11/3/2020

Individualització dels
indicis biològics.
Polimorfisme de
l’ADN. Concepte.
Marcadors genètics
polimòrfics.
Identificació
Assignatura: Criminalística
Prof. Carme Barrot
Ensenyament Criminologia
Facultat de Dret
Universitat de Barcelona

GENÈTICA FORENSE

INTRODUCCIÓ

1
 11/3/2020

On es troba l’ADN
ARN

ADN

ADN nuclear o autosòmic

Àcid desoxidribonucleic nuclear:

• Lineal
• El cromosoma més gran té una llargada de ≈85mm

2
 11/3/2020

http://slideplayer.es/slide/3277123/

Tipus d’àcids nucleics

DNA = ADN RNA = ARN

• Informació per a la vida
• Molt estable
• Es manté igual al llarg de
tota la vida de l’individu
• Elevada variabilitat
• Transcripció de la
informació de l’ADN
• Traducció a proteïnes
funcionals
• Inestable
• Variable en contingut
cel∙lular segons el cicle vital

3
 11/3/2020

Molècula d’ADN constituïda per:

Àcid fosfòric

2‐Desoxiribosa Bases Nitrogenades

Molècula d’ADN constituïda per:

5’

4’ 1’

3’ 2’

http://bio1.yolasite.com/molecular‐biology.php

4
 11/3/2020

https://ca.wikipedia.org/wiki/Àcid_desoxiribonucleic#/media/File:Estructura_qu%C3
%ADmica_de_l%27ADN.svg

SEQÜÈNCIA
ACGTCGAGCATAGCTTACGTAGACTATCTCGATCGACTATCG
ATCATCGTACGTAGATGCTAGCTAGTACGTACGATCGTCGAC
TCGTCAGCATCGTTCGTCAGTCATGCATGCTAGTCTACGTGT
TCGATGATCTAGCTCATCAGTAGATCTATTATATAGTCCGAGT
TATATGCATGCATCGTCGTAGCTAGCATCGCATCTATGCTAGA
TTATATATTATAGCGCGCGCGCGGAGTCGTACTCGTGTATGT
ACGTCAGTCATGTCATCGTATCGACGTAGTCTGCGTCGTCTG
GTGTACGTACGTACGTACGTCAGTCAGTACGTCAGTGTCAG
TCAGTCAGTCAGTCGTACGTACGTCAGTACGTCAGTCAGTA
TCGTACGTAGCGGCGCGGCGCGGCCATTATCCGACGTATCG
TAGTCATGTAGCTAGCTAGTCATATTATATGCCGAGTCTAGC
ACACCACACCATGTGGTTGTGTGGAGGAGAGAGAGCGTCT
CTTTCTCTTAGGAGTAGCTAGCTAGCTAGTGACGTATAGCG
ACGTATTGCACTGATAGGTTGCGTACGTACGTACGTCATGAC
GTACTGACGTACTGCAGTCAGTACTGACGTACGTGTACGTA
CGTCAGTAGTACGTCATGTGACGTACTGCAGTACGTCATTG
TCTTCATCTCTCCGTTGCATACTGGCTCTCAGTCATGACTGC
ATGCATGACTGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCTG
CATGCATGCATGCATCTGCTGCTGCTCATCATGCTGCATGCT
GCTGCATGCTGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCAT
GCATGCTGCATGCATGCTGCTGCATGCTGCTGCTGTCGTGC
ATGATATA

5
 11/3/2020

ESTRUCTURA

Cariotip

https://ca.wikipedia.org/wiki/Cromosoma#/media/File:Mapa_gen%C3%A9tico_o_cariograma.jpeg

6
 11/3/2020

Diversitat

A B

Al∙lel A: CCCGTGAGCTAAGCTACGTTGCAGGCT
Al∙lel B: CCCGTGAGCTAAGCTACGTTGCAGGCT
Al∙lel R: CCCGTGAGCTAAGCTACGAACCGCGTTGCAGGCT
Al∙lel S: CCCGTGAGCTAAGCTACCTTGCAGGCT 13

A B

FREQÜÈNCIES AL∙LÈLIQUES: freqüència de cada un dels diferents al∙lels que

es poden trobar en un locus, a la població
GENOTIP: al∙lels que un individu té en una zona concreta de l’ADN. En el cas
del gen definit en aquest cromosoma té el genotip AB

FREQÜÈNCIES GENOTÍPIQUES: freqüència en que un determinar genotip es

troba a la població

FENOTIP: expressió visual dels al∙lels que tingui un individu

FREQÜÈNCIES FENOTÍPIQUES: freqüència en que un determinar fenotip es
troba a la població

7
 11/3/2020

Funcionalitat
ADN Cèl∙lula
mamífer

ADN humà

ADN
ADN Nuclear
mitocondrial

ADN ADN
Nuclear mitocondrial
Seqüències
Seqüències
funcionals de
repetides
còpia única
ADN
ADN sexual
autosòmic
Seqüències
Seqüències
sense funció
funcionals
coneguda

HERÈNCIA
Quantes combinacions diferents és poden donar en una parella?
https://ca.wikipedia.org/wiki/Cromosoma#/media/File:Mapa_gen%C3%A9tico_o_cariograma.jpeg https://afhanoi.com/vo‐sinh‐o‐nam‐va‐nu‐do‐di‐truyen‐co‐the‐ban‐chua‐biet.html

8
 11/3/2020

H
e
r
è
n
c
i
a
Cromosoma Y ens
identificarà la
línia masculina
d’una família

ADN mitocondrial
Característiques
• ADN circular
• Línia femenina
• Informació de la
cadena
respiratòria

By mikibc ‐ viquipèdia en alemany, CC BY‐SA 3.0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=4769760

9
 11/3/2020

Genètica Forense

OBTENCIÓ DELS INDICIS ÚTILS PER

A L’ANÀLISI D’ADN

D’ON ES TREUEN ELS INDICIS

ESCENA DEL CRIM

SOBRE LA/LES PERSONA/ES IMPLICADA/ES

COM RECOLLIR‐LOS
DOCUMENTACIÓ
PRESERVAR
NO CONTAMINAR
INICI CADENA DE CUSTÒDIA

10
 11/3/2020

OBTENCIÓ DE MOSTRES PROBLEMA

• MATERIAL BIOLÒGIC D’UNA ESCENA CRIMINAL

– Taques de sang
– Empremtes
– Cabells o pels amb arrels
– Burilles o culleres
• MATERIAL DE RESTES CADAVÈRIQUES
– Dents
– Fèmur

OBTENCIÓ DE MOSTRES REFERÈNCIA

• MOSTRES PROCEDENTS D’INDIVIDUS

IDENTIFICATS
– Sang
– Cabells amb arrels
– Saliva
– Mostres procedents de biòpsies

11
 11/3/2020

CONTROLAR:

• LA IDENTIFICACIÓ DE LA MOSTRA
• EVITAR LES CONTAMINACIONS
• EVITAR LA DEGRADACIÓ
• MANTENIR LA CADENA DE CUSTÒDIA

23

12
 11/3/2020

http://www.zelian.com.ar/h
isopos‐hisopos‐y‐medios‐
microbiologicos‐plastico‐‐
prod‐‐4443

http://www.materlab.com/index.php?id_produc
t=955&controller=product&id_lang=1

http://revistamundoforense.com/metodologia‐
de‐investigacion‐en‐el‐lugar‐de‐los‐hechos/

Bloc de GENÈTICA FORENSE

PRINCIPALS TÈCNIQUES D’ANÀLISI. FRAGMENTS
POLIMÒRFICS D’ADN D’INTERÈS CRIMINALÍSTIC.
STR I VNTR. L’ADN DEL CROMOSOMA Y L’ADN
MITOCONDRIAL

13
 11/3/2020

Tècnica d’ Alec
Jeffreys
Cas de Colin Pitchfork
• Ann Mann va ser violada i assassinada
brutalment al 1983
• Lloc: Narborough de Leicestershire
(Anglaterra)
• Dawn Ashworth també va patir una
agressió similar al 1986
• Una persona es declara culpable però
la prova d’ADN indica que és mentida
• S’analitzen 4000 mostres d’homes que
viuen a la zona
• 1987 les proves apunten com a
culpable a Colin Pitchfork
• ADN afirma la culpabilitat

OBJECTIUS

• IDENTIFICAR
–CRIMINAL
–PATERNITAT
–RESTES
• MALALTIES

14
 11/3/2020

Minisatèl∙lits
Número variable de
repeticions en tàndem
Microsatèl∙lits
ADN de seqüència repetida
sense funció coneguda
Transposons
Seqüències derivades
de transposicions
Retrotransposons
29

MINISATÈL∙LIT
SEQÜÈNCIA CORE: una seqüència de n nucleòtids que es
repeteix un nombre variable de vegades en tàndem.
Per exemple: seqüència core de 50pb

6 còpies

5 còpies

ACGTGCATTACTCAGTCAGTATCGATGCATCGTAGATCGTACTAGCTGCTA

15
 11/3/2020

J. Butler. Fonamentals of forensic DNA typing. Ed. Elsevier Inc. 2010. USA

Característiques DNA mitocondrial DNA nuclear

Grandària del ≈16569 bp ≈3,2 bil∙lions bp
genoma
Còpies per >1000 2 (1 al∙lel de cada
Cèl∙lula progenitor)
Estructura Circular Lineal

Herència Materna Paterna i materna

Aparellament de Haploid Diploid

cromosomes
Individualitat Igual per a tots els Únic per a cada individu
parents de la línia (excepte bessons
materna univitel∙lins)
Índex de mutació 5‐10 cops superior a Baix
l’ADN nuclear

Bloc de GENÈTICA FORENSE

METODOLOGIES

16
 11/3/2020

OBTENIR ADN DE QUALITAT

• NO Degradat
– Humitat
– Foc (més de 300◦C destruït totalment)
• Barreges
– Iguals quantitats
– Quantitats diferents
• Poca quantitat
• Contaminat amb productes inhibidors de la
PCR

34

17
 11/3/2020

http://biomedfrontiers.org/stem‐cells‐2015‐7‐8/

• Clàssica
– Fenol‐
cloroform‐
alcohol
isoamílic
http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=34

• Magnets

http://theolb.readthedocs.io/en/latest/molecular‐biology/dna‐extraction‐

• Chelex chelex.html

• FTA cards

http://www.rnaready.com/fta_elute.htm

18
 11/3/2020

Reactius Temperatures
• Cadena a amplificar • Desnaturalització (95°C)
• dNTPs (A,C,G,T) – Separació de cadenes
• Primers o sondes • Anealing (≈60°C)
– Unió dels primers a la cadena
• ADN polimerasa
• Síntesi ADN (72°C)

• Repetició de les 3 etapes n

vegades (28‐35)

38

19
 11/3/2020

http://www.slideshare.net/MetheeSri/principle‐of‐pcr

Còpies de DNA obtingudes

CICLES CÒPIES

1 2

2 4

4 16

10 1.024

15 32.768

20 1.048.576

25 33.554.432

30 1.073.741.824

40

20
 11/3/2020

Electroforesis d’agarosa

1 2 3 4 5 6

21
 11/3/2020

Seqüenciador automàtic
d’DNA on mitjançant
electroforesis capil∙lar
detecta els fragments
d’ADN que han estat
marcats en un extrem amb
un fluorocrom.

43

44

22
11/3/2020

23