BÀI PHÚC TRÌNH

BÀI 2. SỬ DỤNG THIẾT BỊ ĐO QUANG PHỔ TRONG PHÂN

TÍCH ĐỊNH LƯỢNG CHẤT HỮU CƠ

1. Xây dựng đồ thị đường chuẩn:

- B1: Pha dung dịch amylose gốc nồng độ 2mg/mL trong dung dịch
NaOH 1N. Từ dung dịch gốc, pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ từ 0 –
2 mg/mL.
- B2 : Tính thể tích dung dịch amylose gốc :
+ Ống 1: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 0 . 100
0 .100
→ V1 = 2
= 0µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 0 = 100 µL

+ Ống 2: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 0,4 . 100

0,4 . 100
→ V1 = 2
= 20µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 20 = 80 µL

+ Ống 3: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 0,8 . 100

0,8 .100
→ V1 = 2
= 40µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 40 = 60 µL

+ Ống 4: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 1,2 . 100

1,2. 100
→ V1 = 2
= 60µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 60 = 40 µL

+ Ống 5: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 1,6 . 100

1,6 .100
→ V1 = 2
= 80µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 80 = 20 µL

+ Ống 6: C1 . V1=C2 . V2 ↔ 2 . V1 = 2 . 100

2. 100
→ V1 = 2
= 100µL
→ Vnước cất = 100 – VAmylose = 100 – 100 = 0 µL
- B3: Thêm các hóa chất vào 6 ống nghiệm theo bảng sau:

Ống nghiệm 1 2 3 4 5 6
Nồng độ dung dịch amylose (mg/mL) 0 0,4 0,8 1,2 1,6 2
Thể tích dung dịch amylose gốc 0 20 40 60 80 100
(µL)
Thể tích nước cất (µL) 100 80 60 40 20 0
Thể tích dung dịch TCA 0,6% (mL) 5 5 5 5 5 5
Thể tích dung dịch iod 0,01 N (µL) 50 50 50 50 50 50

- B4: Lắc đều các ống nghiệm, để yên 20 phút. (lặp lại thêm 2 lần
như vậy)
- B5: Đo bước sóng ở 620nm được kết quả:
- B6: Vẽ đồ thị.

0.9

0.8
f(x) = 0.3425 x + 0.115
0.7 R² = 0.991266072433654

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5

2. Chuẩn bị mẫu phân tích

- Cân chính xác 15 mg mẫu bột gạo. Thêm 5 mL dung môi methanol để
ly trích béo. Đun cách thủy 60oC trong 30 phút. Ly tâm ở 6000 vòng\phút
trong 15 phút, lấy phần cặn lắng. Lặp lại bước ly trích một lần nữa. Phần
cặn lắng them 2 mL NaOH 1 N và 4 mL nước. Đun cách thủy ở 95oC
trong 30 phút.

Dùng micropipet hút 100 µL dung dịch mẫu vừa chuẩn bị ở trên cho vào
3 ống nghiệm, thêm vào 5 mL dung dịch TCA 0,6% và 50 µL dung dịch
iod 0,01N (làm tương tự với 3 ống nghiệm). Lắc đều các ống nghiệm và
để yên 20 phút. Đo ở bước sóng 620 nm, ta được:
Ống nghiệm 1: A1 = 0,218
Ống nghiệm 2: A2 = 0,209
Ống nghiệm 3: A3 = 0,185
Ống nghiệm 1: B1 = 0,183
Ống nghiệm 2: B2 = 0,171
Ống nghiệm 3: B3 = 0,159