Cacbonhydrate Polymes

Giới thiệu
• Ung thư dạ dày là nguyên nhân phổ biến thứ hai gây tử vong trong các bệnh ung thư trên toàn thế giới. Do
đó, có một nhu cầu cấp thiết cho việc phát triển các chiến lược điều trị mới để cải thiện tuổi thọ của bệnh
nhân ung thư dạ dày.
• Ức chế miễn dịch được quan sát rõ ràng ở bệnh nhân ung thư và động vật mang khối u, cho thấy các tế bào
khối u làm suy giảm chức năng của hệ thống miễn dịch .
• Trong vài thập kỷ qua, nhiều phức hợp protein polysacarit với hoạt động điều hòa miễn dịch từ dược liệu đã
hứa hẹn là chất chống ung thư tiềm năng ,độc tính thấp,ít tác dụng phụ . Các cơ chế chính mà polysacarit
bảo vệ các tế bào thường được cho là thông qua kích hoạt phản ứng miễn dịch của vật chủ.
• N-Methyl-N -nitro- nitrosoguanidine (MNNG) là một chất gây ung thư dạ dày ở một số loài động vật và đã
được sử dụng trong một số hệ thống để phân tích tiềm năng gây ung thư của các hợp chất khác nhau trong
việc gây ra ung thư tuyến dạ dày u. Do đó, mục tiêu của nghiên cứu này là kiểm tra tiềm năng các hoạt động
chống ung thư và điều hòa miễn dịch của các polysacchrides được phân lập từ S. miltiorrhiza ở chuột ung thư
dạ dày do MNNG gây ra và cố gắng làm sáng tỏ cơ chế đằng sau nó nhờ vào N-Methyl-N -nitro-
nitrosoguanidine (MNNG)
 Phân lập và tinh chế polysacarit từ rễ của S. miltiorrhiza

• Rễ cây S. miltiorrhiza được sấy khô ở 50 ◦C, cắt thành từng miếng nhỏ và chiết bằng 95% ethanol trong 24 giờ
• Được lọc qua gạc và cô đặc trong thiết bị bay hơi dưới áp suất giảm. Chất nổi phía trên đậm đặc được trộn với bốn thể tích
ethanol 95% và giữ ở 4 ◦C trong tủ lạnh để 12 h để kết tủa các polysacarit CSMPS.
• Polysacarit thô(CSMPS) được hòa tan trong dung dịch NaCl 0,1 M, được lọc qua bộ lọc Millipore 0,45-m, và sau đó dịch lọc
được đưa vào cột cellulose DEAE-52
• Phân số rửa giải (5 ml) đã được thu thập và theo dõi hàm lượng carbohydrate dựa trên phương pháp axit sunfuric phenol ở
độ hấp thụ 492nm (Dubois, Gilles, Hamilton, Rebers, & Smith, 1956) và ba hỗn hợp (CSMPA, CSMPB và CSMPC) đã thu
được. CSMPA được sắc ký thêm trên máy lọc gel Sephadex G-100 (chiều dài: 100 cm, đường kính trong: 2,6 cm) và rửa giải
bằngNaCl 0,1 M với tốc độ dòng 0,5 ml / phút. Một polysacarit đã thu được, được thẩm tách và đông khô để tạo ra một
polysacarit tinh khiết màu trắng (được đặt tên là SMPA ).
Phân tích thành phần
SMPA (10 mg / ml) đã được thủy phân trong 1 ml TFA (4 mol / l) ở 110 C trong ống kín trong 2 giờ. Sau khi loại bỏ TFA bằng
metanol, cặn được hòa tan trong NaOH và phản ứng với PMP để chuyển đổi các monosacarit thành các dẫn xuất PMP của
chúng. Các dẫn xuất PMP của mười loại đường tiêu chuẩn (Man, Rib, Rham, GlcUA, GalUA, Glc, Gal, Xyl, Ara, Fuc) và SMPA đã
được phân tích trên cột DIKMA Inertsil ODS-3 (4,6 mm × 250 mm) được kết nối với hệ thống HPLC Shimadzu
 Động vật và điều trị

• Chuột Wistar đực 6 tuần tuổi . Sau 1 tuần thích nghi, chuột được chia ngẫu nhiên thành ba nhóm (n = 10).
• Tất cả các động vật được cho uống MNNG với liều 200 mg / kg trọng lượng cơ thể trong nước uống mỗi ngày một lần cho 15 tuần, ngoại trừ
nhóm bình thường.
• Ngày sau 15 tuần dùng đường uống của MNNG được lấy là ngày số không.
• Nhóm I đóng vai trò kiểm soát bình thường và được cho uống nước cất trong 6 tuần.
• Nhóm II đóng vai trò kiểm soát mô hình và được cho uống nước trong 6 tuần.
• Nhóm III nhận SMPA (200 mg / kg trọng lượng cơ thể, hòa tan trong nước cất) trong suốt thời gian nghiên cứu.
• Tất cả các phương pháp điều trị đã được đưa ra sau khi cảm ứng khối u, một lần mỗi ngày trong 6 tuần.
• Trọng lượng cơ thể của các động vật từ mỗi nhóm được ghi lại vào lúc bắt đầu và khi kết thúc thí nghiệm.
• Sau liều cuối cùng và 24 giờ nhịn ăn, tất cả chuột bị giết chết do trật khớp cổ tử cung. Máu được thu thập và tách huyết tương được sử
dụng để phân tích. Đồng thời, tuyến ức và lá lách được lấy từ chuột. Tác động lên cơ quan miễn dịch được đánh giá dựa trên chỉ số tuyến ức
và chỉ số lách (Liu và cộng sự, 2008).
Chiết và đặc tính của SMPA

Polysacarit thô từ rễ của S. miltiorrhiza được phân lập và tinh chế bằng sắc ký cellulose DEAE-52 vào ba polysacarit CSMPA, CSMPB và
CSMPC (Hình 1A). Năng suất của polysacarit thô CSMPS là 5,23% nguyên liệu thực vật và năng suất của ba polysacarit là 41,34%,
9,53% và 10,94% cho CSMPA, CSMPB và CSMPC của polysaccha gốc-đi xe CSMPS, tương ứng. CSMPA đã được chọn để phân đoạn
thêm bởi một cột Sephadex G-100 sắc ký lọc gel, cho một polysaccha đồng nhất-đi xe SMPA
Phân tích GC cho thấy SMPA bao gồm Gal, Glc, Rham, Man và GalUA theo tỷ lệ mol là 2,14: 1,42: 1,16: 2,15: 1
 Tác dụng của SMPA đối với các chỉ số nội tạng và trọng lượng cơ thể ở chuột ung thư dạ dày

• Trong nhóm bình thường, những con chuột trông hoàn toàn • hình 2. Ảnh hưởng của SMPA đến các tế bào NK và hoạt động
thoải mái, di chuyển nhanh chóng và ăn uống tốt. Lông của nó CTL ở chuột ung thư dạ dày. Giá trị là thể hiện như là phương
trông sáng, và mặt nó cứng và hạt. Trong những con chuột của tiện ± S.D. (n = 10); * P <0,05 so với nhóm bình thường; ## P
các nhóm được điều trị bằng MNNG, sự chuyển động tự động <0,01 so với mô hình điều khiển . Trọng lượng nhưng cũng cải
dần dần trở nên chậm hơn, với long bóng mượt, chán ăn và thiện các chỉ số cơ quan miễn dịch ở chuột mô hình được điều
tăng cân chậm; ngược lại, chuột trong các nhóm được điều trị trị bằng MNNG.
SMPA rất mạnh mẽ với bộ lông sáng bóng và tăng trọng lượng
cơ thể nhanh chóng, cho thấy tình trạng chung tốt. Ngoại lệ
bệnh lý cho thấy teo và loạn sản niêm mạc dạ dày là biểu hiện
ở chuột được tiêm bằng MNNG, cho thấy mô hình ung thư dạ
dày đã được thiết lập thành công
Tác dụng của SMPA đối với sự tăng sinh tế bào lách ở chuột ung thư dạ dày

• Khả năng của các tế bào lympho đáp ứng với mitogen phản ánh tiềm năng miễn dịch của sinh vật (Zeng et al., 2013). Để tìm hiểu xem SMPA
có tăng cường tiềm năng miễn dịch của sinh vật hay không, cần đo lường tác dụng của SMPA đối với sự tăng sinh tế bào được kích thích
bằng mitogen ở chuột ung thư dạ dày.
• SMPA cho thấy một hoạt động đáng kể trên các tế bào lympho kích thích ConA- hoặc LPS (P <0,01) với liều 200 mg / kg. Trong sự suy giảm
của mitogen (Con A hoặc LPS), SMPA cũng cho thấy một hoạt động giảm thiểu vừa phải để tăng sinh tế bào, cho thấy rằng nó có lợi ích trực
tiếp cho sự tăng sinh tế bào lách. Các kết quả hiện tại chỉ ra rằng SMPA có tác dụng giảm thiểu tác nhân gây bệnh trực tiếp lên sự tăng sinh
tế bào lách của chuột để tăng cường đáp ứng miễn dịch và cải thiện khả năng miễn dịch.
. Tác dụng của SMPA đối với nồng độ huyết thanh của IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-, IgA, IgG và IgM ở chuột ung
thư dạ dày

• Như đã thấy trong Bảng 4, IL-2, IL-4, IL-10, IgA, IgG và IgM ở chuột kiểm soát mô hình được điều trị bằng MNNG thấp hơn đáng kể so với
chuột kiểm soát bình thường (P <0,05 hoặc P <0,01), trong khi đó nồng độ cytokine IL-6 và TNF-in ở chuột điều khiển mô hình được xử lý
bằng MNNG cao hơn rõ rệt so với chuột điều khiển thông thường (P <0,01). Điều này chỉ ra rằng chức năng miễn dịch đã giảm ở chuột kiểm
soát mô hình ung thư dạ dày.
• Điều trị SMPA đã làm tăng đáng kể nồng độ IL-2, IL-4, IL-10, IgA, IgG và IgM trong máu và làm giảm nồng độ IL-6 và TNF-in ở chuột ung thư
dạ dày so với những con chuột bị ung thư khí ( P <0,05 hoặc P <0,01).
• Những kết quả này cho thấy điều trị SMPA có thể cải thiện chức năng miễn dịch ở chuột ung thư dạ dày một phần thông qua việc thúc đẩy
sản xuất IL-2, IL-4, IL-10, IgA, IgG và IgM và ức chế bài tiết cytokine IL-6 và TNF-.
Tác dụng của SMPA đối với độc tế bào tế bào NK và đáp ứng CTL ở chuột ung thư dạ dày
Loại bỏ tế bào khối u được biết là qua trung gian một phần bởi hoạt động gây độc tế bào của tế bào NK và CTL Do đó, chúng
tôi đã đo lường tác động của SMPA đối với các hoạt động gây độc tế bào của tế bào NK và CTL
Rõ ràng hoạt động của tế bào NK và CTL ở chuột kiểm soát mô hình ung thư dạ dày đã bị ức chế và thấp hơn đáng kể so với
sự kiểm soát bình thường (P <0,05), trong khi sự gia tăng đáng kể hoạt tính đã được quan sát thấy ở các nhóm được điều trị
SMPA với liều 200 mg / kg so với những con chuột bị ung thư dạ dày (P <0,01).
Những kết quả này tiết lộ thêm rằng SMPA có thể tăng cường chức năng miễn dịch bằng cách tăng lên các tế bào NK và kích
hoạt CTL ở chuột ung thư dạ dày.
Tác dụng của SMPA đối với chức năng thực bào của đại thực bào ở chuột ung thư dạ dày
Các đại thực bào được coi là một trong những miễn dịch quan trọng tế bào bảo vệ vật chủ chống lại sự phát triển của khối u
Kết quả cho thấy điều trị SMPA góp phần cải thiện hoặc tăng cường chức năng thực bào của đại thực bào ở chuột ung thư dạ
dày
Tác dụng của SMPA đối với sản xuất granzyme-B và IFN nội bào trong tế bào lách chuột

• Sản xuất granzyme-B và IFN-␥ (P <0,05) thấp hơn đáng kể đã được

tìm thấy trong nuôi cấy tế bào lách của chuột trong dạ dày so với
chuột bình thường. Tuy nhiên, điều trị bằng SMPA ở mức 200 mg /
kg gây ra sự gia tăng đáng kể các biểu hiện của granzyme-B (Hình 3)
hoặc IFN-(Hình 3B), cho thấy SMPA kích hoạt tổng số granzyme nội
bào-B và IFN- nội dung giúp tiêu diệt các tế bào đích bị nhiễm bệnh
hoặc tế bào ung thư.
Thảo luận và kết luận

• Hệ thống miễn dịch đóng một vai trò quan trọng trong phòng chống ung thư .
• Nhiều nghiên cứu cho thấy hoạt động chống ung thư của polysaccha từ một số loại thảo mộc truyền thống của Trung Quốc có thể đạt được
bằng cách cải thiện khả năng miễn dịch
• Việc phát hiện và xác định các loại thuốc chống ung thư mới, có thể làm tăng cường chức năng miễn dịch đã trở thành mục tiêu quan trọng
của nghiên cứu về miễn dịch học và điều trị ung thư (Yuan, Song, Li, Li, & Dai, 2006).
• Do đó, chúng tôi đã phân lập SMPA polysac- tinh khiết từ rễ của S. miltiorrhiza và nghiên cứu tác dụng của SMPA đối với đáp ứng miễn dịch
ở chuột trong dạ dày để phân tích cơ chế hoạt động chống ung thư của nó.
• MNNG đã được sử dụng thành công để gây ung thư dạ dày ở chuột bằng cách tiêm tĩnh mạch trong 15 tuần liên tục.
• Theo dõi SMPA (200 mg / kg) trong 6 tuần nữa không chỉ làm tăng trọng lượng cơ thể, mà còn cải thiện các chỉ số cơ quan miễn dịch, chẳng
hạn như lá lách và tuyến ức.
• Những kết quả này chứng minh rằng SMPA có tác dụng chống ung thư thông qua kích hoạt phản ứng miễn dịch của sinh vật chủ và không
cho thấy tác dụng phụ rõ rệt.