Oпределение

Стволова клетка - недиференцирана клетка, която може да се дели, за да се получат

потомствени клетки, които продължават да бъдат стволови клетки, и някои клетки, които
са предназначени да се диференцират (да се специализират). Стволовите клетки са
постоянен източник на диференцираните клетки, които изграждат тъканите и органите на
животните и растенията. Интересът към стволовите клетки е голям, тъй като те имат
потенциал за разработване на терапии за заместване на дефектни или увредени клетки в
резултат на различни заболявания и увреждания, като болестта на Паркинсон, сърдечни
заболявания и диабет. Съществуват два основни вида стволови клетки: ембрионални
стволови клетки и възрастни стволови клетки, които се наричат още тъканни стволови
клетки.

ИСТОРИЯ
Терминът "стволова клетка" е въведен от Теодор Бовери и Валентин Хекер в края на XIX
в. Пионерски работи в областта на теорията на кръвната стволова клетка са проведени в
началото на XX в. от Артур Папенхайм, Александър Максимов, Франц Ернст Кристиан
Нойман. Основните свойства на стволовите клетки са дефинирани за първи път от Ърнест
Маккулох и Джеймс Тил в Университета на Торонто и Института за ракови заболявания в
Онтарио в началото на 60-те години на миналия век.

Ембрионални стволови клетки

Ембрионалните стволови клетки (често наричани ES клетки) са стволови клетки, които се

получават от вътрешната клетъчна маса на ембриона на бозайник в много ранен етап на
развитие, когато той е съставен от куха сфера от делящи се клетки (бластоцист).
Ембрионални стволови клетки от човешки ембриони и от ембриони на някои други видове
бозайници могат да се отглеждат в тъканни култури.

Миши ембрионални стволови клетки

Най-изучаваните ембрионални стволови клетки са ембрионалните стволови клетки на

мишки, за които се съобщава за първи път през 1981 г. Този тип стволови клетки могат да
бъдат култивирани за неопределено време в присъствието на инхибиращ левкемията
фактор (LIF), гликопротеинов цитокин. Ако култивирани миши ембрионални стволови
клетки се инжектират в ранен миши ембрион на етап бластоцист, те се интегрират в
ембриона и произвеждат клетки, които се диференцират в повечето или всички видове
тъкани, които се развиват впоследствие. Тази способност за репопулация на миши
ембриони е ключова характеристика на ембрионалните стволови клетки и поради нея те се
считат за плурипотентни - т.е. способни да дадат началото на всеки тип клетки на
възрастния организъм. Ако ембрионалните стволови клетки се съхраняват в култура в
отсъствие на LIF, те се диференцират в "ембриоидни телца", които донякъде приличат на
ранните миши ембриони в стадий яйчен цилиндър, с ембрионални стволови клетки във
външния слой на ендодермата. Ако ембрионални стволови клетки се присадят на
възрастна мишка, те ще се развият в един вид тумор, наречен тератом, който съдържа
различни диференцирани типове тъкани.

Миши ембрионални стволови клетки се използват широко за създаване на генетично

модифицирани мишки. Това се прави чрез въвеждане на нови гени в ембрионални
стволови клетки в тъканна култура, като се избира конкретният желан генетичен вариант
и след това генетично модифицираните клетки се вкарват в миши ембриони. Получените
"химерни" мишки са съставени отчасти от клетки на гостоприемника и отчасти от
донорски ембрионални стволови клетки. Докато някои от химерните мишки имат
зародишни клетки (сперматозоиди или яйцеклетки), които са получени от ембрионални
стволови клетки, е възможно да се отгледа линия мишки, които имат същата генетична
структура като ембрионалните стволови клетки и следователно включват генетичната
модификация, направена in vitro. Този метод е използван за създаването на хиляди нови
генетични линии мишки. В много от тези генетични линии са премахнати отделни гени, за
да се изследва тяхната биологична функция; в други са въведени гени със същите
мутации, които се срещат при различни генетични заболявания при човека. Тези "миши
модели" на човешки болести се използват в научните изследвания, за да се проучи както
патологията на болестта, така и нови методи за терапия.

Човешки ембрионални стволови клетки

Богатият опит с миши ембрионални стволови клетки даде възможност на учените да

отгледат човешки ембрионални стволови клетки от ранни човешки ембриони и през 1998
г. беше създадена първата линия човешки стволови клетки. Човешките ембрионални
стволови клетки в много отношения са подобни на мишите ембрионални стволови клетки,
но за поддържането им не е необходим LIF. Човешките ембрионални стволови клетки
образуват голямо разнообразие от диференцирани тъкани in vitro и образуват тератоми,
когато са присадени на имуносупресирани мишки. Не е известно дали клетките могат да
колонизират всички тъкани на човешкия ембрион, но въз основа на другите им свойства
се предполага, че те наистина са плурипотентни клетки, поради което се разглеждат като
възможен източник на диференцирани клетки за клетъчна терапия - замяна на дефектния
клетъчен тип на пациента със здрави клетки. От ембрионални стволови клетки биха могли
да се произвеждат големи количества клетки, като например неврони, секретиращи
допамин, за лечение на болестта на Паркинсон и инсулин-секретиращи бета-клетки на
панкреаса за лечение на диабет, за клетъчна трансплантация. Клетките за тази цел досега
можеха да се получат само от много ограничени източници, като например панкреасните
бета-клетки, получени от трупове на донори на човешки органи.
Използването на човешки ембрионални стволови клетки поражда етични проблеми, тъй
като ембрионите в бластоцистен стадий се унищожават в процеса на получаване на
стволовите клетки. Ембрионите, от които са получени стволовите клетки, са получени
чрез оплождане ин витро, а хората, които смятат, че предимплантационните човешки
ембриони са човешки същества, обикновено смятат, че подобна работа е морално
погрешна. Други я приемат, тъй като смятат бластоцистите за обикновени топки от
клетки, а на човешките клетки, използвани в лабораториите, преди това не е бил придаван
специален морален или правен статут. Освен това е известно, че нито една от клетките на
вътрешната клетъчна маса не е предназначена изключително да стане част от самия
ембрион - всички клетки дават част или цялото си клетъчно потомство на плацентата, на
която също не е придаден специален правен статут. Различията във възгледите по този
въпрос се илюстрират от факта, че използването на човешки ембрионални стволови
клетки е разрешено в някои държави и забранено в други. През 2009 г. Американската
агенция по храните и лекарствата одобри първото клинично изпитване, предназначено за
тестване на терапия, базирана на човешки ембрионални стволови клетки, но в края на
2011 г. изпитването беше спряно поради липса на финансиране и промяна в бизнес
директивите на водещата американска биотехнологична компания Geron. Терапията,
която е трябвало да бъде изпитана, е била известна като GRNOPC1, която се е състояла от
прогениторни клетки (частично диференцирани клетки), които, след като попаднат в
организма, узряват в невронни клетки, известни като олигодендроцити.
Олигодендроцитните предшественици на GRNOPC1 са получени от човешки
ембрионални стволови клетки. Терапията е предназначена за възстановяване на нервната
функция при лица, страдащи от остро увреждане на гръбначния мозък.

Възрастни стволови клетки

Някои тъкани в тялото на възрастните, като епидермиса на кожата, лигавицата на тънките

черва и костния мозък, са подложени на непрекъснато клетъчно обновяване. Те съдържат
стволови клетки, които се запазват за неопределено време, и много по-голям брой
"транзитни усилващи клетки", които възникват от стволовите клетки и се делят ограничен
брой пъти, докато се диференцират. Стволовите клетки съществуват в ниши, образувани
от други клетки, които отделят вещества, поддържащи стволовите клетки живи и активни.
Някои видове тъкани, като чернодробната тъкан, показват минимално клетъчно делене
или се делят само при нараняване. В такива тъкани вероятно няма специална популация от
стволови клетки и всяка клетка може да участва в регенерацията на тъканта, когато това е
необходимо.

Епителни стволови клетки

Епидермисът на кожата съдържа слоеве от клетки, наречени кератиноцити. Само

базалният слой, в непосредствена близост до дермата, съдържа клетки, които се делят.
Част от тези клетки са стволови, но по-голямата част от тях са транзиторни
амплифициращи клетки. Кератиноцитите бавно се придвижват навън през епидермиса,
докато съзряват, и накрая умират и се отстраняват на повърхността на кожата. Епителът
на тънките черва образува изпъкналости, наречени вили, които са преплетени с малки
ямички, наречени крипти. Делящите се клетки са разположени в криптите, като
стволовите клетки се намират в близост до основата на всяка крипта. Клетките
непрекъснато се образуват в криптите, мигрират върху вилите и накрая се изхвърлят в
лумена на червата. По време на миграцията си те се диференцират в типовете клетки,
характерни за чревния епител.

Костен мозък и хемопоетични стволови клетки

Костният мозък съдържа клетки, наречени хемопоетични стволови клетки, които създават
всички видове клетки на кръвта и имунната система. Хемопоетичните стволови клетки се
намират в малък брой и в периферната кръв, а в по-голям брой - в кръвта от пъпната връв.
В костния мозък хемопоетичните стволови клетки са закрепени за остеобластите на
трабекуларната кост и за кръвоносните съдове. Те генерират потомство, което може да се
превърне в лимфоцити, гранулоцити, червени кръвни клетки и някои други клетъчни
типове в зависимост от баланса на растежните фактори в непосредствената им среда.

Работата с експериментални животни показва, че трансплантираните хемопоетични

стволови клетки понякога могат да колонизират други тъкани, като трансплантираните
клетки се превръщат в неврони, мускулни клетки или епител. Степента, в която
трансплантираните хемопоетични стволови клетки са в състояние да колонизират други
тъкани, е изключително малка. Въпреки това използването на трансплантации на
хемопоетични стволови клетки се проучва при състояния като сърдечни заболявания или
автоимунни разстройства. Това е особено привлекателна възможност за тези, които са
против използването на ембрионални стволови клетки. Трансплантациите на костен мозък
(известни още като присаждане на костен мозък) представляват вид терапия със стволови
клетки, която е в широка употреба. Те се използват, за да позволят на пациенти с рак да
преживеят иначе смъртоносни дози радиационна терапия или химиотерапия, които
унищожават стволовите клетки в костния мозък. При тази процедура собственият костен
мозък на пациента се взема преди лечението на рака и след това се влива отново в
организма след лечението. Хемопоетичните стволови клетки от трансплантацията
колонизират увредения костен мозък и в крайна сметка попълват кръвта и имунната
система с функционални клетки. Трансплантацията на костен мозък често се извършва и
между отделни лица (алографт). В този случай присаденият костен мозък има някакъв
благоприятен противотуморен ефект. Рисковете, свързани с алографските трансплантации
на костен мозък, включват отхвърляне на трансплантата от имунната система на пациента
и реакция на имунните клетки на трансплантата срещу тъканите на пациента (болест на
трансплантата срещу гостоприемника).

Костният мозък е източник на мезенхимни стволови клетки (понякога наричани

стромални клетки на костния мозък или MSC), които са предшественици на
нехематопоетични стволови клетки, които имат потенциала да се диференцират в няколко
различни вида клетки, включително клетки, които образуват кости, мускули и
съединителна тъкан. В клетъчни култури мезенхимните стволови клетки, получени от
костен мозък, демонстрират плурипотентност, когато са изложени на вещества, които
влияят върху клетъчната диференциация. Използването на тези плурипотентни свойства
стана изключително ценно при създаването на тъкани и органи, които могат да бъдат
трансплантирани. През 2008 г. учените използват мезенхимни стволови клетки за
биоинженерно изграждане на участък от трахея, който е трансплантиран на жена, чиито
горни дихателни пътища са сериозно увредени от туберкулоза. Стволовите клетки са
получени от костния мозък на жената, култивирани са в лаборатория и са използвани за
тъканно инженерство. В процеса на инженерство донорската трахея е била лишена от
вътрешната и външната си клетъчна обвивка, оставяйки след себе си "скеле" от
съединителна тъкан. След това стволовите клетки, получени от реципиента, се използват
за реколонизиране на вътрешната част на скелето, а нормалните епителни клетки, също
изолирани от реципиента, се използват за реколонизиране на външната част на трахеята.
Използването на собствените клетки на реципиента за населяване на скелета на трахеята
предотвратява имунното отхвърляне и премахва необходимостта от имуносупресивна
терапия. Трансплантацията, която е успешна, е първата по рода си.

Невронни стволови клетки

Изследванията показват, че в мозъка също има стволови клетки. При бозайниците след
раждането се образуват много малко нови неврони, но някои неврони в обонятелните
луковици и в хипокампуса (Амонов рог или хипокамп (на латински: hippocampus) е
анатомична област в мозъка, част от сивото мозъчно вещество, представляваща корова
гънка, изолирана с бяло мозъчно вещество. Той участва в изграждането на т. нар.
лимбична система и обединява в едно цяло информацията, която достига до него от
различни места на мозъка. Играе важна роля при проявите на агресия, при мотивацията и
при формирането на спомените) се образуват непрекъснато. Тези неврони възникват от
невронни стволови клетки, които могат да бъдат култивирани in vitro под формата на
невросфери - малки клетъчни клъстери, които съдържат стволови клетки и някои от
техните потомства. Този тип стволови клетки се проучват за използване в клетъчната
терапия за лечение на болестта на Паркинсон и други форми на невродегенерация или
травматични увреждания на централната нервна система.

Ядрен трансфер на соматични клетки

След експериментите с животни, включително тези, използвани за създаването на овцата
Доли, се обсъждаше много въпроса за използването на соматичен клетъчен ядрен
трансфер (SCNT) за създаване на плурипотентни човешки клетки. При SCNT ядрото на
соматична клетка (напълно диференцирана клетка, с изключение на зародишните клетки),
което съдържа по-голямата част от клетъчната ДНК (дезоксирибонуклеинова киселина),
се отстранява и прехвърля в неоплодена яйцеклетка, на която е отстранена собствената й
ядрена ДНК. Яйчната клетка се отглежда в култура, докато достигне стадий бластоцист.
След това вътрешната клетъчна маса се отстранява от яйцеклетката и клетките се
отглеждат в култура, за да се образува линия ембрионални стволови клетки (поколения
клетки, произхождащи от една и съща група родителски клетки). След това тези клетки
могат да бъдат стимулирани да се диференцират в различни видове клетки, необходими за
трансплантация. Тъй като тези клетки ще бъдат генетично идентични с оригиналния
донор, те могат да се използват за лечение на донора без проблеми с имунното
отхвърляне. През 2013 г. учените за първи път успешно генерираха човешки ембрионални
стволови клетки от човешки ембриони, получени чрез SCNT.

Макар и обещаващо, генерирането и използването на ембрионални стволови клетки,

получени чрез SCNT, е спорно по няколко причини. Една от тях е, че SCNT може да
изисква повече от дузина яйцеклетки, преди една от тях успешно да произведе
ембрионални стволови клетки. Човешките яйцеклетки са в недостиг и съществуват много
правни и етични проблеми, свързани с донорството на яйцеклетки. Съществуват и
неизвестни рискове, свързани с трансплантирането на стволови клетки, получени чрез
SCNT, в хора, тъй като механизмът, по който неоплодената яйцеклетка е в състояние да
препрограмира ядрената ДНК на диференцирана клетка, не е напълно изяснен. Освен това
SCNT обикновено се използва за създаване на клонинги на животни (като Dolly). Въпреки
че понастоящем клонирането на хора е незаконно в целия свят, яйцеклетка, която съдържа
ядрена ДНК от възрастна клетка, теоретично може да бъде имплантирана в матката на
жена и да се превърне в истински клониран човек. Поради това сред някои групи
съществува силна опозиция срещу използването на SCNT за генериране на човешки
ембрионални стволови клетки.

Due to the ethical and moral issues surrounding the use of embryonic stem cells, scientists have
searched for ways to reprogram adult somatic cells. Studies of cell fusion, in which differentiated
adult somatic cells grown in culture with embryonic stem cells fuse with the stem cells and
acquire embryonic stem-cell-like properties, led to the idea that specific genes could reprogram
differentiated adult cells. An advantage of cell fusion is that it relies on existing embryonic stem
cells instead of eggs. However, fused cells stimulate an immune response when transplanted into
humans, which leads to transplant rejection. As a result, research has become increasingly
focused on the genes and proteins capable of reprogramming adult cells to a pluripotent state. In
order to make adult cells pluripotent without fusing them to embryonic stem cells, regulatory
genes that induce pluripotency must be introduced into the nuclei of adult cells. To do this, adult
cells are grown in cell culture, and specific combinations of regulatory genes are inserted into
retroviruses (viruses that convert RNA [ribonucleic acid] into DNA), which are then introduced
to the culture medium. The retroviruses transport the RNA of the regulatory genes into the nuclei
of the adult cells, where the genes are then incorporated into the DNA of the cells. About 1 out
of every 10,000 cells acquires embryonic stem cell properties. Although the mechanism is still
uncertain, it is clear that some of the genes confer embryonic stem cell properties by means of
the regulation of numerous other genes. Adult cells that become reprogrammed in this way are
known as induced pluripotent stem cells (iPS).

Similar to embryonic stem cells, induced pluripotent stem cells can be stimulated to differentiate
into select types of cells that could in principle be used for disease-specific treatments. In
addition, the generation of induced pluripotent stem cells from the adult cells of patients affected
by genetic diseases can be used to model the diseases in the laboratory. For example, in 2008
researchers isolated skin cells from a child with an inherited neurological disease called spinal
muscular atrophy and then reprogrammed these cells into induced pluripotent stem cells. The
reprogrammed cells retained the disease genotype of the adult cells and were stimulated to
differentiate into motor neurons that displayed functional insufficiencies associated with spinal
muscular atrophy. By recapitulating the disease in the laboratory, scientists were able to study
closely the cellular changes that occurred as the disease progressed. Such models promise not
only to improve scientists’ understanding of genetic diseases but also to facilitate the
development of new therapeutic strategies tailored to each type of genetic disease.

In 2009 scientists successfully generated retinal cells of the human eye by reprogramming adult
skin cells. This advance enabled detailed investigation of the embryonic development of retinal
cells and opened avenues for the generation of novel therapies for eye diseases. The production
of retinal cells from reprogrammed skin cells may be particularly useful in the treatment of
retinitis pigmentosa, which is characterized by the progressive degeneration of the retina,
eventually leading to night blindness and other complications of vision. Although retinal cells
also have been produced from human embryonic stem cells, induced pluripotency represents a
less controversial approach. Scientists have also explored the possibility of combining induced
pluripotent stem cell technology with gene therapy, which would be of value particularly for
patients with genetic disease who would benefit from autologous transplantation.

Researchers have also been able to generate cardiac stem cells for the treatment of certain forms
of heart disease through the process of dedifferentiation, in which mature heart cells are
stimulated to revert to stem cells. The first attempt at the transplantation of autologous cardiac
stem cells was performed in 2009, when doctors isolated heart tissue from a patient, cultured the
tissue in a laboratory, stimulated cell dedifferentiation, and then reinfused the cardiac stem cells
directly into the patient’s heart. A similar study involving 14 patients who underwent cardiac
bypass surgery followed by cardiac stem cell transplantation was reported in 2011. More than
three months after stem cell transplantation, the patients experienced a slight but detectable
improvement in heart function.

Patient-specific induced pluripotent stem cells and dedifferentiated cells are highly valuable in
terms of their therapeutic applications because they are unlikely to be rejected by the immune
system. However, before induced pluripotent stem cells can be used to treat human diseases,
researchers must find a way to introduce the active reprogramming genes without using
retroviruses, which can cause diseases such as leukemia in humans. A possible alternative to the
use of retroviruses to transport regulatory genes into the nuclei of adult cells is the use of
plasmids, which are less tumourigenic than viruses.

In 2021 multiple research teams, working independently, generated human blastocyst-like

structures in vitro. The structures were grown using different types of cell populations, including
human embryonic stem cells, iPS cells, and reprogrammed adult skin cells. The breakthrough
provided a novel means of studying human embryonic development and the very early stages of
pregnancy.