BIOCHÉMIA II KATEDRA CHÉMIE, FAKULTA PRÍRODNÝCH VIED, UNIVERZITA MATEJA BELA BANSKÁ BYSTRICA

KATABOLIZMUS SACHARIDOV
GLYKOLÝZA
MOŽNOSTI METABOLIZÁCIE PYRUVÁTU

TÉMA 02 DOC. RNDR. MAREK SKORŠEPA, PHD.

ANAERÓBNA GLYKOLÝZA

2
INTRO

o základná metabolická dráha (séria metabolických reakcií) rozkladu glukózy

o Embden, Mayerhof a Parnas (EMP)

6 at. C 3 at. C
GLUKÓZA 2 PYRUVÁT

o Význam:
získanie energie vo forme ATP a NADH potrebnej na ďalšie procesy

o prebieha v anaeróbnom prostredí

o enzýmy glykolýzy sú lokalizované v cytoplazme

o výhradný zdroj energie pre niektoré bunky a tkanivá (napr. erytrocyty, mozog)3
 I.
REAKCIE GLYKOLÝZY

4
2 FÁZY GLYKOLÝZY

1. prípravná fáza: 1.– 5. reakcia - vyžaduje ATP

2. produkčná fáza: 6. – 10. reakcia – tvorba ATP a NADH (vyžaduje NAD+)

5
CELKOVÁ SCHÉMA ANAERÓBNEJ GLYKOLÝZY

6
 I.1
PRÍPRAVNÁ FÁZA GLYKOLÝZY

7
SCHÉMA PRÍPRAVNEJ FÁZY GLYKOLÝZY

5
8
① FOSFORYLÁCIA GLC NA GLC-6-FOSFÁT

o fosforylácia Glc = aktivácia Glc na vstupe do glykolýzy

o endergonická reakcia „poháňaná“ hydrolýzou ATP
(prvotná spotreba ATP = nutný energetický vstup do glykolýzy)
o uzlový bod metabolizmu glukózy, z ktorého vychádza niekoľko metabolických
pochodov
o enzým: glukokináza (resp. hexokináza) (aloster. inhibítor = Glc-6-fosfát)

9
② IZOMERIZÁCIA GLC-6-FOSFÁT NA FRU-6-FOSFÁT

o oxidoredukcia na uhlíkových atómoch C1 a C2

o C1 aldehyd (poloacetálová sk.) je redukovaný na hydroxyskupinu
o C2 hydroxyskupina je oxidovaná na ketoskupinu fruktózy-6-fosfát
o enzým: glukózafosfátizomeráza

10
③ FOSFORYLÁCIA FRU-6-FOSFÁT NA FRU-1,6-BISFOSFÁT

o druhá reakcia „poháňaná“ hydrolýzou ATP

(ďalšia spotreba ATP = nutný energetický vstup do glykolýzy)
o enzým: fosfofruktokináza (alosterický inhibítor = ATP):
• vysoká koncentrácia ATP – inhibícia
• nízka koncentrácia ATP – aktivácia

11
 ŠTIEPENIE FRU-1,6-BISFOSFÁT NA DIHYDROXYACETÓNFOSFÁT
④
A GLYCERALDEHYDFOSFÁT

o Fru-1,6-bisfosfát = aldol
o aldolové štiepenie na 2 molekuly izomérnych triózafosfátov:
• glyceraldehydfosfát
• dihydroxyacetónfosfát
o enzým: fruktózabisfosfátaldoláza (aldoláza)

12
 IZOMERIZÁCIA DIHYDROXYACETÓNFOSFÁTU
⑤
NA GLYCERALDEHYDFOSFÁT

o enzým: triózafosfátizomeráza

13
SUMARIZÁCIA PRÍPRAVNEJ FÁZY GLYKOLÝZY

o premena 1 molekuly glukózy na 2 molekuly glyceraldehyd-3-fosfátu

o prvá fáza je energeticky deficitná:

spotreba 2 molekúl ATP = nutný vstup do glykolýzy

o kľúčové postavenie v tejto sérii má Fru-1,6-bisfosfát – alosterická regulácia

fosfofruktokinázy

14
 I.2
PRODUKČNÁ FÁZA GLYKOLÝZY

15
SCHÉMA PRODUKČNEJ FÁZY GLYKOLÝZY

9
Poznámka:
všetky reakcie produkčnej fázy 2x!!!

10

16
⑥ OXIDÁCIA GLYCERALDEHYD-3-FOSFÁTU NA 1,3-BISFOSFOGLYCERÁT

o oxidačná fosforylácia (2 časti = oxidácia + fosforylácia)

o jediná oxidačná reakcia v EMP
o oxidačné činidlo = NAD+ je redukované na NADH
o reakcia vyžaduje fosfátovú skupinu
o vznik zmiešaného anhydridu – 1,3-bisfosfoglycerátu
o enzým: glyceraldehydfosfátdehydrogenáza

17
⑥ OXIDÁCIA GLYCERALDEHYD-3-FOSFÁTU NA 1,3-BISFOSFOGLYCERÁT
(CONT’D)

1. krok
oxidácia glyceraldehyd-3-fosfátu
na 3-fosfoglycerát

2. krok
fosforylácia 3-fosfoglycerátu
na 1,3-bisfosfoglycerát

18
 TRANSFER FOSFÁTOVEJ SKUPINY Z 1,3-BISFOSFOGLYCERÁTU
⑦
NA ADP; TVORBA 3-FOSFOGLYCERÁTU

o prvá produkcia ATP v EMP – vyrovnanie „energetického dlhu“ z prípravnej f.

o reakcia vyžaduje ADP
o reakcia je kombináciou endergonickej fosforylácie ADP (ΔG°’ = +30,5 kJ.mol–1)
a exergonickej hydrolýzy zmiešaného anhydridu (ΔG°’ = –49,4 kJ.mol–1)
o enzým: fosfoglycerátkináza

19
⑧ IZOMERIZÁCIA 3-FOSFOGLYCERÁTU NA 2-FOSFOGLYCERÁT

o izomerizácia vnútromolekulovým prenosom fosfátu

o enzým: fosfoglycerátmutáza

20
⑨ DEHYDRATÁCIA 2-FOSFOGLYCERÁTU NA FOSFOENOLPYRUVÁT

o odštiepenie H2O z 2-fosfoglycerátu

o fosfoenolpyruvát (PEP) obsahuje makroergickú väzbu
o enzým: enoláza

21
 TRANSFER FOSFÁTOVEJ SKUPINY Z FOSFOENOLPYRUVÁTU
⑩
NA ADP; TVORBA PYRUVÁTU

o druhá tvorba ATP (zisk z oboch fáz)

o pyruvát = konečný produkt
o ΔG°’ hydrolýzy pyruvátu = –61,9 kJ.mol–1
o enzým: pyruvátkináza (alosterický inhibítor = ATP)

22
SUMARIZÁCIA PRODUKČNEJ FÁZY GLYKOLÝZY

o premena 2 molekúl glyceraldehyd-3-fosfátu na 2 molekuly pyruvátu

o vznik 4 molekúl ATP

o vznik 2 molekúl NADH

23
CELKOVÁ BILANCIA GLYKOLÝZY

glukóza

– 2 ATP 1. fáza

+ 4 ATP
+ 2 NADH 2. fáza

+ 2 ATP
2 pyruvát
+ 2 NADH celkový efekt

24
REGULAČNÉ BODY GLYKOLÝZY

o 3 regulačné body v glykolýze

o 3 metabolické „energeticky
významné“ reakcie

o ich enzýmy sú inhibované

členom reakcie:
• hexokináza
• fosfofruktokináza
• pyruvátkináza

25
ODBÚRAVANIE ĎALŠÍCH SACHARIDOV
o niektoré ďalšie sacharidy
po príslušných úpravách
tiež vstupujú do glykolýzy

26
MOŽNOSTI METABOLIZÁCIE PYRUVÁTU

27
2 SPÔSOBY ĎALŠIEHO SPRACOVANIA PYRUVÁTU

pyruvát

anaeróbna cesta aeróbna cesta

fylogeneticky staršia fylogeneticky mladšia

mliečne kvasenie alkoholové kvasenie oxidačná dekarboxylácia

kostrové svalstvo kvasinky pyruvátu

o Cieľ ďalšieho spracovania pyruvátu:

regenerácia NAD+
citrátový
o množstvo NAD+ je v bunke obmedzené - musí sa cyklus
regenerovať

28
ANAERÓBNE SPRACOVANIE PYRUVÁTU

o Cieľ anaeróbneho spracovania pyruvátu:

regenerácia NAD+ spätnou oxidáciou NADH substrátom,

ktorý sa môže redukovať

o týmto substrátom je:

o pyruvát (mliečne kvasenie = tvorba laktátu)
o acetaldehyd (alkoholové kvasenie = tvorba etanolu)

29
MLIEČNE KVASENIE (TVORBA LAKTÁTU)
o regenerácia NAD+ redukciou pyruvátu
o mliečne baktérie
o v kostrovom svalstve pri nedostatku kyslíka
o enzým: laktátdehydrogenáza

o laktát neskôr musí byť spracovaný v pečeni

30
CORIHO CYKLUS
o vzájomné prepojenie (cyklus) metabolizmu laktátu a
glukózy v organizme

Manželia Gerty a Carl Cori

objavitelia metabolického cyklu laktátu
a glukózy v organizme

o Laktát, produkovaný vo svaloch

anaeróbnou degradáciou Glc, je krvou
transportovaný do pečene
o V pečeni je laktát reoxidovaný na
pyruvát a v procese glukoneogenézy
ďalej konvertovaný opäť na Glc
o Glc môže byť krvou transportovaná
naspäť do svalu, alebo uložená vo forme
glykogénu ako zásobný zdroj energie
31
ALKOHOLOVÉ (ETANOLOVÉ) KVASENIE
o regenerácia NAD+ dekarboxyláciou pyruvátu a následnou redukciou
vzniknutého acetaldehydu
o kvasinky Saccharomyces cerevisiae
o enzýmy: pyruvátdekarboxyláza a alkoholdehydrogenáza

32
ENERGETICKÁ BILANCIA GLYKOLÝZY +
ANAERÓBNEHO SPRACOVANIA PYRUVÁTU

o pri mliečnom aj alkoholovom kvasení vznikajú pri degradácii

1 molekuly glukózy len 2 molekuly ATP (ΔG°’ = –61,0 kJ.mol–1)

o porovnanie s úplnou oxidáciou glukózy:

(ΔG°’ = –2829,0 kJ.mol–1)

o 2 molekuly ATP (ΔG°’ = –61,0 kJ.mol–1) získané anaeróbnym spracovaním

glukózy predstavujú len 2% z celkovej energie, ktorú by teoreticky bolo možné
získať úplnou oxidáciou glukózy (ΔG°’ = –2829,0 kJ.mol–1)

33
OXIDAČNÁ DEKARBOXYLÁCIA PYRUVÁTU
o len v aeróbnom prostredí
o prebieha v mitochondriálnej matrix
o pyruvát sa nespotrebováva na regeneráciu NAD+ (bude regenerovaný v dýchacom reťazci)
o 2 kroky: dekarboxylácia pyruvátu (1) a následná oxidácia (2)

o enzýmový komplex: pyruvátdehydrogenázový komplex (zahŕňa 5 enzýmov)

1. pyruvátdehydrogenáza (PDH, lipoamid)
2. dihydrolipoyltransacetyláza (dihydrolipoamidacetyltransferáza) „výkonné“ enzýmy
3. dihydrolipoyldehydrogenáza (dihydrolipoamiddehydrogenáza)

4. pyruvátdehydrogenáza kináza
(deaktivácia PDH fosforyláciou)
regulačné enzýmy
5. pyruvátdehydrogenáza fosfatáza
(aktivácia PDH hydrolýzou fosfátu) 34
MECHANIZMUS OXID. DEKARBOXYLÁCIE PYRUVÁTU
1. dekarboxylácia pyruvátu, tvorba 3.
hydroxyetyltiamínpyrofosfátu (HETPP)
2. oxidácia dvojuhlíkatej hydroxyetylovej skupiny 4.
kys. lipoovou (lipoamidom) na acetyl, vznik red.
formy lipoamidu s naviazanou Ac-skupinou
prenos dvojuhlíkatej acetylovej skupiny z
lipoamidu na CoA, vznik acetyl-CoA vzniknutý AcCoA vstupuje
do citrátového cyklu
regenerácia (reoxidácia) lipoátu
z redukovanej formy na oxidovanú
35
ŠTRUKTÚRA PYRUVÁTDEHYDROGENÁZOVÉHO KOMPLEXU

A. 24 podjednotiek dihydrolipoyltransacetylázy (TA) tvorí jadro komplexu

8 trimérov – každý trimér je umiestnený v jednom z rohov kocky

B. 24 αβ-dimérov pyruvátdehydrogenázy (PDH)

umiestnené po dva na hranách kocky

C. 6 dimérov dihydrolipoyldehydrogenázy (DLD)

umiestnené na šiestich stranách kocky 36
 DOC. RNDR. MAREK SKORŠEPA, PHD.

MAREK.SKORSEPA@UMB.SK
KATEDRA CHÉMIE
FAKULTA PRÍRODNÝCH VIED
UNIVERZITA MATEJA BELA V BANSKEJ BYSTRICI