Stereohemijski aspekti aktivnosti lekova i metode za odreivanje enantiomera

Dipl. farm. Naa Kosti

 Stereohemija: - prouava prostorni raspored atoma/atomskih grupa u molekulu

- deli se na: statiku (prouava strukturu molekula u prostoru) i dinamiku (prouava stereohemijski tok reakcija)
Hiralnost (stereoizomerija) - osobina predmeta da se ne moe preklopiti sa svojim likom u ogledalu 1848. Louis Paster razdvojio 2 izomera natrijum amonijum tartarata hiralne osobine poseduju svi proteini, enzimi, amino-kiseline, ugljeni hidrati, nukleozidi, kao i veliki broj alkaloida i hormona

R A

B D E

S D

B A E

supstituent sa najmanjim prioritetom

Elementi simetrije: Ravan simetrije () zamiljena ravan koja deli molekul na dve polovine, koje se odnose kao predmet i lik u ogledalu
H H OH COOH COOH

OH

Centar simetrije (i) zamiljena taka kroz koju prolaze prave koje spajaju ekvivalentne supstituente na istim rastojanjima od centra simetrije
HOOC H H HO COOH OH

Elementi simetrije: Osa simetrije (Cn) zamiljena osa n-reda oko koje se rotira molekul za 360/n pri emu zauzme poloaj koji se ne razlikuje od poetnog

H Cl Cl Cl

Naizmenina osa simetrije ili rotaciono-refleksiona osa (Sn) molekul poseduje ovu osu simetrije n-reda ako obrtanjem za ugao 360/n oko te ose, a zatim refleksijom kroz ravan, upravnu toj osi, daje strukturu identinu polaznoj polaznoj
H H H H H H H H H H H H

Stereoizomeri - jedinjenja iste konstitucije a razliite konfiguracije

enantiomeri stereoizomeri koji se odnose kao predmet i lik u ogledalu

diastereoizomeri stereoizomeri koji se ne odnose kao predmet i lik u ogledalu svi stereoizomeri koji nisu enentiomeri

geometrijski izomeri kod alkena i ciklinih jedinjenja usled nemogunosti slobodne rotacije

konformaciona izomerija odnosi se na prostorni oblik molekula, konformacioni izomeri prelaze jedan u drugi rotacijom oko proste veze

A D A B D A B B D D

A B

Homohiralnost sve amino kiseline skreu ravan polarizovane svetlosti na levo karboksilne kiseline koje u svom molekulu sadre amino grupe prirodne AK su 2-aminokiseline ili -amino kiseline odrastao ovek sintetie sve osim 8 AK - esencijalne sve AK izuzev prolina su 1 amini sve AK izuzev glicina su hiralne (stereocentar je S konfiguracije)

COOH

COO H2N H R H

u vrstom stanju

H2N R

zwitter-jon
H2NCH2COO

u vodenom rastvoru

H2NCH2COOH H

H2NCH2COO H
zwitter-jon

protonovana amonijum-karboksilna kiselina

deprotonovani 2-aminokarboksilatni jon

Izoelektrina taka
-pH vrednost na kojoj je koliina protonovane aminokiseline jednaka koliini deprotonovane - srednja vrednost dve pKa vrednosti aminokiseline, osim kada se na bonom nizu nalazi dodatna kisela ili bazna funkcionalna grupa

Osobine enantiomera: strukture enantiomera se odnose kao predmet i lik u ogledalu i ne mogu se preklopiti nemaju refleksione elemente simetrije, hiralni su reaguju jednako se ahiralnim hemijskim i fizikim agensima

imaju iste fizike konstante izuzev ugla rotacije planarno polarizovane svetlosti u ahiralnom okruenju enantiomeri imaju identine fizike i hemijske karakteristike
zbog razlika u trodimenzionalnoj strukturi, enantiomeri ispoljavaju razliito ponaanje u biolokim sistemima npr. na receptorima ili enzimima pod uslovom da je hiralni centar u regionu koji ima ulogu u vezivanju enantiomera za receptor razliita farmakoloka aktivnost, toksinost, farmakokinetika itd.

Farmakoloka aktivnost 1. Racemati kod kojih aktivnost potie od jednog enantiomera Eutomer - farmakoloki aktivan enantiomer Distomer - farmakoloki manje aktivan ili neaktivan enantiomer, moe biti toksian ili ispoljavati druge eljene ili neeljene efekte - blokatori
CH3

O H OH

N H

CH3

R(+)-propranolol se koristi u tarapiji hipertireoidizma, bez efekta - blokatora S(-)-propranolol

2 - agonisti
HO HO H H N CH3 CH3 CH3 HO

S(+)-albuterol je odgovoran za neeljene efekte

R(-)-albuterol

Antagonisti kalcijumovih kanala

CH3 NC CH3 CH3 N OCH3

H3CO OCH3

OCH3

R(+)-verapamil ima manje toksinih efekata, primenjuje se za smanjenje pojave multiple rezistencije kod hemoterapije

S(-)-verapamil

Antibiotici
H CH3 H3C N O N N

HO F O

- ista sposobnost transporta u eliju - razliita inhibitorna aktivnost prema target enzimu DNK-girazi - afinitet vezivanja za enzim je slian, ali je molarni odnos vezivanja za aktivno mesto enzima vei kod aktivnijeg izomera (4:2)

S(-)-ofloksacin (levofloksacin )

Antiepileptici
NH2

R(-)-vigabatrin je neaktivan
HOOC

S(+)-vigabatrin

Opioidni analgetici racemorfan

OH HO

N H3C H H

dekstrorfan antitusik
H H

N CH3

levorfanol analgetik

Antagonisti H1 receptora
Cl

H C N N CH2CH2OCH2COOH

S-izomer ima 30 puta manji afinitet za H1 receptore i 20 puta bre disosuje sa receptora

R-cetirizin (levocetirizin)

2. Racemati iji enantiomeri imaju jednaku bioloku aktivnost Antineoplastici

O P NH N O Cl

Antiaritmici
Cl
F3C O O

ciklofosfamid

Antidepresivi
HN O HN CF3
H3C H N O

flekainid

CF3

fluoksetin

3. Racemati sa hiralnom inverzijom Jednosmerna inverzija

CH3 CH3

CH3

COOH

hepatini enzimi
H3C

CH3

COOH

H3C

R-ibuprofen, neaktivni

S-ibuprofen, aktivni

Dvosmerna inverzija
H N O

OH Cl N

N NH O O

oksazepam racemizuje in vitro

talidomid racemizuje in vitro i in vivo

Toksinost toksini efekti - svojstveni ili samo jednom enantiomeru ili racematu
HO COOH

NH2 HO

L DOPA zbog pojave agranulocitoze koju izaziva D-izomer

HS NH2
O

OH

S penicilamin je antireumatik, R izomer je ekstremno toxian

N NH O O

S(-) izomer talidomida (distomer) je teratogen, ali su praktino oba genotoksina zbog interkonverzije in vivo

O P NH

O N

Cl

oba izomera ciklofosfamida su podjednako toksini

Cl

Mnogi hiralni lekovi se jo uvek proizvode kao racemati ili zbog toga to je njihova hiralna separacija teka, ili su farmakoloki i toksini efekti karakteristini za oba enantiomera ili je proizvodnja odvojenih enantiomera preskupa.

Farmakokinetike osobine stereohemija ima vanu ulogu u biotransformaciji lekova veina enzima pokazuje stereoselektivnost a ne stereospecifinost 1. Stereoselektivnost supstrata dva enantiomera metaboliu u razliitom odnosu
HO H2N HO COOH CH3 HO HO H2N H CH3

S--metildopa podlee dekarboksilaciji do S--metildopamina

R--metildopa ne podlee dekarboksilaciji

2. Stereoselektivnost proizvoda nastaje novi hiralni centar

HO O O

NH HN O HN O

NH

fenitoin podlee aromatinoj hidroksilaciji na samo jednom fenil radikalu

CH3 N CH3 CH3 O HO CH3

CH3 N CH3

metadon

-metadol

3. Stereoselektivnost supstrata i proizvoda favorizovan nastanak jednog diastereoizomera

O

HO
CH3

H CH3 Ph OH H2C

OH CH3 Ph

OH

H2C Ph H

OH

H2C

H O O

+ O O

R(+)-varfarin

R,S(+)-alkohol glavni proizvod

O

R,R(+)-alkohol sporedni proizvod

O

OH

H2C H Ph

CH3

OH HO

H2C H Ph

CH3

S(-)-varfarin

S-6-hidroksi varfarin

Metode za odreivanje optike istoe Polarimetrija merenje ugla optike rotacije [] koji zavisi od: prirode supstance, duine puta, koncentracije rastvora ili gustine vrste supstance temperature rastvaraa talasne duine Gasna hromatografija osetljiva metoda, brza, jednostavna zasniva se na brzim i reverzibilnim diastereoizomernim interakcijama enantiomera na hiralnoj stacionarnoj fazi dovoljno isparljivi i termostabilni uzorci, kvantitativno razdvojeni na hiralnoj stacionarnoj fazi Tena hromatografija separacija se zasniva na interakcijama na hiralnoj stacionarnoj ili mobilnoj fazi

[ ] t =

lxc

[]t =

dxc

NMR
nakon prevoenja enantiomera u diastereoizomere pomou hiralnog reagensa hiralni agensi za derivatizaciju, hiralni solvatiui agensi, hiralni lantanid ift reagensi

Hiralna separacija procedura koja se koristi za razdvajanje dva izomera nalazi primenu u industriji i klinikim analizama industrijske metode mogu biti klasine i moderne klasine metode se zasnivaju na formiranju diastereoizomernih soli

diastereoizomerne soli se mogu razdvojiti: o kristalizacijom, o filtracijom, o klasinom nehiralnom hromatografijom o enzimski tj. kinetiki

 kao najbolja moderna metoda pokazala se hiralna HPLC indirektna HPLC derivatizacija uzorka hiralnim reagensom

dve diastereoizomerne soli razdvajanje na klasinoj RP koloni

direktna HPLC koristi hiralni selektor

hiralna stacionarna faza

hiralna mobilna faza hiralni aditivi mobilne faze jon-par aditivi: vinska kiselina, hinin, (+)-10-kamforsulfonska kiselina inkluzioni kompleksi: ciklodekstrini ligand izmenjivai: N-alkil hidroksiprolin sa bakar-acetatom proteinski aditivi: govei serumski albumin (BSA) i -karboksi glikoprotein

Hiralni sorbenti: ugljeni hidrati, poliakrilamid, Pirklove faze, hirobiotike faze ciklodekstrini

hiralni selektori obezbeuju enantiomerima hiralnu povrinu enantiomeri sa selektorima formiraju privremene komplekse sa razliitom energijom vezivanja dva enantiomera se zbog toga eluiraju na razliitim retencionim vremenima.

 klinike metode kompleksnost biolokih uzoraka i niska koncentracija analita ekstrakcija uz visok prinos iz biolokog materijala analitika procedura visoke osetljivosti, preciznosti i reproduktivnosti Hromatografske metode HPLC GC

J. Chromatogr. B, 854 (2007) 63-67

J. Chromatogr. A, 1214 (2008) 151-156

SFC

Kapilarna elektroforeza

Electrophoresis, 21 (2001) 3145-3151

Imuno-metode - ne zahtevaju ekstrakciju - vea osetljivost - potrebna manja koliina uzorka - ukrtena reaktivnost - tanost, preciznost dozvoljena su vea odstupanja

Angew. Chem. Int Ed. 114 (2002) 132-135