ELEKTROFOREZ

1
 Elektroforez serumda sudan sonra en
fazla bulunan molekller olan
proteinleri analiz etmek iin kullanlan
ilk yntemdir.

Elektroforez ykl molekllerin

elektriksel bir alanda g etmesi olarak
tanmlanabilir.

2
 Elektroforez makromolekllerin
kantitasyon ve ayrm iin olduka
gl yntemlerden birisidir.

Klinik laboratuvarlarda esas olarak

proteinler, izoenzimler, lipoproteinler,
hemoglobinlerin ayrtrlmas iin
kullanlr.

3
 Temel prensip
Destek ortamndaki (hareketin
gerekletii yer) ykl partikller,
elektrik alan uygulandnda zt ykl
elektroda doru g ederler.
Pozitif negatif elektroda
Negatif pozitif elektroda

4
 Proteinler ve aminoasitler gibi birok
organik molekl amfoterik olduu iin
(hem pozitif hem negatif ykl), onlarn
solusyondaki ykleri pH deiiklikleri
ile deitirilebilir.

5
 Molekllerin hareketi bir ok
faktrden etkilenir.
Molekln yk
Molekln bykl
Destek ortamnn zellii
Elektrik alann gc
Tamponun iyonik gc
Is (artan s migrasyon (g) hzn
artrr)

6
 Tipik bir elektroforetik sistem kapakl
bir hazne, destek ortam (elektroforez
jelleri), tampon, g kayna ve
densitometreden oluur.
Yaplan ilemler
1. lem ayralarn hazrlanmas ve
haznenin iki yannn tampon ile
doldurulmas ile balar.
2. Serum uygulanan jeller, haznedeki
kpr zerine konur bylece her iki ucu
tampon ile temas eder.

7
 3. G kayna altrlr ve sabit akm
ve voltaj salanr.
4. Sresi dolunca bir fixatif iine
oradanda,
5. boya iine konarak beklenir ve sonra
ykama yaplr.
6. Boyann fazlas uzaklatrlr ve jell
kurutulup, densitometrede okuma
yaplr.

8
 zetle Protein elektroforezi
Rutin olarak serum proteinlerinin elektroforezi
yaplmaktadr.
Serum proteinlerinin elektroforezi iin, bir selloz
asetat band zerine az miktarda serum ekilir ve
belirli bir zaman sresi boyunca bu banda pH 8,6
olan bir tampon zelti iinde doru akm
uygulanr.
lem sonunda serum proteinleri, anoda doru
farkl gme hzlarna gre fraksiyonlara ayrlrlar.

9
10
11
Serum protein fraksiyonlar,
selloz asetat bandn
boyanp kurutulmasyla
grnr hale getirilirler.

12
Serum proteinlerinin elektroforezinde anoda en hzl
gen fraksiyon, prealbmin ve albmindir, en yava
gen fraksiyon -globlin fraksiyonudur. Prealbmin
fraksiyonu rutin serum proteinleri elektroforezinde
farkedilmez.

13
 Elektroforez sistemlerinin komponentleri
1. RNEK
Klinik laboratuvarlarda rnekler genellikle,
serum, plazma, idrar ve BOS (beyin
omurilik svs) dr.
rnek direk olarak jel stne uygulanr.
Genellikle uygulanan miktar 0.3 ila 25
mikrolitre arasdr.

14
 2.Tamponlar
Tamponlarn iki nemli fonksiyonlar
vardr.
1. pH sabitlemek
2. Akm iletmek

15
 Protein elektroforezinde genellikle pH
8.0-9.0 arasnda olan tamponlar
kullanlmaktadr.
Elektroforez sistemindeki akm,
zeltide mevcut olan iyonlar ile
tanmaktadr.

16
 3.Destek ortam
Agaroz jel
Selluloz asetat
Poliacrilamid jel
Niasta jel
Kat

17
 4.G kayna
G kayna elektroda enerji
salayarak molekllerin ayrmasn
salar.
G kaynann tipine bal olarak
0-500 volt arasnda ayarlanr.

18
 5. Boyalar
ok eitli boyalar vardr.
En sk Panceu S boyas kullanlr.
Comossie brillant blue
Oilred O

19
 6. Densitometre
Densitometrede jeller fotometreye
benzer bir optik sisteme yerletirilir.
Her bandn renginin younluu direk
olarak llr.

20
 Normal bir elektroforezde bantlar
Albumin Band
albumin

21
 Alfa-1 band
Tiroksin balayan globulin
Transkortin
-1-asit glikoprotein
-1-antitripsin
- Lipoprotein

22
 Alfa-2 band
Haptoglobin
-2 Macroglobin
Seruloplazmin

23
 Beta band
Transferrin
Hemopeksin -1Band
-Lipoprotein
-2 mikroglobulin
-2 Band
C 3-kompleman
Fibrinojen

24
 Gama band
Immunglobulinler
C-reaktif protein (CRP)
Fibrinojen

25
26
27
Protein Elektroforezinde Deiime
Neden Olan Patolojik Durumlar
1. ALBUMN FRAKSYONU
a) Bisalbuminemi
b) hipoalbuminemi
1. albumin sentezinde azalma
karacier hcre harabiyeti (siroz,
hepatit)
uzun sreli alk veya beslenme
bozukluu
konjenital an-albuminemi
28
 2. albumin kaybnda artma
Bbrek yolu ile (nefrotik sendrom)
Barsak yolu ile (protein kaybettirici
gastroenteropati)
Deri yolu ile (ar ekzema, yanklar
byk yaralar)
3. Albumin katabolizmasnda artma
Gebelik
Akut faz reaksiyonu
Tirotoksikoz
29
 c) artma (Hiperalbuminemi)
Salkl kiide patolojik bir anlam
yoktur.
Yatan hastalarda ar albumin infzyon
sonucu geliebilir.

30
 -1 Globin Fraksiyonu
A. Azalma
1. karacier hcre harabiyeti beslenme
bozukluu veya protein kayb. Albumin,
-2 ve beta fraksiyonlarnda azalma ile
birliktedir.
2. -1 antitripsin eksiklii

31
 B. Artma
Akut ve kronik inflamasyonda;
-1 antitripsin ve
-1 asitglikoproteindeki arta baldr.

32
 -2 globulin fraksiyonu
A . ift bant varl
Hemolizde
Farkl haptoglobin fenotiplerinde
B. Azalma
karacier hcre harabiyeti beslenme
bozukluu veya protein kayb. Albumin,
-1 ve beta fraksiyonlarnda azalma ile
birliktedir.
33
 C. Artma
Akut ve kronik inflamasyonda
haptoglobin artna bal.
Nefrotik sendromda -2 makroglobin
artna bal.
Gebelikte strojen etkisi ile haptoglobin
artna bal.
ocuklarda bazen normalde olabilir.

34
 -globin fraksiyonu
Taze rneklerde 2 bant grnr ancak
serumun beklemesine bal beta 2
kaybolur.
A. Azalma
karacier hcre harabiyeti beslenme
bozukluu veya protein kayb. Albumin,
-1, -2 fraksiyonlarnda azalma ile
birliktedir.
C3 n tketilmesi
35
 B. Artma
1. Hipertransferrinemi, kronik demir
eksiklii anemisi, gebelik.
2. Hiperbetalipoproteinemi
3. Siroz; Beta-gama kprlemesi
eklinde tipik bir grntdr.
4. Monoklonal Protein varl (IgA)

36
 -globin Fraksiyonu
A. Azalma
1. yenidoan
2. Primer immun yetmezlik sendromu
3. Sitotoksik ve immun supressif tedavi
4. Kronik Lenfositik Lsemi
5. Multiple myeloma (nadiren)

37
 B. Artma
1. Poliklonal hipergamaglobinemi
karacier hastalklar (hepatit,
siroz)
ba doku hastalklar (lupus,
romatoid artrit, sarkoidoz)
enfeksiyon hastalklar
(osteomyelit, bronektazi,)

38
 2. Oligoklonal hipergamaglobinemi
Hepatit ve ADSde grlr.

3. Monoklonal hipergamaglobinemi
Multiple myeloma,
KLL,
Lenfoma,
Waldenstrm makroglobinemisi

39
Baz hastalklarda serum
protein elektroforezi

akut inflamasyon 40
kronik inflamasyon 41
Renal protein kayb 42
siroz 43
hepatit 44
 Monoklonal gamopati

39,2 4,2
3,7 0,4
5,1 0,5
6,2 0,6
45,9 4,8

10,5 45
 Siroz da grlen beta-gama
kprlemesi

35,1 2,5
3.1 0,2
5.9 0,4
18.6 1,3 46
37.4 2,7