1.

Axit amin phản ứng với ninhydrin

1.1 Cơ sở lý thuyết
Phản ứng màu đặc trưng của ninhydrin với các α-aminoacid và cường độ màu phụ
thuộc vào nồng độ của axit amin là cơ sở của việc sử dụng ninhydrin trong các
phương pháp định tính và định lượng axit amin bằng kỹ thuật so màu.
1.2 Cách tiến hành
Dụng cụ: ống nghiệm, kẹp, pipette, nồi đun cách thủy
Hóa chất
- Thuốc thử ninhydrin: dung dịch ninhydrin 1% trong acetone 95%
- Các dung dịch axit amin: glutamic, problin, leucin có nồng độ 5%
- Một dung dịch thủy phân (proteolysat) chứa hỗn hopwjj axit amin
Thí nghiệm
- Dùng pipette lấy vào 5 ống nghiệm đã đánh số thứ tự
Ống [1]: 1mL dung dịch glutamic
Ống [2]: 1mL dung dịch leucin
Ống [3]: 1mL dung dịch problin
Ống [4]: 1mL dung dịch hỗn hợp axit amin
Ống [5]: 0,5mL hỗn hợp axit amin + 0,5mL nước cất
- Thêm vào mỗi ống 0,2 mL thuốc thử ninhydrin
- Đặt các ống nghiệm vào nồi đun cách thủy trong 10 phút
- Sau 10 phút, lấy ống nghiệm ra. Ghi màu và viết phản ứng
1.3 Kết quả
Ống [1]: màu tím xanh
Ống [2]: màu tím xanh
Ống [3]: màu vàng cam
Ống [4]: màu vàng nhạt
Ống [5]: màu vàng nhạt
1.4 Giải thích
Phương trình phản ứng
Axit amin khi phản ứng với ninhydrin sẽ bị oxy hóa giải phóng NH3, CO2, tạo ra
aldehyde (ít hơn 1 Carbon so với axit amin ban đầu), đồng thời chuyển ninhydrin từ
dạng oxy hóa sang dạng khử. Sau đó NH3 và ninhdydrin vừa mới tạo ra tác dụng tiếp
với 1 phân tử ninhydrin cho ra sản phẩm có màu tím xanh.
Hầu hết các axit amin khi phản ứng với ninhydrin sẽ tạo phức màu tím xanh. Riêng
proline phản ứng tạo phức màu vàng.

1.5 Nhận xét

- Phản ứng của axit amin với ninhydrin là cơ sở để định lượng các hợp chất theo
phương pháp khí kế bằng cách tính số lượng CO2 hoặc NH3 bay ra, còn phương pháp
so màu lại đo cường độ màu, nó phụ thuộc nồng độ phức hợp của ninhydrin với NH3.
- Phản ứng của axit amin với ninhydrin được sử dụng nhiều để định tính và định
lượng axit amin, đặc biệt là phương pháp sắc ký trên giấy và sắc ký trên cột nhựa trao
đổi lớn nhờ máy phân tích axit amin tự động do Spackman, Stein và Moose đề xướng.
Phản ứng này rất nhạy, có thể cho phép ta xác định được các axit amin có nồng độ rất
nhỏ (vài microgam).