TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH

Yêu cầu: Theo như lời thầy cô nói thì sẽ yêu cầu tìm 2 trong 4 con vi khuẩn gây bệnh:
E.coli, S.aureus. Salmonella, P.aeruginosa, (enterobacteria và vi khuẩn gram âm)

Tìm lần lượt theo các bước, tới bất cứ bước nào kết quả không đúng thì kết luận không có
vi khuẩn đó.

1. Tìm S.aureus

Ngày 4: Từ bình TSB cấy lên môi trường MSA

Ngày 5: Trên môi trường MSA: KL màu vàng, môi trường từ màu đỏ chuyển sang màu
vàng => Nhuộm gram: Gram dương (màu tím) hình cầu, xếp thành chùm nho => yêu cầu
được xem phản ứng coagulase: Huyết tương bị đông tụ ở mọi mức độ => KẾT LUẬN CÓ
S.AUREUS

Trên môi trường MSA Nhuộm gram

Phản ứng coagulase

 TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH
2. Tìm P.aeruginosa

Ngày 4: từ bình TSB cấy lên môi trường Cetrimid

Ngaỳ 5: Trên môi trường Cetrimid: KL màu lục nhạt, phát huỳnh quang lục dưới tia cực
tím => làm phản ứng sinh hóa :

 Phát hiện khả năng tạo sắc tố: có thể thầy cô sẽ cho 2 đĩa và soi UV cho luôn, nếu không
thì mình tự phải đi soi UV để xem sự phát huỳnh quang:
 Trên môi trường: Pseudomonas F: KL ko màu đến vàng nhạt, phát huỳnh quang
màu vàng nhạt
 Trên môi trường Pseudomonas P: KL màu vàng nhạt phát huỳnh quang màu xanh
nước biển
 Phản ứng oxidase: phải tự làm
 Bước 1: Tẩm thuốc thử N,N – dimethyl – phenyl diamin dihydroclorid 1% lên một
mẩu giấy lọc
 Bước 2: dùng que cấy đã đốt tiệt trùng lấy một khuẩn lạc nghi ngờ chấm lên mẩu
giấy
 Bước 3: Phản ứng dương tính: Thấy màu đỏ hồng chuyển sang tím => KẾT LUẬN
CÓ P.AERUGINOSA

Trên môi trường Cetrimid Phản ứng oxidase

 TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH
Pseudomonas F Pseudomonas P

3. Tìm Salmonella

Ngày thứ 4: Từ bình tetrathionat cấy phân lập lên mooi trường thạch xanh brilliant và thạch
bismuth sulfit agar (BSA)

Ngày thứ 5:

Nếu không thấy các khuẩn lạc màu đen -> không có salmonella

Nếu có khuẩn lạc màu đen -> Nhận định vi khuẩn: Nhuộm gram: hình que, gram âm (bắt
màu hồng), sắp xếp riêng lẻ => yêu cầu thầy cô cho xem phản ứng sinh hoá: cấy vào ống
thạch KIA

 Phần thạch nghiêng màu đỏ -> Lactose (-)

 Phần thạch tròn: màu vàng -> glucose (+); thạch không bị nứt -> Gas (-)
 Phần tiếp giáp giữa 2 phần có màu đen -> H2S (+)
 KẾT LUẬN: CÓ SALMONELLA
Nhuộm gram Môi trường KIA
 TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH
Trên môi trường BSA

4. Tìm E.coli

Ngày 4: từ bình TSB cấy lên môi trường Mac conkey (MC) và mt EMB

Ngày 5:

Trên môi trường MC: khuẩn lạc có màu đỏ

Trên môi trường EMB: KL màu tím đen có ánh kim loại

 Yêu cầu được xem phản ứng sinh hóa IMVIC:

- Indol (+): nhỏ thuốc thử Kovac’s -> có vòng màu đỏ hoặc hồng trên mặt ống nghiệm
- Methyl Red (+): Môi trường chuyển sang màu đỏ
- Voges – Proskauer (-): Không có màu đỏ cam trên bề mặt môi trường
- Citrat (-): môi trường màu xanh lá

KẾT LUẬN : MẪU CÓ E.COLI

 TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH
Trên mt MC Trên mt EMB

Indol (+) Methyl Red (+)

Citrat (-) Voges – Proskauer (-):

5. Tìm enterobacteria và vi khuẩn gram âm (Không biết có ra không nữa)

 TÌM VI KHUẨN GÂY BỆNH
Ngày 4: từ bình môi trường Enterobacteria Mossel cấy lên môi trường Violet Red bile
agar (VRBA)

Ngày 5: Trên môi trường VRBA: KL màu hồng đến đỏ => KẾT LUẬN CÓ
ENTEROBACTERIA .

Nếu không có khuẩn lạc đặc trưng => Không có enterobacteria

 MỘT SỐ CHÚ Ý:
 Đốt que cấy thật kỹ và đảm bảo que cấy đã nguội trước khi nhúng vô bình
 Lắc kỹ bình trước khi cấy
 Lấy 2-4 vòng vi khuẩn để ria từ A->B
 Lấy đúng môi trường phân lập
 Trường hợp có yêu cầu tìm salmonella và một vi khuẩn khác nếu thấy có 2 bình
thì phải nhìn kỹ bình ghi môi trường gì: tìm salmonella cấy từ bình tetrathionat,
vi khuẩn còn lại cấy từ TSB.