‫خطة البحث‬

‫مقدمة ‪2 .......................................................................................‬‬

‫‪ -1‬تعرف بكتريا‪3 .............................................. : Agrobacteriumtumefaciens‬‬

‫‪ -2‬نقل الجينات عن طريق بكتيريا األجروباكتريوم ‪4 .......................... .Agrobacterum‬‬

‫‪-1-2‬طريقة األجروباكتريم‪4 .... Agrobacterium-based Method‬‬

‫‪-3‬ألية عمل نقل الجينات باستخدام ‪5 .......................... :Agrobacterium tumefaciens‬‬

‫‪-4‬مزايا نقل الجينات باستخدام ‪5 ...............................:Agrobacterium tumefaciens‬‬

‫‪-5‬عيوب نقل الجينات باستخدام ‪6 ............................. :Agrobacterium tumefaciens‬‬

‫‪-6‬مراحل اإلصابة بالبكتيريا ‪6 .................................................Agrobacterium‬‬

‫‪-1-6‬البالزميد ‪7 ...................................................Ti‬‬

‫‪-7‬التطبيقات‪8 ............................................................................... :‬‬

‫الخاتمة ‪9 ..............................................................‬‬

‫قائمة المراجع‪10 ..............................................................................‬‬

 ‫مقدمة‬
‫تنتج أمراض تدرن التاج ( ‪ ) Grown all‬والجذر الشعري ( ‪ ) Hairy Root‬طبيعيا‬
‫‪Agrobacterium Tumefaciens‬‬ ‫تيوميفاسينس‬ ‫باألجروبكتريم‬ ‫عن اإلصابة‬
‫واألجروبكتريمرايز وجينيس ( ‪ ) Agrobacterium Tumefaciens‬على التوالي ‪ .‬وهذه‬
‫البكتريا تتبع العائلة الريزوبية ( ‪ ) Rhizobiaceae‬وتوجد بكثرة في التربة وتصيب خاليا‬
‫النبات بالقرب من الجروح وعادة عند منطقة التاج عند سطح التربة ويعتبر هذان النوعان من‬
‫البكتريا ناقلين طبيعيين للجينات ( ‪ ) are Vectors‬خالل اإلصابة بهما ينقل جزء صغير من‬
‫المادة الوراثية للبكتريا إلي التركيب الوراثي لخاليا النبات المضيف ‪Hot Plant‬‬

‫تحتوي البكتريا على بالزميات والبالزميدة عبارة عن جديلة صغيرة من الدنا تتخذ شكل‬
‫حلقة منفصلة عن الكروموزومات يمكنها أن تتحرك من خلية بكتيرية إلى أخري كما يمكنها‬
‫التناسخ الذاتي ‪ .‬وتحتوي األجر وبكتريم تيوميفاسينس على البالزميدة تي آي ‪ Ti‬المسببة‬
‫للتدرن التاجي بينما تحتوي األجر وبكتريم رايزوجينيس على البالزميدة آر آي ‪ Ri‬التي تسبب‬
‫الدفع لتكوين الجذور في العديد من النباتات ‪ .‬وهذا يحدث نتيجة لنقل قطعة تعرف بالدنا تي‬
‫من البالزميدة تي آي أو آر آي إلى المادة الوراثية في النباتات الحساسة لألجروبكتريم ‪.‬‬

‫‪ ‬ماهي طرق نقل الجينات عن طريق بكتريا ‪ Agrobacterien tunfaciens‬؟‬

‫‪2‬‬
 ‫‪ -1‬تعرف بكتريا‪: Agrobacteriumtumefaciens‬‬
‫هي بكتيريا تربة شائعة تؤدي عادةً إلى تكوين االورام مسببة مايسمى بالتدرن التاجي‬
‫على مجموعة واسعة من أنواع النباتات ‪ ،‬بما في ذلك نبات ذوات الفلقتين ‪dicotyledonous‬‬
‫ساق النبات‬
‫جرح ُ‬
‫خدش أو تُ َ‬
‫التورم عندما تُ َ‬
‫وبعض األنواع ذوات الفلقة الواحدة ‪ .‬ويحدث هذا ّ‬
‫بحيث ُيسمح لهذه البكتريا بإحداث االصابة تسبب البكتريا نمو سرطاني في انسجة الساق‬
‫المصابة القدرة على احداث الورم وتترافق مع وجود بالزميد يسمى ‪ Ti‬داخل البكتريا وهو مشتق‬
‫من التسمية استحثاث الورم ‪ ,Tumer inducing‬ويعتبر هذا البالزميد من البالزميدات الكبيرة‬
‫ويحمل عدد م ن الجينات المشتركة في عملية االصابة‪ ,‬بعد االصابة يستطيع جزء منه التكامل‬
‫مع كروموسوم النبات وهذا الجزء يسمى ‪ ,T-DNA‬تحتوي منطقة ‪ T-DNA‬على عدد من‬
‫المورثات ‪ 8‬او اكثر والمسؤلة عن الخصائص السرطانية في االنسجة النباتية المتحولة وهذه‬
‫المورثات مسؤولة كذلك على تصنيع مواد ضارة للنبات تدعى ‪ Opiens‬التي تستعملها البكتريا‬
‫كمركبات مغذية‪ .‬فقد طورت بالزميدات ال تحمل منطقة ‪ T-DNA‬فيها على هذه المورثات‬
‫المكونة للمركبات الضارة‪.‬‬

‫صورة لبكتيريا ‪Agrobacterium tumefaciens‬‬

‫‪3‬‬
 ‫‪ -2‬نقل الجينات عن طريق بكتيريا األجروباكتريوم ‪.Agrobacterum‬‬
‫‪-1-2‬طريقة األجروباكتريم ‪Agrobacterium-based Method‬‬
‫البكتريا ‪ Agrobacterium tumefaciens‬تكتب بالعربية األجروباكتريم (مفرد) أو‬
‫األجروباكتريا (جمع) وهذه الباكتريا تعيش في التربة و تنتج األورام التاجية ( ‪Crown gall‬‬
‫‪ tumors‬في منطقة التاج على عدد كبير من النباتات ثنائية الفلقة وتعتبر النباتات أحادية‬
‫الفلقة مقاومة لإلصابة بهذه الباكتريا‪.‬‬

‫تنتج امراض تدرن التاج (الورم التاجي ‪ )Grown gall‬والجذرالشعري ‪ Hairy root‬في‬
‫و‬ ‫‪Agrobacterum‬‬ ‫‪tumefaciens‬‬ ‫ببكتيريا‬ ‫االصابة‬ ‫عند‬ ‫طبيعيا‬ ‫النباتات‬
‫‪ Agrobacterum rhizogenus‬على التوالي‪ .‬توجد هذه البكتيريا بكثرة في التربة وتصيب‬
‫خاليا النبات بالقرب من الجروح‪ ،‬ويعتبر هذان النوعان من البكتيريا ناقلين طبيعيين للجينات‪.‬‬
‫فخالل االصابة بهما ُينقل جزء صغير من المادة الوراثية للبكتيريا إلى التركيب الوراثي لخاليا‬
‫النبات المضيف‪.‬‬

‫تجدر االشارة إلى أن االصابة بهذه البكتيريا تحدث عند عدد كبير من النباتات ثنائية‬
‫الفلقة وتعتبر النباتات أحادية الفلقة مقاومة لإلصابة بهذه البكتيريا‪.‬‬

‫صور‪ : 01‬نباتات مصابة بالمرض (الورم التاجي)‬

‫‪4‬‬
 ‫‪-3‬ألية عمل نقل الجينات باستخدام ‪:Agrobacterium tumefaciens‬‬
‫يتم تصميم ناقل الحمض النووي ليحتوي على‬ ‫ي‬
‫‪ ‬تحضير ناقل الحمض النوو (‪ّ :)T-DNA‬‬
‫المراد نقلها إلى النبات‪ ،‬باإلضافة إلى عناصر تنظيمية ضرورية للتعبير عن هذه‬
‫الجينات ُ‬
‫الجينات في الخاليا النباتية‪.‬‬
‫يتم دمج ناقل‬ ‫ي‬
‫‪ ‬إدخال ناقل الحمض النوو في ‪ّ :Agrobacterium tumefaciens‬‬
‫الحمض النووي في بالزميد ‪ Agrobacterium tumefaciens‬باستخدام تقنيات الهندسة‬
‫الوراثية‪.‬‬
‫‪ ‬غزو النباتات‪ :‬تُزرع بكتيريا ‪ Agrobacterium tumefaciens‬على سطح النبات أو‬

‫تُحقن في نسيج النبات‪ .‬تُدخل البكتيريا ناقل الحمض النووي إلى خاليا النبات ُ‬
‫المضيفة‬
‫من خالل جروح في السطح أو عبر آلية غزو خاصة‪.‬‬
‫المضيف‪ :‬يتكامل ناقل الحمض النووي مع‬ ‫ي‬
‫‪ ‬دمج ناقل الحمض النوو في جينوم النبات ُ‬
‫المراد نقلها في‬ ‫ٍ‬
‫المضيف بشكل عشوائي‪ ،‬مما يؤدي إلى دمج الجينات ُ‬
‫جينوم النبات ُ‬
‫الحمض النووي للنبات‪.‬‬
‫يتم انتقاء النباتات التي‬
‫اثيا‪ :‬بعد دمج ناقل الحمض النووي‪ّ ،‬‬
‫المعدلة ور ً‬
‫‪ ‬انتقاء النباتات ُ‬
‫المدخلة‪.‬‬
‫عبر بنجاح عن الجينات ُ‬ ‫تُ ّ‬
‫‪-4‬مزايا نقل الجينات باستخدام ‪:Agrobacterium tumefaciens‬‬
‫عد تقنية ‪ ATMT‬فعال ًة للغاية في نقل الجينات إلى مجموعة واسعة من‬
‫‪ ‬كفاءة عالية‪ :‬تُ ّ‬
‫النباتات‪.‬‬
‫نسبيا مقارن ًة بأساليب نقل الجينات‬
‫عد تقنية ‪ ATMT‬تقني ًة بسيط ًة ً‬
‫‪ ‬سهولة االستخدام‪ :‬تُ ّ‬
‫األخرى‪.‬‬
‫‪ ‬تنوع التطبيقات‪ :‬يمكن استخدام تقنية ‪ ATMT‬لنقل مجموعة واسعة من الجينات‪ ،‬بما في‬
‫المحسنة‪ ،‬وتحسين تحمل‬
‫ّ‬ ‫ذلك الجينات التي تُقاوم اآلفات واألمراض‪ ،‬والصفات الغذائية‬
‫الظروف البيئية القاسية‪.‬‬

‫‪5‬‬
 ‫‪-5‬عيوب نقل الجينات باستخدام ‪:Agrobacterium tumefaciens‬‬
‫ٍ‬
‫‪ ‬دمج عشوائي‪ :‬يتكامل ناقل الحمض النووي بشكل عشوائي مع جينوم النبات ُ‬
‫المضيف‪،‬‬
‫المجاورة‪.‬‬
‫مما قد يؤدي إلى تعطل وظائف الجينات ُ‬
‫‪Agrobacterium‬‬ ‫‪ ‬عملية طويلة‪ :‬قد تستغرق عملية نقل الجينات باستخدام‬
‫‪ tumefaciens‬عدة أسابيع أو أشهر‪.‬‬
‫اثيا باستخدام ‪Agrobacterium‬‬
‫المعدلة ور ً‬‫‪ ‬المخاوف التنظيمية‪ :‬قد تواجه النباتات ُ‬
‫قيودا تنظيمي ًة في بعض البلدان‪.‬‬
‫‪ً tumefaciens‬‬
‫‪-6‬مراحل اإلصابة بالبكتيريا ‪Agrobacterium‬‬

‫وترجع أهمية هذه الباكتريا إلى إنها تقوم طبيعيا بنقل الجينات إلى النبات حيث يوجد‬
‫داخل خلية األجرو باكتريم (باإلضافة إلى الكروموسوم الدائري الباكتيرى بالزميد حلقي ثنائي‬
‫الشريط (حوالي ‪ p200‬ويعرف هذا باسم بالزميد إحداث األورام (‪)Tumor inducing‬‬
‫واألجروباكتريم التي تحتوي على هذا البالزميد تكون قادرة على إحداث األورام التاجية على‬
‫النباتات ثنائية الفلقة‪ .‬و قد اتضح إن األورام التي تنتج على النبات تكون نتيجة غرس قطعه‬
‫‪ DNA‬من ‪ Ti-plasmid‬في كروموسوم النبات المصاب (تعرف هذه القطعة باسم (‪T-‬‬
‫‪ )DNA‬و هذه القطعة تحتوي على جينات تشفر لتخليق الهرمونات النباتية (األكسين ‪Auxin‬‬

‫‪6‬‬
‫والسيتوكينين ‪ )Cytokinin‬و هي التي تجعل الخلية النباتية تنقسم بدون أي تحكم‬
‫‪ )Uncontrollably‬فتنشأ بذلك األورام السرطانية) على النبات‪.‬‬

‫‪-1-6‬البالزميد ‪Ti‬‬
‫ويتكون ‪ Ti-plasmid‬من منطقة ‪ T-DNA‬التي تمتد من الحد األيسر ‪)Left 24‬‬
‫وتحتوى على( ‪ )bp) Right Border 24‬الى الحد األيمن( ‪ bp) Border‬جينات تشفر‬
‫لتخليق الهرمونات النباتية (األكسين والسيتوكينين بالشكل كما انها تحتوى على جينات لتخليق‬
‫بعض األحماض األمينيه الغير عاديه تخليق األوبين ‪ )Opine‬التي ال يتمكن النبات من‬
‫استخدامها ولكن األجروباكتريم تكون هي فقط القادرة على استخدام هذه األحماض األمينية‬
‫الشاذه وتوجد الجينات المسئولة عن هدم (استعمال) األوبين الحظ ايضا مكان وجود المنطقه‬
‫المرضيه التي تعرف باسم ‪ Virulence Region‬وهذه المنطقه بها جينات تعرف باسم ‪vir‬‬
‫‪ genes‬جينات مرضيه واذا غابت المنطقه المرضيه من البالزميد ال تنتقل منطقة ‪T-DNA‬‬
‫الى النبات ‪ T-DNA‬في الشكل خارج منطقة ‪.Opine catabolism( 140‬‬

‫‪7‬‬
 ‫‪-7‬التطبيقات‪:‬‬
‫اثيا ذات خصائص‬ ‫ٍ‬
‫نطاق واس ٍع لتطوير نباتات ُمعدلة ور ً‬ ‫تُستخدم تقنية ‪ ATMT‬على‬
‫حسنة‪ .‬تشمل بعض األمثلة‪:‬‬
‫ُم ّ‬

‫تم نقل جينات من بكتيريا )‪ Bacillus thuringiensis (Bt‬إلى‬ ‫✓ نباتات مقاومة لآلفات‪ّ :‬‬
‫نباتات القطن والصويا‪ ،‬مما يجعلها مقاوم ًة ليرقات الحشرات‪.‬‬
‫تم نقل جينات مقاومة الفيروسات إلى نباتات البابايا والبطاطا‪،‬‬
‫✓ نباتات مقاومة لألمراض‪ّ :‬‬
‫المسببة للفيروسات‪.‬‬
‫مما يجعلها محمي ًة من األمراض ُ‬
‫عزز محتوى الفيتامينات والمعادن إلى‬
‫تم نقل جينات تُ ّ‬ ‫حسنة‪ّ :‬‬
‫✓ نباتات ذات صفات غذائية ُم ّ‬
‫نباتات األرز والذرة‪ ،‬مما يجعلها أكثر قيم ًة غذائي ًة‪.‬‬
‫تحملة للجفاف إلى نباتات القمح‬
‫الم ّ‬
‫تم نقل جينات من البكتيريا ُ‬
‫✓ نباتات ُتقاوم الجفاف‪ّ :‬‬
‫والذرة‪ ،‬مما يجعلها أكثر قدرةً على النمو في ظروف الجفاف‬

‫‪8‬‬
 ‫الخاتمة‬
‫عد تقنية نقل الجينات باستخدام ‪ Agrobacterium tumefaciens‬أداةً قوي ًة‬
‫في الختام تُ ّ‬
‫ذات إمكانيات هائلة لتحسين الزراعة وتحقيق األمن الغذائي العالمي‪ .‬مع معالجة التحديات‬
‫أمانا للبشرية‪.‬‬ ‫ٍ‬
‫هاما في توفير غذاء أكثر وفرةً وأكثر ً‬
‫دور ً‬
‫الموجودة‪ ،‬يمكن أن تلعب هذه التقنية ًا‬
‫ُ‬

‫‪9‬‬
 ‫قائمة المراجع‬
Transgénèse ‫ شمسه أحمد الخليفة محاضرات مقياس التحول الوراثي في النبات‬.‫• د‬
.‫ كلي ـ ـ ـ ــة علـ ـ ـ ـ ـ ــوم الطبيعـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــة والحي ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــاة قس ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــم البي ـ ــول ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــوجي ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ ــا‬végétale
• Aboul-Maaty, N. A. F., & Oraby, H. A. S. (2019). Extraction of
high-quality genomic DNA from different plant orders applying a
modified CTAB-based method. Bulletin of the National Research
Centre, 43(1), 25–31.
• Chen, Q., Shinozaki, D., Luo, J., Pottier, M., Havé, M., Marmagne,
A &...,.Masclaux-Daubresse, C. (2019). Autophagy and nutrients
management in plants. Cells, 8(11), 1426-1478.

10