Ćwiczenie 3

Nowoczesne metody analiz biomarkerów

w diagnostyce molekularnej.

Cytometria przepływowa.

1
Część przepływowa –
dr n.med. Anna Przybyła

Część –
dr n.med. i n. o zdr. Tomasz Deptuch

Część –
dr hab.n.med. Mariusz Kaczmarek
Część 1
4
 Cytometria przepływowa (FACS, FCM)

•
układ mierzący i analizujący sygnały powstające
podczas indywidualnego przepływu komórek lub
innych cząstek przez wiązkę promieni
świetlnych

6
układ hydrauliczny - wytwarza strumień cieczy i zapewnia laminarny przepływ
analizowanych komórek

źródło światła - przechodząc przez badane cząsteczki wytwarza sygnał

rozproszenia fluorescencji. Funkcję tę spełnia laser lub lampa
łukowa.

układ optyczny - kształtuje i ogniskuje wiązkę lasera na badanej komórce;

optyka zbierająca ( jej zadaniem odfiltrowanie odpowiednich
długości fali oraz ogniskowanie promieni świetlnych na
detektorach)

układ elektryczny - przetwarza impulsy świetlne na impulsy elektryczne

- oprogramowanie, opracowanie wyników

Liczy cząstki w zawiesinie

Odróżnia i oddziela komórki żywe od martwych

Ocenia 105 - 106 cząstek w mniej niż 1 min

Mierzy względną wielkość, ziarnistość i

autofluorescencję komórek

Przy użyciu cząsteczek fluorescencyjnych ocenia

fenotyp komórek

Sortuje pojedyncze cząstki do dalszych analiz

8
przepływowe

9
10
11
 szybkość i charakter
ilościowy oraz
czułość i
rozdzielczość
przestrzenna

szybkość, Wysoka
czułość, rozdzielczość,
charakter niewielki
ilościowy, brak charakter
przestrzennej ilościowy i niska
rozdzielczości... przepustowość...
 CD45 vs Side Scatter
1e6

eosinophils
neutrophils
SSC Intensity

monocytes
Side scatter

1e5
Intensity

basophils
1e4
lymphocytes
1e5
CD45 Intensity
CD45 AF488
Human PBMC
60X ImageStreamX
CD45-AF488
Nucleus-DRAQ5
Darkfield
10,000 cells imaged

13
 14
http://flow.ucsf.edu/self-analysis-cytof