Nobel díj, Kémia - 2018

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018

Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése

A fehérjék vizsgálatának klasszikus, fehérjemérnöki megközelítése egyedi fehérje-mutánsok vizsgálatán alapul. 

https://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018
Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése
A fehérjék vizsgálatának klasszikus, fehérjemérnöki megközelítése egyedi fehérje-mutánsok vizsgálatán alapul. 

vad tipusú fehérje

mutáns fehérjék

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018
Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése

vizsgált fehérje génje

szükség esetén mutáns gének könyvtára mutáns fehérjék

újjabb mutánsok
létrehozása

mutáns gének könyvtára szelekció

kiválasztott fehérjék nem-kötő fehérjék

https://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo
Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018
Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése
Hogyan tudjuk elrontani a fehérjét?

Hibát ejtő (error – prone) PCR PCR működése

- gyakrabban hibát ejtő DNS-Polimeráz enzim használata https://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo
- a nukleotidok egyenltlen adagolása
- reakciókrülmények hibára hajlamosító beállítása (pl: hő)

Hátránya
Nehéz a helyes mutációs ráta megválasztása
Magas mutációs ráta esetén :
Gyakoribbak a teljes funkcióvesztett mutánsok amik „eltakarhatják” a megváltozott funkciójő fehérjéket
Aalcsony mutációs ráta esetén:
A vadtipusú fehérjék dominánsabbak a kimutatás során

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018
Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése
Szelekciós eljárás

Riboszóma-bemutatás fehérje
A gén ezekből áll
- transzkripciós promóter
- riboszóma kötőhely
- könyvtárfehérje génje
peptid linker
- peptid linker génje
- nincs STOP kodon

A folyamat során:
- a könyvtárfehérje és az azt követő linker átíródik,
- a riboszóma az mRNS végére ér riboszóma
- STOP kodon hiánya miatt nincs disszociáció
5’ mRNS
- a peptid linker miatt a fehérje el tud távolodni a
riboszómátol
- szelekció során a kötőpartner hozzáfér
Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018
Irányított mutagenezis - egyes aminosavak célzott kicserélése
Szelekciós eljárás

Fág bemutatás

A folyamat során:
- a kivánt fehérje génjét a fág
burokfehérjegénjéhez kötik egy
linkert kódoló szakaszon
keresztül
- A fúziós fehérje beépül a fág
burkába, így megjelenik a
felszinen
- a felszinen létrejöhet a
kapcoslat a fúziós partnerrel a
fizikai kapcsolat
- Véghezvihető a szelekció

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html
Nobel díj, Kémia - 2018

Összefoglalás

Az irányított evolúciós technikák által rengeteg fehérje variánst állíthatunk elő egy időben
vizsgálhatjuk tualjdonságaikat és ezek alapján szelektálhatunk
Az így kiválasztott fehérjék jobb, más tipusú katalizátorok lehetnek

Forrás: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/Gentechnologia/ch16.html