Mikroskopska vizualizacija

morfolokih i funkcionalnih
struktura bakterijske elije

Obrada materijala
Obrada materijala predstavlja skup
razliitih tehnika i postupaka koji imaju za
cilj izolaciju, identifikaciju bakterija i po
potrebi ispitivanje osetljivosti izolovanih
bakterija na hemioterapijska sredstva.

Mikroskop
Optiki delovi

Mehaniki delovi

Okular
Makrozavrtanj
Mikrozavrtanj
Objektivi

Telo mikroskopa
Stoi za preparat

Kondenzor

Zavrtanj za
pomeranje
kondenzora
Izvor svetla

Mikroskop
Ukupno uvelianje mikroskopa:
proizvod uvelianja okulara i uvelianja objektiva
Razdvojna mo mikroskopa (rezolucija):
najmanje rastojanje izmeu dve take na kome
se one vide odvojeno
(za svetlosne mikroskope 200 nm)

nerazdvojene

delimino razdvojene

razdvojene

Vrste preparata

1. Nativni preparat
2. Bojeni preparat

1. Direktni preparat (iz materijala)

2. Preparat iz kulture

Mikroskop
Preporuke za mikroskopiranje:
koristiti objektive 10 ili 40 za posmatranje
bakterija na nativnom preparatu
koristiti imerzioni objektiv (100) za posmatranje
bakterija na bojenom preparatu
postaviti preparat tako da razmaz bude okrenut
na gore, ka soivu objektiva

Nativni preparat
Nativni preparat omoguava vizualizaciju:

1. Oblika bakterija
2. Veliine bakterija
3. Pokretljivosti bakterija

Osnovni oblici bakterija

Koke
(loptast)

Bacili
(tapiast)

Kokobacili

Spirohete
(spiralan)

Vibrio

Veliina bakterija
nekoliko mikrona
ali:

Thiomargarita namibia

Nativni preparat
Vrste nativnog preparata:

1. Nativni preparat (u uem smislu)

2. Visea kap
3. Tamno polje

Nativni preparat

Nativni preparat

Objektiv

Nativni preparat

Nativni preparat - visea kap

Nativni preparat - visea kap

Nativni preparat - tamno polje

SVETLO POLJE

TAMNO POLJE

u svetlom polju se spirohete ne vide jer je popreni presek ovih

bakterija 0,1 m (rezolucija svetlosnog mikroskopa je 0,2 m)
tamno polje omoguava posmatranje spiroheta

Nativni preparat - tamno polje

Bojeni preparat
Bojeni preparat omoguava vizualizaciju:
1. Oblika bakterija
2. Veliine bakterija
3. Rasporeda bakterija
4. Pojedinih struktura bakterijske elije (kapsula, spore,
granule...)
ne i pokretljivost

Raspored (grupisanje) bakterija

Koke

Diplokoke

Streptokoke

Tetrade Sarcine

Bacili

Kokobacil

Diplobacili

Streptobacili

Vibrio

Spirohete
Stafilokoke

Bojeni preparat
Podela bojenja u bakteriologiji:
prosta bojenja
sloena bojenja: diferencijalna
specijalna

Prosto bojenje metilenskim plavim

Diferencijalna bojenja

bojenje po Gram-u
bojenje po Ziehl-Neelsen-u

Bojenje po Gram-u
Omoguava razlikovanje:
Gram-pozitivnih bakterija (plavo-ljubiasto obojene)
Gram-negativnih bakterija (crveno obojene)
razlika u bojenju je posledica razlika u grai
elijskog zida

elijski zid Gram pozitivnih bakterija

elijski zid Gram negativnih bakterija

Bojenje po Gram-u
Gram pozitivne
bakterije
Gencijana violet
Rastvor joda
Alkohol (etanol)
Voda
Karbol fuksin / safranin
Voda

Gram negativne
bakterije

Bojenje po Gram-u

Specijalna bojenja
Bojenje intracitoplazmatskih granula (po
Neisser-u)
Bojenje spora (po Hauser-u)
Bojenje kapsule (po Olt-u)

Bojenje intracitoplazmatskih
granula

Bojenje kapsule

Priprema razmaza za bojeni

preparat