KRVNI I GENSKI DOPING seminarski rad iz predmeta HIGIJENA SA SPORTSKOM MEDICINOM
Predmetni nastavnik: Doc. dr Tatjana Popovi - Ili
Leposavi, 2012/13
2
SADRAJ: 1.UVOD. 3 2.TA JE KRVNI DOPING.. 4 3.POECI KRVNOG DOPINGA..... 5 4.RIZICI KOJE DONOSI KRVNI DOPING.... 6 5.KRVNI DOPING JE I DANAS PRISUTAN..... 7 6.PREDNOSTI KOJE DONOSI KRVNI DOPING.......................... 8 7.GENSKI DOPING I GENETIKO ININJERSTVO U SPORTU.................. 9 8.KRATKA ISTORIJA GENSKOG DOPINGA...... 11 9.GENSKI DOPING I GENSKA TERAPIJA.......... 12 10.METE GENSKOG DOPINGA.... 13 10.1 ACE (engl. Angiotensin-ConvertingEnzyme) gen....... 14 10.2 Alfa-aktinin 3 (ACTN3).... 15 10.3 Miostatin gen..... 15 10.4 Insulinu slian faktor rasta I (IGF-I)...... 16 10.5 Vaskularni endotelijalni faktor rasta(VEGF).. 16 10.6 PPAR delta (engl. Peroxisomeprolifera-tor-activated receptor-delta)........ 16 10.7 Eitropoetin (EPO).. 16 11.DETEKCIJA GENSKOG DOPINGA.......17 12.ETIKA OPRAVDANOST UPOTREBE GENSKE TERAPIJE U SPORTU......18 13.ZAKLJUAK....19 IZVODI...20 3
1. UVOD Pod dopingom se danas u savremenom sportu podrazumeva upotreba bilo koje strane supstance ili fiziolokih supstanci u velikim koliinama, kao i korienje fiziolokih sastojaka razliitim putevima unosa sa namerom da se na vetaki nain poveaju radne i sportske sposobnosti. Pored primene stranih i fiziolokih supstanci pod dopingom se podrazumeva i primena razliitih metoda koji vode stimulisanju organizma na nain koji je suprotan prirodi. Doping je u suprotnosti sa sportskim duhom, a sportski duh predstavlja osnovu olimpizma i svega to je istinski vredno kada je sport u pitanju. Doping nije karakteristian samo za sport, mada je tu najvie korien, a nije ni nastao u sportu. Doping su navodno koristile prvo neke vojske u ratovima da bi na vetaki nain podigle hrabrost i izdrljivost svojih vojnika.
4
2. TA JE KRVNI DOPING Poznato je da u sportovima izdrljivosti, kao to je tranje na duge staze, biciklizam, veslanje itd krajnji rezultat u velikoj meri zavisi o tzv. aerobnom kapacitetu, odnosno sposobnosti tela da u to veoj meri koristi kiseonik za proizvodnju energije. Da bi kiseonik dospeo do miia, gde je neophodan za proizvodnju energije, zaduen je transportni sistem u krvi koji se uglavnom sastoji od eritrocita, odnosno crvenih krvnih zrnaca te hemoglobina koji se nalazi na njima.
Slika 1 - krvni doping Iz toga proizilazi da vea koliina eritrocita moe preneti i veu koliinu kiseonika, to miie ini otpornijim na pojavu zamora za vreme kontinuiranih napora.
5
3. POECI KRVNOG DOPINGA Voen takvom logikom dr. Bjorn Ekblom sa tokholmskog instituta za gimnastiku i sport, 1972. godine zapoeo je praktikovati krvni doping. Izvadio je krv sportistima te centrifugiranjem eritrocite odvojio od plazme. Takav zgusnuti pripravak uskladitio je u friider te ga mesec dana kasnije svakom sportisti vratio u krvotok. Prva ispitivanja aerobnog kapaciteta posle toga su pokazala da dotini sportisti mogu, u proseku, na tredmilu trati 25% due nego ranije. Kasnija praksa je pokazala da je krv najbolje poeti vaditi jednom do etiri puta po 450ml, 6-8 nedelja pre, a odvojene eritrocite vratiti jedan do sedam dana od glavnog takmienja. Ukoliko je pravilno uinjena, takva procedura moe poveati nivo hemoglobina i eritrocita za ak 20%. Takvo poveanje moe trajati i do tri meseca, kada se hemoglobin i eritrociti u krvi postupno poinju vraati u normalu.
6
4. RIZICI KOJE DONOSI KRVNI DOPING Procedure krvnog dopinga donose sa sobom i vrlo ozbiljne rizike. Neretko se dogaa da prevelika koliina eritrocita preterano zgusne krv, odnosno povea hematokrit, to moe rezultirati smanjenom sposobnou srca da je pumpa prema periferiji. Time se postie upravo suprotan uinak od eljenog. Drastino se smanjuje dotok krvi u miie, to rezultira velikim padom radne sposobnosti. Meutim, to i nije tako zabrinjavajue u odnosu na druge probleme koje zgusnuta krv moe uzrokovati. Poto je protok takve krvi kroz krvne sudove otean postoji velika opasnost da doe do zastoja u cirkulaciji. U zavisnosti od mesta gde se takvo zaepljenje dogodi, posledice mogu biti srani zastoj, modani udar, pulmoralni edem te ostale komplikacije koje najee zavravaju fatalno.
Slika 2 Zbog ove opasnosti a i zbog novog testa na EPO(eritropoietin), sportisti istovremeno koriste i razne ekspandere plazme, kao to su Albumex, Gelufozine i Haemaccel, kako bi razredili krv odnosno smanjili hematokrit. Pored ovih opasnosti, manipulacije krvlju te transfuzije uvek donose odreeni rizik od infekcije hepatitisom, AIDS-om i ostalim uzronicima tekih zaraznih bolesti.
7
5. KRVNI DOPING JE I DANAS PRISUTAN Pojavom EPO (eritropoietin je proteinski hormon a osnovni zadatak mu je da stimulie kotanu sr s ciljem izazivanja eritropoieze, odnosno proizvodnje eritrocita), koji se uzima putem inekcija praksa je uveliko nastavljena. Sportiste, izgleda ne zabrinjava mnogo injenica da je od posledica krvnog dopinga i EPO-a od 1987. Godine do danas umrlo najmanje 30-40 vrhunskih sportista, uglavno biciklista. tavie, veliki broj njih se okrenuo novijoj generaciji preparata koji su, prema svedoenju strunjaka, jo opasniji. Radi se o dodacima krvi koji sadre ultraproieni i modifikovan hemoglobin uzet iz goveda. Hemopure, kako se zove najnoviji preparat, ima vrlo brz i drastian uinak na krv sportista. Meutim, i najmanja greka pri njegovoj upotrebi moe prouzrokovati fatalne posledice.
8
6. PREDNOSTI KOJE DONOSI KRVNI DOPING Kao to vidite krvni doping nije igra. No, sportisti, posebno oni u disciplinama izdrljivosti, nesumnjivo e ga i dalje uveliko praktikovati. Ne samo jer ga doping kontrola moe teko detektovati, nego zato to daje izuzetna poveenja sposobnosti. Ispitivanja su pokazala da krvni doping, u proseku, kod vrhunskih sportista daje sledee rezultate: u trci na 1500m poboljanje iznosi 3-5 sekundi, 10000m tri se oko 1 minut, a maraton ak 4 minuta bre. Sigurno je teko odoleti takvim fantastinim poboljanjima na vrhunskom nivou.
Slika 3 Na kraju krajeva, mnogi koji moda i ne ele, ipak su prisiljeni koristiti krvni doping da bi uopte ostali konkurentni. Tradicionalne metode, poput priprema na velikim nadmorskim visinama, pa ak i boravak u barokomorama, gube bitku s agresivnim i vrlo efikasnim farmakolokim sredstvima.
9
7. GENSKI DOPING I GENETIKO ININJERSTVO U SPORTU
Slika 4 Genetski(genski) doping predstavlja vrstu dopinga koja se zasniva na genetskoj (genskoj) terapiji, koja ukljuuje upotrebu modifikovanog genetskog materijala. Ona se zasniva na dodavanju ili menjanju gena koji se nalazi u eliji. Genska terapija je jo uvek u eksperimentalnoj fazi mada ima i onih koji smatraju da se ova vrstadopinga uveliko koristi u elitnom sportu. Oko genske terapije vlada veoma podeljeno miljenje, sa jedne strane su naunici koji rade na njenom daljem razvoju i koji naglaavaju veliki potencijal i korisnost ovakve terapije, dok sa druge strane postoji veliki broj kritiara koji to sve osporavaju, iskazuju svoju zabrinutost i koji ukazuju na moralnu i etiku stranu dosadanjeg ali i budueg istraivanja u ovoj oblasti.
Nai geni se sastoje od hemijske supstance DNK (dezoksiribonukleinska kiselina), i ona sadri informacije po kojima se stvaraju supstance u naem telu tako da ljudski genom ustvari predstavlja "plan" na osnovu koga je napravljen ljudski organizam. DNK predstavlja veoma dug lanac koji ine etiri aminokiseline A, C, G, i T. Dok sa jedne strane geni - DNK sadre informacije, sa druge strane proteini omoguuju rad i razvoj organizma na osnovu tih informacija. Neki od proteina reguliu rast i razvoj organizma, dok su drugi vezani za regulaciju raznih procesa koji se odvijaju u samom organizmu. Takoe mnogi proteini reguliu rad drugih proteina. Kodirani delovi DNK sadre informacije koje elije koriste za proizvodnju specifinih proteina prilagoenih njihovoj potrebi kao i njihovu koliinu. Vezivanjem razliitih regulatornih proteina u genima, moe se uticati na dalji razvoj gena, odnosno moe se regulisati gen. Genska terapija je prvenstveno razvijana za potrebe leenja bolesti kao to su anemija, distorzija miia, periferne vaskularne bolesti, nasledne bolesti, itd. Genska terapija ima i fokus na leenje povreda uz pomo "faktora rasta" koji stimuliu i ubrzavaju proces zarastanja (ozdravljenja).
10
Budui da proizvodnja proteina zavisi od aktivnosti gena poto kodirani delovi gena sadre informacije za proizvodnju i regulisanje proteina, moe se postii proizvodnja vee koliine odreenog proteina tako to e se izmeniti genski zapis (informacije) i samim tim direktno uticati na regulaciju gena. Jedan od naina poveanja proizvodnje odreenog proteina postie se tako to se izvadi odreeni kodirani deo gena i umesto njega stavi drugi kodirani deo, koji je aktivniji od prethodnog i koji se na kraju inekcijom ubrizga u organizam. Ovim postupkom postie se regulacija gena, odnosno direktno se utie na proizvodnju odreenih proteina koji mogu pospeiti vei i bri razvoj samog organizma. Smatra se da se ovakvim postupkom postie rast i razvoj tkiva (miia) to dovodi do poveanja snage i mnogo breg oporavka od povreda. Takoe se smatra da je genski doping nemogue ili mnogo tee otkriti u odnosu na neke druge metode dopinga.
Meutim postavlja se moralno i etiko pitanje koje se odnosi na upotrebu i dalji razvoj genske terapije naroito kad se uzme u obzir injenica da su u sportu najee zloupotrebljavane ba one stvari koje su prvenstveno napravljene da pomognu sportistima pri leenju bolesti, oporavaku, itd. Genska terapija nesumnjivo moe predstavljati veliki korak u napred, kad je u pitanju leenje bolesti, ali sa druge strane genetski doping moe vrlo ozbiljno ugroziti integritet sporta.
11
8. KRATKA ISTORIJA GENSKOG DOPINGA
Svetska Anti-DopingAgencija ( WADA ) formirana je 1999. god.Povesni razvoj politike povezane sa genskim dopingom zapoeo je 2001. god. kada se Meunarodni Olimpijski Komitet ( MOK ) sastao kako bi razmotrili posledice genske terapije za sport.Nakon toga sastao se odbor Svetske Anti Doping Agencije, u Cold Spring Harbor labaratoriji u New York-u, kako bi razgovarali o genetskim poboljanjima. Takoe u 2002. god. u SAD-u precednici vea za bioetiku sastali su se kako bi razgovarali o etici genske tehnologije vezane za sport. U 2003. godini WADA je odluila zabraniti genski doping unutar svog svetskog antidoping kodeksa, koji je formaliziran 2004. godine. WADA je pitala naunike da im pomognu kako bi pronali naine da spree gensku terapiju iz koje se dobiva najnovije sredstvo dopinga. U septembru 2010. godine WADA je finansirala jedan istraivaki projekat koji je pokazao da se zlouoptreba te genske tehnike moe otkriti u konvencionalnim uzorcima krvi. Prvi proizvod, koji je bio povezan sa genskim dopingom , se pojavio na Zimskim Olimpijskim Igrama u Torinu 2006. godine ,a to je bio repoxygen.
12
9. GENSKI DOPING I GENSKA TERAPIJA Genski doping je izrastao iz genske terapije. Meutim, umesto ubrizgavanja DNK u telo osobe u cilju obnove neke funkcije vezane za oteenje ili nedostatak nekog gena, kao u genskoj terapiji, genski doping ukljuuje umetanje DNK u cilju poboljanja sportske izvedbe. Prema WAD- i ( World Anti Doping Agency ) genski doping se definira kao "ne- terapeutsko unoenje elija, gena, genetskih elemenata u cilju poveanja sportske performanse.
Slika 5 - Logo Svjetske Anti Doping Agencije
Tehnike koje se koriste u genskom dopingu potiu od tehnika genske terapije. U genskoj terapiji cilj je leenje i zamena pokvarenog gena .
Gensku terapiju delimo prema njenim ciljnim stanicama. Tako razlikujemo: Somatsku gensku terapiju gde ciljne stanice mogu biti sve stanice organizma,osim spoljnih. Pri somatskoj genskoj terapiji, promene u genomu ostaju ograniene na osobu na kojoj je terapija primenjena, te nemaju uticaja na genom potomstva. Germinativnu gensku terapiju kod koje se genski materijal unosi u spolne stanice.Pri germinativnoj genskoj terapiji, naprotiv, promjena u genomu se prenosi napotomstvo unedogled.Ova je podjela za sada uglavnom teoretska, jer ne postoji pouzdan nain kojim bi se moglo priin vivo genskoj terapiji sprijeiti unos genetskog materijala u spolne stanice. Druga bitna podela genske terapije je prema nainu primene. Tako razlikujemo: Ex vivo gensku terapiju koja se obavlja u labaratorijskim uvetima na stanicama koje se kasnije vrate u organizam bolesnika. In vivo gensku terapiju kod koje se genski materijal unosi direktno u bolesnika,posredstvom vektora
Slika 6 13
10. METE GENSKOG DOPINGA
Geni kandidati mogu biti uzrok nekog karakteristinog fenotipa.
- vaan u elektrolitnom balansu i sistemskom krvnom pritisku - degradacija kinina - vaan pri performansama brzine i snage
ISTRAIVANJA: - Vee prisustvo I alela kod trkaa na duge staze, alpinista, ronilaca i sl.
Slika 8 - Vee prisustvo D alela u sportovimasnage, sprintu,plivanju na kratke staze i sl.
Slika 9 15
10.2 Alfa-aktinin 3 (ACTN3) ULOGA: odravanje i regulacija citoskeletona
- Alfa- aktinin 2 prisutan je u svim skeletnim miinim vlaknima ( sporim i brzim ). - Alfa-aktinin 3 je ogranien samo na brza vlaknau skeletnom miiu. - 1999. je identifikovan polimorfizam u ACTN3genu - funkcionalni R- alel i nulti X alel - oko bilion ljudi irom sveta ima nedostatak alfa- aktinina 3
ISTRAIVANJA: - Prisustvo R alela moe biti predispozicija za snanu miinu kontrakciju. - Naena je vea frekvencija R alela kod sportista sprinta i snage. - Prisustvo X alela moe biti predispozicija za veu izdrljivost u fizikim aktivnostima. - Naena je vea frekvencija XX genotipova kod sportista iz sportova izdrljivosti.
10.3 Miostatin gen ULOGE: - Usporava razvoj miinih stem elija - Inhibira kinazu - Mutacija koja smanjuje produkciju funkcionalnog miostatinadovodi do porasta miinog tkiva.
Slika 10 - Liam Hoekstra beba koja se rodila bez miostatin gena
16
10.4 Insulinu slian faktor rasta I (IGF-I) ULOGE: - Stimulie rast elije - Aktivaciju sintezeproteina - Regeneraciju tkiva - U oteenju miia i procesima reparacije Najjai efekat IGF-a: - uzrokuje hiperplaziju (deljenje elija )
10.5 Vaskularni endotelijalni faktor rasta(VEGF) ULOGE: - Utie na vaskularizaciju ( formiranje novih krvnih sudova ) Upotrebom ovog faktora: - Zamor se moe odgoditi - Poboljava produkciju energije - Smanjuje produkciju metabolita
10.6 PPAR delta (engl. Peroxisomeprolifera-tor- activated receptor-delta) ULOGE: - Deluju kao transkripcioni faktori u regulaciji ekspresije gena - Ima vanu ulogu u adaptaciji mnogih tkiva na promene u spoljanjoj sredini - Regulacija metabolizma masnih kiselina skeletnih miia i adipoznog tkiva
10.7 Eitropoetin (EPO) ULOGE: - Indukuje eritropoezu - Sintetiki eritropoetin poveava kapacitet krvi za prenoenje kiseonika i time poveava izdrljivost sportiste RIZIK: - pojava hipertenzije, sranog ilimodanog udara.
17
11. DETEKCIJA GENSKOG DOPINGA Genski doping je teko otkriti standardnim doping testovima. Proteini koji se prenose transferom gena su humanog porekla i ne razlikuju se od ostalih endogenih konstituenata. Testovi krvi i urina nisu odgovarajui, pa je zato neophodna biopsija za uzimanje uzorka tkiva. Upotreba proteinskih markera, kao indikatora naruavanja normalne fiziologije je mogue reenje, uz prethodnu individualnu analizu (skrining) seta proteina u fiziolokim uslovima, a u fazi ispitivanja je upotreba mikroip tehnologije i DNK barkodova. S obzirom na veliki broj razliitih gena koji se koriste u dopingu, potrebno je poznavati njihovu ekspresiju i metaboliki put. Od 2000. godine, mogue je identifikovati rekombinantni EPO. Tehnika elektroforeze omoguava direktno merenje nivoa u urinu, i to na osnovu principa da je rHuEPO molekul manje negativno naelektrisan u odnosu na endoge ni EPO molekul. Takoe je mogue detektovati minutne tragove genskog transfera pomou vektora, koristei visokosenzitivnu tehniku PCR-a, opisanu od strane Beiter, Zimmermann, Fragaso, Armeanu,Lauer, Bitzer i saradnika (2008). Jo jedan pristup, koji je u upotrebi, jeste indirektna tehnika kojom se detektuju posledice genske manipulacije, bilo da se radi o ciljevima genske ekspresije, proteinima ili njihovim metabolitima. Biosenzori na osnovu afiniteta (ABBs) supogodni za primenu kod detekcije gena ili vektora DNK sekvence, rekombinantnih protein ili drugih indirektnih biomarkera. Ova tehnika se bazira na upotrebi oligonukleotidnih proba specifinih za endogene sekvence. Moe se, na primer, upotrebiti za detekciju rekombinantnih proteina, koristei specifina antitijela (Minunni, Scarano i Mascini, 2008).
18
12. ETIKA OPRAVDANOST UPOTREBE GENSKE TERAPIJE U SPORTU Usklaeno sa principima Svetske zdravstvene organizacije, u medicinskoj etici od presudne vanosti je potovanje dva principa: potovanje linosti oveka i odanost idealima humanizma. Ali manipulacija genskom terapijom u sportu rui upravo ove osnovne principe humanizma. Stvaranje super sportista se kosi sa osnovnim etikim principima, ugroava se zdravlje sportista, a i duh samog sporta bi mogao biti naruen.Fer plej ukljuuje jednakost uslova i meusobno potovanje,kao i zadovoljstvo pobede, a svaka druga pobeda bi bila varanje prirode i humanosti. Potrebno je napraviti otru granicu izmeu terapije, pomoi bolesnima i ugroenima, i zloupotrebe i osuditi je zakonski, moralno i etiki. Da bi spreili doping treba izvriti edukaciju na svim nivoima (sportisti, treneri, roditelji, javnost ), promovisati tzv. isti sport, ukljuiti kaznene mere: finansijske i iskljuivanje sa takmienja, obratiti panju na nesportsko ponaanje.
Slika 11 - Promovisanje tzv.istog sporta bez upotrebe nedozvoljenih sredstava.
19
13. ZAKLJUAK: Na osnovu svega navedenog racionalnom oveku ne bi treblao da predstavlja problem da konstatuje da bi dobing zakonom trebalo strogo zabraniti u svim njegovim pojavnim oblicima, budui da je tetan i besmislen. Ipak, doping je uprkos svim kampanjama, kaznama i pretnjama, oduzimanjima medalja, titula, tekim oboljenjima koja su zadesila najvee legende sporta, i dalje aktuelan, i dalje se u razvoj supstanci i metoda ulau basnoslovne cifre... Zato? Oigledno je da ovek tei ka tome da postigne nemogue, i istovremeno ne eli da se divi osobi koja je nalik njemu samom, osobi koja je sve postigla napornim radom, i koja izgleda sasvim normalno, izuzev to - eto ima neto bolju kondiciju. To je neodvojiva potreba ljudskog bia -traenje i negovanje super-idola, kao bia koje je nadnaravno. Od profesionalnog sportiste se oekuje da daje vie nego to obino ljudsko bie moe, da postie nadljudske rezultate, sve zarad zadovoljstva irokog auditorija, a u cilju generisanja abnormalnih profita. Potroako drutvo zahteva potronu robu koja donosi zabavu, a sport se zahvaljujui svojim karakteristikama ( barem pojedine vrste ) savreno uklapa u taj opis. U tom smislu, verovatnoa da e u skorije vreme neto da se promeni nije ravna nuli, ali je veoma priblina toj cifri ( bez imalo pesimizma ). Ipak, treba nastojati da se stanje promeni, jer ne postoji samo profesionalni sport - i nije jedini cilj sporta generisanje profita, ve i zadovoljstvo