Mikrobiális törzsfejlesztés

Fonalas gombák - klasszikus

genetikai alapok
 Gombák a biotechnológiában
enzimek
• Amiláz: Aspergillus niger - keményítő
gyártás

• Celluláz: Trichoderma reesei – papíripar

• Proteáz: Aspergillus oryzae - bőripar,

sajtgyártás
 Gombák a biotechnológiában
szerves savak
• citromsav: Aspergillus niger –
élelmiszeripar (E330)
• Itakonsav: Aspergillus terreus
• Maleinsav: Candida sp. – élelmiszeripar
(E296)
• Fumársav: Candida sp. – élelmiszeripar
(E297)
 Gombák a biotechnológiában
vitaminok
• Riboflavin (B2-Vitamin) – Candida sp.
• Piridoxin (B6) – Pichia sp.
• D-eritro-aszkorbinsav – Candida sp.
 Gombák a biotechnológiában
antibiotikumok
• Penicillinek: Penicillium chrysogenum

• Cefalosporin: Acremonium chrysogenum

 Gombák a biotechnológiában
alkoholgyártás
• Saccharomyces cerevisiae – üzemanyag,
kémiai ipar, élelmiszeripar
 Gombák a biotechnológiában
gyógyszer hatóanyag
• Lovasztatin: Aspergillus terreus
• Ciklosporin: Trichoderma polysporum
 Gombák a biotechnológiában
rekombináns fehérjék
• Aspergillus niger
• Trichoderma sp.
 Gombák a biotechnológiában
aminosavak
• Lizin: Saccharomyces sp.
• Triptofán: Hansenula sp.
• Fenil-alanin: Rhodotorula sp.
 Gombák a biotechnológiában
növényi hormonok
• Gibberellinsav – Gibberella fujikuroi
(gyümölcstermesztés)
 Ascomycota törzs
• Tömlősgombák
• Összes gombafaj 30%-a (penészek,
élesztők, lisztharmat stb.)
Aspergillus nidulans
 Aspergillus nidulans
• A fonalas gomba genetika és sejtbiológia
modellszervezete
• Ipari és orvosi jelentőségű rokonai:
A. niger - citromsav
A. terreus - lovasztatin
A. fumigatus – aspergillózis
A. flavus - aflatoxin
A. oryzae – japán szaké
(kokkin)
 Modellszervezet
• Ne legyen patogén
• Ne legyen drága
• Könnyen beszerezhető legyen
(törzsgyűjtemény)
• Gyorsan növekedjen
• Ne igényeljen speciális körülményeket
• Mutánsok előállítása lehetséges legyen
(standard molekuláris biológiai technikák)
 Miért jó modellszervezet az
A. nidulans?
• Nem patogén
• Nő minimál
táptalajon (olcsó)
• Rövid életciklus
(2-3 nap)
• Színes spórák
• Auxotrófia
 A. nidulans - színes spórák
• Vad típus zöld konídium
• yA sárga konídium (p-difenol oxidáz)
• wetA nedves fehér
• wA fehér konídium
• bwA barna konídium
• chA Chartreuse konídium
 Auxotrófia
• Auxotrófiának nevezzük azt a jelenséget,
amikor egy élőlény, a növekedéséhez
szükséges egyik szerves vegyületet
(például aminosavat, bázist, vitamint) nem
tudja előállítani. Auxotróf az az élőlény,
amelyik esetében ez a jelenség
megfigyelhető.
 Auxotrófia
• genetikai markerek
• Pl.: biA1= biotin (H-vitamin) szükséges a
növekedéshez
• Pl.: lysD = lizin szükséges a növekedéshez
(homocitrát szintetáz hiánymutáns)
 Miért jó modellszervezet az
A. nidulans?
• Kis genom: ~31 Mb
• 8 kromoszóma; 11-12 ezer gén
• 3 különböző életciklus, mely jól
tanulmányozható laboratóriumi körülmények
között (aszexuális, paraszexuális és szexuális
ciklus)
 Miért jó modellszervezet az
A. nidulans?
• Homotallikus (két törzs egymással
keresztezhető)
• A spórák általában haploidok (konidiospóra,
asexual spores)
• A diploid alak is életképes
• Aszkospóra (sexual spores)
 Homotallikus
• egyenértékű meiospórák, belőlük fejlődő hifák
hímnősek, és ha fejlődik ivarszerv, bármely
hím bármely nősténnyel összeolvad
Vegetatív ciklus
Vegetatív ciklus
 Paraszexuális ciklus
• Két A. nidulans törzs hifája egyesül,
fúzionálnak >>>> új, közös micélium képződik,
mely mindkét törzs sejtmagját tartalmazza
• Új genotípus képződik
• Nincs szexuális ciklus (nincs meiózis)
• Két törzs: egy szín marker, egy auxotróf
mutáció
• Két törzs spóráját olyan táptalajra helyezem,
hogy mindkét törzs növekedése elinduljon
Paraszexuális ciklus
 Paraszexuális ciklus -
mitotikus crossing over esete

Olir: oligomycin
rezisztens

Olis: oligomycin
szenzitív

Olisr: oligomycin
szemirezisztens

Oligomycin: ATP-
szintáz gátló
 Szexuális ciklus
• A homotallikus gombáknál egy spórából
kifejlődő valamennyi ellentétes nemű
ivarszerv (hifa) ivaros egyesülésre képes, tehát
minden spóra egyenértékű.
Szexuális ciklus
Szexuális ciklus
 Szexuális ciklus

aszkusz

aszkospóra
kleisztotécium
Szexuális ciklus
 Keresztezés
A: yA1; paba
B: wA3; biA1
Néhány genotípus keresztezés
után:
1. yA1; biA1
2. wA3; paba
3. paba
4. bioA1
5. Vad típus
6. yA1; paba; biA1
7. wA3; paba; biA1
8. paba; biA1
Stb……
 Keresztezés
yA1 frA1; pyroA1 (sárga--fruktokináz negatív;
piridoxin aux.)
wA3; galE; biA1 (fehér, galaktokináz negatív,
biotin)

FELADAT: frA1; galE dupla mutáns

Csak a sárga telepeket szelektálom