ПРОТОКОЛ № 7 13.10.

2023

Тема: Ріст та розмноження бактерій. Дихання бактерій. Методи виділення чистих

культур аеробних і анаеробних бактерій Виділення чистої культури аеробних і
анаеробних бактерій з ротової порожнини..

Мета заняття: Ознайомитися з теоретичним матеріалом по темі заняття. Ознайомитися з

механізмом дихання бактерій, засвоїти методи виділення чистої культури бактерій з
досліджуваного матеріалу, засвоїти методи культивування анаеробів.
Питання для обговорення:
1. Особливості життєдіяльності і розмноження бактерій в аеробних та анаеробних умовах.
Методи виділення чистої культури аеробів і анаеробів.
3. Особливості життєдіяльності і розмноження бактерій в анаеробних умовах.
4. Методи виділення чистої культури аеробів і анаеробів.
1. Вивчити морфологічні та культуральні властивості мікроорганізмів, які були
посіяні на попередньому занятті.
Морфологічні Культуральні властивості
властивості
Форма Характер поверхні

Розмір Край

Колір Прозорість

Консистенція Структура

2. Для накопичення чистої культури бактерій зробити пересівання ізольованих колонії на

скошений агар, посіви підписати і поставити в термостат.

3. Після 10-хв. кип'ятіння зробити посів проби ґрунту на середовище Кіта-Тароци, посів
підписати і поставити в термостат.

4. Нарисувати схему фаз розмноження мікроорганізмів та надати характеристику

кожній фазі.
1 фаза_____ початкова стаціонарна - це кількість бактерій, яке потрапило в поживне
середовищє (ПС) і в ній знаходиться (1 - 2 год);
2 фаза___ - фаза спокою - це адаптація бактерій до ПС, активне зростання клітин
(збільшується кількість білку, РНК), активного розмноження немає (3 - 4год);
3 фаза____ експоненціальна фаза розмноження (логарифмічна) - активні процеси
розмноження клітин в популяції, яке переважає над загибеллю (5-6 год);
4 фаза____ - фаза негативного прискорення - швидкість ділення клітин значно знижується;
5 фаза___ - стаціонарна фаза - число клітин перестає збільшуватись; кількість біомаси
досягає найвищого рівня; кількість загиблих бактерій дорівнює кількості, що утворюється
(6-7 год);
6 фаза__ - фаза прискореної загибелі - процеси загибелі клітин переважають над процесом
їх розмноження;
7 фаза__ фаза логарифмічної загибелі - кількість клітин вмирає з максимальною
швидкістю;
8 фаза____ фаза зменшення швидкості загибелі клітин
9 фаза_____ стаціонарна фаза мінімуму - кількість живих клітин мінімальна.

5. На які групи діляться всі бактерії в залежності від температурного оптимуму їх

зростання. В якому температурному діапазоні можуть зростати мікроорганізми
кожної з наведених груп?

1. _Облігатні термофіли - мають температурний оптимум 65–70 °С і мінімум вище 40–42

°С.
2. _ Факультативні термофіли - мають температурний максимум 50–65 °С і мінімум
менше 20 °С.
3. _Екстремальні термофіли - мають температурний оптимум вище 70 °С.
6. Охарактеризуйте типи дихання бактерій.
Тип дихання Характеристика Приклад
мікроорганізмів
Облігатні аероби потребують вільного кисню у високій Mycobacterium
концентрації (близько 21 %); одержують tuberculosis,
енергію шляхом переносу електронів за Micrococcus luteus
ланцюгом окисно-відновних реакцій, в
якому остаточним акцептором
електронів є атмосферний кисень;
електронні транспортні системи
бактерій локалізовані на
цитоплазматичній мембрані, перенос
електронів здійснюється комплексом
нікотинамідних дегідрогеназ або хінонів
і цитохромів; аеробні бактерії мають три
цитохроми (а, в, с)
Мікроаерофіли потребують невеликої кількості кисню Campylobacter jejuni,
(висока його концентрація хоч не вбиває Helicobacter pylori,
бактерії, але може затримувати їх ріст); лептоспіри
такі бактерії не ростуть в аеробних та
 анаеробних умовах, для їх росту вміст
кисню повинен складати не менше 1–15
%; як правило, такі бактерії ростуть
краще за наявності більш високої
концентрації вуглекислого газу (10–15
%
Факультативні здатні змінювати тип дихання з патогенні
анаероби аеробного на анаеробний, мають один мікроорганізми: коки,
або два цитохроми ентробактерії
Облігатні анаероби отримують енергію у разі відсутності збудники правця,
кисню, за рахунок прискореного, але не ботулізму, анаеробної
повного розщеплення поживних інфекції
речовин внаслідок субстратного
збудники правця, ботулізму, анаеробної
інфекції фосфорилювання; не мають
цитохромів
Капнофіли у перших генераціях зростає лише у Brucella abortus
присутності високої концентрації СО2

Чим пояснюється токсичність О2 для анаеробних мікроорганізмів? ___ Токсичність

кисню для облігатних анаеробів визначається тим, що ці організми не мають
окислювальних ферментів - супероксиддисмутази і комалази, які здатні захищати організми
від токсичних продуктів кисневого обміну (Н2О2 тощо).

7. Охарактеризуйте механізми дихання бактерій.

Механізм дихання Характеристика
Окислювальне енергія одержується за рахунок формування макроергічних
фосфорилювання фосфатних зв’язків АТФ у результаті окислювання субстрату з
утворенням кінцевих продуктів - вуглекислого газу і води
(відбувається з участю дихального ланцюга).

Субстратне це процес синтезу АТФ, що відбувається внаслідок розщеплення

фосфорилювання субстратів без участі дихального ланцюга мітохондрій.
Перетворення субстрату в продукт реакції супроводжується
фосфорилюванням АДФ з утворенням АТФ.

Бродіння це процес, в якому клітини мікроорганізмів вирощуються в

біореакторі в рідкому чи на твердому середовищі з метою
перетворення органічних речовин у біомасу або певні продукти
(кінцевими акцепторами електронів можуть бути органічні сполуки
- піруват, лактат тощо).

8. Назвіть методи виділення чистих культур анаеробних бактерій.

Фізичні; хімічні; біологічний метод
9. Ознайомитесь з демонстраційним матеріалом, зарисуйте в протокол необхідне та
надайте характеристику методам культивування.
Метод Характеристика
 Анаеростат - товстостінний металевий циліндр з добре
притертою кришкою (з гумовою прокладкою), забезпечений
відводить краном і вакуумметром. Після розміщення
засіяних чашок або пробірок повітря з анаеростатах
видаляють за допомогою вакуумного насоса.
https://spectrolab.com.ua/ua/p1215985561-
anaerostat-laboratornyj-ans.html
Трубка Виньяль-Вейона
Капілярний кінець трубки запаюють у полум'ї пальника та
трубки поміщають у термостат - так створюються
сприятливі умови для зростання суворих анаеробів.

Середовище Кіта-Тароци
складається з мясопептонного бульйону, 0,5% глюкози і
шматочків печінки або м'ясного фаршу для поглинання
кисню з середовища. Перед посівом середовище
прогрівають на киплячій водяній бані протягом 20-30
хвилин для видалення повітря з середовища

Високий стовпчик сахарного агару

Агар із глюкозою наливають у пробірку високим
стовпчиком до 2/3 її об'єму, охолоджують до 42–45 °C.
Досліджуваний матеріал додають до агару, ретельно
перемішують. Пробірку ставлять у склянку з холодною
водою. Середовище застигає, і всередині нього
створюються надійні анаеробні умови.

Хімічний метод
заснований на поглинанні кисню повітря в герметично
закритій посудині (анаеростатах, ексикаторі) такими
речовинами, як пирогаллол або гідросульфіт натрію
Na2S204.

Посів за методом Фортнера

метод спільного культивування анаеробів і аеробів на
щільних живильних середовищах у запаяних чашках Петрі.
На поверхню середовища в чашках Петрі (5% кров'яний
агар з 1–2% глюкози), розділеної на дві половини
жолобком, висівають на одній половині культуру, яка
активно поглинає кисень - аероби, на іншій половині -
досліджуваний матеріал. Чашки запаюють воском або
заклеюють лейкопластером. Аеробні бактерії швидко
використовують кисень в герметично закритій чашці, що
створює умови для зростання анаеробів
10. Практичне завдання.
1). Зробити висів з попередньо засіяного середовища Кіта-Тароці на м'ясо-пептонний агар
та поставити посіви для культивування у термостат в анаеробні умови.

11 . Тестові завдання для самоконтролю (вирішити та обґрунтувати надану

відповідь).
Тест Пояснення
1. ДНК-полімераза з Thermus aquaticus - важливий
компонент полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).
Цей мікроорганізм здатний до росту при
температурі вище 100°C і є
А. Термофілом
В. Мезофілом
С. Психрофілом
D. Галофілом
Е. Хемолітотрофом
2. Матеріал із рани від хворого з підозрою на газову
анаеробну інфекцію засіяли на середовище Кіта-
Тароцці, яке попередньо підігріли до кипіння. З
якою метою проводили підігрівання середовища?
А. Знищення мікробів
В. Розчинення солей
С. Стерилізації середовища
D. Збагачення киснем
Е. Видалення кисню
3. Матеріал із рани від хворого з підозрою на газову
анаеробну інфекцію засіяли на середовище Кіта-
Тароцці, яке попередньо підігріли до кипіння. З
якою метою проводили підігрівання середовища?
А. Знищення мікробів
В. Розчинення солей
С. Стерилізації середовища
D. Збагачення киснем
Е. Видалення кисню
4. Перший етап виділення чистої культури
передбачає:
А. Взяти матеріал, який містить збудника
В. Зберегти збудника в матеріалі
С.Запобігти від інфікування себе і оточуючих осіб
D. Посіяти матеріал, який містить збудника з метою
отримання ізольованих колоній мікроорганізмів
Е. Всі відповіді вірні
5. Чисту культуру мікроорганізмів виділяють:
А. З метою встановлення видової належності
бактерій.
B. Для дослідження мікробного забруднення
об’єктів навколишнього середовища
С. З метою отримання антибіотиків і інших
біологічно активних продуктів мікробної
життєдіяльності
D. З метою діагностики інфекційних захворювань
або бактеріоносійства.
E. Всі відповіді правильні.
6.Виділення чистих культур бактерій та їх
ідентифікація складають суть:
А. Мікроскопічного методу дослідження
B. Серологічного методу дослідження
C. Бактеріологічного методу дослідження
D. Імунологічного методу дослідження
E. Біохімічного методу дослідження
7. Ознаки чистої культури:
A. Тільки однорідність
B. Однорідність, однотипність,
однотинкторіальність
C. Тільки однотипність
D. Однорідність, однотинкторіальність
E. Тільки однотинкторіальність.