praktická maturitní zkouška z 

TRANSFUZNÍCH SLUŽEB
otázka č. 10
Vyšetření matky a dítěte při podezření na HON
Vzniká při inkompatibilitě mezi erytrocytárními antigeny matky a dítěte v případě, že matka
vytváří inkompletní (IgG) protilátky proti erytrocytům dítěte. Tyto protilátky se
transplacentárně dostávají do oběhu dítěte a navazují se na příslušný antigen na
erytrocytech dítěte. V důsledku rozpadu krvinek (hemolýza, předčasně odbourávání) vzniká
u dítěte anemie (v důsledku vyplavení nezralých erytrocytů – erytroblastóza) a
hyperbilirubinémie (nebezpečí poškození centrálního nervového systému), které mohou vést
ke smrti dítěte.

Princip:
Při podezření na HON zjišťujeme, zda si matka vytvořila protilátky proti antigenům dítěte,
zjišťujeme typ protilátky, to znamená proti kterému antigenu je protilátka zaměřená a
stanovujeme její množství – titrací.
U dítěte prokazujeme, zda došlo k navázání protilátky na erytrocyty – to znamená, zda došlo
k senzibilizaci jeho erytrocytů.
Součást vyšetření je i krevní skupiny matky a dítěte.
Klinické oddělení dále sleduje známky anemie a hladinu bilirubinu a rozhoduje o eventuální
výměnné transfuzi (exsanguinace).

Pomůcky:
- krevní vzorek matky, krevní vzorek dítěte
- diagnostická séra se známou protilátkou a typové erytrocyty 0, A1, B (na vyšetření krevní
skupiny a typizace antigenů), screeningové a popřípadě panelové erytrocyty (na
vyšetření protilátek)
- AGH a kontrolní ery – senzibilizované (na účinnost AGH), enzym (bromelin), fyziologický
roztok
- centrifuga, termostat, zkumavky, pipety, atd.

Vyšetření matky:
PRAKTICKY
- krevní skupina a Rh faktor
- screeningové vyšetření protilátek – enzymatický test a NAT
TEORETICKY
- v případě pozitivity screeningu i určení specifity protilátky pomocí panelových erytrocytů a
to testem, ve kterém protilátka nejlépe reagovala ve screeningovém testu; stejným
testem stanovíme její množství (titrace séra geometickou řadou)
- při inkompatibilitě v AB0 systému mezi dítětem a matkou stanovíme titr imunních
protilátek -A, -B (stanovení se provádí po odstranění přirozených aglutininů – nejčastěji
jde o chemickou destrukci 2-merkaptoethanolem)
Vyšetření dítěte:
Při vyšetřování dáváme přednost vzorku žilní krve před krví z pupečníku. U pupečníkové
krve je nutno krvinky dobře proprat (falešně pozitivní reakce).
- krevní skupina (pouze aglutinogeny, nikdy ne aglutininy – vyvíjejí se až po půl roce
života) a Rh faktor, PAT
Všechna vyšetření provádíme stejně jako v předchozích kapitolách.
Při vyšetření krevní skupiny jsou nedostatečně vyvinuty aglutininy, proto u KS stanovíme
různými vyšetřeními aglutinogeny tak, abychom měli kontrolu správného výsledku
vyšetření (na skle + zkumavkový test, na skle + gelová karta).
- V případě, že dítě má senzibilizované erytrocyty protilátkou (PAT pozitivní), musíme si
uvědomit, že tato protilátka blokuje příslušný antigen na jeho erytrocytech dítěte a
můžeme mít falešně negativní výsledky při vyšetření tohoto antigenu (např. -D protilátky
při vyšetření Rh faktoru můžeme určit falešně Rh negativní faktor). K vyšetření ostatních
antigenů na krvinkách dítěte pak nelze použít inkompletní diagnostická séra – zde by
byly výsledky naopak falešně pozitivní.

Přímý Coombsův test = PAT – přímý antiglobulinový test

Přímým Coombsovým testem prokazujeme navázanou protilátkou na erytrocytech –
senzibilizací ery. K vazbě protilátky na ery došlo přímo v organismu (v těle člověka).
K takové vazbě dochází zejména u novorozenců postižených HON, u hemolytických anemií,
po inkompatibilní tranfuzi krve.

Krev k vyšetření: sražená i nesražená

Pomůcky:
- sérum AGH (anti globulinum humanum) – sérum obsahující protilátku proti lidské
bílkovině
- pozitivní kontrola na účinnost SAGH = 0 scr. ery senzibilizované protilátkou
- fyziologický roztok, zkumavky, centrifuga

Postup:
Vyšetřované erytrocyty 3x propereme ve fyziologickém roztoku. Na podložní sklíčko, které
máme popsané, kápneme jednu kapku SAGH a jednu malou kapku sedimentu
vyšetřovaných ery. Promícháme s dáme na 5-7 minut do vlhké komůrky do termostatu 37°C.

Erytrocyty 3x propereme ve fyziologickém roztoku a dále do označené zkumavky přidáme

odebraný sediment. Přidáme 1 kapku AGH, promícháme, inkubujeme 5-7 minut při 37°C
v termostatu a stočíme 1min/1000ot.
Negativita = mikroskop = CCC.
Odečítání:
Odečítáme mírným pohybem podložního sklíčka makroskopicky i mikroskopicky (vždy).

Odečítáme mírným poklepem na dno zkumavky.

Hodnocení:
- shluky erytrocytů = positivita (přítomnost navázané protilátky na vyšetřovaných
erytrocytech)
- volně rozptýlené erytrocyty = negativita
U negativního výsledku přikápneme na podložní sklíčko kontrolní (senzibilizované)
erytrocyty, promícháme a do 5 minut musí nastat aglutinace (kontrola účinnosti AGH).

Pozitivita:
- u HON v Rh inkompatibilitě – senzibilizace ery dítěte
- u AIHA = autoimunitní hemolytické anémie
- následkem potransfuzní isoimunní reakce
- u nadměrné retikulocytózy
- u perniciózní anémie
- při agamaglobulinémiích
- při výskytu protilátky proti penicilinu
- u anemií při chirurgických zákrocích na srdci.