Machine Translated by Google

Lớp phủ polyethylene glycol chức năng sinh học trên

titan: so sánh dựa trên in vitro của

phương pháp chức năng hóa

Judit Buxadera-Palomero1,2, Cristina Calvo1,2, Sergi Torrent-Camarero1,2, F. Javier Gil1,† ,

Carlos Mas-Moruno1,2, Kênh Cristina1,2, Daniel Rodríguez1,2, *

1
Nhóm Vật liệu sinh học, Cơ sinh học và Kỹ thuật mô, Khoa Khoa học Vật liệu

và Luyện kim, Escola d'Enginyeria Barcelona Est, Đại học Kỹ thuật Catalonia (UPC), C/

Eduard Maristany 10-14, 08019 Barcelona, Tây Ban Nha

2
Trung tâm Nghiên cứu Kỹ thuật Nano (CRNE) – UPC, C/Pascual i Vila 15, 08028 Barcelona,

Tây ban nha

Địa chỉ hiện tại

† Đại học Quốc tế Catalunya (UIC), C/ Immaculada 22, Barcelona 08017, Tây Ban Nha

TỪ KHÓA: Polyethylene glycol, Titan cấy ghép, Chức năng sinh học, Huyết tương

Phản ứng trùng hợp, silan hóa, lắng đọng điện

1
Machine Translated by Google

TRỪU TƯỢNG. Ba phương pháp sản xuất lớp phủ Polyethylene glycol (PEG) trên

titan được so sánh, tức là trùng hợp plasma, định vị bằng điện và silan hóa. Các

các phương pháp lắng đọng được so sánh cho thấy độ thấm ướt tương tự (lớp phủ ưa nước), hóa chất

thành phần được đánh giá bằng XPS và độ dày khoảng 1nm. Lớp phủ làm giảm lượng albumin

hấp phụ và làm giảm nguyên bào sợi, Streptococcus sanguinis và Lactobacillus

sự bám dính của nước bọt . Việc cố định peptide bám dính tế bào (RGD) mang lại hiệu quả cao hơn

bám dính nguyên bào sợi và không làm thay đổi độ bám dính của vi khuẩn, đưa ra ba phương pháp để

chức năng sinh học của titan cho cấy ghép nha khoa. Tính khả thi của từng phương pháp

được so sánh về mặt các tham số của quy trình để cung cấp hướng dẫn cho việc lựa chọn

phương pháp luận.

Trừu tượng đồ họa

2
Machine Translated by Google

GIỚI THIỆU

Polyethylene glycol (PEG) là một loại polymer nổi tiếng được sử dụng để phát triển các bề mặt chống hà.

Khi cố định trên một chất nền, nó sẽ tạo ra đặc tính ưa nước trên bề mặt, vốn đã được

liên quan đến việc giảm khả năng hấp phụ protein1–
3 , độ bám dính tế bào động vật có vú4,5 và vi khuẩn

độ bám dính6–
8 . Những lớp phủ này cũng làm giảm sự kết dính của tiểu cầu, dẫn đến giảm nguy cơ hình thành huyết khối.

hình thành, tổn thương mô và các tác dụng gây độc tế bào khác9 . Vì vậy, lớp phủ PEG đã được sử dụng để

có được thiết bị cấy ghép y tế chống nhiễm trùng10–

13, cảm biến sinh học với tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu được cải thiện14,15

và màng ít bám bẩn16–

18, cùng nhiều ứng dụng khác.

Titan được sử dụng rộng rãi để sản xuất các thiết bị cấy ghép, chẳng hạn như thiết bị nha khoa và chỉnh hình.

cấy ghép19–21. Việc sử dụng titan tiếp xúc với chất dịch và mô cơ thể có thể dẫn đến các triệu chứng không đặc hiệu.

hấp phụ protein, bám dính tế bào và bám dính vi khuẩn, có thể gây ra các tác nhân gây bệnh bất lợi

các vấn đề trong thực hành lâm sàng, chẳng hạn như huyết khối, thiếu sự tích hợp xương và liên quan đến vật liệu sinh học

nhiễm trùng22,23.

Nhiễm trùng liên quan đến cấy ghép titan rất khó điều trị vì sự bám dính của vi khuẩn thường dẫn đến

sự hình thành màng sinh học, là một cộng đồng đa loài được gắn vào một polysacarit

chất nền ngoại bào do vi khuẩn tạo ra. Màng sinh học bảo vệ cộng đồng vi khuẩn

chống lại phản ứng miễn dịch và cung cấp cho chúng khả năng kháng lại các phương pháp điều trị bằng kháng sinh24–
26.

Hệ sinh thái vi khuẩn được tìm thấy trong màng sinh học rất phức tạp và được hình thành bởi một số loài. Ví dụ, trong

trường hợp cấy ghép nha khoa, một số vi khuẩn xâm chiếm sớm bao gồm Streptococcus sanguinis27–29

ban đầu bám dính vào bề mặt cấy ghép, và sau đó hướng dẫn sự bám dính của các khuẩn lạc sau này,

chẳng hạn như Porphyromonas gingivalis, Fusobacter nucleatum và Agggabactiter

3
Machine Translated by Google

Actinomycetemonitans30,31. Các loài khác có vai trò duy trì sự ổn định của màng sinh học

thông qua tương tác với các chủng vi khuẩn khác, như Lactobacillussalrius32,33.

Các phương pháp khác nhau đã được nghiên cứu để sản xuất lớp phủ PEG. Sự chuẩn bị của họ có thể

được thực hiện thông qua hấp phụ vật lý34, các lớp đơn tự lắp ráp35 hoặc liên kết cộng hóa trị14. Một số

các nghiên cứu đề cập đến ảnh hưởng của đặc tính PEG đến khả năng chống hà của lớp phủ35–

37. Tuy nhiên, không có dữ liệu về sự khác biệt giữa các phương pháp lắng đọng về mặt hiệu quả của chúng.

đặc tính chống bẩn.

Trong số các phương pháp hiện có, một chiến lược đầy hứa hẹn là sử dụng phương pháp trùng hợp huyết tương. Huyết tương

phương pháp xử lý là một kỹ thuật phù hợp để sản xuất các lớp polyme trên các chất nền khác nhau,

chẳng hạn như polyme38–

40 hoặc thép không gỉ41. Về vấn đề này, trước đây chúng tôi đã báo cáo

sản xuất các lớp giống PEG có kích thước nano trên titan bằng phản ứng trùng hợp plasma của

tetra(etylen glycol) dimetyl ete42. Các phương pháp dựa trên plasma không có dung môi, cho phép

xử lý nhiều mẫu cùng lúc và thích hợp cho việc xử lý các mẫu phức tạp

hình học. Các đặc tính của lớp phủ plasma có thể được kiểm soát bằng cách sửa đổi các thông số của

xử lý plasma, chẳng hạn như áp suất, công suất của plasma và loại tiền chất được sử dụng,

trong số những người khác39.

Ngoài ra, phương pháp xử lý điện hóa có thể tạo ra nhiều loại lớp phủ khác nhau, chẳng hạn như

hydroxyapatite43, polyme dựa trên phospholipid44 và bề mặt pha tạp bạc45. Mạ điện

polyme có thể được thực hiện thông qua quá trình điện phân46,47 hoặc bằng lực hút tĩnh điện của

polyme vào mẫu, hoạt động như một trong các điện cực của hệ thống48. Sản xuất PEG-

lớp phủ bằng phương pháp định vị điện được phát triển bởi Tanaka et al.49. Trong công việc của họ, một

dung dịch nước của PEG-amine có chứa natri clorua được sử dụng làm dung dịch

4
Machine Translated by Google

chất điện phân để mạ điện. Lớp phủ này cho thấy sự hình thành màng sinh học giảm

Streptococcus gordonii và Streptococcus mutans trên bề mặt titan50. Việc sử dụng PEG

sự lắng đọng điện ngụ ý việc sử dụng nước làm dung môi và thể hiện một phương pháp đơn giản và nhanh chóng.

thủ tục.

Cuối cùng, silan hóa PEG là một kỹ thuật đã được sử dụng rộng rãi để điều chế PEG-

lớp phủ trên tấm silicon. Ban đầu nó được phát triển bởi Zhang et al. 51, bằng cách sử dụng PEG và silicon

tetrachloride (SiCl4), sau đó phản ứng với silanol trên bề mặt silicon. Phương pháp này

cũng được Kocijan et al.52 sử dụng để phủ thép không gỉ. Giảm đáng kể lượng protein và

sự bám dính của vi khuẩn đã được quan sát thấy khi cố định PEG đã silan hóa trên cả silicon và

thép không gỉ. Các phương pháp silan hóa bề mặt silica cũng có thể được áp dụng cho titan, do

với sự hiện diện của lớp oxit titan53. Trong luận văn này, phương pháp này được áp dụng cho

bề mặt titan để đạt được lớp phủ tương tự.

Các chuỗi peptide liên kết với Integrin có thể được cố định trên bề mặt titan để cải thiện tính chất

hoạt tính sinh học của mô cấy54–

56 Mô típ kết dính tế bào nổi tiếng nhất là arginine-glycine-

axit aspartic (RGD), một chuỗi được tìm thấy trong các protein của chất nền ngoại bào như fibronectin,

có khả năng liên kết các tế bào thông qua các tương tác cụ thể với integrins. Do đó, trình tự RGD là

có khả năng thúc đẩy sự kết dính của một số lượng lớn tế bào57–
59. Về vấn đề này, việc sử dụng RGD

peptide kết hợp với lớp phủ dựa trên PEG đã được nghiên cứu để tăng cường mô

tích hợp với sự có mặt của polyme chống hà 60–

62; vẫn là sự so sánh về tác dụng của

thiếu peptide kết dính tế bào tùy thuộc vào lớp phủ PEG.

Mục đích chính của công việc này là so sánh hiệu suất sinh học in vitro của ba loại khác nhau

phương pháp phủ titan bằng lớp PEG, cụ thể là trùng hợp plasma, lắng đọng điện

5
Machine Translated by Google

và silan hóa. Quá trình trùng hợp huyết tương tạo ra các tính chất khác nhau trên polyme, vì

quá trình trùng hợp khác với quá trình truyền thống (tức là trùng hợp gốc). Các

so sánh phản ứng in vitro của ba kỹ thuật được đặc biệt quan tâm khi xem xét

giải thích sự khác biệt giữa quy trình plasma và quy trình hóa học ướt. Bề mặt

đặc tính được thực hiện bằng góc tiếp xúc với nước và XPS. Ở giai đoạn thứ hai, một

peptide bám dính tế bào đã được thêm vào bề mặt để cải thiện phản ứng của

tế bào động vật có vú vào lớp phủ PEG mà vẫn duy trì tác dụng chống bám bẩn cho vi khuẩn.

Sau khi xác định đặc tính hóa học của các lớp, phản ứng của tế bào động vật có vú và vi khuẩn

đã được thử nghiệm để kiểm tra tính tương thích sinh học của lớp phủ.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Nguyên vật liệu

Titan loại 2 tinh khiết về mặt thương mại được mua dưới dạng thanh 2m có đường kính 10 mm,

được cắt thành các đĩa có đường kính 2 mm (kim loại VDM, Đức). Giấy mài cacbua silic

kích thước hạt khác nhau (P400, P600, P800, P1200 và P2500) và huyền phù keo silica

(Eposil M11, cỡ hạt 0,06µm) được mua từ Neurtek (Tây Ban Nha). Isopropanol (>99,7%),

ethanol (96%) và axeton (99%) được lấy từ Panreac (Đức) và được sử dụng mà không cần

thanh lọc thêm. Toluen (99,9%), tetraetylen glycol dimethyl ete (tetraglyme, 99%),

PEG (Mw=1000g/mol), bis(3-aminopropyl)-poly(ethylene glycol) (PEG-amine), trimethylamine,

silicon tetrachloride được mua từ Sigma Aldrich (Mỹ) và được sử dụng mà không cần thêm

thanh lọc. Dung dịch muối đệm photphat (PBS, pH=7,4, Gibco, US) được mua dưới dạng viên 5g.

được hòa tan trong 500mL nước cất và hấp khử trùng ở 121oC trong 1 giờ trước khi sử dụng.

6
Machine Translated by Google

Chuẩn bị mẫu titan

Các đĩa titan được mài bằng giấy cacbua silic và đánh bóng bằng keo silic.

Sau đó, các mẫu được làm sạch bằng dung môi bằng phương pháp siêu âm trong một loạt dung môi: toluene,

isopropanol, nước, etanol và axeton. Các mẫu được đánh bóng và làm sạch như mô tả được sử dụng làm

điều khiển (Ti). Trước khi phủ PEG bằng bất kỳ phương pháp nào trong ba phương pháp được đánh giá, các mẫu được

plasma được kích hoạt trong plasma áp suất thấp. Chi tiết về điều trị huyết tương có thể được tìm thấy

nơi khác42. Tóm lại, xử lý huyết tương bằng argon trong 5 phút ở công suất 100W và ở 0,40mbar đã được thực hiện

với hệ thống plasma áp suất thấp tần số vô tuyến (13,56 MHz) (Hệ thống Plasma Femto, Điện,

Nước Đức).

Quy trình phủ

Quá trình trùng hợp huyết tương được thực hiện ngay sau khi kích hoạt huyết tương trong cùng lò phản ứng mà không cần

phá vỡ chân không. Tiền chất trùng hợp là tetra(ethylene glycol) dimetyl ete

được đưa vào bằng cách sục khí argon trong lò phản ứng và các thông số được sử dụng là 100W, 0,40mbar và

1h, theo công việc trước đó42. Quá trình được thực hiện ở chế độ xung với tấn=20µs

và toff=20ms (sơ đồ 1a).

Để điều chế PEG silan hóa, dung dịch 0,98% PEG (Mw=1000g/mol) trong khan

toluene (99,8%) được trộn với 136µL trimethylamine trong 1 giờ trong môi trường trơ.

Sau thời gian này, 20µL silicon tetrachloride được thêm vào và để phản ứng trong 5 phút. Giải pháp này

được lọc và các mẫu hoạt hóa trong huyết tương được ngâm trong dung dịch này trong 2 giờ (Sơ đồ

1b).

Quá trình lắng đọng điện được thực hiện trong một tế bào điện phân với mẫu được kích hoạt bằng plasma làm chất

cực âm, một điện cực so sánh calomel bão hòa và một điện cực đối lập bằng bạch kim, được nối với một

7
Machine Translated by Google

chiết áp (Nghiên cứu ứng dụng Princeton, Parstat 2273). Thủ tục này là một sự thích nghi của

Tanaka và cộng sự49. Chất điện phân là dung dịch nước chứa 2% trọng lượng bis(3-

aminopropyl)-poly(ethylene glycol) (PEG-amine) và 0,3M NaCl. Hiệu điện thế 5V là

áp dụng cho hệ thống trong thời gian 5 phút (Sơ đồ 1c).

Sơ đồ 1. Sơ đồ phản ứng sản xuất tetraglyme polyme hóa huyết tương (a), silan hóa PEG (b)
và lắng đọng điện hóa PEG-amine (c)

Cố định peptide

Peptide RGD được điều chế bằng phương pháp tổng hợp peptide pha rắn và có đặc điểm như đã giải thích

trong các nghiên cứu trước đây54. Để hấp phụ vật lý các mẫu được phủ RGD, Ti và PEG được ngâm

qua đêm ở nhiệt độ phòng trong dung dịch 100µM peptide trong dung dịch muối đệm phốt phát.

Sau khi ngâm, mẫu được làm sạch hai lần bằng PBS.

Bản tóm tắt các mã mẫu được sử dụng trong nghiên cứu này được trình bày trong bảng 1.

số 8
Machine Translated by Google

Bảng 1. Mã mẫu được sử dụng trong nghiên cứu này. Đánh bóng, làm sạch bằng dung môi và kích hoạt plasma được

thực hiện cho tất cả các mẫu

Xử lý mẫu Mã mẫu

Điều khiển Ti

Kích hoạt huyết tương Ti-PA

PEG polyme hóa huyết tương Ti-PEG-PP

PEG silan hóa Ti-PEG-S

PEG-amine lắng đọng điện Ti-PEG-E

Kiểm soát+RGD Ti-RGD

PEG+RGD polyme hóa huyết tương Ti-PEG-PP-RGD

PEG+RGD được Silan hóa Ti-PEG-S-RGD

PEG-amine + RGD Ti-PEG-E-RGD được lắng đọng điện

Đặc tính bề mặt

Góc tiếp xúc tĩnh với nước được đo bằng phương pháp không cuống với nước siêu tinh khiết (MilliQ,

Millipore Corporation), với máy đo góc OCA15 (Công ty thiết bị dữ liệu vật lý, Đức).

Một giọt 2µL được đặt ở tốc độ 1µL/s. Hình dạng của giọt nước được phân tích bằng phần mềm

SCA20 (Công ty thiết bị dữ liệu vật lý, Đức). Ba khu vực của mỗi mẫu được

được đo ba lần cho mỗi điều kiện.

Phân tích hóa học được thực hiện bằng phương pháp quang phổ quang điện tử tia X (XPS). quang phổ

được thu trong chân không cực cao (5,0·10-9 mbar) với nguồn cực dương XR50 Mg hoạt động ở

150 W và máy dò Phoibos 150 MCD-9 (D8 Advance, SPECS Surface Nano Analysis GmbH,

Nước Đức). Phổ được ghi ở mức năng lượng truyền qua 25 eV với kích thước bước 1,0 eV để khảo sát

phổ và 0,1 eV cho phổ có độ phân giải cao của C1s, O1s, Si2p, Cl2p, N1s và Ti2p. đỉnh C1

đã được sử dụng làm tài liệu tham khảo. Phần mềm CasaXPS (Casa Software Ldt, UK) đã được sử dụng cho
9
Machine Translated by Google

xác định thành phần nguyên tố nguyên tử áp dụng bộ công thức tương đối của nhà sản xuất

yếu tố nhạy cảm Hai mẫu cho mỗi điều kiện đã được phân tích.

Độ dày màng được ước tính bằng sự suy giảm tín hiệu titan XPS theo

0
phương trình 1, trong đó là cường độ Ti2p từ bề mặt sạch (Ti-PA), là cường độ

của Ti2p từ chất nền phủ PEG, là độ dài suy giảm electron đối với các đỉnh Ti và θ là

góc cất cánh cho phép đo XPS.

= 0
Phương trình 1
kinh nghiệm � �

63
Độ dài suy giảm điện tử được giả định là 2,8Å theo Ruiz-Taylor et al. và lấy-

góc lệch là 90° cho tất cả các phép đo.

Đánh giá sinh học

Khả năng hấp phụ protein trên bề mặt titan được kiểm tra bằng cách ngâm mẫu trong huyết thanh bò

albumin (BSA, Sigma Aldrich). BSA được nhuộm bằng fluorescein isothiocyanate (FITC, Thermo

Scientific, Hoa Kỳ) với Bộ dán nhãn kháng thể Kit Pierce (Thermo Scientific). Sự nhuộm màu

được thực hiện bằng cách hòa tan BSA trong dung dịch đệm photphat-borat, trộn với dung dịch FITC và

được tinh chế trong nhựa để loại bỏ FITC không phản ứng. Sau đó mẫu được ngâm trong 150 µL dung dịch

FITC-BSA ở nồng độ 100µg/mL trong 1 giờ ở nơi tối. Tiếp theo, protein được

cố định bằng paraformaldehyde (Sigma Aldrich) ở mức 2,5% v/v trong PBS. Sau mỗi bước mẫu được

rửa bằng PBS. Các lá kính đậy được gắn trên các mẫu ở Mowiol (Merck Millipore

Corporation, Bedford, MA, USA) phương tiện lắp đặt. Mẫu được chụp bằng máy ảnh Nikon

Kính hiển vi huỳnh quang E-600 và máy ảnh Olympus DP72 (Nikon Corporation Instruments

10
Machine Translated by Google

Công ty, Mỹ). Để đánh giá khả năng hấp phụ protein, bốn hình ảnh được chụp cho mỗi mẫu và

cường độ điểm ảnh được tính toán bằng phần mềm Image-J (NIH, MD, USA).

Tác dụng gây độc tế bào tiềm ẩn của lớp phủ được đánh giá theo tiêu chuẩn ISO 10993-5 trên

nguyên bào sợi bao quy đầu của con người (hFFs, Merck Millipore Corporation) sử dụng ba mẫu cho mỗi nguyên bào sợi

tình trạng. Tất cả các mẫu được khử trùng bằng cách ngâm trong ethanol 70% trong 30 phút. Chiết xuất của

các mẫu ở nồng độ 1:1, 1:10, 1:100 và 1:1000 được chuẩn bị bằng cách ngâm

các mẫu trong Môi trường Đại bàng Sửa đổi của Dulbecco (DMEM, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) cho

72h ở 37oC. 5000 tế bào/giếng được gieo vào đĩa polystyrene nuôi cấy mô 96 giếng (TCPS)

và ủ với môi trường trong 24 giờ. Sau đó, môi trường nuôi cấy được thay thế bằng dịch chiết

pha loãng. Sau 24 giờ, tế bào được ly giải bằng thuốc thử chiết xuất protein động vật có vú (mPER,

Thermo Scientific, USA) và định lượng bằng hoạt tính enzyme lactate dehydrogenase (LDH)

với bộ phát hiện độc tính tế bào LDH (Roche, USA).

Các thử nghiệm về độ bám dính của tế bào đã được thực hiện với hFF. Mẫu được khử trùng bằng etanol và làm sạch

hai lần với PBS. 2·104 tế bào trên mỗi mẫu được gieo vào mẫu và ủ trong 6 giờ ở

37°C trong DMEM. Sau thời gian ủ, mẫu được rửa hai lần bằng PBS và tế bào

phần còn lại gắn vào mẫu được ly giải bằng mPER. Số lượng tế bào bám dính là

được đánh giá bằng cách định lượng hoạt động của LDH. Để quan sát các tế bào bằng cách quét

kính hiển vi điện tử (SEM, Focused Ion Beam Zeiss Neon40), các mẫu có tế bào được kết dính

được cố định trong dung dịch paraformaldehyde 2,5% trong PBS trong 1 giờ ở 4oC. Sự mất nước của

mẫu được thực hiện bằng cách ngâm trong dãy dung dịch etanol ở nồng độ 50, 70, 90, 96 và 100%

(v/v) trong 15 phút cho mỗi dung dịch. Sau khi khử nước, các mẫu được phủ carbon để chụp SEM

11
Machine Translated by Google

quan sát. Ảnh SEM được chụp ở điện áp 5,0kV. Ba lần cho mỗi điều kiện đã được sử dụng cho

định lượng và một mẫu bổ sung được chuẩn bị để quan sát SEM.

Thử nghiệm độ bám dính của vi khuẩn được thực hiện với hai chủng vi khuẩn: Streptococcus sanguinis (S.

sanguinis, CCUG 17826, Đại học sưu tầm văn hóa Göteborg (CUG), Göteborg, Thụy Điển)

và Lactobacillus Salvaryrius (L.salvary, CECT 4063, Colección Española de Cultivos Tipo

(CECT), Valencia, Tây Ban Nha). Nước canh Todd-Hewitt (TH) (Sharlab SL, Tây Ban Nha) được sử dụng làm môi trường nuôi cấy

môi trường nuôi cấy S. sanguinis và canh Man, Rogosa và Sharpe (MRS) (Sharlab SL)

môi trường cho L. Salivarius. Các mẫu cấy được nuôi qua đêm trước mỗi lần xét nghiệm và phương pháp quang học

mật độ ở 600nm được điều chỉnh ở mức 0,2 ± 0,01, tạo ra khoảng 1·108 đơn vị hình thành khuẩn lạc

mỗi mL (CFU/mL). Các mẫu được ngâm trong 1mL huyền phù vi khuẩn trong 2 giờ ở

37oC. Để tách vi khuẩn ra khỏi mẫu, 5 phút xoáy được áp dụng trong 1mL dung dịch.

PBS. Các độ pha loãng nối tiếp của PBS được gieo vào các đĩa thạch trung bình và được ủ trong 24-48 giờ ở

37°C để đếm CFU bám trên mẫu.

Phân tích thống kê

Kết quả được trình bày dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn (SD), cho ít nhất ba lần độc lập

mẫu. Phân tích thống kê được thực hiện bằng phần mềm Minitab 17TM (Minitab Inc, State

Cao đẳng, PA, Hoa Kỳ). Dữ liệu được phân tích bằng bảng ANOVA t-test và một chiều của Sinh viên với

Nhiều thử nghiệm so sánh của Tukey để đánh giá các giá trị ngoại lệ và có ý nghĩa thống kê

sự khác biệt giữa các nhóm mẫu tương ứng. Sự khác biệt được coi là thống kê

có ý nghĩa khi p<0,05.

12
Machine Translated by Google

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Việc áp dụng lớp phủ PEG trên một số thiết bị y tế nhằm mục đích giảm vi khuẩn.

bám dính nhằm giảm tỷ lệ nhiễm trùng liên quan đến cấy ghép. Trong trường hợp nha khoa

và các ứng dụng chỉnh hình, độ bám dính của tế bào phải được duy trì để đạt được độ thích hợp

sự tích hợp và ổn định của mô cấy. Trong nghiên cứu này, ba phương pháp khác nhau để

sự lắng đọng PEG trên bề mặt titan đã được đặc trưng và so sánh về mặt

hiệu suất sinh học và vi sinh trong ống nghiệm của chúng .

Bước đầu tiên để phủ các mẫu titan là kích hoạt bề mặt. Huyết tương

kích hoạt là một quy trình nổi tiếng để làm sạch và kích hoạt kim loại, polyme và

gốm sứ64. Trong nghiên cứu này, bề mặt titan được kích hoạt để loại bỏ các chất hữu cơ

làm ô nhiễm bề mặt và tăng chức năng của oxit titan bằng cách ghép

nhóm hydroxyl phản ứng trên bề mặt titan. Theo góc tiếp xúc với nước (Hình

1), cách xử lý này cho thấy tính ưa nước cao. Khả năng thấm ướt được tăng cường là do sự kết hợp

hiệu quả của việc loại bỏ các chất gây ô nhiễm và sự hình thành các loại hydroxyl65,66, được xác nhận bởi

lượng carbon giảm được tìm thấy bởi XPS (bảng 2).

Các mẫu đối chứng cho thấy đặc tính kỵ nước nhất. Lớp phủ PEG tạo ra tính chất ưa nước

bề mặt, có thể quan sát bằng cách so sánh góc tiếp xúc với nước của bề mặt được phủ PEG

với điều khiển đó. Tất cả các mẫu được phủ PEG đều có tính ưa nước hơn đáng kể, với

quá trình plasma (Ti-PEG-PP) dẫn đến độ thấm ướt cao nhất (θ≈10°). PEG silan hóa (Ti-PEG-

S) và PEG mạ điện (Ti-PEG-E) có tính ưa nước gần như nhau

(khoảng 50°). Các giá trị thấp hơn cho góc tiếp xúc của mẫu polyme hóa plasma có thể được

được giải thích bằng sự hình thành các chức năng oxy trong polyme do quá trình plasma 67,

13
Machine Translated by Google

và cấu trúc khác nhau của lớp giống PEG thu được, có thể được liên kết chéo nhiều hơn và với

chuỗi ngắn hơn PEG thu được từ các quy trình khác, như thể hiện trong Sơ đồ 1. Nước

góc tiếp xúc của lớp phủ PEG đã được báo cáo là nằm trong khoảng 15-60° tùy thuộc vào

chất nền, phương pháp lắng đọng và tính chất hóa học của vật liệu cố định

phân tử 1,68,69, do đó, độ ẩm đo được đối với titan được phủ PEG là biểu hiện của

sự có mặt của polyme.

Sự hấp phụ của peptide RGD trên bề mặt dẫn đến giảm sự tiếp xúc với nước

góc cho tất cả các mẫu ngoại trừ Ti-PEG-PP. Tuy nhiên, Ti-PEG-PP-RGD đã trình bày

góc tiếp xúc thấp hơn so với các mẫu còn lại có chứa RGD.

Hình 1. Góc tiếp xúc với nước của mẫu được phủ PEG theo ba phương pháp khác nhau và mẫu
PEG-RGD. Các mẫu có ký hiệu giống nhau thì không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05).

Sự hiện diện của một tỷ lệ phần trăm carbon nhất định được đo bằng XPS (bảng 2) cho thấy

sự hiện diện của lớp ô nhiễm hữu cơ trên bề mặt titan70,71. Lượng cacbon trên

bề mặt giảm khi áp dụng phương pháp xử lý plasma kích hoạt (Ti-PA) do bị loại bỏ

14
Machine Translated by Google

của các chất ô nhiễm hữu cơ. Ngược lại, sự gia tăng tín hiệu C1 có thể được quan sát thấy ở tất cả các PEG-

các mẫu được phủ so với Ti-PA, cho thấy sự hiện diện của lớp polymer. Sau

cố định RGD, tỷ lệ này còn tăng thêm do sự lắng đọng của

peptit. Những thay đổi trong tín hiệu Ti2p theo xu hướng ngược lại: sự hiện diện của PEG và

Lớp phủ RGD làm giảm lượng Ti có thể phát hiện được bằng XPS. Sự định vị điện của amino-PEG

trên các bề mặt (Ti-PEG-E) cũng đi kèm với sự gia tăng đáng kể tín hiệu N1.

Ngoài ra, việc kết hợp PEG bằng quá trình silan hóa (Ti-PEG-S) mang lại hiệu quả đáng kể.

tỷ lệ phần trăm Si2p và Cl2p có trong silicon tetrachloride. Sự hấp phụ của RGD trên titan

bề mặt thể hiện sự gia tăng trên %C 1s và %N 1s (Bảng 1), cho thấy sự hiện diện của

peptit.

Bảng 2. Thành phần nguyên tử% của Titan với các phương pháp xử lý PEGylation và hấp phụ RGD
khác nhau.

C1 O1 N1 si2p Cl2p Ti2p

Ti 23,5 ± 0,8 59,6 ± 0,8 0,6 ± 0,1 0,2 ± 0,0 0,1 ± 0,1 16,0 ± 0,1

Ti-PA 15,0 ± 0,7 62,1 ± 0,7 0,3 ± 0,1 0,3 ± 0,0 0,0 ± 0,1 22,3 ± 0,1

Ti-PEG-PP 21,8 ± 1,0 64,0 ± 0,6 0,2 ± 0,1 0,3 ± 0,0 0,1 ± 0,1 12,0 ± 0,6

Ti-PEG-S 17,7 ± 0,5 57,7 ± 0,8 0,3 ± 0,0 10,9 ± 1,2 1,8 ± 0,0 13,4 ± 0,9

Ti-PEG-E 27,1 ± 1,2 55,0 ± 0,7 1,3 ± 0,2 2,7 ± 1,1 0,4 ± 0,3 13,5 ± 0,1

Ti-PEG-PP-RGD 37,5 ± 2,1 51,5 ± 1,4 0,6 ± 0,0 0,2 ± 0,0 0,2 ± 0,0 10,1 ± 0,7

Ti-PEG-S-RGD 25,8 ± 1,8 58,9 ± 1,0 0,4 ± 0,1 5,2 ± 0,6 1,7 ± 0,3 8,0 ± 0,5

Ti-PEG-ER-RGD 30,1 ± 1,6 54,4 ± 1,0 1,0 ± 0,0 2,4 ± 0,5 2,0 ± 0,2 10,2 ± 0,8

15
Machine Translated by Google

Sự phân hủy pic C1s của các mẫu phủ PEG cho thấy pic ở 286,5eV,

được cho là do sự hiện diện của đặc tính liên kết CO (ether) của PEG (Bảng 3) xác nhận tính chất

hình thành lớp phủ PEG trong tất cả các mẫu được phủ PEG. Các đỉnh khác được tìm thấy ở 285,0eV

và 287,0eV có thể là do sự có mặt của liên kết CC (hydrocarbon) và C=O (carbonyl

nhóm), tương ứng. Ti-PEG-PP thể hiện đỉnh bổ sung ở 288eV tương ứng với

sự hiện diện của OC=O (nhóm carboxyl), có thể là do sự phân ly và hình thành các nhóm mới

các loại trong lò phản ứng plasma hoặc khắc polyme lắng đọng bằng argon được sử dụng làm chất mang

khí và phản ứng tiếp theo với không khí sau khi xử lý 72,73, như được chỉ ra trong Sơ đồ 1. Sự hiện diện của Ti-

PEG-E cũng được hỗ trợ bằng việc phát hiện lượng nitơ cao hơn trên vật liệu được xử lý

bề mặt, do sự hiện diện của các nhóm amino ở đầu cuối của đầu tận cùng amino

CỌC. Đối với Ti-PEG-S, lượng silicon và clo cao hơn là do sử dụng silicon

tetrachloride được sử dụng để silan hóa PEG (Sơ đồ 1).

Về tín hiệu oxy (Bảng 3), hai đỉnh khác nhau đã được tìm thấy. Đỉnh ở 532,0eV

tương ứng với sự kết hợp của bề mặt oxit titan và sự hiện diện của hydroxyl

các nhóm, trong khi đỉnh ở 533,4eV có thể được quy cho các liên kết ether từ PEG. Đối với Ti-

PEG-S, đỉnh này cũng có thể là do sự có mặt của nhóm silanol và siloxane.

16
Machine Translated by Google

Bảng 3. Đóng góp của các pic trên phổ XPS của C1 và O1

C1 O1

Năng lượng liên kết (eV) 285,0 286,5 288,0 288,8 532.0 533,4

Ti-PEG-PP 15,9 ± 0,5 54,4 ± 1,2 17,6 ± 0,7 11,9 ± 1,1 49,6 ± 0,9 50,4 ± 0,8

Ti-PEG-S 44,5 ± 0,9 46,9 ± 0,7 8,5 ± 0,8 - 45,1 ± 0,7 54,9 ± 0,4

Ti-PEG-E 38,8 ± 1,1 39,9 ± 0,9 22,1 ± 0,5 - 40,4 ± 0,8 59,6 ± 0,5

Lớp phủ được coi là đồng nhất theo ảnh SEM (không hiển thị). độ dày

của các lớp phủ được ước tính bởi XPS cho thấy sự hiện diện của lớp phủ siêu mỏng, với các giá trị

1,4nm đối với Ti-PEG-PP và Ti-PEG-E và giá trị 1,8nm đối với Ti-PEG-S. Vì vậy, các lớp rất mỏng

thu được bằng bất kỳ kỹ thuật nào. Các kết quả này phù hợp với độ dày thu được

bởi Papra et al 74, và Tanaka et al 49. Cả hai tác giả đều đưa ra các giá trị độ dày trong khoảng 1-2nm cho

PEG silan hóa và PEG điện cực tương ứng.

Mặc dù độ dày của các lớp thấp, sự hấp phụ albumin trên các mẫu được phủ PEG

thấp hơn so với titan trần, thể hiện đặc tính chống hà của lớp phủ

(Hình 2). Không thấy sự khác biệt về cường độ huỳnh quang của FITC-BSA

giữa các mẫu. Đo cường độ huỳnh quang của protein được dán nhãn FITC là một

phương pháp đã được thiết lập để xác định khả năng hấp phụ protein trên các chất nền khác nhau, như

cường độ huỳnh quang có thể được coi là tỷ lệ thuận với sự hiện diện của protein75,76. Vì thế,

ba phương pháp này là đủ để mang lại đặc tính chống hà tương tự cho bề mặt titan.

17
Machine Translated by Google

Hình 2. Hình ảnh kính hiển vi huỳnh quang (trái) của các mẫu có hấp phụ BSA-FITC a) Ti, b) Ti-

PEG-PP, c) Ti-PEG-S, d) Ti-PEG-E. Thanh tỷ lệ đại diện cho 50µm. Định lượng bằng phân tích hình ảnh (phải).

Các mẫu có ký hiệu giống nhau thì không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.

Các thử nghiệm độc tế bào gián tiếp cho thấy không có tác dụng độc hại đối với dung dịch rửa giải của cả hai loại được phủ PEG và

Các mẫu được phủ RGD, vì khả năng sống sót của các tế bào khi tiếp xúc với các dung dịch rửa giải này đều trên 80%

độ pha loãng được thử nghiệm (dữ liệu không được hiển thị).

Sự kết dính tế bào của nguyên bào sợi ở người bị suy giảm do sự hiện diện của lớp phủ PEG trong trường hợp này

của Ti-PEG-PP và Ti-PEG-S. Tuy nhiên, trong khi độ bám dính tế bào của Ti-PEG-E có xu hướng giảm thì

sự khác biệt không khác biệt về mặt thống kê so với đối chứng (Hình 3). Sự bám dính của nguyên bào sợi là

được tăng cường với sự hiện diện của RGD mà không tìm thấy sự khác biệt thống kê trong

phương pháp lắng đọng, tăng cường khả năng tương thích sinh học của lớp phủ. Hình thái tế bào

18
Machine Translated by Google

được quan sát bởi SEM không thay đổi khi có cả PEG và PEG với RGD, với các tế bào

lan rộng trên bề mặt.

Hình 3. Số lượng tế bào có trên các mẫu (phải). Hình ảnh SEM đại diện của người được tôn trọng

tế bào. a) Ti, b) Ti-PEG-S, c) Ti-PEG-S-RGD. Thanh tỷ lệ đại diện cho 50µm. Các mẫu có cùng ký hiệu

không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05).

Xét về ứng dụng nha khoa, hai chủng vi khuẩn đường miệng đã được thử nghiệm. Xét nghiệm bám dính vi khuẩn

với S. sanguinis (Hình 4a) và L. Salivarius (Hình 4b) cho thấy sự giảm đáng kể

(p<0,05) về số lượng vi khuẩn bám trên tất cả các mẫu được phủ PEG đối với đối chứng

bề mặt titan. Khả năng bám dính của vi khuẩn S. sanguinis và L.salvarius (Hình 4) cũng cho thấy

giảm so với titan trần, như được quan sát thấy ở các công trình khác có chất chống gỉ

lớp phủ50,77,78. Các phương pháp khác nhau được sử dụng để thu được lớp phủ PEG không cho thấy

khác biệt có ý nghĩa thống kê nên tất cả các kỹ thuật đều phù hợp để ngăn chặn vi khuẩn

độ bám dính. Tuy nhiên, Ti-PEG-S có xu hướng bám dính vi khuẩn thấp hơn đối với hai chủng được thử nghiệm.

19
Machine Translated by Google

Độ bám dính của vi khuẩn của cả hai chủng không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của RGD (Hình 4).

quan sát thấy trong các nghiên cứu trước đây đối với các chủng vi khuẩn khác 62.

Răng implant được đặt trong môi trường ô nhiễm tự nhiên, nơi có vi khuẩn xâm nhập

năng lực với các tế bào chủ như nguyên bào sợi để xâm chiếm bề mặt. Tình trạng này đã

được mô tả bởi Gristina79, và nó thường được gọi là “cuộc đua trên bề mặt”. Điều này có nghĩa rằng

sự tích hợp thích hợp của bộ phận cấy ghép phụ thuộc vào khả năng giảm thiểu bề mặt

sự bám dính của vi khuẩn và/hoặc tối đa hóa sự bám dính của tế bào. Để kiểm tra tình trạng này trong ống nghiệm , Zhao et al.80

đã phát triển một thí nghiệm đồng nuôi cấy trong đó một chủng vi khuẩn được phép xâm chiếm bề mặt,

và sau một thời gian nhất định, các nguyên bào sợi sẽ được gieo vào mẫu. Xét nghiệm này nhằm

tái tạo chặt chẽ hơn tình trạng lâm sàng. Vì ba phương pháp so sánh được hiển thị

kết quả in vitro có thể so sánh được đối với các thí nghiệm nuôi cấy đơn, nghiên cứu đồng nuôi cấy chỉ được thực hiện

đối với Ti-PEG-E (xem Hình S1 và S2 trong Tài liệu bổ sung), đây là phương pháp nhanh và tiết kiệm

phương pháp thân thiện, được thực hiện trong dung dịch nước. Sự bám dính và lan rộng của hFFs trong

sự hiện diện của vi khuẩn cao hơn đối với các mẫu được phủ PEG (Ti-PEG-E) so với đối chứng

mẫu (Ti), cho thấy lớp phủ PEG có thể chịu được sự bám dính của vi khuẩn trong khi

cho phép xâm chiếm tế bào. Kết quả này phù hợp với các thí nghiệm nuôi cấy đơn.

20
Machine Translated by Google

Hình 4. Độ bám dính của vi khuẩn trên mẫu. a) S. sanguinis, b) L.salvius. Các mẫu giống nhau

ký hiệu không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05).

Các kỹ thuật khác nhau được nghiên cứu đều có những ưu điểm và nhược điểm cần được xem xét

trong việc lựa chọn cái phù hợp nhất cho một ứng dụng cụ thể. Ví dụ,

silanization có xu hướng làm giảm độ bám dính của vi khuẩn nhiều hơn, đạt giá trị giảm 70%

so với điều khiển. Thật vậy, có thể xử lý nhiều mẫu cùng một lúc vì

nồng độ PEG silanized cao. Tuy nhiên, để silanize, dung môi hữu cơ (toluene)

cần sử dụng và hút chân không, điều này làm cho quá trình này tốn kém hơn và ít thân thiện với môi trường
hơn.
Machine Translated by Google

thân thiện. Định vị bằng điện là một quá trình nhanh chóng diễn ra bằng cách sử dụng nước làm dung môi, ở

áp suất khí quyển và nhiệt độ phòng. Nó tạo ra một bề mặt làm giảm vi khuẩn

độ bám dính lên tới 65% so với đối chứng, trong khi độ bám dính của tế bào hầu như không bị ảnh hưởng. Cuối cùng,

trùng hợp plasma là một kỹ thuật không có dung môi. Xử lý nhiều mẫu cùng lúc

thời gian là có thể. Đây là một kỹ thuật áp suất thấp, giúp tăng cường độ tinh khiết của chất giống PEG

lớp áo. Các mẫu polyme hóa trong huyết tương cho thấy độ bám dính của vi khuẩn giảm 60% và

độ bám dính của tế bào cũng bị suy giảm ở mức độ tương tự. Khi tính đến tính linh hoạt này,

Việc lựa chọn phương pháp này hay phương pháp khác phải dựa trên các tham số thực tế hơn, chẳng hạn như

ứng dụng cuối cùng hoặc các chi tiết của quá trình sản xuất.

KẾT LUẬN

Ba lớp phủ PEG khác nhau đã thu được trên bề mặt titan bằng các phương pháp khác nhau:

trùng hợp plasma, lắng đọng điện và silan hóa. Thành phần hóa học của lớp phủ

và khả năng thấm ướt được cải thiện tương ứng với sự hiện diện của polyme PEG trên bề mặt. Các

lớp phủ có đặc tính chống bám bẩn chống lại BSA và làm giảm đáng kể sự xâm nhập của vi khuẩn

khả năng bám dính của S. sanguinis và L.salaryrius. Sự kết dính của tế bào bị suy giảm do chất chống bám bẩn

Đặc tính của lớp phủ PEG được cải thiện bằng cách cố định động cơ kết dính tế bào

RGD, đồng thời duy trì tác dụng lên độ bám dính của vi khuẩn. Ba phương pháp lắng đọng trong

điều kiện nghiên cứu không có sự khác biệt lớn về hiệu suất sinh học,

chứng minh rằng các phương pháp này là một lựa chọn tốt để chuẩn bị lớp phủ PEG trên

titan.

22
Machine Translated by Google

SỰ NHÌN NHẬN

Các tác giả ghi nhận sự hỗ trợ tài chính của Đại học Kỹ thuật Catalonia và Fundación

Ramón Areces thông qua sự hợp tác của JB-P. Hỗ trợ tài chính cho dự án được thừa nhận

tới Fundación Ramón Areces thông qua dự án “Biosellado”, Chính phủ Tây Ban Nha thông qua

Học bổng Ramon y Cajal của CC và CM-M, và dự án MAT2015-67183-R, được đồng tài trợ bởi

EU thông qua Quỹ phát triển khu vực châu Âu và Hợp tác khoa học châu Âu

và Công nghệ, hành động CHI PHÍ MP1101. Các tác giả cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới

Montserrat Domínguez vì những nhận xét và lời khuyên hữu ích của cô về phân tích XPS.

CÁC TỪ VIẾT TẮT

Polyetylen glycol, PEG; Axit Arginine-Glycine-Aspartic, RGD; Nước muối đệm photphat

(PBS); Fluoresceine Isothiocyanate, FITC; Albumin huyết thanh bò, BSA; bao quy đầu của con người

Nguyên bào sợi, hFF; Nuôi cấy mô Polystyrene, TCPS; thuốc thử chiết xuất protein động vật có vú,

mPER; Lactate Dehydrogenase, LDH; Phương tiện đại bàng sửa đổi của Dulbecco, DMEM; thuộc địa

Đơn vị hình thành, CFU; Nước dùng Todd Hewitt, TH; Nước dùng Man, Rogosa và Sharpe, MRS.

23
Machine Translated by Google

NGƯỜI GIỚI THIỆU

(1) Ito, Y.; Hasuda, H.; Sakuragi, M.; Tsuzuki, S. Biến đổi bề mặt của nhựa, thủy tinh và titan bằng phương pháp quang

hóa cố định Polyethylene Glycol để chống bám bẩn sinh học. Chất sinh học Acta. 2007, 3 (6), 1024–
1032.

(2) Dalsin, JL; Lâm, L.; Tosatti, S.; Vörös, J.; Textor, M.; Messersmith, Khả năng kháng protein PB của bề mặt oxit titan

được biến đổi bằng mPEG-DOPA lấy cảm hứng từ sinh học. Langmuir 2005, 21

(2), 640–
646.

(3) Groll, J.; Fiedler, J.; Engelhard, E.; Ameringer, T.; Tugulu, S.; Klok, H.-A.; Brenner, RE; Moeller, M. Lớp phủ bề

mặt có nguồn gốc từ PEG của Ngôi sao mới để bám dính các tế bào cụ thể. J. Sinh học.

Mẹ ơi. Res. A 2005, 74 (4), 607–

617.

(4) Nisol, B.; Oldenhove, G.; Con mồi, N.; Monteyne, D.; Moser, M.; Perez-Morga, D.; Reniers, F.

Lớp phủ PEG tổng hợp plasma khí quyển: Vật liệu sinh học không gây ô nhiễm cho thấy lực đẩy protein và tế bào. Lướt

sóng. Công nghệ sơn phủ. 2014, 252, 126–133.

(5) Hansson, KM; Tosatti, S.; Isaksson, J.; Wetterö, J.; Textor, M.; Lindahl, TL; Tengvall, P.

Đông máu toàn phần trên bề mặt PEG kháng hấp phụ protein và bề mặt titan phủ PEG có chức năng peptide. Vật liệu

sinh học 2005, 26 (8), 861–872.

(6) Harris, LG; Tosatti, S.; Wieland, M.; Textor, M.; Richards, RG Staphylococcus Aureus Độ bám dính trên bề mặt oxit

titan được phủ bằng chất đồng trùng hợp poly(L-Lysine)-Grafted-Poly(ethylene Glycol) không chức năng hóa và peptide.

Vật liệu sinh học 2004, 25

(18), 4135–
4148.

(7) Tăng, G.; Ogaki, R.; Meyer, RL Chất kết dính vi khuẩn không chứa protein thách thức đặc tính chống bám bẩn của lớp

phủ chổi polyme. Chất sinh học Acta. 2015, 24, 64–
73.

(số 8) Saldarriaga Fernández, IC; Busscher, HJ; Metzger, SW; Grainger, DW; van der Mei, HC

Sự kết dính cạnh tranh phụ thuộc vào thời gian và mật độ của Staphylococci và các nguyên bào xương trên lớp phủ

polymer dựa trên Poly(ethylene Glycol) liên kết ngang trong buồng dòng chảy đồng nuôi cấy.

Vật liệu sinh học 2011, 32 (4), 979–

984.

(9) Alcantar, NA; Aydil, ES; Israelachvili, JN Các bề mặt tương thích sinh học được phủ Polyethylene Glycol. J. Sinh

học. Mẹ ơi. Res. 2000, 51 (3), 343–

351.

(10) Công viên, KD; Kim, YS; Hàn, ĐK; Kim, YH; Lee, EHB; Su, H.; Choi, KS Độ bám dính vi khuẩn trên bề mặt Polyurethane biến

tính PEG. Vật liệu sinh học 1998, 19 (7–

9), 851–859.

(11) Hickok, NJ; Shapiro, Thuốc kháng sinh cố định IM để ngăn ngừa nhiễm trùng bộ cấy ghép chỉnh hình.

Khuyến cáo. Thuốc cung cấp. Rev. 2012, 64 (12), 1165–1176.

(12) Mã, Y.; Chen, M.; Jones, JE; Ritts, AC; Yu, Q.; Sun, H. Ức chế màng sinh học Staphylococcus Epidermidis bằng lớp phủ

plasma Trimethylsilane. Kháng khuẩn. Đặc vụ Chemother. 2012, 56

(11), 5923–
5937.

(13) Harding, JL; Reynolds, MM Chống bám bẩn thiết bị y tế. Xu hướng công nghệ sinh học. 2014, 32

(3), 140–
146.

24
Machine Translated by Google

(14) Vương, F.; Anderson, M.; Bernards, MT; Hunt, HK PEG Chức năng hóa của Cảm biến sinh học Bộ cộng hưởng vi mô
quang học Chế độ thư viện thì thầm để giảm thiểu sự hấp phụ không cụ thể trong quá trình cảm biến mục tiêu,
không có nhãn. Cảm biến (Basel). 2015, 15 (8), 18040–
18060.

(15) Mặt trời, C.; Miêu, J.; Yên, J.; Dương, K.; Mao, C.; Ju, J.; Shen, J. Các ứng dụng của lớp phủ PEG kháng
sinh trong cảm biến sinh học điện hóa để xác định Glucose trong máu toàn phần.
Điện cực. Acta 2013, 89, 549–
554.

(16) Chen, X.; Su, Y.; Thần, F.; Wan, Y. Màng siêu lọc chống hà được làm từ chất đồng trùng hợp PAN-B-PEG: Ảnh
hưởng của thành phần chất đồng trùng hợp và chiều dài chuỗi PEG. J. Thành viên. Khoa học. 2011, 384 (1–2),
44–51.

(17) Vương, P.; Tân, KLL; Kang, ETT; Neoh, KGG cố định huyết tương của Poly(ethylene Glycol) lên màng vi mô
Poly(vinylidene Fluoride). J. Thành viên. Khoa học.
2001, 195 (1), 103–
114.

(18) Zou, L.; Vidalis, tôi.; Steele, D.; Michelmore, a.; Thấp, SP; Verberk, JQJC Cải thiện tính ưa nước bề mặt của
màng RO bằng phản ứng trùng hợp huyết tương để giảm thiểu ô nhiễm hữu cơ.
J. Thành viên. Khoa học. 2011, 369 (1–2), 420–428.

(19) Steinemann, SG Titanium--Vật liệu được lựa chọn? Nha chu. 2000 1998, 17, 7–
21.

(20) Oshida, Y. Khoa học sinh học và kỹ thuật sinh học vật liệu titan; Elsevier, 2007.

(21) Aparicio, C.; Javier Gil, F.; Fonseca, C.; Barbosa, M.; Planell, JA Hành vi ăn mòn của hạt titan nguyên chất
thương mại được thổi bằng các vật liệu và kích cỡ hạt bắn khác nhau cho các ứng dụng cấy ghép nha khoa.
Vật liệu sinh học 2003, 24 (2), 263–
273.

(22) Pye, THÊM; Lockhart, DEAEA; Dawson, MPP; Murray, CAA; Smith, AJJ Đánh giá về cấy ghép nha khoa và nhiễm trùng.
J. Hosp. Lây nhiễm. 2009, 72 (2), 104–
110.

(23) Salvagni, E.; Berguig, G.; Engel, E.; Rodriguez-Cabello, JC; Coullerez, G.; Textor, M.; Planell, JA; Gil, FJ;
Aparicio, C. Một chất tái tổ hợp giống như Elastin có hoạt tính sinh học làm giảm sự hấp phụ protein không
đặc hiệu và tăng cường phản ứng của tế bào trên bề mặt Titan. Chất keo lướt. B. Giao diện sinh học
2014, 114, 225–
233.

(24) Watnick, P.; Kolter, R. Biofilm, Thành phố vi khuẩn. J. Vi khuẩn. 2000, 182 (10), 2675–
2679.

(25) Parsek, MR; Singh, Màng sinh học vi khuẩn PK: Mối liên hệ mới nổi với sinh bệnh học. Annu.
Mục sư Vi sinh. 2003, 57, 677–
701.

(26) Lee, A.; Vương, H.-L. Màng sinh học liên quan đến cấy ghép nha khoa. Răng cấy ghép. 2010, 19 (5), 387–
393.

(27) Kolenbrander, PE; Andersen, RN; Moore, Sự kết tụ nội sinh LVH giữa các chủng vi khuẩn đường miệng ở người:
Vai trò tiềm năng trong quá trình xâm chiếm sơ cấp trên bề mặt răng. ứng dụng.
Môi trường. Vi sinh vật. 1990, 56 (12), 3890–
3894.

(28) Godoy-Gallardo, M.; Mas-Moruno, C.; Fernández-Calderón, MC; Pérez-Giraldo, C.; Manero, J.
M.; Albericio, F.; Gil, FJ; Rodríguez, D. Sự cố định cộng hóa trị của peptide hLf1-11 trên bề mặt Titan làm
giảm sự bám dính của vi khuẩn và hình thành màng sinh học. Chất sinh học Acta. 2014, 10
(8), 3522–3534.

25
Machine Translated by Google

(29) Hori, K.; Matsumoto, S. Độ bám dính của vi khuẩn: Từ cơ chế đến kiểm soát. Hóa sinh. Anh. J. 2010,
48 (3), 424–434.

(30) Kolenbrander, PE; London, J. Tuân thủ hôm nay, ở đây ngày mai: Sự tuân thủ của vi khuẩn đường miệng. J.
Vi khuẩn. 1993, 175 (11), 3247–
3252.

(31) Mayanagi, G.; Sato, T.; Shimauchi, H.; Takahashi, N. Microflora Lập hồ sơ mảng bám dưới nướu và trên nướu của các
đối tượng khỏe mạnh và viêm nha chu bằng PCR lồng nhau. Int. Xin chúc mừng. Ser. 2005, 1284, 195–196.

(32) Phạm, LC; van Spanning, RJM; Röling, WFM; Thịnh vượng, AC; Terefework, Z.; Mười Cate, JM; Crielaard, W.; Zaura, E.
Tác dụng của Probiotic Lactobacillus Salivarius W24 đối với sự ổn định thành phần của cộng đồng vi khuẩn đường

miệng. Vòm. Biol uống. 2009, 54 (2), 132–137.

(33) Khó hơn, P.; Grunze, M.; Dahint, R.; Người da trắng, GM; Laibinis, Cấu trúc phân tử PE trong lớp đơn lớp tự lắp ráp
Oligo(ethylene Glycol) trên bề mặt vàng và bạc xác định khả năng chống lại sự hấp phụ protein của chúng. J. Vật

lý. Chem. B 1998, 102 (2), 426–436.

(34) Hoàng, Y.-WW; Gupta, VK Ảnh hưởng của dòng polyme và độ dài chuỗi đến sự hấp phụ của Poly (Ethylene Oxide) trên các

bề mặt không đồng nhất về mặt vật lý. Langmuir 2002, 18 (6), 2280–
2287.

(35) Thủ tướng, KL; Whiteside, GM Hấp phụ protein lên các bề mặt có chứa Oligo(ethylene Oxide) gắn đầu cuối: Một hệ thống

mẫu sử dụng các lớp đơn lớp tự lắp ráp. Mứt. Chem. Sóc.
1993, 115 (23), 10714–10721.

(36) Rabe, M.; Verdes, D.; Seeger, S. Tìm hiểu hiện tượng hấp phụ protein ở bề mặt rắn.

Khuyến cáo. Khoa học giao diện keo. 2011, 162 (1–2), 87–106.

(37) Ostuni, E.; Chapman, RG; Holmlin, RE; Takayama, S.; Whitesides, GM Khảo sát về mối quan hệ cấu trúc-tính chất của các

bề mặt chống lại sự hấp phụ protein. Langmuir

2001, 17 (18), 5605–
5620.

(38) Beyer, D.; Knoll, W.; Ringsdorf, H.; Vương, JH; Timmons, RB; Sluka, P. Giảm sự hấp phụ protein trên nhựa thông qua

sự lắng đọng trực tiếp trong huyết tương của Triethylene Glycol Monoallyl Ether. J.
Sinh học. Mẹ ơi. Res. 1997, 36 (2), 181–
189.

(39) Bretagnol, F.; Lejeune, M.; Papadopoulou-Bouraoui, A.; Hasiwa, M.; Rauscher, H.; Ceccone, G.; Colpo, P.; Rossi, F. Bề
mặt bám bẩn và không bám bẩn được tạo ra bằng quá trình trùng hợp huyết tương của monome Ethylene Oxide. Chất
sinh học Acta. 2006, 2 (2), 165–172.

(40) Labay, C.; Kênh đào, JM; Modic, M.; Cvelbar, U.; Quiles, M.; Armengol, M.; Arbos, MA; Gil, F.
J.; Canal, C. Lưới phẫu thuật bằng polypropylen chứa kháng sinh với hành vi sinh học phù hợp bằng chức năng hóa

và trùng hợp huyết tương. Vật liệu sinh học 2015, 71, 132–144.

(41) Denes, AR; Somers, EB; Vương, A. CL; Denes, F. 12-Crown-4-Ether và Tri(Ethylene Glycol) Dimethyl-Ether Bề mặt thép
không gỉ được phủ plasma và khả năng làm giảm sự lắng đọng màng sinh học vi khuẩn của chúng. J. Ứng dụng. Polym.

Khoa học. 2001, 81, 3425–

3438.

(42) Buxadera-Palomero, J.; Kênh, C.; Torrent-Camarero, S.; Garrido, B.; Javier Gil, F.; Rodríguez, D.

Lớp phủ chống hà cho cấy ghép nha khoa: Lớp phủ giống như Polyethylene Glycol trên Titanium bằng phản ứng trùng
hợp huyết tương. Giai đoạn sinh học 2015, 10 (2), 29505.

26
Machine Translated by Google

(43) Drevet, R.; Velard, F.; Potiron, S.; Laurent-Maquin, D.; Benhayoune, H. Nghiên cứu về độ hòa tan và ăn mòn trong ống
nghiệm của lớp phủ canxi photphat được xây dựng bằng dòng điện định vị xung trên chất nền Ti6Al4V. J. Mater. Khoa
học. Mẹ ơi. Med. 2011, 22 (4), 753–
761.

(44) Fukuhara, Y.; Kyuzo, M.; Tsutsumi, Y.; Nagai, A.; Chen, P.; Hanawa, T. Phospholipid Polymer được mạ điện trên Titan
ức chế sự kết dính của tiểu cầu. J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. B. Ứng dụng.
Sinh vật học. 2015.

(45) Godoy-Gallardo, M.; Rodríguez-Hernández, AG; Delgado, LM; Manero, JM; Javier Gil, F.; Rodríguez, D. Sự lắng đọng bạc
trên bề mặt Titan bằng quá trình Anodizing điện hóa làm giảm độ bám dính của vi khuẩn của Streptococcus Sanguinis
và Lactobacillus Salivarius. Phòng khám. Cấy ghép răng miệng Res. 2014, 0, 1–10.

(46) Trương, F.; Gu, S.; Đinh, Y.; Trương, Z.; Li, L. Một cảm biến mới dựa trên quá trình trùng hợp điện hóa của β-
Cyclodextrin và L-Arginine trên điện cực dán cacbon để xác định Fluoroquinolones.
Hậu môn. Chim. Acta 2013, 770, 53–61.

(47) Vương, J.; Lý, B.; Lý, Z.; Ren, K.; Jin, L.; Trương, S.; Thường, H.; Mặt trời, Y.; Ji, J.
Điện trùng hợp Dopamine để biến đổi bề mặt của Stent tim mạch có hình dạng phức tạp. Vật liệu sinh học 2014, 35
(27), 7679–7689.

(48) Saxer, S.; Portmann, C.; Tosatti, S.; Gademann, K.; Zürcher, S.; Textor, M. Lắp ráp bề mặt của chất đồng trùng hợp
Catechol-Functionalized Poly(L -Lysine)- Graft -Poly(ethylene Glycol) trên Titan Khai thác kết hợp khả năng tự tổ
chức tĩnh điện và bám dính sinh học mạnh. Đại phân tử 2010, 43 (2), 1050–
1060.

(49) Tanaka, Y.; Đồi, H.; Iwasaki, Y.; Hiromoto, S.; Yoneyama, T.; Asami, K.; Imai, H.; Hanawa, T.
Định vị điện của Poly(ethylene Glycol) kết thúc bằng amin trên bề mặt Titan. Mẹ ơi. Khoa học.
Anh. C 2007, 27 (2), 206–
212.

(50) Tanaka, Y.; Matin, K.; Gyo, M.; Okada, A.; Tsutsumi, Y.; Đồi, H.; Nomura, N.; Tagami, J.; Hanawa, T. Ảnh hưởng của
Poly(ethylene Glycol) lắng đọng điện đến sự kết dính của màng sinh học với Titan.
J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. A 2010, 95 (4), 1105–
1113.

(51) Trương, M.; Desai, T.; Ferrari, M. Protein và tế bào trên bề mặt silicon cố định PEG.
Vật liệu sinh học 1998, 19 (10), 953–
960.

(52) Kocijan, A.; Conradi, M.; Mandrino, D.; Kosec, T. So sánh và mô tả đặc tính của lớp phủ polymer tương thích sinh
học trên thép không gỉ AISI 316L. J. Công nghệ sơn phủ. Res. 2015, 12 (6), 1123–
1131.

(53) Tóc nâu, DM; Tengvall, P.; Textor, M.; Thomsen, P. Titanium trong y học; Kỹ thuật
Nguyên vật liệu; Springer Berlin Heidelberg: Berlin, Heidelberg, 2001.

(54) Mas-Moruno, C.; Fraioli, R.; Albericio, F.; Manero, JM; Gil, Nền tảng dựa trên peptide mới của FJ để trình bày kép
các họa tiết peptide hoạt tính sinh học trên vật liệu sinh học. Ứng dụng ACS Mẹ ơi.
Giao diện 2014, 6 (9), 6525–6536.

(55) Mas-Moruno, C.; Dorfner, Thủ tướng; Manzenrieder, F.; Neubauer, S.; Đoàn tụ, U.; Burgkart, R.; Kessler, H. Hành vi
của các nguyên bào xương sơ cấp ở người trên các bề mặt Ti6Al4V được cắt tỉa và thổi cát được chức năng hóa
bằng các peptide RGD tuần hoàn chọn lọc αvβ3-Integrin. J. Sinh học. Mẹ ơi.

27
Machine Translated by Google

Res. A 2013, 101 (1), 87–97.

(56) Tosatti, S.; Paul, SM; Askendal, A.; VandeVondele, S.; Hubbell, JA; Tengvall, P.; Textor, M. Peptide có chức
năng Poly(l-Lysine)-G-Poly(ethylene Glycol) trên Titanium: Khả năng chống lại sự hấp phụ protein trong huyết
tương người đã được heparin hóa hoàn toàn. Vật liệu sinh học 2003, 24 (27), 4949–
4958.

(57) Hersel, U.; Dahmen, C.; Kessler, H. Các polyme biến đổi RGD: Vật liệu sinh học để kích thích sự kết dính của tế
bào và hơn thế nữa. Vật liệu sinh học 2003, 24 (24), 4385–
4415.

(58) Pierschbacher, MD; Ruoslahti, E. Hoạt động gắn kết tế bào của Fibronectin có thể được nhân đôi bởi các mảnh
tổng hợp nhỏ của phân tử. Thiên nhiên 1984, 309 (5963), 30–33.

(59) Ruoslahti, E.; Pierschbacher, MD Những quan điểm mới về độ bám dính của tế bào: RGD và Integrins.
Khoa học (80-. ). 1987, 238 (4826), 491–
497.

(60) Muszanska, AK; Rochford, ETJ; Gruszka, A.; Bastian, AA; Busscher, HJ; Norde, W.; van der Mei, HC; Herrmann, A.
Lớp phủ bàn chải polymer chống dính được chức năng hóa với các peptide kháng khuẩn và RGD để giảm sự hình
thành màng sinh học và tăng cường tích hợp mô.
Các đại phân tử sinh học 2014, 15 (6), 2019–2026.

(61) Tosatti, S.; Schwartz, Z.; Campbell, C.; Cochran, DL; VandeVondele, S.; Hubbell, JA; Denzer, A.; Simpson, J.;
Wieland, M.; Lohmann, CH; Textor, M.; Boyan, BD RGD chứa Peptide GCRGYGRGDDSPG làm giảm sự tăng cường sự
khác biệt hóa nguyên bào xương bằng các bề mặt Titan được phủ poly(L-Lysine)-Graft-Poly(ethylene Glycol).
J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. A 2004, 68 (3), 458–
472.

(62) Maddikeri, RR; Tosatti, S.; Schuler, M.; Chessari, S.; Textor, M.; Richards, RG; Harris, LG
Giảm độ bám dính của các chủng vi khuẩn liên quan đến nhiễm trùng y tế trên bề mặt Titan biến tính RGD có

hoạt tính sinh học: Bước đầu tiên hướng tới các bề mặt chọn lọc tế bào. J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. A 2008, 84
(2), 425–
435.

(63) Ruiz-Taylor, LA; Martin, TL; Wagner, P. Nghiên cứu quang phổ quang điện tử và phép đo phóng xạ tia X của các
đơn lớp Poly(L -Lysine)-Grafted-Poly(ethylene Glycol) trên oxit kim loại. Langmuir 2001, 17 (23), 7313–
7322.

(64) Chu, P. .; Chen, J. .; Vương, L. .; Huang, N. Biến đổi bề mặt plasma của vật liệu sinh học. Mẹ ơi.
Khoa học. Anh. R Báo cáo 2002, 36 (5–
6), 143–206.

(65) Aronsson, BO; Lausmaa, J.; Kasemo, B. Phương pháp xử lý plasma phóng điện Glow để làm sạch bề mặt và biến đổi
vật liệu sinh học kim loại. J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. 1997, 35 (1), 49–73.

(66) Kasemo, B.; Lausmaa, J. Vật liệu sinh học và bề mặt cấy ghép: Về vai trò của quy trình làm sạch, nhiễm bẩn và
chuẩn bị. J. Sinh học. Mẹ ơi. Res. 1988, 22 (S13), 145–158.

(67) Johnston, EE; Bryers, JD; Ratner, Sự lắng đọng huyết tương BD và đặc tính bề mặt của màng không bám bẩn
Oligoglyme, Dioxane và Crown Ether. Langmuir 2005, 21 (19), 870–881.

(68) Sharma, S.; Johnson, RW; Phân tích Desai, TA XPS và AFM về giao diện PEG chống hà
cho các cảm biến sinh học silicon được chế tạo vi mô. Biosen. Điện tử sinh học. 2004, 20 (2), 227–239.

28
Machine Translated by Google

(69) Ungureanu, C.; Pirvu, C.; Mindroiu, M.; Demetscu, I. Lớp phủ polyme kháng khuẩn dựa trên Polypyrrole và
Polyethylene Glycol trên hợp kim TiAlZr mới. Ăn xin. Tổ chức Lớp phủ 2012, 75 (4), 349–355.

(70) Michelmore, A.; Gross-Kosche, P.; Al-Bataineh, SA; Whittle, JD; Ngắn, RD Về ảnh hưởng của hóa học monome
đến cơ chế tăng trưởng của các polyme huyết tương giống PEG không bám bẩn.
Langmuir 2013, 29 (8), 2595–
2601.

(71) Lý, Y.; Muir, BW; Easton, CD; Thomsen, L.; Nisbet, DR; Forsythe, JS Nghiên cứu về sự phát triển màng ban
đầu của màng polymer plasma giống PEG thông qua XPS và NEXAFS. ứng dụng. Lướt sóng. Khoa học.
2014, 288, 288–
294.

(72) Palumbo, F.; Favia, P.; Vulpio, M.; d'Agostino, R. Sự lắng đọng plasma RF của màng giống PEO:
Chẩn đoán và kiểm soát quá trình. Polyme plasma. 6 (3), 163–174.

(73) Manso, M.; Valsesia, A.; Lejeune, M.; Gilliland, D.; Ceccone, G.; Rossi, F. Điều chỉnh các đặc tính bề
mặt của polyme y sinh bằng cách cấy các ion Ar và He. Chất sinh học Acta. 2005, 1 (4), 431–440.

(74) Alexander Papra, Nikolaj Gadegaard, A.; Larsen, NB; Papra, A.; Gadegaard, N.; Larsen, NB
Đặc tính của lớp đơn lớp Ultrathin Poly (ethylene Glycol) trên nền silicon. Langmuir
2001, 17 (5), 1457–1460.

(75) Yoshikawa, C.; Goto, A.; Tsujii, Y.; Fukuda, T.; Kimura, T.; Yamamoto, K.; Kishida, A. Khả năng chống
thấm protein của cọ Poly(2-Hydroxyethyl Methacrylate) đậm đặc, được xác định rõ nhờ hiệu ứng loại trừ
kích thước. Đại phân tử 2006, 39 (6), 2284–
2290.

(76) Molena, E.; Tín dụng, C.; De Marco, C.; Levi, M.; Turri, S.; Simeone, G. Chất chống hà Protein và
Phát hành bám bẩn trên bề mặt Perfluoropolyether. ứng dụng. Lướt sóng. Khoa học. 2014, 309, 160–167.

(77) Kingshott, P.; Ngụy, J.; Bagge-Ravn, D.; Gadegaard, N.; Gram, L. Sự gắn kết cộng hóa trị của Poly(ethylene
Glycol) với các bề mặt, rất quan trọng để giảm sự bám dính của vi khuẩn. Langmuir 2003, 19
(17), 6912–
6921.

(78) Saldarriaga Fernández, IC; van der Mei, HC; Lochhead, MJ; Grainger, DW; Buscher, H.
J. Sự ức chế sự bám dính của các chủng vi khuẩn phân lập trên lâm sàng trên lớp phủ polyme dựa trên
poly(ethylene Glycol) liên kết ngang đa thành phần. Vật liệu sinh học 2007, 28 (28), 4105–
4112.

(79) Gristina, G. Nhiễm trùng tập trung vào vật liệu sinh học: Sự bám dính của vi khuẩn so với sự tích hợp mô.
Khoa học 1987, 237 (4822), 1588–
1595.

(80) Triệu, B.; van der Mei, HC; Subbiahdoss, G.; de Vries, J.; Rustema-Abbing, M.; Kuijer, R.; Busscher, HJ;
Ren, Y. Tích hợp mô mềm so với sự hình thành màng sinh học sớm trên các vật liệu cấy ghép nha khoa
khác nhau. Sứt mẻ. Mẹ ơi. 2014, 30 (7), 716–727.

29
Machine Translated by Google

Tài liệu bổ sung: Đánh giá

vật liệu trong đồng nuôi cấy vi khuẩn và tế bào

Judit Buxadera-Palomero1,2, Cristina Calvo1,2, Sergi Torrent-Camarero1,2, F. Javier

Gil1,† , Carlos Mas-Moruno1,2, Kênh Cristina1,2, Daniel Rodríguez1,2,*

1
Nhóm Vật liệu sinh học, Cơ sinh học và Kỹ thuật mô, Khoa Vật liệu

Khoa học và Luyện kim, Escola d'Enganyeria Barcelona Est, Đại học Kỹ thuật

Catalonia (UPC), C/ Eduard Maristany 10-14, 08019 Barcelona, Tây Ban Nha

2
Trung tâm Nghiên cứu Kỹ thuật Nano (CRNE) – UPC, C/Pascual i Vila 15, 08028

Barcelona, Tây Ban Nha

Địa chỉ hiện tại

† Đại học Quốc tế Catalunya (UIC), C/ Immaculada 22, Barcelona 08017, Tây Ban Nha
Machine Translated by Google

Đúng như dự đoán, thí nghiệm đồng nuôi cấy cho thấy sự giảm độ bám dính của tế bào trong

sự hiện diện của vi khuẩn (Hình I). Đối với bề mặt Ti trơn, độ che phủ bề mặt giảm đi nhiều,

đạt giá trị khoảng 25% so với bề mặt Ti không có vi khuẩn. Hơn nữa, tế bào

độ lan rộng thấp hơn nhiều (Hình II a, b, c), chứng tỏ tế bào không có khả năng xâm chiếm

bề mặt khi vi khuẩn có mặt. Kết quả này cũng được tìm thấy trong một nghiên cứu trước đây sử dụng S.

sanguinis và L. Salirius3 . Ngược lại, đối với bề mặt Ti-PEG-E độ che phủ bề mặt gấp đôi

kết quả quan sát được đối với Ti, do đặc tính chống hà của lớp phủ PEG. Tế bào

độ lan truyền cao hơn so với mẫu đối chứng (Hình II d, e, f). Đây là

cho thấy hiệu suất tốt hơn của Ti-PEG-E để tạo điều kiện cho sự bám dính của tế bào trong khi

ngăn cản sự bám dính của vi khuẩn.

80%

70%

60%

50%

40% S. vàng
%

30% E coli

20%

10%

0%
Ti Ti-PEG-E

Hình S1. Định lượng diện tích được bao phủ bởi hFFS trên các bề mặt được phủ vi khuẩn so với
cùng điều kiện không có vi khuẩn (được sử dụng làm đối chứng với độ phủ bề mặt 100%)
Machine Translated by Google

Hình S2. Hình ảnh đại diện của các bề mặt được thử nghiệm trong các thí nghiệm đồng nuôi cấy. (a) Ti
+ hFFs, (b) Ti + S.aureus + hFFs, (c) Ti + E.coli + hFFs, (d) Ti-PEG-E + hFFs, (e) Ti-PEG-E + S .aureus
+ hFFs, (f) Ti-PEG-E + E. coli + hFFs

Thực nghiệm

Thí nghiệm đồng nuôi cấy tế bào-vi khuẩn là sự chuyển thể từ 2,3. Staphylococcus aureus

CCUG 15915 (Đại học Bộ sưu tập Văn hóa Göteborg (CCUG), Göteborg, Thụy Điển) và

Escherichia coli CECT 101 (Colección Española de Cultivos Tipo, Valencia, Tây Ban Nha) đã được sử dụng

như mô hình vi khuẩn. Đối với các thí nghiệm đồng nuôi cấy, huyền phù S.aureus hoặc E. coli

được điều chỉnh đến mật độ quang học 0,2 in BHI, cho kết quả khoảng 1·108 tế bào/ml. 5µl

(5·105 tế bào/mẫu) huyền phù vi khuẩn được gieo vào mỗi mẫu. Sau 2h ở 37oC,

mẫu được rửa ba lần để loại bỏ vi khuẩn không bám dính và hFF trong

DMEM cải tiến (DMEM với 2% BHI) ở mức 2·104 tế bào/mẫu được gieo hạt và ủ trong

24h. Sau thời gian ủ, tất cả các mẫu được rửa 2 lần bằng PBS, cố định và nhuộm màu.

với Phalloidin-Rhodamin (Invitrogen) và DAPI (Invitrogen) để quan sát. Hình ảnh đã được

chụp bằng kính hiển vi đồng tiêu Leica TCS SPE và được phân tích bằng phần mềm Image J. Năm

hình ảnh được chụp cho từng mẫu để định lượng, sử dụng các bản sao cho từng điều kiện.

(1) Gristina, một bệnh nhiễm trùng tập trung vào vật liệu sinh học của G.: Sự bám dính của vi khuẩn so với mô
Machine Translated by Google

Hội nhập. Khoa học 1987, 237 (4822), 1588–1595.

(2) Triệu, B.; van der Mei, HC; Subbiahdoss, G.; de Vries, J.; Rustema-Abbing, M.;
Kuijer, R.; Busscher, HJ; Ren, Y. Tích hợp mô mềm so với sự hình thành màng sinh
học sớm trên các vật liệu cấy ghép nha khoa khác nhau. Sứt mẻ. Mẹ ơi. 2014, 30 (7), 716–
727.

(3) Godoy-Gallardo, M.; Guillem-Marti, J.; Sevilla, P.; Manero, JM; Gil, FJ; Rodriguez, D.
Silane chức năng anhydride cố định trên bề mặt Titan gây ra sự biệt hóa tế bào nguyên bào
xương và làm giảm sự bám dính của vi khuẩn và hình thành màng sinh học. Mẹ ơi. Khoa học.

Anh. C. Mẹ. Biol. ứng dụng. 2016, 59, 524–532.