‫َّ‬ ‫َّ‬

‫حبثٌٌتقدمتٌٌبهٌالطالبة ٌ‬

‫ِّ‬
‫إىلٌجملسٌقسمٌالكيمياء‪-‬كليةٌالعلومٌيفٌجامعةٌٌالقادسية ٌ‬

‫وهيٌمنٌمتطلباتٌنيلٌشهادةٌبكالوريوسٌيفٌالكيمياء ٌ‬

‫بإشراف‬
 ‫إىل روحهِ اليت تُرفرف يف جنانِ الرّمحن‪...‬أبي‬

‫إىل اإلنسانة اليت علقتُ عليها آمايل يف اجتياز هذا الدرب الطويل‪...‬أمّي‬

‫إىل شقيق الرّوح و ظالهلا الدّافئة‪ ...‬أخي حسني‬

‫إىل رفيق دربي بكلِّ احلبّ والوفاء‪ ...‬زوجي أكرم‬

 ‫ال ّشكر هلل وحده ّ‬
‫الذي كان لي خير معين ونصير‪.‬‬
‫أتق ّدم بجزيل ال ّشكر إلى عمادة كلية العلوم‪/‬جامعة القادسية‪ ,‬والسيّما قسم‬
‫الكيمياء ‪ُ ,‬ث ّم أُق ّدم أَسمى آيات ال ّشكر و العرفان إلى االستاذة نـوال خنطيل‬
‫جبّـار التي مهّدت لنا طريق العلم والمعرفة ‪ ,‬واضاءت بعلّمِها وتوجيهاتها‬
‫المبّاركة عقولنا‪ .‬فلكِ م ّني ك ّل ال ّتقدير والوفاء‪.‬‬
‫أرقام الصفحات‬ ‫الموضوع‬

‫‪4-3‬‬ ‫المقدمة‬

‫‪8-5‬‬ ‫التمهيد ‪ :‬التحاليل المناعية المرتبطة‬

‫‪13-9‬‬ ‫المبحث األول ‪ :‬نشأة االليزا‬

‫‪10‬‬ ‫اوال ‪ :‬تأريخ ‪Elisa‬‬

‫‪10‬‬ ‫ثانيا ‪ :‬تعريف تقنية ‪Elisa‬‬

‫‪11‬‬ ‫ثالثا ‪ :‬مبدأ ‪Elisa‬‬

‫‪11‬‬ ‫رابعا ‪:‬مزايا ‪Elisa‬‬

‫‪12‬‬ ‫خامسا ‪ :‬تطبيقات ‪Elisa‬‬

‫‪13‬‬ ‫الفرق بين ‪ Spector photometer‬و ‪Elisa‬‬

‫‪19-14‬‬ ‫المبحث الثاني ‪ :‬أنواع وقياسات االليزا‬

‫‪17-15‬‬ ‫أقسام ‪Elisa‬‬

‫‪19-18‬‬ ‫مكونات ‪Elisa‬‬

‫‪21-20‬‬ ‫فهرس المصادر والمراجع‬

‫‪2‬‬
3
 ‫بسم هللا الرَّ حْ َم ِن الرَّ ِح ِيم‬
‫ِ‬
‫الحم ُد هلل الذي َب َرأ ال َّنسم ‪ ,‬وعلم بالقلم ‪ ,‬وعلم اإلنسان ما لم يعلم ‪ ,‬وأفضل الصالة و‬
‫السالم على مح ّم ٍد و أل ِه سادة األُمم ‪.‬‬

‫أما بع ُد‬

‫فقد كانت األمراض والمشاكل الصحّ ية تؤرّ ق كثيرا من الناس‪ ،‬فلم يكن هناك عالج‬
‫متاح‪ ،‬ولم يكن هناك مراكز طبّية متطورة‪ ،‬ولكن مع تق ّدم العلم وتطوّ ره‪ ،‬ظهرت العديد من‬
‫التقنيات التي سهّلت عمل المراكز الصحّ ية‪ ،‬وتمكن العلماء من إيجاد عالج لكثير من األمراض‬
‫التي كانت منتشرة‪ ،‬وظهرت مع ّدات طبّية جديدة ومتطوّ رة‪ ،‬أتاحت الكشف عن األمراض بشكل‬
‫أسرع‪ ،‬وعالجها بشكل فوري‪ ،‬وأصبحت التقنيات الطبّية متناهية في الصغر‪ ،‬ودقيقة‪ ،‬وتم ّكن‬
‫األطباء من إجراء العديد من العمليّات عن بعد‪ ،‬وبدأ اإلنسان في تطوير الروبوتات الطبّية‪،‬‬
‫والتي تساعد في العمليّة العالجيّة للمرضى ‪ ,‬ومن هنا جاءت هذ ِه ال ِّدراسة التي حملت عنوان‬
‫ت الكيمياء السريريِّة)‪ ,‬لتسليط الضوء على‬ ‫(تقنيِّة جهاز االليزا و فوائده المختبريِّة في مجاال ِ‬
‫ماهيِّة هذا الجهاز وكيّفيَّة علمه وأقسامه و مكوناته‪.‬‬

‫وقد اقتضت طبيع ُة الحث تقسمه على تمهي ٍد و مبحثيِّن ‪ ,‬وقد تناولت في التمهيد (التحاليل‬
‫المناعيِّة المرتبطة) ‪.‬‬

‫أما المبحث األوّ ل فتناولت فيه (نشأة االليزا) ‪ .‬وقد قُسِّم علي خمس َة فقرات ‪:‬‬

‫األولى‪ :‬تأريخ االليزا ‪ ,‬والثانية‪ :‬تعريف االليزا ‪ ,‬والثالثة‪ :‬مبدأ االليزا ‪ ,‬والرابعة‪ :‬مزايا األليزا ‪,‬‬
‫والخامسة‪ :‬تطبيقات االليزا ‪.‬‬

‫أما المبحث الثاني فتناولت فيه (أنواع قياسات االليزا) ‪.‬‬

‫وفي الختام أدعو هللا مخلصة أن يوفقنا لخدمة العلم والمعرفة وأخر دعوانا أن الحم َد هللِ‬
‫ربِّ العالمين ‪.‬‬

‫الباحثة‬

‫‪4‬‬
‫تقنية االليزا او ما يعرف بتقنية االجسام المناعية المرتبطة هي تقنية بايوكيميائية تستعمل‬
‫لتعيين مادة معينة في العينة الخاضعة لالختبار تعرف ‪ Antigen‬الذي عادة ما يتواجد في‬
‫العينة التي يراد اجراء االختبارات عليها ‪,‬وهذا يتطلب وجود مادة تتوافق مع االنتيجين تدعى‬
‫‪ Antibody‬حيث لكل ‪ Antigen‬يوجد ‪ Antibody‬خاص به ‪:‬‬

‫هي مركبات موجودة ضمن الجهاز المناعي للجسم وتصنع بشكل خاص عند تعرض الجسم‬
‫ألجسام غريبة ‪.‬‬

‫هو جسم مسؤول عن إثارة الجهاز المناعي للجسم وبالتحديد أثارة األجسام المضادة‪.‬‬

‫‪6‬‬
‫هي اختبارات بيوكيميائية لقياس مستوى مادة معينة في السائل الحيوي ( سيروم ‪ ,‬بول ‪,‬‬
‫لعاب‪ ,‬دموع ) بواسطة ارتباط ‪ Antibody‬مع ‪ Antigen‬المخصص له‪.‬‬

‫هي المادة الحيوكيميائية التي يتم قياسها ‪.‬‬

‫وفي التحاليل المناعية يكون ‪ Analite‬أمّا ‪:‬‬

‫‪. Antibody‬‬

‫‪. Antigen‬‬

‫‪7‬‬
 ‫يكون ‪ Antigen‬أمّا ‪:‬‬

‫موجود في الجسم بشكل طبيعي مثل الهرمونات‪.‬‬

‫يتم تصنعيه في الجسم في حاالت مرضية ‪ ,‬مثل هرمون ‪ HCG‬الذي يفرز من خاليا‬
‫المشيمة بشكل طبيعي أثناء الحمل ‪ ,‬كما يمكن إفرازه في بعض أنواع السرطانات حتى عند‬
‫الرجال ‪.‬‬
‫غير موجود في األحوال العادية ‪ ,‬مثل ‪:‬المخدرات ‪.‬‬

‫_________________________________‬

‫يتم تصنيع األجسام المضادة في حال التعرض لألجسام الغريبة ‪ Antigen‬وتكون هذه األجسام‬
‫المضادة ذات تخصصيّة ‪ Spcific Affinity‬لألجسام الغريبة التي أثارت تصنيعها‪.‬‬
‫هناك أكثر من طريقة لتصنيع األجسام المضادة ‪ ,‬واحدة من أكثر هذه الطرق شيوعا لتصنيع‬
‫لجسم ما (‪ )Antigen‬هو حقن هذا الجسم الحيوان وبعد ذلك يتم‬‫ٍ‬ ‫‪ Antibody‬مخصص‬
‫استخالص ‪ Antibody‬يسمى ‪ Polyclonal‬ألنه ناتج تصنيع عدة خاليا‪.‬‬

‫هنالك طريقة تصنيع ‪ Antibody‬أكثر تخصصا ‪ Monoclonal Antibody‬هو ناتج‬

‫تصنيع مجموعة خاليا متماثلة تماما ‪. Cell Line‬‬

‫ونحصل على هذه الخاليا بدمج خلية مصنعة للجسم المضاد مع خلية سرطانية لها القدرة على‬
‫االنقسام إل ما ال نهايّة‪.‬‬

‫‪8‬‬
‫في عام ‪1971‬م قام بيتر بيرلمانّ و ايفا انغفال في جامعة ستوكلوم في السويد ‪,‬‬
‫وآنطونسكارزوبايك فان وييمين في هولندا بنشر أوراق بحثيِّة تولدت هذ ِه المعرفة في أساليب‬
‫أداء األثر البيئي ‪.Elisa‬‬

‫وفي عام ‪2012‬م كان اختبار الحساسيّة ‪ Elisa‬القائم على األنزيم ذلك باستخدام‬
‫الجُ سيمات النانويّة كمُرسِ ل لوني قادر على إعطاء إشارة بالعين المجردة ‪ ,‬يظهر اللون األزرق‬
‫للحصول على نتائج إيجابيِّة ‪ ,‬ولون أحمر للحصول على نتائج سلبيِّة‬
‫_________________________________‬

‫هو اختبار سريع و هذ ِه التقنية ُتستخدم لقياس تركيز مادة جزيئيّة مثل الهرمونات‬
‫والمستضدات البكتيريِّة و األجسام المضادة تستخدم البروتينات بدال من الجزيئات الصغيرة و‬
‫األيونات بدل الكلوكوز والبوتاسيوم ‪ .‬موجودة في السائل الحيوي كالسيرم ‪ .‬هذه المادة الجزيئيّة‬
‫ُتقاس عن طريق معرفة كميّة األجسام المضادة ‪ Antibody‬والتي ارتبطت بـ ‪. Antigen‬‬

‫‪10‬‬
‫تستند هذه التقنية على مبدأ ‪ .Enzyme immunoassay ElA‬في هذه التقنية تثبت‬
‫االضداد او المستضدات في حفر صفيحة بالستيكية تدعى ‪ .Microtiter plate‬توضع‬
‫عينات مصل المرضى وعينات السيطرة في حفر الـ ‪ Microtiter plate‬فيحدث ارتباط بين‬
‫االضداد و المستضدات‪ .‬و بعد ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة‪ ،‬تغسل الـصفيحة‬
‫بواسطة محلول غسل خاص إلزالة المواد غير المرتبطة‪ .‬بعد ذلك يضاف انزيم مرتبط بجزيئة‬
‫الضد ‪ Enzyme conjugate‬و يحضن لمدة نصف ساعة‪ .‬وبعد خطة غسل اخرى يتم‬
‫اضافة المادة االساس ‪ Substrate‬وتحضن الصفيحة لمدة ‪ 02‬دقيقة ‪ ،‬حيث يظهر لون‬
‫(أزرق عادة) في الحفر‪ .‬ثم يضاف بعد ذلك محلول ‪ Stop solution‬حيث يتغير اللون من‬
‫االزرق الى االصفر‪ .‬تقاس شدة اللون باستخدام جهاز المطياف بطول موجي ‪.nm 052‬‬
‫يتناسب تركيز الضد او المستضد المراد قياسه مع شدة اللون تناسبا طرديا‪.‬‬

‫_________________________________‬

‫أقل تكلفة ‪ ,‬و أكثر أمانا ‪.‬‬

‫عال من الدقة ‪.‬‬

‫سهولة التصور من النتائج مع مستوى ٍ‬

‫فحوصاته محددة وحساسة للغاية التي يمكن الكشف عن البروتين في ‪,pm‬ومجموعة ‪.nm‬‬

‫تتم بسهولة ألداء أعداد كبيرة من االختبارات ‪.‬‬

‫تتطلب الحد األدنى في الكواشف ( الكشف النوعيّ ‪ ,‬او القياس الكميّ أمّا مستضد أو‬
‫األجسام المضادة )‪.‬‬

‫يمكن القيام به من الموظفين مع الحد األدنى من التدريب ‪.‬‬

‫‪11‬‬
 ‫تحليل الهرمونات ‪ ,‬و الفيتامينات ‪.‬‬

‫رصد المخدرات العالجية ‪.‬‬

‫اجراءات التشخيص ‪.‬‬

‫يستخدم في التشخيص الطبيّ لإلنسان و الحيوانات ‪.‬‬

‫يستخدم لقياس مستوى األجسام المضادة (الحساسية ‪ ,‬و اللقاحات ) ‪.‬‬

‫الكشف عن الفيروسات ( التهاب الكبد ‪ ,‬و أمراض فيروس نقص المناعة البشرية‬
‫التناسلية) ‪.‬‬

‫الكشف عن التغيرات الهرمونيِّة ( الحمل ) ‪.‬‬

‫الكشف عن عالمات التهابات الدورة الدمويِّة ‪.‬‬

‫‪12‬‬
 ‫هو ِّدراسة كميِّة الطيِّف الكهرومغناطيسي ‪ ,‬حيث يتعامل فقط مع الضوء المرئي ‪ ,‬و‬
‫االشعة فوق البنفسجية ‪ ,‬و األشعة تحت الحمراء القريبة ‪ ,‬وتعتمد فكرة الجهاز التحليل الطيِّفي‬
‫على تسليط حزمة مركزة من شعاع ضوئي على العينة المراد تحليلها ‪ .‬ثم قياس شدة الضوء‬
‫الممتص في العينة ‪ ,‬و بالتالي تقدير تركيز مادة االختبار ‪.‬‬

‫الفرق الرئيسي بين القارئ لوحة االليزا والمطياف هو أن قراءة االليزا تستخدم عادة لقياس‬
‫التراكيز على عدد كبير من العينات حيث يمكنك أيضا استخدام حجم صغير جدا من العينة‪.‬‬
‫ويبدو أن المقياس الطيفي أكثر تعقيدا وأكثر تفصيال ‪.‬‬

‫‪13‬‬
‫في هذه الحالة يتنافس ‪ Antigen‬المطلوب قياسه في العينة مع ‪Lapeled Antigen‬‬
‫لالرتباط بالجسم المضاد ‪ .‬و في هذه الحالة تكون العالقة عكسية بين كميِّة ‪Antigen‬‬
‫المطلوب قياسه مع ‪. Lapeled Antigen‬‬

‫‪15‬‬
‫يكون المطلوب الكشف عن ‪ , Antigen‬و قياس تركيزه في العينة ‪ ,‬فيكون طبق االليزا‬
‫مغطى بالجسم المضاد ‪. Antigen‬‬

‫عندما يكون المطلوب الكشف عن ‪ Antigen‬وقياس تركيزه في العينة ‪ ,‬ففي هذه الحالة ‪:‬‬

‫يرتبط ‪ Antigen‬في العينة مع الجسم المضاد ‪.‬‬

‫يتم غسل الطبق إلزالة األجسام المضادة غير المرتبطة ‪.‬‬
‫بعد ذلك تتم إضافة أجسام مضادة أخرى و تكون هذه االجسام المضادة مرتبطة بإنزيم ‪.‬‬
‫يتم غسل الطبق أيضا إلزالة األجسام المضادة غير المرتبطة ‪.‬‬
‫ثم تضاف المادة االساس لإلنزيم ‪ ,‬ويتم حساب كميِّة ‪ Antigen‬عن طريق قياس كميِّة‬
‫ناتج التفاعل ‪.‬‬

‫‪16‬‬
 ‫عندما يكون المطلوب الكشف عن ‪ Antibody‬وقياس تركيزه في العينة ‪ ,‬ففي هذه‬
‫الحالة ‪:‬‬

‫ُيضاف ‪ Antigen‬المخصص لطبق االليزا و يُترك فترة حتى يلتصق ‪.‬‬

‫ُيضاف السيرم المحتوي على أنواع مختلفة من ‪Antibody‬‬
‫ُتسمى ‪. Primary Antibody‬‬
‫يرتبط ‪ Antibody‬في السيرم مع ‪ Antigen‬الموجودة في الطبق ‪.‬‬
‫يتم غسل الطبق إلزالة ‪ Antibody‬غير المرتبط ‪.‬‬
‫يُضاف ‪ Antigen‬آخر مرتبط بإنزيم ‪ Secondary Antibody‬وهذا‬
‫يمكنه االرتباط فقط في حال ارتباط ‪ Primary Antibody‬بالعينة الموجودة‬
‫بالطبق ‪.‬‬
‫يتم غسل الطبق إلزالة ‪ Antibody‬غير المرتبط ‪.‬‬
‫ُتضاف المادة االساس لإلنزيم ‪ ,‬ويتم حساب كميِّة ‪ Antibody‬عن طريق‬
‫قياس كميِّة ناتج التفاعل ‪.‬‬

‫‪17‬‬
‫لوحة (‪ )Well‬مع ‪ 8‬شرائط عمودية و ‪ 12‬تتضمن ‪( well 96‬حجيرة) يحدث التفاعل داخلها‬

‫انتيجن ‪Antigen‬‬

‫االجسام المضادة ‪Antibodies‬‬

‫محاليل مظهرة للون‬

‫محاليل لوقف التفاعل‬

‫ومن شروطه يكون الشحن في حزمة باردة و تكون على شكل طبقات ‪.‬‬

‫‪ -‬شكل اللوحة ‪:‬‬

‫تستخدم اللوحات مسطحة مكونة من ‪ 96‬جدار مصنوعة من البوليسترين‬

‫او كلوريد البولي فينيل في الغالبية العظمى ‪.‬‬

‫‪ -‬خصائص اللوحة ‪:‬‬

‫من المهم استخدام لوحات مخصصة لالليزا ؛ أل ّنها يتم تصنيعها للحفاظ على االلتصاق و التقليل‬
‫من آثار الحافة و توفير الظروف البصريّة األمثل لجميع البيانات ‪.‬‬

‫‪18‬‬
 ‫‪ -‬المخازن المؤقتة القياسية لالليزا ‪:‬‬

‫تستخدم عدة مخازن مختلفة خالل االليزا ‪ ,‬واحدة للطالء ‪ ,‬و واحدة للحجب‪ ,‬وأخرى للغسيل‪ ,‬و‬
‫أخرى لعينة و تجفيف األجسام المضادة ‪.‬‬

‫‪19‬‬
 Yalow, Rosalyn S.; Berson, Solomon A. (1960). .
"Immunoassay of endogenous plasma insulin in man". The
Journal of Clinical Investigation. 39: 1157–75.

Lequin, R. M. (2005). "Enzyme Immunoassay (EIA)/Enzyme-

Linked Immunosorbent Assay (ELISA)".

Clinical Chemistry. 51 (12): 2415-8

Engvall, Eva; Perlmann, Peter (1971). "Enzyme-linked

immunosorbent assay (ELISA) quantitative assay of
immunoglobulin G". Immunochemistry. 8 (9): 871–4.

Van Wee men, B.K.; Schuurs, A.H.W.M. (1971).

"Immunoassay using antigen—enzyme conjugates". FEBS
Letters. 15 (3): 232–236.

Leng, S. X.; McElhaney, J. E.; Walston, J. D.; Xie, D.;Fedarko,

N. S.; Kuchel, G. A. (2008). "ELISA and Multiplex Technologies
for Cytokine Measurement in Inflammation and Aging
Research''. The Journals of Gerontology Series A: Biological.
Sciences and Medical Sciences. 63 (8): 879–84.

21