DOKAZIVANJE AMINOKISELINA I PROTEINA

Sve reakcije za dokazivanje proteina mogu se podijeliti na OBOJENE

(dokazivanje peptidne veze ili pojedinih aminokiselina) i TALOŽNE
REAKCIJE ( temelji se na koloidnim svojstvima otopine proteina). Za te
reakcije najbolje je koristiti vodenu otopinu bjelanjka. Bjelanjak se u čašu odvoji
od žutanjka te se doda trostruki volumen vode. Nakon miješanja staklenim
štapičem, otopina se profiltrira preko lijevka sa filter papirom.
DODATAK

Koloidi su sustavi dvije ili više faza u kojima najmanje jedna faza ima čestice dimenzija između 1 nm i 1 μm (10-9 m – 10-
6
 m). Dimenzije čestica, više od prirode čestica, karakteriziraju koloide. Koloidne čestice se ne mogu odijeliti filtriranjem jer
su premalene i prolaze kroz pore filtar papira. Zbog malih dimenzija i male mase koloidne čestice se ne talože, već lebde u
otopini, praveći koloidnu otopinu. Takva je otopina naizgled bistra, ali za razliku od prave otopine pokazuje Tyndallov efekt.
Koloidne čestice mogu adsorbirat ione iz otopine čime nastaju koloidni ioni. Makromolekule (npr. bjelančevine) donja su
granica veličine koloidnih čestica a čestice koje se još ne mogu vidjeti optičkim mikroskopom gornja su granica.

Koloidne čestice mogu biti plinovite, tekuće ili čvrste. Dijelimo ih na:

sole - disperzije čvrstih čestica u tekućini

emulzije - disperzije tekućine u tekućini

gelove - koagulirani oblik koloidnih sustava

aerosole - disperzije čvrstih ili tekućih čestice u plinu

pjene - disperzije plinova u tekućinama ili čvrstim tvarima

U prirodi ima veoma mnogo koloida, a mnoge tvari već po veličini svojih molekula pripadaju koloidima kao što su škrob ili
bjelančevine.

Koloidi se mogu pripremiti disperzijom većih čestica ili kondenzacijom molekulskih otopina.

TALOŽNE REAKCIJE PROTEINA

1. REVERZIBILNO TALOŽENJE
Otopini proteina dodati čvrsti amonijev sulfat___________. Nastali talog otopi dodatkom vode.

ZAPAŽANJE:_____________________________________________________________________

2. IREVERZIBILNO TALOŽENJE
a.)TALOŽENJE POMOĆU KALIJEVOG HEKSACIJANNOFERATA______________
pribor i kemikalije: stalak s epruvetom, 2 kapaljke, bjelanjak, octena kiselina(10%)_______, kalijev
heksacijanoferat(c=0.05mol/dm3)__________.

Dodatkom nekoliko kapi octene kiseline i kalijevog heksacijanoferata u otopinu bjelanjka, nastaje
bijeli talog.

OBJAŠNJENJE: Veliki anioni poput ______ mogu neutralizirati pozitivan naboj proteina, čime se
smanjuje međusobno odbijanje koloidnih čestica i nastaje koagulacija.

b.) KOAGULACIJA PROTEINA

pribor i kemikalije:

-2 stalka sa po 6 epruveta, kapaljke, plamenik, drvena hvataljka, bjelanjak, koncentrirana dušična

kiselina_________, otopina deterdženta, etanol_____(w=96%),otopine soli(c=0.1 mol/dm3) K+, Ag+,
Ca2+, Hg2+, Fe3+ i Al3+,HCl

POSTUPAK:

U 12 epruveta ulijte po 2 mi otopine bjelanjka:

1. Epruveta – kuhanjem otopine bjelanjka u epruveti se izlučuje bijeli pahuljasti

talog:______________________
2. Epruveta – ako u otopinu bijelanjka uz stijenku epruvete dodajemo koncentriranu HNO3, na
graničnoj plohi nastaje bijeložuti pšrsten koaguliranih proteina:_________________
3. Epruveta- talog nastaje i dodatkom HCl ili H2SO4:____________________
4. Epruveta – do koagulacije dolazi kada se u otopinu doda otopina
detrdženta:________________
5. Epruveta- ako u otopinu s otopinom bjelančevina dodajemo etanol i protresemo, nastat će
talog koaguliranih bjelančevina:___________________

Do 11. Epuvete- u epruvete redom dodajemo nekoliko kapi otopine iona metala (K+, Ag+, Ca2+,
Hg2+, Fe3+ i Al3+,)i zabilježite koji ioni talože proteine:_______________________________

OBJAŠNJENJE:

Proteine možemo istaložiti i dodatkom teških metala u lužnatoj otopini. Kationi metala neutraliziraju
negativan naboj proteina zbog čega dolazi do taloženja.