‫وزارة التعليم العالي والبحث العلمي‬

‫جامعة كربالء‬

‫كلية العلوم ‪ /‬قسم علوم الحياة‬

‫تحديد التحويرات الوراثية في الفاكهة المستوردة ودراسة‬

‫تاثير هذه التحويرات على فترات الخزن‬
‫رسالة‬
‫مقدمة إلىمجلس كلية العلوم ‪ -‬جامعة كربالء‬
‫وهي جزء من متطلبات نيل درجة الماجستير علوم في علوم الحياة‬

‫الطالـب‬
‫باسم عبد الواحد جاسور سعدون‬
‫بكالوريوس علوم حياة جامعة كربالء – ‪2006‬‬

‫بأشــــــــــــــــــــراف‬

‫أ‪.‬د‪ .‬مهند محسن احمد العتبي‬ ‫أ‪.‬م‪.‬د‪ .‬خالد علي حسين اليساري‬

‫‪ 2021‬م‬ ‫‪ 1442‬هـ‬

‫العنوان ‪ :‬كلية الطب ‪/‬‬

 ‫يم‬
‫الر ِح ِ‬ ‫س ِم اللَّـ ِه َّ‬
‫الر ْح َم ٰـ ِن َّ‬ ‫ِب ْ‬
‫الزبَد فَيَ ْذ َهب جفَاء ۖ َوأَ َّما َما‬
‫﴿فَأ َ َّما َّ‬
‫ض﴾‬ ‫يَنفَع النَّاس ََفَ َي ْمكث ِفي ْاْلَ ْر ِ‬

‫صدق هللا العلي العظيم‬

‫سورة الرعد‬
‫االية ‪17:‬‬
 ‫شكر وتقدير‬
‫ال يسعني وأنا أضع اللمسات األخيرة لهذه الدراسة إال أن أتقدم بالشكر الجزيل‬
‫إلى أ ستاذي المشرفين الكريمين‪ :‬األ أستاذ المساعدالدكتور خالد علي حسين ‪ ,‬واأل أستاذ‬
‫الدكتورمهند محسننن احمدثمالاال للوفا ‪ ,‬معيارا للانن ا ‪ ,‬الزالد على العبا با منا‬
‫والعنا ) ‪ ,‬وليس غريبا في شننننكري لذسننننتاذ المسنننناعد الدكتور خالد علي حسننننين لما‬
‫شجعني وح زني إلتمام مسيرتي العلمية فجزاه هللا عني خير الجزا ‪.‬‬

‫كما ال ي وتني في هذا المقام إالأنأتقدم بخالص شكري وتقديري الى رلا سة ق سم‬
‫علوم الحياة وعمادة كلية العلوم إلتاحتها ال أرصة لي إلاكمال دراستي ‪.‬‬

‫وآعترافا مني بالجميل أتقدم بالشكر إلى عاللتي لابرهم وتحملهم إياي طيلة فترة‬
‫الدراسة والبحث وللدعم المادي والمعنوي الذي قدموه الي ‪.‬‬

‫و أخيرا بالغ تقديري لكل من ساعدني و أعانني في انجا هذه الرسالة وبالخاوص‬
‫االستاذ الدكتور حيدر علي محمد كلية البب البيبري – جامعة كربا ‪ ،‬فلهم في‬
‫كر أهم ‪ ،‬فهم أهل لل ضل والخير والشكر ‪.‬‬
‫ف المقام ذ أ‬
‫الن س منزلة و إن لم يأسع أ‬

‫باسم‬
 ‫الخالصة‬
‫تنتج معظم االغذية في الوقت الحالي بآستخدام تقنيات الهندسة الوراثية او ما يعرف بتقنية الجين ‪ ,‬وهو‬
‫ا أسلوب يأستخدم في نقل الجينات من كالن حي الى اخر‪ ,‬بهدف اعبا سمات او خاالص مرغوبة وان اغلب‬
‫عمليات نقل الجينات تتم باورة عشوالية وسط المادة الوراثية مما يولد أمخاوف في عدم قدرة الـ ‪ DNA‬في‬
‫التحكم في العمليات االيضية على المدى البعيد ‪.‬‬

‫تعد تقنية ت اعل سلسلة البوليميريزث‪ )PCR‬للتحري عن الكالنات المعدلة وراثيا ‪ GMO‬الخيار األكالر‬
‫موثوقية نظرا لحساسيتها العالية وخاوصيتها‪ .‬وهي مستخدمة في اكالر دول العالم‪.‬‬

‫جمعت ‪ 91‬عينة لكل من حبوب فول الاويا ومشتقاتها الالانوية وكذلك حبوب الر ‪ ,‬التي تم الحاول عليها‬
‫خال فترة الدراسة الحالية التي بدأت من شهر كانون االول ‪ 2019‬ولغاية شهر اذار ‪ , 2020‬تم عزل الـ‬
‫‪ DNA‬من العزالت النباتية الجافة ثفول الاويا ومشتقاتها الالانوية وحبوب الر ) لذصناف المعتمدة في‬
‫الدراسة باستعمال خبوات بروتوكول مجهزة ‪ ،‬وهذه العدة توفر طريقة سريعة وسهلة للحاول على ‪DNA‬‬
‫نقي من العزالت النباتية‪.‬‬

‫عند قياس الكالافة الضولية )‪ )OD‬للحامض النووي لجميع العزالت أوجد أن معظم قيم النقاوة تقع بين ث‪1.7‬‬
‫– ‪. )2.0‬‬

‫خال الدراسة الحالية تم آستخدام تقنية ت اعل سلسلة البوليميريز للتحري عن البادلات الشالعة االستخدام‬
‫في التحويرات الوراثية في النباتات وهي كل من البادي ‪ CaMV-35S promoter‬و المنهي ‪Nos‬‬
‫‪ ، terminator‬وقد استخدم اسلوبين جزيئيين للتحري عن المحاصيل المعدلة وراثي المحاول وكما موضح‬
‫كاالتي‪ :‬االسلوب االول هو التحري باستخدام سلسلة ت اعل البوليميريز الـ‪ ،PCR Monoplex‬األسلوب الالاني‬
‫هي الكشف باستخدام سلسلة ت اعل البوليميريزالالنالي ‪.douplex PCR‬‬

‫أظهرت النتالج الحالية ان ثاثة تراكيب وراثية من أصل سبعة عشر تركيبا وراثيا والعالدة لكسبة فول‬
‫الاويا كانت محورة وراثيا اذ احتوت على الح ا والمنهي في ن س العينة ‪ ,‬والعينات المحورة وراثيا هي‬
‫كسبة فول الاويا المستوردة االمريكية ‪ ،Healthy Fead No.1‬و كسبة فول الاويا المستوردة البرا يلية‬
‫‪ ،Healthy Fead No.2‬كسبة فول الاويا المستوردة االرجنتينية‪ Healthy Feed No.3‬وتم اكتشاف‬
 ‫التحوير الوراثي باستخدام كا ت اعلي سلسلة البوليميريز االعتيادي ‪ MonoplexPCR‬وسلسلة ت اعل‬
‫البوليميريزالالنالي ‪.douplex PCR‬‬

‫حيث تم تسجيل الح ا الخاص بالبادئ ‪CaMV-35S promoter‬ناتج ‪ 195‬وجا قاعديا في ثاث تراكيب‬
‫وراثية والعالدة ألعاف فول الاويا المعدلة وراثيا ‪ ,‬وكذلك سجل الح ا الخاص بالمنهي ‪Nos terminator‬‬
‫ناتج ‪ 118‬وج قاعدي في ثاث تراكيب وراثية والعالدة لكسبة فول الاويا المعدلة وراثيا ‪ ,‬تم تقدير األو ان‬
‫الجزيئية للحزمة المتضاع ة على مواقع الحزم ذات االو ان الجزلية المعروفة للدليل الحجمي ث‪DNA-‬‬
‫‪. )Marker‬‬

‫تمت مقارنة نتالج هذه الدراسة مع الدراسات السابقة اذ تبين ان الحزمة المتضاع ة تنحار بين الحجمين‬
‫‪ 200-100‬وج قاعدي وتم تأكيد ذلك من خال العاقة بين الو ن الجزيئي لحزم الدليل الحجمي وبين المسافة‬
‫التي تحركتها تلك الحزم المتضاع ة على هام االكارو ‪ ,‬بينما لم تسجل أي نتالج موجبة للبادلات النوعية‬
‫المتخااة لكل من البادي ‪ P35S-cf3‬والمنهي ‪ P35S-cf4‬لجميع عزالت محاول الر باستخدام سلسلة‬
‫ت اعل البوليميريزث‪. (PCR‬‬

‫تم ارسال عينة كسبة فول الاويا ث‪ ) S1‬االمريكية المعدلة وراثيا الى كوريا الجنوبية من اجل تاكيد‬
‫تسلسات القواعد النايتروجينية للحافز ‪ promoter‬والمنهي‪ terminator‬ومقارنته مع التسلسات المنشورة‬
‫في موقع المركز الوطني للتقانات اإلحيالية ‪ , NationalCenter for Biotechnology‬اوضحت نتالج‬
‫الدراسة الحالية بان هناك تبابق ‪ %100‬مع تسلسات القواعد النايتروجينة للدراسات المنشورة على موقع‬
‫المركز الوطني لمعلومات التقانات الحيوية ‪.NationalCenter for Biotechnology‬‬

‫تم دراسة المكونات الكيميالية لمحاصيل فول الاويا حيث بينت المقارنة بين المكونات الكيمالية للمحاصيل‬
‫الم عدلة وراثيا وغير المعدلة وراثيا وجود اختافات جوهرية في المكونات اذا ادت نسبة البروتينات والدهون‬
‫في النباتات المعدلة وراثيا عن النباتات غير المعدلة وراثيا وبالمقابل فان نسبة االلياف والمعادن ثالرماد) قد‬
‫قلت نسبتها في المعدلة وراثيا وهذه التغيرات قد يكون لها منافع اقتاادية الى ان اضرارها على صحة الحيوانات‬
‫وبالتالي االنسان غير واضحة وتحتاج الى دراسات معمقة‪.‬‬

‫تتلخص الدراسننة الحالية بأن أسننتخدام البرالق الجزيئة المختل ة مالل ت اعل سننلسننلة البوليميريز هي اداوات‬
‫قيمة وم يدة للكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا‪ ،‬الخبوة الرليسية للكشف عن نتالج المحاصيل المعدلة وراثيا‬
‫هي استخدام طريقة استخاص الحامض النووي المناسبة ومدى مالمتها للتحليل الاحق‪.‬‬
 ‫قالمة المحتويات‬
‫الا حة‬ ‫المحتويات‬ ‫التسلسل‬

‫‪1‬‬ ‫المقدمة‬

‫‪3‬‬ ‫استعراض المراجع‬ ‫‪1‬‬

‫‪3‬‬ ‫الهندسة الوراثية ووسالل التربية التقليدية‬ ‫‪1-1‬‬

‫‪3‬‬ ‫الكالنات المعدلة وراثيا‬ ‫‪2-1‬‬

‫‪4‬‬ ‫عناصر التحويل في التعديل الوراثي‬ ‫‪3-1‬‬

‫‪5‬‬ ‫المحاصيل المعدلة وراثيا‬ ‫‪4-1‬‬

‫‪6‬‬ ‫فول الاويا‬ ‫‪1‬‬

‫‪6‬‬ ‫الر الذهبي‬ ‫‪2‬‬

‫‪8‬‬ ‫اسواق المحاصيل المعدلة وراثيا‬ ‫‪5-1‬‬

‫‪8‬‬ ‫االمان الحيوي ووضع عامات على المحاصيل المعدلة وراثيا‬ ‫‪6-1‬‬

‫‪10‬‬ ‫طرق التعديل الوراثي للمحاصيل‬ ‫‪7-1‬‬

‫‪16‬‬ ‫الكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا‬ ‫‪8-1‬‬

‫‪17‬‬ ‫الكشف المعتمد على الـ‪DNA‬‬ ‫‪1-8-1‬‬

‫‪17‬‬ ‫ت اعل سلسلة البوليميريز‬ ‫‪1-1-8-1‬‬

‫‪18‬‬ ‫انوا نقل الجينات في النباتات المعدلة وراثيا‬ ‫‪9-1‬‬

‫‪18‬‬ ‫البادي والمنهي‬ ‫‪1-9-1‬‬

‫‪18‬‬ ‫البادي‬ ‫‪1-1-9-1‬‬

‫‪19‬‬ ‫المنهي‬ ‫‪2-1-9-1‬‬

‫‪i‬‬
‫‪19‬‬ ‫الجينات المعلمة‬ ‫‪2-9-1‬‬

‫‪19‬‬ ‫مخاطر ومنافع استخدام النباتات المعدلة وراثيا‬ ‫‪10-1‬‬

‫‪20‬‬ ‫المخاطر الناشئة عن استخدام النباتات المعدلة وراثيا‬ ‫‪1-10-1‬‬

‫‪20‬‬ ‫المخاطر الاحية‬ ‫‪1-1-10-1‬‬

‫‪20‬‬ ‫الحساسية والسمية‬ ‫‪1‬‬

‫‪21‬‬ ‫المخاطر البيئية‬ ‫‪2-1-10-1‬‬

‫‪22‬‬ ‫فوالد النباتات المعدلة وراثيا‬ ‫‪2-10-1‬‬

‫‪22‬‬ ‫مقاومة االفات‬ ‫‪1-2-10-1‬‬

‫‪23‬‬ ‫تحمل مبيدات األعشاب‬ ‫‪2-2-10-1‬‬

‫‪23‬‬ ‫مقاومة األمراض‬ ‫‪3-2-10-1‬‬

‫‪24‬‬ ‫ال والد الغذالية‬ ‫‪4-2-10-1‬‬

‫‪24‬‬ ‫اهمية دراسة المكونات الكيميالية لحبوب فول الاويا‬ ‫‪11-1‬‬

‫‪26‬‬ ‫المواد وطرالق العمل‬ ‫‪2‬‬

‫‪26‬‬ ‫المواد واالجهزة المستخدمة‬ ‫‪1-2‬‬

‫‪26‬‬ ‫االدوات والمعدات‬ ‫‪1-1-2‬‬

‫‪27‬‬ ‫المواد الكيميالية‬ ‫‪2-1-2‬‬

‫‪28‬‬ ‫العدد التشخياية‬ ‫‪3-1-2‬‬

‫‪28‬‬ ‫طرالق العمل‬ ‫‪2-2‬‬

‫‪ii‬‬
‫‪28‬‬ ‫جمع العينات النباتية‬ ‫‪1-2-2‬‬

‫‪35‬‬ ‫عزل الـ ‪ DNA‬من النماذج النباتية‬ ‫‪2-2-2‬‬

‫‪36‬‬ ‫قياس تركيز ونقاوة الــ ‪DNA‬‬ ‫‪3-2-2‬‬

‫‪36‬‬ ‫الترحيل الكهربالي لمستخلص الـ‪DNA‬‬ ‫‪4-2-2‬‬

‫‪36‬‬ ‫المحاليل المستخدمة في الترحيل الكهربالي‬ ‫‪1-4-2-2‬‬

‫‪36‬‬ ‫دارى )‪Tris- borate –EDTA buffer)TBE- 1X‬‬ ‫‪1‬‬

‫‪36‬‬ ‫محلول صبغة بروميد االثيديوم‬ ‫‪2‬‬

‫‪37‬‬ ‫الدليل الحجمي للـ ‪DNA‬‬ ‫‪3‬‬

‫‪37‬‬ ‫الترحيل الكهربالي على هام االكارو‬ ‫‪2-4-2-2‬‬

‫‪38‬‬ ‫ظروف ت اعل سلسلة ت اعل البوليميريز وتحليات حزم‬ ‫‪5-2-2‬‬

‫التضخيم‬
‫‪38‬‬ ‫البادلات‬ ‫‪1-5-2-2‬‬

‫‪38‬‬ ‫البادلات الخاصة ل ول الاويا‬ ‫‪1‬‬

‫‪39‬‬ ‫البادلات الخاصة لار‬ ‫‪2‬‬

‫‪40‬‬ ‫تحضير البادلاتاالصلية‬ ‫‪3‬‬

‫‪40‬‬ ‫ت اعل سلسلة البوليميريز االعتيادي‬ ‫‪2-5-2-2‬‬

‫‪40‬‬ ‫تحضير محاليل العمل اليومي الجرا ت اعات ‪PCR‬‬ ‫‪1‬‬

‫االعتيادي‬
‫‪41‬‬ ‫برنامج المدور الحراري لسلسلة ت اعل البوليميريز االعتيادي‬ ‫‪2‬‬
‫‪PCR‬‬
‫‪43‬‬ ‫ت اعل سلسلة البوليميريز الالنالي‬ ‫‪3-5-2-2‬‬

‫‪iii‬‬
‫‪43‬‬ ‫تحضير محاليل العمل اليومي الجرا ت اعات ‪ PCR‬الالنالي‬ ‫‪1‬‬

‫‪43‬‬ ‫برنامج التدوير الحراري لسلسلة ت اعل البوليميريز الالنالي‬ ‫‪2‬‬

‫‪44‬‬ ‫تحليل نتالج تسلسل الدنا‬ ‫‪6-2-2‬‬

‫‪44‬‬ ‫التحليل الكيميالي للعينات‬ ‫‪7-2-2‬‬

‫‪44‬‬ ‫التحليل االحاالي‬ ‫‪8-2-2‬‬

‫‪45‬‬ ‫النتالج والمناقشة‬ ‫‪3‬‬

‫‪45‬‬ ‫جمع عينات فول الاويا ومشتقاته‬ ‫‪1-3‬‬

‫‪45‬‬ ‫استخاص الـ ‪ DNA‬والتاكد من سامة الـ ‪DNA‬‬ ‫‪2-3‬‬

‫المستخلص من عينات فول الاويا لت اعل‪ PCR‬االعتيادي‬
‫‪45‬‬ ‫استخاص وتنقية الـ ‪ DNA‬لذنماط الوراثية لمحاول فول‬ ‫‪1-2-3‬‬
‫الاويا‬
‫‪46‬‬ ‫تقديرتركيز و نقاوة الـ ‪ DNA‬المستخلص لانماط الوراثية‬ ‫‪2-2-3‬‬
‫لمحاول فول الاويا وكسبة فول الاويا‬
‫‪48‬‬ ‫التحري عن المورثات المحتمل وجودها في عزالت فول‬ ‫‪3-3‬‬
‫الاويا‪:‬‬
‫‪48‬‬ ‫الكشف عن الجين المش ر ‪ CaMV-35S promoter‬و‬ ‫‪1-3-3‬‬
‫‪ nos-terminator‬في حبوب فول الاويا وكسبة فول‬
‫الاويا باستخدام تقنية سلسلة ت اعل البوليميريز االعتيادي‬
‫‪52‬‬ ‫التحري عن المورثات المحتمل وجودها في عزالت فول‬ ‫‪4-3‬‬
‫الاويا وكسبة الاويا باستخدام تقنية الـ ‪ PCR‬االعتيادي‬
‫‪ MonoPlex PCR‬والـ‪ PCR‬الالنالي ‪Duplex PCR‬‬
‫‪53‬‬ ‫جمع عينات الر‬ ‫‪5-3‬‬

‫‪54‬‬ ‫استخاص الـ ‪ DNA‬من عينات حبوب الر لت اعل‪PCR‬‬ ‫‪6-3‬‬

‫‪55‬‬ ‫التاكد من سامة الـ ‪ DNA‬المستخلص لت اعل ‪PCR‬‬ ‫‪7-3‬‬

‫لعينات محاول الر‬

‫‪iv‬‬
 ‫‪56‬‬ ‫تقديرتركيز و نقاوة الـ ‪ DNA‬المستخلص لانماط الوراثية‬ ‫‪1-7-3‬‬
‫لمحاول الر‬
‫‪61‬‬ ‫الكشف عن الجين المش ر البادي ‪ P35S‬والمنهي ‪ NOS‬في‬ ‫‪8-3‬‬
‫البر الوراثية للر باستخدام ت اعل سلسلة البوليميريز‬
‫‪66‬‬ ‫الكشــــــف عن تسلسل القواعــــــــــد النتروجينية‬ ‫‪9-3‬‬
‫لمـــــــــــورثة ‪P35S‬و ‪ HA-nos‬في مشتقات فول الاويا‬
‫‪71‬‬ ‫المكونات الكيميالية لل ول الاويا‬ ‫‪10-3‬‬

‫‪73‬‬ ‫االستنتاجات والتوصيات‬ ‫‪4‬‬

‫‪73‬‬ ‫االستنتاجات‬ ‫‪1-4‬‬

‫‪74‬‬ ‫التوصيات‬ ‫‪2-4‬‬

‫‪75‬‬ ‫المصادر‬

‫قائمة االشكال‬
‫الا حة‬ ‫عنوان الشكل‬ ‫رقم الشكل‬
‫‪1‬‬ ‫طريقة النقل المباشر بقاذفات الجينات لتعجيل سرعة‬ ‫‪1.1‬‬
‫الجسيمات الدقيقة الحاملة للجين المرغوب‬
‫‪46‬‬ ‫حزم الحمض النووي الجيني لتسعة طر وراثي من‬ ‫‪1.3‬‬
‫حبوب فول الاويا وكسبة الاويا باستخدام ‪ ٪1‬جل‬
‫أجارو عند ‪ 90‬فولت لمدة ساعة واحدة‬
‫‪49‬‬ ‫الترحيل الكهربالي لناتج الت اعل التضاع ي لسلسة الدنا‬ ‫‪2.3‬‬
‫بأستعمال البادلات ‪P-35S promoter‬لعينات فول‬
‫الاويا على هام االكارو بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد ‪75‬‬
‫و من ساعة‬
‫‪50‬‬ ‫الترحيل الكهربالي لناتج الت اعل التضاع ي لسلسة الدنا‬ ‫‪3.3‬‬
‫لعزالت فول الاويا بأستعمال ثاث بادلات نوعية ‪HA-‬‬

‫‪v‬‬
 ‫‪ nos118-terminator‬في هام االكارو بتركيز ‪%1‬‬
‫وفرق جهد ‪ 75‬و من ساعة‬
‫‪53‬‬ ‫الترحيل الكهربالي لناتج الت اعل التضاع ي لسلسة الدنا‬ ‫‪4.3‬‬
‫‪ duplex PCR‬لعزالت فول الاويا بأستعمال بادلات‬
‫نوعية ‪ P-35S promoter‬و المنهي ‪Nos‬‬
‫‪ terminator‬في هام االكارو بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد‬
‫‪ 75‬و من ساعة‬
‫‪56‬‬ ‫حزم الحمض النووي لتسعة طر وراثية من الر على‬ ‫‪5.3‬‬
‫‪ ٪1‬جل أجارو عند ‪ 90‬فولت لمدة ‪ 20‬دقيقة‬
‫‪62‬‬ ‫الترحيل الكهربالي لناتج الت اعل التضاع ي لسلسة الدنا‬ ‫‪6.3‬‬
‫لعزالت الر بأستعمال ثاث بادلات نوعية ‪HA-‬‬
‫‪ nos118-terminator‬في هام االكارو بتركيز ‪%1‬‬
‫وفرق جهد ‪ 75‬و من ساعة‬
‫‪69‬‬ ‫تبابق القواعد النيتروجينية لموروث ‪ p35S‬للدراسة‬ ‫‪7.3‬‬
‫الحالية ث‪ )Query‬مع العزلة المرجعية ث‪.)Sbject‬‬
‫‪69‬‬ ‫يوضح كروماتوكرافي لقمم تسلسات الحامض النووي‬ ‫‪A-8.3‬‬
‫لموروث ‪P35‬‬
‫والذي يمالل خبوط ومنحنيات قواعد النايتروجينية‬
‫‪70‬‬ ‫يوضح كروماتوكرافي لقمم تسلسات الحامض النووي‬ ‫‪B-8.3‬‬
‫لموروث ‪P35‬‬
‫والذي يمالل خبوط ومنحنيات قواعد النايتروجينية‬
‫‪70‬‬ ‫تبابق القواعد النايتروجينة لموروث ث‪)HA-nos‬‬ ‫‪9.3‬‬
‫للدراسة الحالية ث‪ )Query‬مع العزلة العالمية‬
‫ث‪.)Sbject‬‬
‫‪71‬‬ ‫يوضح كروماتوكرافي لقمم تسلسات الحامض النووي‬ ‫‪10.3‬‬
‫لموروث ‪ HA-nos‬والذي يمالل خبوط ومنحنيات قواعد‬
‫النايتروجينية‬

‫‪vi‬‬
 ‫قائمة الجداول‬

‫الصفحة‬ ‫عنوان الجدول‬ ‫رقم الجدول‬

‫‪26‬‬ ‫االدوات والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة‬ ‫‪1.2‬‬

‫‪27‬‬ ‫المواد الكيميالية او المحاليل المستخدمة في هذه الدراسة‬ ‫‪2.2‬‬

‫‪28‬‬ ‫العدد المستخدمة في هذه الدراسة مع المادر‪.‬‬ ‫‪3.2‬‬

‫‪29‬‬ ‫األصناف قيد الدراسة مع مادرها واصل نشؤها لمحاول فول‬ ‫‪4.2‬‬
‫الاويا ومشتقاتها‪.‬‬
‫‪30‬‬ ‫األصناف قيد الدراسة مع مادرها واصل نشؤها لمحاول الر ‪.‬‬ ‫‪5.2‬‬
‫‪37‬‬ ‫الدليل الحجمي للـ ‪DNA‬‬ ‫‪6.2‬‬

‫‪39‬‬ ‫البادلات النوعية الماممة للكشف عن التعديل الوراثي بواسبة‬ ‫‪7.2‬‬

‫الـ ‪PCR‬‬
‫‪39‬‬ ‫البادلات النوعية الماممة للكشف عن التعديل الوراثي بواسبة‬ ‫‪8.2‬‬
‫الـ ‪PCR‬‬
‫‪41‬‬ ‫مكونات ت اعل الـ ‪ PCR‬االعتيادي للبادي ‪CaMV-35S‬‬ ‫‪9.2‬‬
‫‪ promoter‬و المنهي ‪. Nos terminator‬‬
‫‪42‬‬ ‫برنامج ت اعل الـ ‪ PCR‬االعتيادي لجين ث ‪CaMV 35S‬‬ ‫‪10.2‬‬
‫‪ promoter‬و‪ )HANos 118-‬لعزالت فول الاويا وكسبة‬
‫الاويا‬
‫‪42‬‬ ‫برنامج ت اعل الـ ‪ PCR‬لجين ث‪CaMV 35S promoter‬‬ ‫‪11.2‬‬
‫و‪ )Nos terminator‬لعزالت حبوب الر‬
‫‪43‬‬ ‫مكونات ت اعل سلسلة البوليميريز الالنالي ‪Duplex PCR‬‬ ‫‪12.2‬‬
‫‪44‬‬ ‫برنامج التدوير الحراري في ت اعل الـ ‪ Duplex PCR‬لجين‬ ‫‪13.2‬‬
‫ث‪ S35‬و‪ )HANos 118‬لعزالت فول الاويا وكسبة الاويا‬
‫الاويا ‪.‬‬
‫‪45‬‬ ‫ماادر واعداد العينات الخاصة بمحاول فول الاويا وكسبة‬ ‫‪1.3‬‬
‫فول الاويا المستخدمة في الدراسة الحالية ‪.‬‬
‫‪46‬‬ ‫تركيز ونقاوة مستخلاات عزالت فول الاويا ومشتقاتها‬ ‫‪2.3‬‬
‫بواسبة طريقة ‪i-genomic DNA Extraction method‬‬

‫‪vii‬‬
 ‫‪51‬‬ ‫نتالج اختبار العينات المدروسة والعالدة ل ول الاوياثحبوب فول‬ ‫‪3.3‬‬
‫الاويا وكسبة فول الاويا) بالنسبة الى المورثات التي تم التحري‬
‫عنها والتي تستعمل في التعديل الوراثي ‪.‬‬

‫‪54‬‬ ‫ماادر واعداد العينات الخاصة بمحاول الر المستخدمة في‬ ‫‪4.3‬‬
‫الدراسة الحالية‪.‬‬

‫‪56‬‬ ‫تركيزونقاوة مستخلاات االنماط الوراثية لمحاول الر‬ ‫‪5.3‬‬

‫بواسبة طريقة ‪i-genomic DNA Extraction method‬‬
‫‪63‬‬ ‫ملخص يوضح نتالج اختبار االنماط الوراثية المدروسة‬ ‫‪6.3‬‬
‫لمحاول الر بالنسبة الى المورثات التي تم التحري عنها والتي‬
‫تستعمل في التعديل الوراثي‪.‬‬
‫‪67‬‬ ‫يوضح نسبة التشابه بين تسلسل القواعــــــــــد النتروجينية‬ ‫‪7.3‬‬
‫لناقل الكلونة للنباتات التي لها تشابه نسبي مع تسلسل‬
‫القواعــــــــــد النتروجينية لمـــــــــــورثة ‪ P35S‬و ‪HA-nos‬‬
‫في مشتقات فول الاويا في الموقع العالمي ‪. Gene bank‬‬

‫‪71‬‬ ‫يتضمن نتالج التحليل اإلحاالي لمحتوى حبوب فول الاويا‬ ‫‪8.3‬‬
‫وكسبة فول الاويا من المركبات الغذالية الرليسية المتماللة‬
‫بالبروتين والدهن واأللياف والرماد بالاضافة الى محتواها من‬
‫الرطوبة ‪.‬‬

‫قائمة المخططات‬

‫الصفحة‬ ‫العنوان‬ ‫رقم المخطط‬

‫‪34‬‬ ‫العمليات الرليسية للكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا‬ ‫‪2.1‬‬

‫‪viii‬‬
 ‫قائمة المختصرات‬
‫المعنى‬ ‫العنار المختار‬
Annealing Temperature Ta

Bacillus thuringiensis Bt

Backward B

Cauliflower mosaic virus CaMV

Cauliflower mosaic virus P35S promoter P35S

Concentration Con

De ionized Distilled Water ddH2O

Deoxynucleotide Triphosphates dNTP's

Deoxyribonucleic acid DNA

Ethidium Bromide EtBr

Food and Agriculture Organization FAO

Genetically Engineered Organism GEO

Genetically Modified crops GM Crops

Genetically Modified Organisms GMOs

Guanine G

Herbicide-tolerant HT

i-genomic DNA extraction IGDE

Melting temperature Tm

ix
 Microgram Μg

Microlitre Μl

Micromolar Mm

Milliliter Ml

Minutes Min

Nanometre Nm

Nopaline synthase NOS

Nopaline Synthase Terminator T-nos

Optical Density O.D

Picomole Pmole

Polyethylene glycol PEG

Polymerase Chain Reaction PCR

Reverse Primer R

Single strand Deoxyribonucleic acid ssDNA

Thymine T

Transfer DNA T-DNA

Tumour-inducing plasmid Ti – plasmid

Ultra violate UV

Tumour-inducing Ti

x
 Soy S

Rice R

Tris-Borate EDTA TBE

xi
‫المقدمة‬
 ‫المقدمة ‪Introduction‬‬
‫اتسم الناف الالاني من القرن العشرين بالكالير من اإلنجا ات العلمية ‪ ,‬وبشكل خاص‬
‫التبور التقني والعلمي في العلوم الحيوية ‪ ,‬وكانت تقنيات الهندسة الوراثية أو مايعرف تبويع‬
‫الجين ‪ gene manipulation‬من أبر سمات هذا التبور العلمي‪ ,‬لقد تمكن كل من‪Jackson‬‬
‫و ‪ Symons‬و كذلك ‪ Berg‬وألول مرة في سنة ‪ 1972‬من لاق جزيئين ‪ DNA‬من كالنين‬
‫مختل ين في المختبر )‪.( Bawa, 2013‬‬

‫الهندسة الوراثية ت أعد اسلوبا حديالا في عمليات انتقال الا ات الوراثية وباورة‬
‫مباشرة من كالن حي الى اخر حتى وان لم يكن بينهما صلة قرابة ‪ ,‬وهذا خاف ما هو‬
‫معروف بانتقال الا ات الوراثية عن طريق التهجين ‪ ,‬اذ البد من توفر صلة وراثية بين‬
‫الكالنين وهذا مايسمى بالتربية التقليدية ‪(Maghari et breeding traditional‬‬
‫)‪. al.,2011‬‬

‫تسمح الهندسة الوراثية بنقل الجينات بين األنوا المتباعدة وراثيا ويعود السبب في ذلك‬
‫الى ان الكالنات الحية تمتلك جزيئة الـ ‪ DNA‬مكونة من ن س المادة من الممكن قاها ولاقها‬
‫واعادة ترتيبها مجددا في المختبر )‪. (Ammann, 2011‬‬

‫وفي نهاية القرن الماضي بر ت الهندسة الوراثية ; لتعتمد على التعديل الوراثي كبديل‬
‫للكالير من المشكات ذات الالة في ما يخص مقاومة اآلفات ومستويات االنتاجوالجودة‬
‫والتكيف مع البيئات المختل ة‪ ,‬نتج عن ذلك اتسا في المساحات المزروعة بالمحاصيل المعدلة‬
‫وراثيا حول العالم ث‪. )Matas et al., 2009‬‬

‫ا دادت المساحة المزروعة بالمحاصيل المعدلة وراثيا سنويا من ‪1.71‬مليون هكتار في‬
‫عام ‪ 1996‬وحتى ‪181.5‬مليون هكتار في عام ‪ , 2014‬حيث رعت في ‪ 28‬دولة من قبل‬
‫‪ 18‬مليون مزار ‪ ,‬الواليات المتحدة تعتبر البلد الرالد بزراعة المحاصيل المعدلة وراثيا‬
‫بمساحة مليون هكتار‪ ,‬يتبعها في المرتبة الالانية البرا يل ‪ ,‬ثم االرجنتين والهند ‪ ,‬ثم كندا ‪ ,‬اما‬
‫اهم المحاصيل المزروعة فتشمل الذرة والقبن وفول الاويا والكانوال والبابايا والبندورة ‪,‬‬
‫إلنتاج اصناف مقاومة للحشرات واالمراض ومبيدات االعشاب )‪(Kamle & Ali ,2013‬‬

‫‪1‬‬
 ‫على الرغم مما حققته تببيقات الهندسة الوراثية من إنجا ات لخدمة البشرية لم يكن يحلم‬
‫بها‪ ,‬فقد أثير على منتجاتها مخاوف وجدال ساخنا ‪ ,‬لم تزل بعد ‪ ,‬والتي من المحتمل أن تهدد‬
‫الاحة العامة لانسان بل والبيئة ‪ ,‬وتنحار أهم ماادر القلق المحتملة هو انتقال المورثات‬
‫الحيوي‬ ‫من النباتات المهندسة وراثيا الى البيئة من التهديدات المؤثرة على التنو‬
‫ث‪. ) Ammann et al., 2001‬‬

‫انتقال مورثات مقاومة المضادات الحيوية من النبات المحور وراثيا إلى بكتيريا القناة‬
‫الهضمية للحيوان واالنسان من المحاصيل المستعملة في تغذيتها ‪ ,‬ومن ثم الى بكتيريا التربة‬
‫من مخل ات الحيوان واإلنسان وبقايا النباتات ‪ ,‬ومن المحتمل ان يؤدي ذلك إلى ظهور أمراض‬
‫ميكروبية ال ين ع معها استعمال المضادات الحيوية ث‪. )Wonget al.,2013‬‬

‫لذا تعتمد بروتوكوالت على استعمال تقنية الـ ‪ PCR‬للكشف عن العناصر المعدلة وراثيا‬
‫وذلك باستعمال العناصر الوراثية الشالعة االستخدام في التعديل الوراثي ‪(Wang et‬‬
‫)‪.al.,2015‬‬

‫لشحة الدراسات واالبحاث المتعلقة في الكشف عن النباتات المحورة وراثيا في العراق‬

‫عموما وفي محافظة كربا خاوصا مع الشك في وجود بعض النباتات المعدلة وراثيا لذا‬
‫ارتات الدراسة التاكد من وجودها ومادرها لغرض الكشف عنها ‪.‬‬

‫أهداف البحث ‪:‬‬

‫‪ .1‬الكشنننننف عن وجود تحويرات وراثية في فول الانننننويا ومحانننننول الر المتداولة في األسنننننواق‬
‫العراقية ‪ ،‬وذلك باسننتخدام العناصننر الشننالعة االسننتخدام في التعديل الوراثي مالل المح ز الخاص‬
‫بالـنننننننننننن ‪CaMV-35S promoter‬والح ا الخاص بالمنهي ‪ Nos terminator‬في العينات‬
‫المدروسة باستخدام طريقة سلسلة ت اعل البوليميريز ث‪.) PCR‬‬
‫‪ .2‬دراسنننننة تسنننننلسنننننل القواعد النايتروجينية للموروث الخاص بالمح ز ‪CaMV-35S promoter‬‬
‫‪ Sequencing‬وتحليل النتالج ‪.‬‬ ‫والح ا الخاص بالمنهي ‪ Nos terminator‬باستخدام جها‬
‫‪ .3‬دراسننة التركيب الكيميالي لبعض بذور واعاف فول الاننويا الببيعية والمحورة باسننتجدام جها‬
‫ث ‪)Near-Infrared Spectroscopy‬‬

‫‪2‬‬
 ‫الفصل األول‬
‫استعراض المراجع‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫‪ -1‬استعراض المراجع ‪Literatures Review‬‬

‫‪1-1‬الهندسة الوراثية ووسائل التربية التقليدية‬
‫‪Geneticengineering andtraditional breeding techniques‬‬
‫هنالك تشننابه بين وسننالل التربية التقليدية ‪ Traditional breeding techniques‬وتقنية الهندسننة‬
‫الوراثينننة ‪ , Genetic engineering technique‬بنننالرغم من وجود اختافنننات عنننديننندة بين هننناتين‬
‫االسلوبين ‪ ,‬اال ان كل منهما استهدف التحسين الوراثي لمحاصيل النبات )السعدي واخرون‪.)2012 ,‬‬
‫تقتانننر برامج التربية التقليدية في الوقت الحاضنننرعلى نقل الجينات عن طريق التهجين واالنتخاب‬
‫بين افراد النو الواحد ‪ ,‬في حين نجد ان طرالق الهندسة الوراثية قد تعدت حاجز النو كاليرا ‪ ,‬حيث يتم‬
‫نقل المورث ات بين أي كالن حي وكالن اخر وبمدة منية قايرة ‪ ,‬وتشمل التربية التقليدية جمع العديد من‬
‫تولي ات الا ات المرغوبة التي يمكن نقلها باستخدام البرق التقليدية ثالتهجين واالنتخاب ) خال الدورة‬
‫الجنسنننية للنبات ‪ ,‬ولذلك تم تقليل مشننناكل التربية التقليدية للمحاصنننيل النباتية ‪ ,‬والتي تجلت في صنننعوبة‬
‫السيبرة على نتالجها وطول المدة الزمنية الجرالها ‪ ,‬والقدرة المحدودة على تغير اكالر من ص ة وراثية‬
‫‪ ,‬ا ضافة الى صعوبة ا ستعمالها لحدوث التعديل الوراثي بين الكالنات الحية المختل ة ‪(El-Zaeem‬‬
‫)‪.et al., 2011‬‬
‫ومن جانب اخر اسننتعملت الهندسننة الوراثية في تحسننين انتاج العديد من النباتات ‪ ,‬سننوا فيما يخص‬
‫السنننننمات الزراعية المتنوعة المتعلقة بالجودة ومقاومة الحشنننننرات واالفات والحشنننننرات وتحمل مبيدات‬
‫االعشننننناب ‪ ,‬وهذه الخانننننالص او المميزات يانننننعب تلبيتها مع وسنننننالل التربية التقليدية) السننننناهوكي‬
‫وعبدالباسط‪.)2020 ,‬‬
‫‪ .2.1‬الكائنات المعدلة وراثيا ‪Genetically Modified Organism (GMO):‬‬
‫الكالن المعدل وراثيا أو الكالن المهندس وراثيا هو كالن تم تغيير خاننالاننه الجينية من خال إدخال‬
‫جين معدل أو جين من كالن آخر بآستخدام تقنيات الهندسة الوراثية ) ‪. (Zhu et al.,2010‬‬
‫تسننمى عملية إنتاج كالن معدل وراثيا لالهندسننة الوراثيةل ‪ ،‬ويمكن تببيق الهندسننة الوراثية على النباتات‬
‫والبكتيريا والخ مالر والحيوانات وال بريات ‪ ,‬أ يا كانت ال كالنات الحية التي سننننننيتم ت عديل ها ‪(Tam,‬‬
‫)‪.2015‬‬

‫‪3‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫تتضمن الهندسة الوراثية ثاث خبوات رليسة ‪:‬‬

‫‪ ‬إياال الحمض النووي ‪ DNA‬إلى الخايا عن طريق عملية تعرف بآسم التحول ‪Transformation‬‬
‫)‪.(Freese & Schubert , 2004‬‬
‫‪ ‬تبوير نظام استزرا اذ يتم تجديد الخايا المحولة بك ا ة إلى كالنات كاملة ث ‪Freese & Schubert ,‬‬
‫‪.)2004‬‬
‫‪ ‬التعبيرالجيني للجينات المعدلة وراثيا‪ :‬الجين المعدل عبارة عن جين أو مادة وراثية تم نقلها بشكل طبيعي‬
‫‪ ،‬أو بأي عدد من تقنيات الهندسة الوراثية من كالن إلى آخر ‪ ,‬الجينات المحورة لها القدرة على تغيير‬
‫النمط الظاهري للكالن الحي عبر انتاج البروتين المش ر لها )‪. (Venken & Bellen,2007‬‬
‫أصننننننبحت الهندسننننننة الوراثية تقنية واعدة وفعالة لتحسننننننين الخاننننننالص الزراعية للنبات ‪(Moghissi et‬‬
‫)‪.al.,2016‬‬
‫تم تاميم النباتات من أجل مقاومة األمراض أو اآلفات أو مبيدات األعشاب أو مبيدات اآلفات أو يادة الغلة‬
‫أو القيمة الغذالية)‪. (Holst-Jensen et al.,2012‬‬
‫من أماللة الجينات التي تم نقلها هي جينات بي تي ث‪ )Bt‬المقاومة للحشننننرات والتي تم نقلها من بكتريا‬
‫تعيش في التربة تسنننننمي ث‪ )Bacillus thuringiensis‬وهذا النو من البكتريا يعمل على صننننننع مواد‬
‫سامة ضد يرقات ال راشات التي تايب الذرة الشامي‪ ،‬وبعضها لها اضرارا مميته على أنوا أخرى من‬
‫الحشننننرات ‪ ,‬وبعد أن تم نقل هذه الجينات الى المادة الوراثية لمحاننننول الذرة ‪ ,‬أصننننبحت هنالك المقدرة‬
‫لنباتات هذا المحاول المهندس وراثيا لمقاومة الحشراتالتي تايبه ث‪.)Chakrabarty et al., 2020‬‬
‫‪ 3.1‬عناصر التحويل في التعديل الوراثي ‪:‬‬
‫‪TransformationElements in Genetic Modification‬‬
‫يتم التعديل الوراثي عادة من خال نقل المورث المانح للاننن ة المرغوب فيها‪ ,‬والذي يكون موجودا‬
‫ضننننننمن تركينب البا ميند ث‪ )contruct plasmid‬النذي يتنألف عمومنا من االجزا التنالينة التي تع مل‬
‫مجتمعة على اعبا الاننن ة المرغوب بها ‪ .‬تمكن العال أم ‪ Chilton‬عام ‪ 1977‬من عزل البا ميدات من‬
‫البكتريا السننتعمالها في نقل الموروثات من نبات الى اخر‪ ,‬وهذا االكتشنناف أس نت أخدم في الهندسننة الوراثية‬
‫ثالرفاعي واخرون ‪.)2002 ,‬‬

‫‪4‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫يحتوي الملحق النموذجي ثتكوين الجين) في الكالنات المعدلة وراثيا على ثاثة عناصننننننر ث ‪Tripathi,‬‬
‫‪ )2005‬وكما موضح ادناه ‪.‬‬
‫ث‪ )1‬جين التحكم المح ز‪ promoter sequence‬كم تاح تشننننننغيل ف إيقاف لقرا ة الجين المدخل او‬
‫المعدلوهي تساعد في تحديد توقيت عمل الجين المدخل‪.‬‬
‫ث‪ )2‬عناننر التحكم االنها ‪ Terminater sequence‬كإشننارة توقف للجين المدخل ف المعدل وتكون‬
‫مسؤولة عن انها عمل نسخة الـ ‪ mRNA‬الرسول ‪transcript Messenger RNA‬‬
‫ث‪ )3‬باإلضافة إلى ذلك ‪ ،‬قد توجد أيضا الجينات المعلمة ث ‪ ) Marker gene‬كعامات اختيار لتمييز‬
‫الكالنات المعدلة وراثيا عن األنوا غير المعدلة وراثيا أثنا تبور المحاصيل ‪.‬‬
‫‪ .4.1‬المحاصيل المعدلة وراثيا ‪Genetically Modified Crops‬‬
‫تسنننمى المحاصنننيل المهندسنننة وراثيا أيضنننا محاصنننيل التكنولوجيا الحيوية ‪ ،‬أو المحاصنننيل المحورة‬
‫وراثيا ‪ ،‬أو المحاصيل المعدلة وراثيا ث‪.)Agnihotri et al., 2013‬‬
‫المحاول المعدل وراثيا هو النبا ت الذي تم فيه إدخال واحد أو أكالر من الجينات بشكل مابنع بدال‬
‫من الحاول عليها في ظل ظروف طبيعية كما هو الحال في عملية التكاثر ‪,‬قد يكون تسلسل الجين المدرج‬
‫والمعروف باسم الجينات المحورة من ن س األنوا أو األنوا المختل ة الموجودة في ن س المملكة أو حتى‬
‫من مملكة مختل ة ‪ ,‬من فوالد تقنيات نقل الجين عبر طرالق الهندسة الوراثية هي سرعة نقل الجين على‬
‫العكس من طريقة الزراعة التقليدية والتي تستهلك كاليرا من الوقت)‪.(Nábrádi& Popp, 2011‬‬
‫وكذلك إن هذه التقنيات الحديالة ال تعتمد على كي ية التكاثر للمحاننننول ;أي بمعني إن كان تكاثرا جنسننننيا‬
‫أو خضريا )‪.)Rommens, 2004‬‬
‫تمت راعة محانننننول واحد فقط من المحاصنننننيل المعدلة وراثيا في االتحاد األوروبي ‪ ،‬وهو الذرة‬
‫المقاوم للحشنننرات ‪ ، MON810‬في جمهورية التشنننيك ‪ ،‬وبولندا ‪ ،‬والبرتغال ‪ ،‬وسنننلوفاكيا ‪ ،‬ورومانيا ‪،‬‬
‫وإسبانيا ثالسعدي ‪.)2012,‬‬
‫جميع المحاصننيل المعدلة وراثيا المتاحة في السننوق الدولية تم تاننميمها لمنح واحدة من ثاث سننمات‬
‫أسنننناسننننية للمانننننع‪ :‬نباتات مقاومة للحشننننرات واالمراض ‪ ,‬وقادرة على النمو تحت ظروف قاسننننية من‬
‫در جات الحرارة والملو حة والرطو بة ‪ ,‬و كذ لك تح مل مب يدات االعشننننننناب ‪ ,‬وذات قي مة غذال ية عال ية‬
‫ث‪.)Batista & Oliveira, 2009‬‬

‫‪5‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫‪ - 1‬فول الصويا ‪Soy bean :‬‬

‫يأعد فول الاننننننويا من أ هم المحاصننننننيل المنتجة بالتكنولوجيا الحيوية في جميع أنحا العالم وهو أحد‬
‫أكالر المحاصننننيل انتاجا اذ تم إنتاج ‪ 226‬مليون طن في أكالر من ‪ 70‬دولة في عام ‪, 2013‬تم راعة فول‬
‫الاننننننويا إلنتاج ال بذور الزيتية لمعظم دول العالم في عام ‪ 2013‬وهو ما يمالل ‪ ٪ 29‬من إجمالي هكتار‬
‫المحاصيل الزيتية في جميع أنحا العالم )‪.(Parket al., 2015‬‬
‫وتسنننتخدم فول الانننويا ومشنننتقاتها في مجال واسنننع من منتجات األغذية واألعاف في جميع أنحا‬
‫العالم)‪.(Singh et al., 2008‬‬
‫على وجه الخانننوص ‪ ،‬يتم اسنننتخدام الوجبة المشنننتقة من فول الانننويا المعدلة وراثيا بشنننكل متزايد‬
‫كمانننندر للبروتين في علف الحيوانات ‪ ،‬اذ ياننننل اسننننتخدامه عالميا إلى حوالي ‪ 70‬مليون طن سنننننويا‬
‫)‪.(Aljumali, 2011‬‬
‫قام العلما بدمج جين من اصل ‪ Bacillus.thuringiensis‬ث‪ )Bt‬في فول الاويا الذي يحتوي على‬
‫بروتين مبيد حشري يحافظ على إنتاجية المحاول )‪.) Świątkiewiczet al.,2010‬‬
‫ت أعد البقوليات احدى ماننننننادر البروتينات الهامة ‪ ,‬والتي عادة ماتكون ناقاننننننة في بعض االحماض‬
‫األ مينية الهامة كما هو الحال في بروتينات الحبوب ‪ ,‬وباسننننننتخدام الهندسنننننننة الوراثية امكان توافر كل‬
‫االحماض االمينية الضننننننرورية في الغذا النباتي واحد بوسنننننناطة تحديد الجينات التي تشنننننن ر اعداد من‬
‫البروتينات‪ ،‬ويوجد فول الاويا معدل وراثيا غني بالماليونين)‪.(Krishnan et al.,2011‬‬
‫وهناك بعض الدراسنننات التي تشنننير الى انه باالمكان نقل جين جليسنننينين فول الانننويا ‪Soy bean‬‬
‫‪ glicinin‬والذي يسبب يادة في البروتين الكلي )‪.)Bomgardner, 2012‬‬
‫‪Golden rice‬‬ ‫‪ -2‬الرز الذهبي‬
‫يأعد الر مانننننندرا غذاليا للمليارات من البشننننننر في كل أنحا العالم‪ ،‬وهو الغذا االسنننننناس واألكالر‬
‫أهمية‪ ,‬يعتمد ناف سكان العالم او اكالر على الر في نظامهم الغذالي ثمحمد‪.)2014 ،‬‬
‫تحتوي حبـنننوب الـنننر على نشا بنسبة )‪ % (75-65‬وبروتين بنسبة )‪ %(12-9‬و يت بنسبة )‪,%(6-4‬‬
‫و بروتين الر يتميز عن بقية بروتينات الحبوب بوفرة البروتين ‪ glutelin‬ويحـنننننننوي كمية قليلـنننننننة من‬
‫بروتين ‪ Prolamine‬وخلوه من الحـامض االميني األساس الايسـين ‪ Lysine‬ممـا يقلل القيمـة الغذاليــة‬
‫لبروتيـن الر )‪. (Ellis etal., 1986‬‬

‫‪6‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫وضنننمن تبورات الهندسنننة الوراثية عمليات النقل الجيني كأداة م يدة إليجاد أصنننناف من الر تمتلك‬
‫تراك يب وراث ية قادرة على التح مل و التكيف للشننننننند البيئي ‪ ,‬و كذ لك فضننننننا عن الم قاو مة للمب يدات‬
‫االعشاب‪ Herbicides‬واالمراض وتحسين القيمة الغذالية للر ‪ ,‬من ابر تبورات الهندسة الوراثية في‬
‫الر هو غرس ‪ Incorporation‬الموروث المسنننننؤول عن بنا الحديد في محانننننول فول الانننننويا في‬
‫جينوم الر باستخدام بكتريا ‪. (Brar & Khush, 1997) Agrobacterium‬‬
‫يأعد الر من محاصننننننيل الحبوب الهامة والتي نالت اهتمام الباحالين في مجال الهندسنننننننة الوراثية ومن‬
‫الا ات الهامة التي امكن تعديلها في االر مايلي ‪:‬‬
‫‪ .1‬تخ يض مسببات الحساسية ‪.‬‬
‫يادة محتوى الحبوب في فيتامين ‪ A‬والحديد‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫يادة المحتوى من االحماض االمينية االساسية الناقاة ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫وهذا ويأعد الر المهندس وراثيا المعروف باسننننننم االر الذهبي ث‪ )Golden rice‬مالال جيد لنجاح‬
‫تقنية الهندسننننة الوراثية في هذا المجال حيث امكن نقل ثاث جينات لزيادة محتوى الر من مولد فيتامين‬
‫‪ A‬ث‪ )Provitamin A‬ثالسعدي واخرون‪ )2012,‬وهي ‪:‬‬
‫‪1̵ Desaturase synthase (PSY)Gene‬‬
‫‪2̵ Phytoene (Cit 1) gene‬‬
‫‪3-Lycopene cyclase gene‬‬
‫من المعروف أن الر العادي ي تقر الى مادة بيتا كاروتين الذي يأعد مانننننندرا ل يتامين ‪A‬ولوحظ ان‬
‫حبوب الر المحورة وراثيا يكون لها اندوسننبرم اص ن ر اللون يعود هذا اللون الى البيتاكاروتين ولزيادة‬
‫نسبة الح ديد باالر واالفادة منه تم نقل ثاث جينات ايضا للتغلب على محتوى الحديد المنخ ض ثجندل‪,‬‬
‫‪.)2015‬‬
‫وهناك بعض الدراسات التي تشير الى انه امكان يادة الليسين في االر عن طريق نقل جين من‬
‫ال اصوليا والذي يش رالبروتين ‪ ,B ̵ phaseolin‬وكذلك يادة المياليونيين من خال نقل جين جليسينين‬
‫فول الاويا ث‪ )Soybean glicin‬و ‪ %20‬من البروتين الكلي عبارة عن كليسينين وكذلك امكان نقل‬
‫موروث من محاول عباد الشمس لزيادة البروتينات الغنية في الكبريت ; لزيادة نسبة االحماض االمينية‬
‫الكبريتية ‪ ,‬هذا ويمكن استخدام تقنية تعبيل الجين النتاج ار منخ ض في مسببات الحساسية ثالسعدي‬
‫واخرون‪.)2012 ,‬‬

‫‪7‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫الر الذهبي هو مجموعة متنوعة من األر المنتج من خال التعديل الوراثي لتخليق سالف بيتا‬
‫كاروتين ث‪.)Premanandh,2011) )pro-vitamin A‬‬
‫يعاني أكالر من ‪ 120‬مليون ط ل في العالم من نقص فيتامين ‪ , A‬لدى الر الذهبي ‪Golden rice‬‬
‫القدرة على المسنننننناعدة في منع الوفيات من مليون إلى مليوني وفاة كل عام بسننننننبب نقص هذا ال يتامين‬
‫ث‪.) Bua & Ojirot, 2014‬‬
‫‪ 5-1‬اسواق المحاصيل المعدلة وراثيا‬
‫‪Genetically modified crops markets‬‬
‫أول اسننتخدام للتحوير الوراثي يعود الى العام ‪ 1987‬لقد تمكن العلما من انتاج المحاصننيل المهندسننة‬
‫وراثيا تمت راعة اول محانننول طماطم معدل وراثيا من قبل العالم االمريكي بيشننني وتم تسنننويقها الى‬
‫االسواق في العام ‪ 1996‬وهو المحاول االول المهندس وراثيا ثجندل‪. )2015,‬‬
‫بعد ذلك عرضت األغذية المعدلة وراثيا ألول مرة في السوق في بداية التسعينيات ‪ ,‬وعادة ما تكون‬
‫األغذية االمحورة وراثيا هي منتجات نباتية محورة جينيا مالا فول الانننويا والذرة والكانوال و يت بذور‬
‫القبن )‪.)Schnurr, 2013‬‬
‫االغذية المحورة وراثيا انبلقت بشننننننكل كبير لتحل محل المنتجات الببيعية في االسننننننواق ‪ ,‬معظم‬
‫االطعمة المكدسة في السوبر ماركت في الوقت الحاضر هي عبارة عن اغذية مهندسة وراثيا موضوعة‬
‫على رفوف محات السوبر ماركت ‪ ,‬فالنقاد اعترض على تسويق األطعمة المعدلة وراثيا لعدة أسباب ‪،‬‬
‫بما في ذلك االهتمامات البيئية ‪ ,‬وقضننايا السننامة العامة ‪ ،‬و المخاوف االقتاننادية التي أثارتها حقيقة أن‬
‫هذه الكالنات تخضع لقانون الملكية )‪.(Rosellini, 2011‬‬
‫المحاصنننيل المعدلة وراثيا الموجودة في االسنننواق المحلية انتجت لتانننبح لها احدى السنننمات التالية‬
‫وهي تحمل مبيدات االعشاب ‪ ,‬ومقاومة الحشرات ‪ ,‬ومقاومة العدوى بال ايروسات مالال على ذلك الذرة‬
‫وفول الاويا والهندبا والبباطس والقر هي ابر انوا االغذية المهندسة وراثيا المتوفرة في االسواق‬
‫ثجندل‪.)2015 ,‬‬
‫‪ 6-1‬االمان الحيوي ووضع عالمات على المحاصيل المعدلة وراثيا‬
‫‪Biosecurity and Genetically modified crops labeling‬‬
‫إن القلق جرا اسنننننتعمال المحاصنننننيل المعدلة وراثيا انعكس سنننننلبا وعلى مدى واسنننننع على القوانين‬
‫والتشريعات في اغلب البلدان المتقدمة ‪ ,‬و يظهر ال رق واضحا بين القوانين األمريكية و األوروبية فيما‬

‫‪8‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫يتعلق بالتحوير الوراثي بالذات‪ ,‬القانون األمريكي يعتبر المحاصننننننيل المحورة وراثيا مكونات طبيعية ال‬
‫تهدد االمن الغذالي حتى يالبت العكس في حين ان القانون األوروبي وعلى وجه الخاننننننوص القانون‬
‫ال رنسنننننني يعتبر األغذية المحورة وراثيا غير طبيعية من المحتمل أن تشننننننكل تهديدا غذاليا إلى أن يالبت‬
‫العكس ثالسعدي واخرون‪.)2012,‬‬
‫الهندسنننة الوراثية تأعد احد التقنيات التي اثارت االهتمام في الوسنننط العلمي والرأي العام ; وذلك لعدم‬
‫التاكد من عواقب هذه التقنية وعدم وجود رغبة او ال ة مع هذه االغذية المعدلة وراثيا ‪ ,‬يستعمل مابلح‬
‫االمان الحيوي في سنننننرد طرق وسنننننياسنننننات المتبعة في تامين التببيقات االمنة للبيئة باسنننننتعمال تقنيات‬
‫الهندسة الوراثية او هي سامة تداول االغذية المحورة وراثيا ثالسعدي واخرون ‪.)2012 ,‬‬
‫ظهرت اصننننننوات تنادي بلزوم تجميد انشننننننبة و تجارب التقنيات الحيوية الحديالة ‪ ,‬لحين اسننننننتكمال‬
‫التشريعت الخاصة باالمان الحيوي وبما يغبي معظم االنتقادات الموجهة اليها ‪ ,‬ومنح ال رصة الى التقييم‬
‫العلمي للمخاطر وتوفر ادلة محددة من التجارب العملية تقود الوصنول الى االسنتنتاجات يوثق بها ‪ ,‬على‬
‫سننبيل المالال الحسنناسننية التي يمكن ان تبر نتيجة وجود بروتينات جديدة تأعد احد المشنناكل المقلقة لهذه‬
‫المنتجات المهندسة وراثيا )‪. (Paganelli et al., 2010‬‬
‫كما يوجد هنالك صنننراعات و جدل واسنننع يما يتعلق بوضنننع بباقات تعري ية على المنتجات المحورة‬
‫وراثيا ومدى رغبة واسنننتجابة المسنننتهلك بجدوى مالل تلك االغذية ‪ ,‬ومن المتعارف ان القانون في معظم‬
‫دول العالم يألز أم منتجي االغذية ال أمهندسة وراثيا باإلعان عن ال أمنتج المعدل وراثيا ‪ ,‬وذلك بوضع بباقت‬
‫تعري ية علي هاالن ذلكحقالمواطن فيمعر فة في مااذا كان ال غذا م عدل وراثيا من عد مه ث ‪.(Robinson,‬‬
‫‪2013‬‬
‫ونظر الن عمليات الهندسنننننننة الوراثية تؤدي الى ادخال بروتينات غريبة لذلك البد من عمل التجارب‬
‫الخاصننة بالحسنناسننية الي نو من المنتجات تحتوي بروتين غريب ‪ ,‬وبذلك تاننبح عملية وضننع بباقة‬
‫البيانات هام للمواطن ح اظا على المسنننننتهلك من خبورة هذه الحسننننناسنننننية ان وجدت & ‪(HUANG‬‬
‫)‪.PENG, 2015‬‬
‫على سنننبيل المالال عند ادخال جين ال ول الانننويا من محانننول ‪ Brazil nut‬لزيادة محتواه من‬
‫المياليونين فانه ينقل الجين المسننننبب للحسنننناسننننية ‪ ,‬ليكون سننننبب معاناة لافراد الذين لديهم حسنننناسننننية‬
‫)‪. (Arora & Mishra, 2011‬‬

‫‪9‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫من ضننننننمن العوامل الهامة في تقدير درجة األمان الحيوي هو مانننننندر البروتين الجديد ‪ ,‬إذ يجبأأن‬
‫يكون آمنا في حالة احتواله على بعض مركبات الحساسية او بعض مضادات التغذية ثالسعدي واخرون‪,‬‬
‫‪.)2012‬‬
‫تم رصد ما يقارب ‪ 60‬من المحاصيل المعدلة وراثيا وادخلت في األسواق العالمية ‪ ،‬ومن المتوقع أن‬
‫يزداد الى الضعف هذا العدد في السنوات القادمة )‪.(Stein& Rodriguez-Cerezo, 2010‬‬
‫من جانب أخر ‪ ،‬اقترح بعض الباحالين أنه في الواقع ال توجد صنننننورة كاملة عن سنننننمية ثوسنننننامة)‬
‫المنتجات المعدلة وراثيا التي يتناولها البشنننر والحيوانات ‪ ,‬ومن ن س المنبلق ‪ ،‬هناك حاجة إلى تواصنننل‬
‫أفضل إلعام المنتجين والمستهلكين حول اساليب الكشف وتشريع ووضع الملاقات ‪ ,‬اذ يشعر الكالير‬
‫من المسننتهلكين أن البباقات من الضننروري أن تكون إلزامية وأن لديهم أ‬
‫حق المعرفة فيما إذا كان البعام‬
‫الذي يتناولونه قد تم انتاجه بإستخدام عناصر معدلة وراثيا ام ال ‪,‬على االغلب ال يوجد شرط لدفع تكاليف‬
‫وضع الملاقات التعري ية ‪.‬ث‪.)Maghaniet al., 2011‬‬
‫كما ان البعض من الدول تمنح الموافقة على اسننننننتيراد المنتجات المحورة وراثيا والبعض االخر‬
‫التسنننمح بدخولها نهاليا والبعض منهم تسنننمح بدخول هذه المنتجات ولكن بنسنننب محددة ‪ ,‬فهنالك قوانين‬
‫ولوالح تشننننريعية لكل بلد تؤكد على اهمية الكشننننف عن المنتجات المعدلة وراثيا ‪ ,‬ومن الضننننروري ان‬
‫تكون النسب المئوية للمنتج المعدل وراثيا احد مكونات ملاقات التعريف على سبيل المالال في االسواق‬
‫االوروبية وجوب اعام المستهلك في ما اذا احتوت المنتج الغذالي على مكونات او عناصر معدلة‬
‫وراثيا بنسبة ‪ %1‬فما فوق )‪.)Wolt, 2010‬‬
‫‪ .7.1‬طرق التعديل الوراثي للمحاصيل‪:‬‬
‫‪Transformation Methods of Crop Genetic Modification‬‬
‫التحوير الوراثي أو الجيني للكالنات باسننننننتخدام تقنيات تبويع الجين ‪ gene manipulation‬أو‬
‫الهندسة الوراثية يتم عن طريق ادخال مادة وراثية غريبة الى جينوم الكالن المراد تحويره جينيا‪ ,‬ومادر‬
‫المادة الوراثية الغريبة انوا اخرى من الكالنات )‪.(Viljoen et al., 2006‬‬
‫وتتكون المادة الوراثية المدخلة الى جينوم الكالن المراد تحويره من المكونات االسننننننناسنننننني اآلتية‪:‬‬
‫بادي ‪ promoter‬لبدا عملية االستنساخ و جين واسم ‪ marker gene‬يساعد في تحديد الخايا التي تم‬
‫تحويرها وكذلك المنهي ‪ terminator‬الذي يحدد اين تنتهي عملية االسنننننتنسننننناخ ‪(Biłas et al .,‬‬
‫)‪.2016‬‬

‫‪10‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫ويتم غالبا في النبات ادخال قبعة الـنننننننننن ‪ DNA‬الغريبة الى الخلية المسننننتقبلة عن طريق ناقل كلونة‬
‫‪ Cloing vector‬يتميز بقدرته على نقل قبعةالـنننننننننننن ‪ DNA‬الى خلية العالل المضننننننيف للكالن المراد‬
‫تحويره )‪. (Viljoen et al., 2006‬‬
‫التحول المعتمد على بكتريا‪:Agrobacterium‬‬ ‫‪‬‬
‫‪Agrobacterium Based Transformation‬‬
‫‪ Agrobacteriumtumefaciens‬هي بكتيريا تربة شالعة تؤدي عادة إلى تكوين االورام مسببة‬
‫مايسمى بالتدرن التاجي على مجموعة واسعة من أنوا النباتات ‪ ،‬بما في ذلك نبات ذوات ال لقتين‬
‫ذوات ال لقة الواحدة ‪(Kreneket monocotyledonous‬‬ ‫‪ dicotyledonous‬وبعض األنوا‬
‫)‪.al.,2015‬‬
‫أ‬
‫سننناق النبات بحيث يأسنننمح لهذه البكتريا بإحداث االصنننابة‬ ‫ويحدث هذا التورم عندما ت أخدش أو ت أجرح‬
‫تسنننبب البكتريا نمو سنننرطاني في انسنننجة السننناق المانننابة القدرة على احداث الورم وتترافق مع وجود‬
‫با ميد يسمى ‪ Ti‬داخل البكتريا وهو مشتق من التسمية استحالاث الورم ‪ ,Tumer inducing‬ويعتبر‬
‫هذا البا ميد من البا ميدات الكبيرة ويحمل عدد من الجينات المشننننننتركة في عملية االصنننننننابة ‪ ,‬بعد‬
‫االصابة يستبيع جز منه التكامل مع كروموسوم النبات وهذا الجز يسمى ‪ , T-DNA‬تحتوي منبقة‬
‫‪ T-DNA‬على عدد من المورثات ‪ 8‬او اكالر والمسننؤلة عن الخاننالص السننرطانية في االنسننجة النباتية‬
‫المتحولة وهذه المورثات مسننؤولة كذلك على تا ننيع مواد ضننارة للنبات تدعى ‪ Opiens‬التي تسننتعملها‬
‫البكتريا كمركبات مغذية ث‪. )Sood et al., 2011‬‬
‫فقد طورت با ميدات التحمل منبقة ‪ T-DNA‬فيها على هذه المورثات المكونة للمركبات الضنننارة‬
‫)‪.(Păcuraret al., 2011; Sood et al., 2011‬‬

‫با ميد ‪ Ti‬يستخدم الدخال مورثات جديدة الى االنسجة النباتية ويستعمل اسلوبين الدخال البا ميد الى‬
‫االنسجة النباتية ‪:‬‬
‫‪ .1‬احداث خدش ثجرح ) في النبات االوراق او ساق واصابته بواسبة بكتريا ‪Agrobacterium‬‬
‫‪ tumefaciens‬المهندسة وراثيا ان هذه العملية الت ي بالغرض الن الخايا المستقبلة للموروث الجديد‬
‫سوف تكون محاورة في منبقة االصابة فقط )‪.)Kim & An, 2012‬‬

‫‪11‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫تحبيم الجدران الخلوية النتاج البروتوباسننننت تتم هذه العملية بواسننننبة ا الة الجدران الخلوية النباتية‬ ‫‪.2‬‬
‫التي تكون حاجز امام وصول جزيئات الـننننننن ‪ DNA‬وذلك عن طريق معاملة مزرعة من الخايا النباتية‬
‫بوا سنننبة انزيمات خاصنننة‪ ,‬هذه العملية تضنننمن ايانننال الجين الى كل الخايا النباتية بعد ذلك يتم اظهار‬
‫بروتوبا ست الخايا النباتية الى بكتريا ‪ Agrobacterium tumefaciens‬المهند سة وراثيا والتي تقوم‬
‫اثننا دخولهنا على دمج ‪ T-DNA‬والنذي يحوي على الموروث المبلوب والمراد ايانننننننالنه مع جينوم‬
‫الخايا النباتية يحضننن النسننيج النباتي بالبكتريا ل ترة وجيزة متباينة للسننماح بحدوث االصننابة ‪ ،‬بعد ذلك‬
‫يتم و ضعها على و سط صناعي يتوفر فيه الهرمونات والعنا صر الغذالية التي تح ز اوتعز نمو الخايا‬
‫المن ردة الى نبات كامل ‪ ،‬وكذلك وجود عامل انتقالي على سننبيل المالال المضنناد الحيوي يعمل على ا الة‬
‫الخايا غير المتحولة ‪ ,‬بعد ذلك يمكن استخدام اسلوب راعة الخايا لتكشف الخايا المتحولة الى نبات‬
‫كامل معدل وراثيا )‪. (Sood et al., 2011‬‬
‫ويمكن اسننننننتعمال طريقة ثانية مشننننننابهة للبريقة االولى تدعى طريقة تحول االقراص الورقية وذلك‬
‫الجل تجاو المعوقات المتعلقة بانتاج البروتوباسننننت واخافه الى نبات كامل تتوضننننح البريقة بتقبيع‬
‫ورقة نباتية الى اجزا صننغيرة بعد تعقيمها تعدى االجزا الاننغيرة بالبكتريا المحورة وراثيا ثم تنقل هذه‬
‫االجزا الى وسط رعي خاص يعمل على انتقا النسيج النباتي المتحول ويهي الوسط الظروفالمناسبة‬
‫لتكش ها الى نبات كامل )‪.(Lacroix & Citovsky, 2016‬‬
‫النقل المعتمد على الفايروس‪Viral Based Transformation :‬‬ ‫‪‬‬
‫ال يروسات كأحد العوامل المساعدة في اجرا التحول في تقنيات الهندسة الوراثية حيث توجهت‬
‫االبحاث والتجارب الى كي ية االصابة بال يروس وكذلك عملية تكامل او توحيد جينوم ال يروس مع جينوم‬
‫العالل وكي ية التعبير عن تلك الجينات معا في البروتوباست وكل ذلك ممكن ‪ ,‬من المعروف ان ال يروسات‬
‫تايب االنسجة النباتية وكذلك تتضاعف وتتكاثر في داخل خايا العالل ثالرفاعي‪.)2002 ,‬‬
‫ال يروس المسبب لمرض تخبط االوراق في القرنبيط من احسن ال يروسات لاستعمال في الهندسة‬
‫الوراثية ث‪ )CaMV‬واول تجربة ناجحة تحققت باستعمال فيروس ‪Cauliflower mosaic virus‬‬
‫ث‪ )CaMV‬بواسبة العالم ‪ Brisson‬واخرين ث‪ )1984‬لقد نجح بادخال هذا ال يروس الى خايا نبات الل ت‬
‫فان ال يروس كان يتضاعف حتى في النباتات المحولة هنالك احتمال اخر هو استخدام البكتريا الزراعية‬
‫المعدية عن طريق عمل تولي ة من البكتريا وال يروس الدخال جينات الى العالل امكن ذلك من استعمال‬
‫هذه ال يروسات في مجال الهندسة الوراثية ثالرفاعي‪.)2002,‬‬

‫‪12‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫‪ ‬قذف الخاليا باستخدام قاذفات الجينات ‪Microprojection bombardment‬‬

‫حيث تسنتعمل اسناليب خاصنة تسناعد في وصنول الـننننننن ‪ DNA‬الى الخايا من خال الجدار الخلوي‬
‫والغشننا البا مي ‪ ,‬وان هذه االعملية مناسننبة وخاصننة لمحاننول ذوات ال لقة الواحدة التي ياننعب فيها‬
‫تحضنننير البروتوباسنننت واخافه الشنننكل ث‪ )1-1‬يوضنننح طريقة النقل المباشنننر بقاذفات الجينات لتعجيل‬
‫سرعة الجسيمات الدقيقة الحاملة للجين المرغوب )‪. (Ahmed et al., 2017‬‬
‫وقد استعملت بنجاح هذه البريقة في حقن موروث المقاومة للمضاد الحيوي ‪ Kanamycin‬باورة‬
‫مباشرة الى السيقان الناشئة من بذور نبات الشليم ‪.(Kikkert et al., 2004) Secale cerale‬‬
‫هذه البريقة القت نجاحا في بعض الحبوب والمحاصننننننيل االخرى وتشننننننمل هذه العملية لاننننننق الـ‬
‫‪ DNA‬المراد ايانننناله داخل الخايا في النبات من خال وضننننعه على جسننننيمات او قبعة دقيقة من‬
‫التنجستين او الذهب ثم تبلق بعد ذلك داخل الخايا النباتية وقبع الخايا النباتية المعاملة ث ‪Darbani et‬‬
‫‪.) al.,2008‬‬
‫البريقة تستلم الـ ‪ DNA‬من الجسيمات المعدنية ‪ ,‬تنمى بعد ذلك الى نباتات كاملة من الخايا بتقنية‬
‫راعة االنسجة ‪. (Darbani et al., 2008) Tissue Culture‬‬

‫الشكككل ‪ )1-1‬طريقة النقل المباشككر بقاذفات الجينات لتعجيل سككرعة الجسككيمات الدقيقة الحاملة للجين‬
‫المطلوب قذفه في الخلية )‪.(Ahmed et al., 2017‬‬

‫‪13‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫النقل باستخدام التيار الكهربائي‬ ‫‪‬‬

‫‪Electroporation-MediatedTransformation‬‬
‫بينت الدراسات الى امكانية استعمال الحقول الكهربالية لتن يذ عملية دمج البروتوباست ‪ ,‬تسمى هذه‬
‫العملية الدمج بالباقة الكهربالية ‪ , Electro-fosion‬وجد فيما بعد انها عملية من السننننننهل اجرالها وتم‬
‫اسننننننتخدامها النتاج كميات كبيرة من الخايا المدمجة على العكس من عملية الدمج باسننننننتخدام المواد‬
‫الكيميالية المح زة مالل مادة البولي اثيلين كايكول )‪ , ) Polyethylene glycol‬والخايا الناتجة بعملية‬
‫الدمج الكهربالي التنتج مواد سنننامة بالمقارنة مع الدمج الكيمياوي بواسنننبة مادة الـننننننننن ‪Polyethylene‬‬
‫‪ glycol‬ثالرفاعي‪.)2002,‬‬
‫وهذه التقنية تعمل بنجاح مع االنسننننننجة النباتية منزوعة الجداران الخلوية ‪ Protoplast‬وفيها يتم‬
‫اسنننننتعمال مجال كهربالي بانننننورة نبضنننننات سنننننريعة ‪ ,‬حيث يؤدي الى تكوين ثقوب دقيقة تظهر آنيا او‬
‫باننورة سننريعة جدا في االنسننجة النباتية مما يسننمح للـنننننننن ‪ DNA‬بالوصننول الى داخل الخايا بواسننبة‬
‫المحلول المحيط )‪.(Darbani et al., 2008‬‬
‫يتبلب التحول بو ساطة التيار الكهربالي ا ستخدام نب ضات المجال الكهربالي القوية للخايا واألن سجة‬
‫التي قد تحدث نوعا من التعديل الهيكلي للغشا الخلوي )‪.(Young& Dean, 2015‬‬
‫في المختبر إدخال الحمض النووي في الخايا في الوقت الحاضر هو االستخدام األكالر شهرة باستخدام‬
‫التالقيب الكهربالي‪. (Chaiet al., 2013) electroporation‬‬
‫تم تبوير العملية في البداية من أجل تغيير ن اذية البروتوباسننننننت‪ .‬الجهد من ‪ 25‬مللي أمبير و ‪0.5‬‬
‫أمبير لمدة ‪ 15‬دقيقة هي ال ولتية المسننتخدمة إلى حد كبير‪ ,‬ومع ذلك ‪ ،‬فإن المتغيرات ‪ ،‬على سننبيل المالال‬
‫‪ ،‬تركيز الحمض النووي ومقاومة الخايا لن اذ الغ شا قد تؤثر على الن شاط الكهربالي ‪ ,‬والجل اال ست ادة‬
‫من هذه التقنية ‪ ،‬تم تحقيق تغييرات مالمرة مع البروتوباسنننننننت من كل من نبات ذوات ال لقة الواحدة‬
‫ونبات ذوات ال لقتين )‪.(Chai et al., 2013‬‬
‫النقل المعتمد على البروتوبالست ‪Protoplast Base Transformation‬‬ ‫‪‬‬
‫البروتوب اسنننننت هوخلية منزوعة الجدار الخلوي ‪ ,‬والبروتوباسنننننت يعتبر ادق واصنننننغر نظام خلوي‬
‫ويمكن اسننننننتعماله في عملية التهجين الخلوي وتحسننننننين النبات ‪ ,‬تمكن العالم ‪ Cocking‬عام ‪ 1960‬من‬
‫اسننننننتع مال محلول مركز من انزيم السننننننيليوليز ‪ Cellulase‬وا لذي حضننننننر وعزل من مزار ال بر‬
‫‪ Myrothecium verrucaria‬من تحليل جدران الخايا وعزل كمية كبيرة من البروتوباسنننننننت عن‬

‫‪14‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫طريق االنزيمات المحللة للجدار الخلوي ‪ ,‬في الوقت الحاضننننننر اصننننننبحت انزيمات ‪ Cellulase‬وكذلك‬
‫‪ Pectinase‬متوفرة في االسننواق ‪ ,‬انزيمات السننيليليز تحلل السننليلو وتحلل مادة البكتين بواسننبة انزيم‬
‫البكتينيز وتاننننننبح الخايا بدون جدار ‪ Cell without wall‬فيتم دمج برتوباسننننننت الخلية االولى مع‬
‫بروتوباسننننت الخلية االخرى لينتج تركيب وراثي جديد ‪ ,‬وتعتبر االوراق ‪ Leavese‬من اهم الماننننادر‬
‫الحيوية للحاول على البروتوباست النها تعبي ال رصة للحاول على خايا جيدة ومتماثلة في الوقت‬
‫ن سه من انسجتها )السعدي واخرون‪.(2012,‬‬
‫النقل المعتمد على الليبوسوم‪Liposome fusion Mediated Transformation:‬‬ ‫‪‬‬
‫الجسننيمات الشننحمية التي تحتوي على الحمض النووي قد تسنناعد في نقل الحمض النووي عن طريق‬
‫البا مود ماتا أو مباشرة عبر أغشية الخايا )‪. )Husaini et al., 2010‬‬
‫يتم ادخال اجزا الدنا داخل حوياات دهنية منتجة صناعيا حيث تخلط هذه الحوياات مع االنسجة‬
‫المراد تعديلها وراثيا فيندمج غشا ها الدهني مع الغشا البا مي وذلك لتشابه تركيبهما م رغة محتوياتها‬
‫من اجزا الدنا الى داخل السايتوبا م في الخلية ‪ ,‬يساعد تغليف الجسيمات الشحمية في المحافظة على‬
‫الخايا ‪ .‬ومع ذلك ‪ ،‬فإن وتيرة التحول‬ ‫الحمض النووي من نشاط انزيم النيوكلييز داخل الكهربالي‬
‫بوساطة الجسيمات الشحمية أقل بكالير من تلك التي يتم الحاول عليها إما عن طريق الترحيل‬
‫‪ electroporation‬أو عن طريق المح زات الكيميالية ث‪. (Almofti et al., 2003‬‬
‫الليبوسننننوم عبارة عن فسننننيحة ذات ك ا ة عالية تدخل بها جزي الدنا ‪ ,‬في هذه البريقة يخترق الدنا‬
‫البروتوباسنننت من خال الجسنننيمات الحالة وتحرير الدنا ‪ ,‬في هذه البريقة يخترق الدنا البروتوباسنننت‬
‫من خال الجسيمات الحالة‪ ,‬وتحرير البا ميد داخل الخلية )‪.(Ahmad et al., 2017‬‬
‫النقل المعتمد على الياف كربيد السليكون ‪Silicon carbide fibers Mediated‬‬ ‫‪‬‬
‫‪Transformation‬‬
‫وا حدة من البرق المتبورة إليانننننننال الحمض النووي إلى الن با تات هو التحول بواسنننننن بة كربيد‬
‫السننننيليكون‪ ,‬السننننمات ال يزيالية والكيميالية أللياف كربيد السننننيليكون تجعلها قادرة على ثقب الخايا دون‬
‫قتلها‪,‬مزايا هذا النظام سريعة وغير مكل ة وسهلة اإلعداد وفعالة على مجموعة متنوعة من أنوا الخايا‪,‬‬
‫و تشمل بعض عيوبه ك اية التحول المنخ ض )‪.(Komatsuet al., 2006‬‬
‫ك ا ة كربيد السيليكون تعتمد على عدة عوامل أه أمها حجم األلياف ‪ ،‬األنوا النباتية او الجز النباتي‬
‫‪ explant‬وخاالص الخايا النباتية وخاصة سمك جدار الخلية )‪. (Racoczy-Trijanowska ,2002‬‬

‫‪15‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫النقل المعتمد مادة البولي اثيلين كاليكول‬ ‫‪‬‬

‫‪Polyethylene glycol -Mediated Transformations‬‬

‫التحول بواسبة مادة البولي إياليلين كايكول ‪ Polyethylene glycol‬هو طريقة تستخدم لنقل الحمض‬
‫النووي عبر البروتوباست وهو من اكالر المواد الكيميالية شيوعا في اإلستخدام في عملية دمج البروتوباست‬
‫‪(Lazzeri et‬‬ ‫وهي تعمل على يادة قدرة البروتوباسنننننت على اخذ االجزا البروتوباسنننننتية الانننننغيرة‬
‫) ‪.al.,1991‬‬

‫هذه التقنية تشنننبه إلى حد كبير طريقة التالقيب الكهربالي ‪ ،‬حيث يتم خلط الحمض النووي المراد حقنه‬
‫فقط مع البروتوباسننننننت ‪ ,‬ويتم بعد ذلك تح يز امتانننننناص الحمض النووي عن طريق إضننننننافة مادة الـ‬
‫‪ .PEG‬التغيير بوسننننننناطة ‪ PEG‬له مزايا ‪ ،‬ث‪ )1‬من السننننننهل التعامل معه ‪ ،‬ث‪ )2‬وليس هناك حاجة إلى‬
‫معدات محددة ‪ ،‬يتم استخدام هذه البريقة من حين إلى آخرث‪.(Daveya et al., 2005‬‬

‫‪ .8.1‬الكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا‬

‫‪Detecting Genetically Modified Crops‬‬

‫‪ .1.8.1‬الكشف المعتمد على الـ ‪DNA-based methods: DNA‬‬
‫ت أعت بر البرق المستندة إلى الحمض النووي قوية مع خاوصية أعلى وحساسية وقابلية تببيق أوسع‬
‫‪ ,‬تعت مد طرق الكشننننننف عن الحمض النووي لذطع مة الم عدلة وراثيا على ت كا مل خيبين من الحلزون‬
‫المزدوج للحمض النووي الذي يتهجن ببريقة تسننلسننلية محددة ‪ ,‬يتكون الحمض النووي الذي تم هندسننته‬
‫في محاننول من عدة عناصننر تحكم وهي عادة عبارة عن تسننلسننل مح ز وجين هيكلي وتسننلسننل توقف‬
‫للجين )‪.(Ahmed, 1995‬‬

‫‪Polymerase Chain Reaction (PCR‬‬ ‫‪ .1.1.8.1‬تفاعل سلسلة البوليميريز‬

‫أمكن تعريف هذه التقنية بأنها البريقة التي من خالها يتضنننننناعف بها تتابع دنا محدد انزيميا مايين‬
‫النسخ خارج الجسم الحي ‪ in vitro‬بوجود البادلات وب ترة منية قايرة ‪ ،‬وبالرغم لقلة اهتمام الباحالين‬
‫به في البداية ‪ ،‬ولكن فيما بعد اصبح الـ ن ‪ PCR‬التقنية االكالر استخداما في مختبرات الوراثة الجزيئية في‬

‫‪16‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫الكالير من دو ل العنالم ‪,‬والمبندا النذي تعتمند علينه كالير من االبحناث على مسننننننتوى الندننا & ‪(Mullis‬‬
‫)‪.Fallona, 1987‬‬
‫الـننننن ‪ PCR‬لما له من خاوصية ‪ ، specificity‬ومن حيث امكانيتها على التعامل مع اعداد ضخمة‬
‫من النماذج‪ ،‬وهي ال تتبلب اعداد كبيرة من الدنا ث‪.)Higuchi et al., 1988‬‬
‫ويتبلب ذلك وجود انزيم بلمرة الدنا ث‪ )Taq DNA Polymerase‬والبادلـنننننننننننننات ‪Primers‬‬
‫والنيوكليوتـنننننيدات منقوصة األوكسجين ثاثية ال وس ات ث‪ )deoxynucleoside triphosphate‬والتي‬
‫تضنننناف في انبوبة االختبار ثوحدة الـنننننننننن ‪ )PCR‬وهي‪ dGTP , dATP , dCTP , dTTP‬والمحلول‬
‫المنظم ث‪ )PCR buffers‬الذي يحتوي على قالب الدنا ث‪ , )DNA Template‬وايونات المغنيسننننننيوم‬
‫‪ ++Mg‬باالضافة الى جها المبلمر الحراري ‪ Thermocycler‬ثالسعدي واخرون‪.) 2012 ,‬‬

‫وعلى العموم يتم ت اعل فحص سلسلة البوليمريزبجها التدوير الحراري وهو جها باالمكان‬
‫برمجتهه للتغيير بشكل سريع من درجة حرارة ما الى درجة اخرى )‪.)Wang et al., 2015‬‬
‫المشاكل المتكررة لمراقبي الغذا في مادة العينة هو التوفر المحدود للجزيئات الهدف المراد تحليلها‬
‫)‪.)Wang et al., 2015;Raymond, 2010‬‬
‫عند عمل طريقة االسننتخاص االسنناسننية فان مادة الدنا ذات التوفر القليل باالمكان اثرالها بواسننبة‬
‫ت اعات تضننخيم انتقالية ‪ ,‬والتي تسننت يد من تضنناعف الحمض النووي اللذي يحدث طبيعيا ‪(Man et‬‬
‫‪.) al., 2007‬‬
‫الغرض من هذه العملية هو تجميع االجزا القليلة من الحموض النووية مما يمكن من تعريف وتحديد‬
‫الكمية ‪ ,‬تم تبوير هذه التقنية فهو جها بسننيط لكنه فعال للكشننف عن كميات دقيقة من تسننلسننات الدنا (‪.‬‬
‫)‪Jiang et al., 2012‬‬
‫‪.9.1‬انواع نقل الجينات في النباتات المعدلة وراثيا‬
‫‪The Types of Gene Transfer in GM Plants‬‬
‫إنتاج النباتات المعدلة وراثيا عن طريق إد خال جينات غريبة مختارة من كالنات محددة والذي‬
‫يكون ضننمن تركيب البا ميد ث‪ , )contract plasmid‬تتبلب العملية التي يتم بها بنا الحمض النووي‬
‫الغريب الربط بين عدة عناصننر لتشننكيل وحدة وراثية وظي ية ‪,‬يشننمل التعديل الوراثي عموما عناننرين‬
‫تنظيميين ‪ ،‬المح ز وال أمنهي ‪ ، Promoter and Terminator‬باإلضنننافة إلى الموروث المانح للاننن ة‬
‫المرغوب ‪ Gene Marker‬فيها الذي يعبي ميزة قابلة لاختيار ث‪.)Wang et al., 2014‬‬

‫‪17‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫‪ .1.9.1‬الباديء والمنهي ‪Promoter and Terminator :‬‬

‫اثنان من العناصننننر التنظيمية األكالر اسننننتخداما في عمليات التعديل الوراثي هما البادي ‪ P-35s‬من‬
‫فيروس فسنننننني سنننننننننا القرنبيط ‪ (CaMV) cauliflower mosaic virus‬والمنهي ‪Nopaline‬‬
‫)‪ Synthase Terminator(T-Nos‬من اصنننننننل بكتريا ‪ , Agrobacterium tumefaciens‬يوجد‬
‫هذان العنانننننران إما بشنننننكل مشنننننترك أو من انننننل في معظم الكالنات المحورة وراثيا ‪(Hernandez-‬‬
‫)‪.Garcia & Finer, 2014‬‬
‫‪.1.1.9.1‬الباديء ‪Promoter:‬‬
‫ولكي يكون الكالن الحي قادرا على تنشننيط أو إيقاف تشننغيل جيناته الخاصننة ‪ ،‬فإنلكل جين لديه م تاحه‬
‫الخاص به ‪ ،‬والذي يبلق عليه اسننننننم البادي ‪ , Promoter‬يتكون البادي من الحمض النووي‬
‫أ‬ ‫الجزيئي‬
‫ويقع في مقدمة الجين )‪. (Oliveira et al., 2014‬‬
‫وقد تم تحديد عدد من الباديئات التي تعبي مسنننننتويات عالية من التعبير للجينات في النباتات المعدلة‬
‫وراثيا ‪ ,‬كان البادي ‪ 35S‬من فيروس فسننني سنننا القرنبيط ‪Cauliflower Mosaic virus‬ث‪)CaMV‬‬
‫في العديد من التكوينات هو البادي ‪ Promoter‬األكالر اسننتخداما على نباق واسننع في النباتات المعدلة‬
‫وراثيا ث‪.)Ho et al., 1999‬‬
‫يؤدي البادي ‪ 35 S‬إلى تعبير قوي عن الجينات التي يندمج بها ‪,‬يعمل فيروس البادي ‪Promoter‬‬
‫الذي يشبه القرنبيط ث‪ )CaMV‬في كالير من األنوا المختل ة من النباتات ث‪.)Ho et al., 1999‬‬
‫يمكن أن يتراوح طول البادي ‪ 400 CaMV-35S‬وج قاعدي )‪. (Chenetal., 2019‬‬
‫يمكن العالور على البادي ‪ P-35S‬أيضنننننا في النباتات غير المعدلة وراثيا في النباتات المانننننابة مع‬
‫فايروس فسي سا القرنبيط ‪. (Breyeret al., 2014) Cauliflower Mosaic virus‬‬
‫‪ .2.1.9.1‬المنهي ‪Terminator :‬‬
‫يعمل المنهي ‪ terminator‬كاشنننننارة توقف نسنننننخ الموروث المدخل‪,‬العنانننننر الوراثي ث‪)T-Nos‬‬
‫اسننننتخدم على نباق واسننننع لتبوير النباتات المعدلة وراثيا وهو مشننننترك في العديد من الكالنات المعدلة‬
‫وراثيا المرخاننننة وغير الماننننرح بها‪ ,‬المنهي ‪ Synthase Terminator Nopaline‬هو من اصننننل‬
‫بكتريا ‪. (Park et al., 2015) Agrobacterium tumefaciens‬‬

‫‪18‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫‪ .2.9.1‬الجينات المعلمة ‪Gene Marker (selectable marker gene :‬‬

‫يمكن التحري عن الخايا التي تحتوي على الجين المرغوب بآسنننتعمال الجينات المعلمة ث ‪marker‬‬
‫‪ )gene‬التي تربط مع اجزا الـنننننننن ‪ DNA‬قبل حدوث عملية النقل ‪ ,‬حيث تنمو الخايا على بيئة رعية‬
‫انتقالية يحتوي على المضنننناد الحيوي الذي يشنننن ر له الجين المعلم ‪ ,‬وفي هذه االثنا سننننيسننننمح الوسننننط‬
‫الزرعي فقط بنمو الخايا التي وصننننل اليها الجين المبلوب فقط كونها سننننتاننننبح مقاومة لهذا المضنننناد‬
‫الحيوي ‪ ,‬على العكس التنمو الخايا غير المحتوية على الموروث المرغوب )‪. (Miki et al., 2004‬‬
‫وفي الوقت الحاضننر توجد العديد من انظمة الجينات المعلمة ‪ Gene Marker‬التي انتجت لهذا الغرض‬
‫)‪.(Rosellini, 2011‬‬
‫‪ .10.1‬مخاطر ومنافع استخدام النباتات المعدلة وراثيا ‪:‬‬
‫‪Risks and Benefits of using GM plants‬‬
‫يذكر بعض العلما أن الكالنات المحورة وراثيا تس أهم بتقديم فوالد فيما يتعلق بتوافر البعام في جميع‬
‫أ‬
‫بلدان العالم ‪ ،‬على الجانب االخر يقول القسم االخر من العلما إن الكالنات المهندسة وراثيا ت أسب أ‬
‫ب آثارا‬
‫ضارة على الاحة وأنها مضرة للبيئة ‪ ,‬نظرا لوجود الكالير من التقارير المتناقضة فإن الحاول على‬
‫تقارير صحيحة ودقيقة وموثوقة فيما يتعلق بتأثيرات الكالنات المحورة جينيا أمر صعب ‪(Pauwels et‬‬
‫) ‪.al.,2015‬‬
‫هناك قلق فيما يتعلق بالتدفق الجيني من النبات المحور جينيا الى البيئة وكذلك انتقال جينات مقاومة‬
‫المضادات الحيوية والحساسية من المنتجات المهندسة وراثيا ث‪. )Dona & Arvanitoyannis, 2009‬‬
‫‪ .1.10.1‬المخاطر الناشئة عن استخدام النباتات المعدلة وراثيا‪:‬‬
‫‪Risks arising from the use of GM plants‬‬
‫يركز النقاش حول األطعمة المعدلة وراثيا في الغالب على عدم اليقين بشأن اآلثار العكسية المحتملة‬
‫لذغذية المعدلة وراثيا على صحة اإلنسان والسامة البيئية ‪ ,‬يمكن أن يأعزى القلق بين المستهلكين إلى‬
‫عدة أسباب منها‪ :‬ث‪ )1‬المخاوف بشأن النشر غير السليم لذغذية المحورة وراثيا ث‪ )2‬المبادئ األخاقية‬
‫الكامنة في تجهيز األغذية التقليدية ث‪ )3‬المخاوف بشأن مدى ك اية تقييم األغذية المعدلة وراثيا ‪(Wolt,‬‬
‫)‪.2010‬‬
‫إن التقنيات المسننننتخدمة في الوقت الحاضننننر ال تزال غير ك ؤة بدرجة كافية اذ أن اسننننتيعاب الناقل‬
‫الذي يحتوي على المورثات يحدث فى نسنننبة تكاد تكون قليلة فقط من االنسنننجة المراد تعديلها جينيا ‪ ,‬كما‬

‫‪19‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫أن من الاننننننعب حاليا تحديد وتوجيه مكان ادخال الموروث وعليه فإن ايراد الجين يتم بشننننننكل غير‬
‫دقيقثعشنننوالي) و سنننط الـننننننننن ‪ DNA‬و هذا يمكن أن يسنننبب تغيير فى مقدرة الـننننننننن ‪ DNA‬على التحكم‬
‫بالعمليات األيضية وتتااعد المخاطر ألن الموروث المدخل ال يعبر عن ن سه ببريقة صحيحة او أماللى‬
‫اال إذا تمإدخا ألهأ فى منبقة فعالة من الـ ‪ DNA‬ث‪.)Allison and Palma, 1997‬‬
‫‪ .1.1.10.1‬المخاطر الصحية‪Health risk:‬‬
‫بالرغم من مما حققت تببيقات الهندسننة الوراثية من انجا ات لخدمة البشننرية فقد اثير على منتجاتها‬
‫مخاوف وجدال ساخنا ما الت مستمرة الى االن ومن المحتمل ان تهدد الاحة العامة وكذلك البيئة ‪,‬هناك‬
‫مخاطر صنننننحية محتملة مرتببة باألغذية المحورة وراثيا منها‪ :‬السنننننمية ‪ ،‬الحسننننناسنننننية والجين ال أمدرج‬
‫وبروتيناته ال أمعبر عنها ‪ ،‬واآلثار الالانوية لمنتجات التعبير الجيني ‪ ,‬واإل عاج المحتمل للجينات الببيعية‬
‫في الكالن الحي ال أمعالج ث ‪.) Bawa & Anilakumar et al., 2013‬‬
‫تم ايجاد ذرة محورة وراثيا تنتج االفدين وهي مبيد حشري يسبب يادة في نقص فيتامينات الجسم ‪,‬‬
‫وايضننا نو اخر من الذرة المعدلة وراثيا تنتج الروتينين وهي مادة مخالرة للدم وتسننبب مرض البنكرياس‬
‫لا نسنننان والحيوان‪ .‬تناول االطعمة المعدلة وراثيا يسنننبب اضنننبرابات في تنظيم االنسنننولين في الجسنننم‬
‫وكذلك الشيخوخة المبكرة ثجندل‪. )2015 ,‬‬
‫‪ -1‬الحساسية والسمية ‪Toxicity and Allergenicity‬‬
‫التاثيرات السنننننامة المحتملة والتحسنننننس المحتمل من منتجات النباتات المحورة جينيا والمسنننننتخدمة في‬
‫التغذية من المواضيع التي أثارت الجدل عن التأثيرات الضارة على المستهلكين )‪.)Wong, 2013‬‬

‫ومن األسننباب المحتملة لتلك التأثيرات ان يكون الجين او الجينات الغريبة المسننتخدمة في تحوير النبات‬
‫ذات سنننننمية مباشنننننرة على اإلنسنننننان ‪ ,‬او أنها قد تغير في تركيب مكونات النبات الغذالية مالل رفع مسنننننتوى‬
‫السنننموم الببيعية التي تحويها بعض النباتات بكميات صنننغيرة ‪ ،‬وقد تنتج النباتات المحورة بروتينات تسنننبب‬
‫ت اعات الحساسية )‪. (Jin et al., 2017‬‬

‫تمتل ك البروتينات التي تنتجها أي جينات تم إدخالها القدرة على التسبب في استجابة حساسية إضافية مالل‬
‫الذرة ‪ Starlink‬تقدم مالاال على الخبر الغذالي الناجم مباشننرة عن التـننننننننعبير عن الجين المدخل ثالسننعدي‬
‫واخرون‪. (2012,‬‬

‫‪20‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫ويرى ‪ Galvin‬في عام ث‪ )1998‬ان عملية ادخال الجين بالبرق الجزيئية هي عملية عشوالية ومن المحتمل‬
‫ان تحول تنظيم تعبير جينات أخرى و إنتاج مركبات سنننننامة‪ .‬ويبدو حتى اآلن عدم تسنننننجيل حاالت تسنننننمم‬
‫غذالي من المحاصننننننيل المحورة جينيا‪ ,‬و يرجع ذلك الى االختبارات التي تأخذ في االعتبار االحتماالت‬
‫السابقة و فقا للقوانين المنظمة‪ ,‬اال ان المخاوف قد تتحقق احيانا ‪ ,‬تسبب نقل جين من الـنننننن ‪ Brazil nut‬الى‬
‫فول الاننويا ت اعات حسنناسننية شننديدة لاشننخاص المسننجل تحسننسننهم من الـننننننن ‪ Brazil nut‬ولم يسننبق لهم‬
‫التحسس من فول الاويا )‪.(Dona & Arvanitoyannis, 2009‬‬

‫ويعود السبب الي احتمال تشفير الموروث المنقول لبروتينات مسببة للحساسية من محصول ‪Brazil‬‬
‫‪.(Van Putten et al.,2011) nut‬‬

‫‪ .2.1.10.1‬المخاطر البيئية‪Ecological risks:‬‬

‫باإلضنننافة إلى اآلثار المباشنننرة المحتملة على صنننحة اإلنسنننان ‪ ،‬فإن النباتات المعدلة وراثيا لها أيضنننا‬
‫تأثيرات بيئية على الكالنات غير المسننننننتهدفة ثال كالنات التي ليسننننننت آفات) ‪ ،‬مالل البيور والحشننننننرات‬
‫والديدان والنحل واألسماك )‪.) Pavoneet al., 2011‬‬
‫تتمالل المخاطر البيئية المحتملة األخرى في اسننننننتمرار الجين ب عد جني ال كالنات الم عدلة وراثيا ‪،‬‬
‫وإمكانية عدم استقرار الجينات ‪ ،‬أو فقدان التنو البيولوجي ث‪.) Wong, 2013‬‬
‫تنشننننأ مشنننناكل صننننحية كاليرة ‪ ،‬مالل لالعبث بالببيعة األمل ‪ ،‬من المخاوف الاننننحية التي يجب على‬
‫المستهلكين إدراكها من النباتات المقاومة لآلفات والمبيدات الحشرية )‪. (Jeschke et al., 2013‬‬
‫ياف تبور اآلفات واألعشاب الضارة المقاومة للجراثيم واألعشاب الضخمة م شكلة أخرى ‪ ,‬يمكن‬
‫أن تتبور المقاومة عند اسننتمرار الموروث باالنتشننار في البيئة بعد حانناد المحاننول قويا بدرجة كافية‬
‫)‪.)Breckling et al., 2011‬‬
‫هناك مشنننكلة أخرى وهي الشنننك فيما إذا كانت الخاصنننية المقاومة لآلفات لهذه المحاصنننيل يمكن أن‬
‫تهرب إلى أقاربها من األعشننناب الضنننارة مسنننببة يادة في مقاومة األعشننناب الضنننارة &‪.( Hilbeck‬‬
‫)‪.Otto, 2015‬‬
‫ومن الممكن أيضننننا أنه إذا تسننننببت النباتات المقاومة للحشننننرات في يادة الوفاة في آفة معينة ‪ ،‬فقد‬
‫يؤدي ذلك إلى تقليل المنافسة واستدعا اآلفات الاغيرة لتابح مشكلة كبيرة ‪ ,‬باإلضافة إلى ذلك ‪ ،‬يمكن‬
‫أن يتسننننننبب انتقال سننننننكان اآلفات إلى مجموعة نباتية أخرى لم يتم تهديدها ‪(Bawa&Anilakumar,‬‬
‫)‪. 2013‬‬

‫‪21‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫أيضننننننا ‪ ،‬من وجهة نظر السننننننمية ‪ ،‬هناك حاجة أيضننننننا إلى إجرا تحقيقات لتحديد ما إذا كانت بقايا‬
‫مبيدات األعشنننناب أو النباتات المقاومة لآلفات يمكن أن تلحق الضننننرر بمجموعات رليسننننية من الكالنات‬
‫الموجودة في التربننة المحيبننة ‪ ،‬مالننل البكتيريننا وال بريننات والنندينندان الخيبيننة والكننالنننات الحيننة النندقيقننة‬
‫األخرى )‪.(Tsatsakis et al., 2017; Allison & Palma, 1997‬‬
‫‪ .2.10.1‬فوائد النباتات المعدلة وراثيا ‪Benefits of GM plants‬‬
‫بالرغم من التأثير السنننننلبي الذي يأعتقد أنه يحيط باألطعمة المحورة وراثيا ‪ ،‬هناك العديد من الجوانب‬
‫الم يدة التي تأتي من اسننننننتخدام األطعمة والمحاصننننننيل المحورة وراثيا ‪(Wolfenbarger & Phifer,‬‬
‫)‪.2000‬‬
‫مالا فهي قادرة على يادة إنتاج الغذا في جميع أنحا العالم عن طريق تحسين الغلة من خال يادة‬
‫مقاومة اآلفات المحاصيل وتحمل الظروف البيئية القاسية )‪. (Moellenbeck et al., 2001‬‬
‫‪.1.2.10.1‬مقاومة االفات ‪Pest resistance‬‬

‫قد تكون خسالر المحاصيل من آفات الحشرات مذهلة ‪ ،‬مما يؤدي إلى خسالر مالية مدمرة للمزارعين‬
‫وتجويعهم في البلدان النامية )‪.(Rani & Usha, 2013‬‬
‫يستخدم المزارعون عادة العديد من أطنان المبيدات الكيميالية سنويا )‪.) Tabashnik, 2010‬‬
‫من أماللة الجينات التي تم نقلها هي جينات بي تي )‪ (Bt‬المقاومة للحشننننرات والتي تم نقلها من بكتريا‬
‫‪ , acillusthuringiensis‬وهذا النو من البكتريا يقوم باننننع مواد سنننامة ضننند يرقات ال راشنننات التي‬
‫تاننيب نبات الذرة ‪ ،‬وبعض منها له اضننرار مميته على أنوا أخرى من الحشننرات ‪,‬وبعد أن تم نقل هذه‬
‫الجينات الى المادة الوراثية لمحانننننول الذرة أصنننننبحت هنالك المقدرة لنباتات هذا المحانننننول المهندس‬
‫وراثيا لمقاومة الحشرات التي تايبه ‪ ,‬يمكن أن تساعد الذرة في القضا على استخدام المبيدات الكيميالية‬
‫وتقليل تكل ة طرح المحانننول إلى السنننوق ‪ ,‬جعلت المحاصنننيل المعدلة وراثيا ‪ ،‬التي تحتوي على جينات‬
‫مقاومة للحشننرات من بكتيريا ‪ ، B. Thuringiensis‬من الممكن تقليل كمية المبيدات الحشننرية إلى حد‬
‫كبير ث‪.) Carrière et al., 2016‬‬
‫‪ .2.2.10.1‬تحمل مبيدات اْلعشاب )‪Herbicide tolerance (HT‬‬
‫تعتبر الحشننالش عناننر محدد لنمو النبات لتسننببها في ضننعف المحاننول بما يعادل ‪ %10‬في العديد‬
‫من التقديرات ‪ ,‬وتؤثر االدغال على صننننننحة اللبالن في كالير من الجوانب اهمها مشنننننناركة المحاننننننول‬
‫المزرو في غذاله وتعبي ظروف مناسنننبة مما يسننناعد على جلب االفات الحاملة لل يروسنننات كذلك من‬

‫‪22‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫المحتمل ان تعمل كمخا ن للمسببات المرضية خاصة ال يروسات التي من المحتمل ان تنتقل منها للنبات‬
‫المزرو محدثة اصابات خبيرة لهذا السبب تقاوم االعشاب الضارة بعدة اساليب عديدة اهمها استعمال‬
‫مبيدات االعشنننننناب او االدغال التي يجب ان التكون له تاثير سننننننمي لكا االنسننننننان والحيوان والنباتات‬
‫االقتاادية والكالنات الدقيقة في التربة من الضروري ان يتم انتقاله من موقع االستعمال على المحاول‬
‫الى القمم النامية وكذلك ان يكون اختياري في عمله أي انه يؤثرعلى الحشنننالش واليؤثر على المحانننول‬
‫ومن القليل توفر مبيد يمتلك كل الشننروط كما ان مبيدات االدغال الضننارة المتوفرة في الوقت‬ ‫المزرو‬
‫الحاضر ليست اختيارية لذا ترش المزرعة قبل راعته كما هو الحال في مبيد ‪ , glyphosate‬تم إدخال‬
‫أو اختيار الجينات التي تتحمل مبيدات األع شاب في العديد من األنوا األخرى ‪ ،‬بما في ذلك جميع أنوا‬
‫المحاصننننننيل الرليسننننننية في العالم تقريبا وأنوا الزينة‪ .‬في بعض الحاالت ‪ ،‬تم اسننننننتخدام جينات مبيدات‬
‫االعشاب )‪ )HT‬كعامة اختبار )‪.(Rani & Usha, 2013‬‬
‫‪.3.2.10.1‬مقاومة اْلمراض ‪Disease resistance‬‬
‫هنالك العديد من ال ايروسات ‪ ,‬البكتريا وال بريات التي تسببب امراض للمحاصيل النباتية ‪,‬يعمل‬
‫علما االحيا النباتية على هندسة ناتات وجعلها مقاومة لامراض التي تايب المحاصيل النباتية على‬
‫سبيل المالال نبات البماطم والتبغ المقاوم لل ايروس‪ TMV‬ث‪.)Scorza et al., 2001‬‬
‫ومن المحاصيل المحورة جينيا باستخدام غاف ال يروس والمقاومة لل يروسات هومحاول البباطا‬
‫‪.‬‬ ‫المقاوم ل ايروس البباطا‪ ,‬ومحاول الر المقاوم ل يروس ‪(Rani &Usha, 2013) RSV‬‬
‫‪ .4.2.10.1‬الفوائد الغذائية ‪Nutritional benefits‬‬
‫الر المبحون هو الغذا الرليسنننني لجز كبير من سننننكان العالم ‪ ,‬لم تنجح طرق التكاثر التقليدية في‬
‫إنتاج المحاصيل التي تحتوي على نسبة عالية من فيتامين ‪ , A‬الر المبحون هو الغذا األساسي لجز‬
‫كبير من سننننننكان العالم ‪ ,‬أدخل الباحالون ثاثة جينات في الر ‪ :‬اثنان من أ هار النرجس واألخرى من‬
‫يننادة في إنتنناج كنناروتين ‪ B‬ث‪)β-carotene‬‬ ‫الكننالنننات الحيننة النندقيقننة‪ ,‬يأظهر الر المحور وراثيننا‬
‫كمشتقات ل يتامين ‪ A‬والبذور يكون لونها اص ر )‪.(Ye et al., 2000‬‬
‫قد يكون مالل هذا الر األصنننننن ر أو الذهبي أداة م يدة لمعالجة مشننننننكلة نقص فيتامين ‪ A‬في األط ال‬
‫‪,‬والشباب الذين يعيشون في المناطق االستوالية )‪.(Rani &Usha, 2013‬‬
‫تم العالور على أر التكنولوجيا الحيوية مع يادة محتوى ال يريتين لتجديد تركيزات الهيموجلوبين‬
‫وحديد الكبد في تجارب ال ئران مما يشنير إلى مسناهمة الهندسنة الوراثية في حل دالم للمشنكات العالمية‬

‫‪23‬‬
 ‫استعراض المراجع‬ ‫ال ال األول‬

‫لنقص الحديد مالا تضمن نقل موروث ال يرتين ث‪ )Ferritin gene‬من ال اصوليا يعمل هذا الجين على‬
‫يادة تجمع الحديد وكذلك يستعمل على تحسين امتااص الحديد في امعا االنسان ويوجد هذا الجين في‬
‫فول الاننويا للبروتين المخزن للحديد ث‪ , )Ferinin‬يمكن رفع القيمة الغذالية لمنتجات بعض المحاصننيل‬
‫الحقلية بإضافة جينات مالمة مأخوذة من نباتات أخرى )‪. (Wang et al., 2013‬‬
‫‪ .11.1‬اهمية دراسة المكونات الكيميائية لحبوب فول الصويا‬
‫تحظى الحبوب بأهمية بالغة في الزراعة العالمية بسنننننبب ارتباطها باألمن والسنننننامة الغذالي للشنننننعوب‬
‫‪,‬تعتبرالحبوبمنأهممانننادرالغذا لانسنننانوالحيوانمن بين اسنننتخداماته يدخل في صنننناعة الزيوت النباتية و‬
‫كذلك تعتبر البذورمادرمهم لذدويةوالعقاقير ثالسعدي واخرون‪.)2012,‬‬
‫يعتمد العراق على استخدام حبة فول الاويا المستوردة من الخارج وباسعار غالية والتي تستعمل في غذا‬
‫الحيوانات الداجنة المجهز في العليقة كمادر اساسي للبروتين ‪ ,‬ولتاثيرها المباشر في انتاج فروج اللحم‬
‫ونوعيته ‪ ,‬يقع ترتيب فول الاويا من حيث االنتاج العالمي للبذور في مقدمة المحاصيل الزيتية‪ ,‬بلغت‬
‫انتاجيته في سنة ‪ 1997‬حوالي ‪ 132.112‬مليون طن مايعادل ‪ %30‬عالميا من الزيت المنتج ‪ ,‬وتمتلك‬
‫بذوره على نسبة يت ث ‪( %22 – 16‬ونسبة البروتين ث ‪ , )%42 – 36‬فول الاويا هو المنتج الوحيد‬
‫الذي تمتلك بذوره جميع االحماض االمينية االساسية لنمو االنسان والحيوان ‪ ,‬محاول فول الاويا ادخل‬
‫الى العراق سنة ‪ 1992‬ثالعبيدي واخرون ‪.)2003 ,‬‬
‫وتحوي بذوره معظم االحماض االمينية االسنننننناس لنمو االنسننننننان عدا االحماض االمينية الكبريتية مالل‬
‫الميالايونين ثاالميري واخرون ‪.)2009 ,‬‬
‫أما بالنسنبة للبذور البقولية ومنها ال ول والعدس فتتميز بأنها تحتوي على نسنبة مرت عة من البروتين‬
‫‪ ،‬ويختلف التركينب الكيمينالي إختافنا جوهرينا وفقنا للعوامنل الوارثينة والبيئينة ‪ ،‬وتتميز بنذورال ول‬
‫بمحتوى عالي نسبيا من البروتين ثاسماعيل ‪.)1997,‬‬

‫‪24‬‬
‫الفصل الثاني‬
‫المواد وطرائق‬
‫العمل‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

Materials and Methods ‫المواد وطرائق العمل‬.2

‫ المواد واالجهزة المستخدمة‬.1.2
Equipment’s and instruments ‫ االدوات والمعدات‬.1.1.2
:)1.2‫االدوات والمعدات المستخدمة في الدراسة الحالية ث‬
‫ االدوات والمعدات والشركات المصنعة لها‬1.2 ‫جدول‬
‫الشركة المصنعة‬ ‫المنشا‬ ‫المعدات‬ ‫ت‬
Sony Japan Autoclave ‫الموصدة‬ 1
CYAN-Cypress Japan Digital camera ‫كاميرا رقمية‬ 2
BioBasic Inc. Belgium Eppendrof tubes ‫انابيب ابندروف‬ 3
Concord Lebanon Freezer ‫مجمدة‬ 4
‫نظام تاوير الهام‬ 5
Cleaver Scientific UK Gel documentation system
‫حاوية النتروجين السالل‬ 6
Native Industrialization USA Liquid Nitrogen container
)‫جها البرد المركزي ثانابيب ابندروف‬ 7
Witeg Germany Microcentrifuge
Hettich Germany )‫أطراف الماصة الدقيقة ثكل االحجام‬ 8
Micropipette tips(all size)
Slamed Germany )‫الماصة الدقيقة ثكل االحجام‬ 9
Micropipettes (all size)
Cleaver scientific UK ‫جها البلمرة الحراري‬ 10
Thermo Cycler PCR

‫جها األشعة فوق البن سجية‬ 11

LAB- LINE UK UV- Transilluminator

26
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

Tomy USA Vortex mixer ‫محرك مغناطيسي‬ 12

Biobase China cabinatBiosafety ‫حجرة التعقيم‬ 13

‫جها الترحيل الكهربالي االفقي‬ 14

Cleaver Scientific UK Horizontal Gel electrophoresis
Sartorius Germany Sensitive balance ‫ميزان حساس‬ 15

Tharco China Mortal‫هاون خزفي‬ 16

Tharco China Micro pesttil ‫مدقة صغيرة‬ 17

Gosonic China Microwave Oven‫ال رن الموجي‬ 18

Labwerench Canda spectro ‫جها المبياف الضولي‬ 19

phptometer

Chemicals and Solutions‫ المواد الكيميائية‬.2.1.2

) 2.2‫المواد الكيميالية والمحاليل المستخدمة في هذه الدراسة في جدول ث‬
.‫ المواد الكيميائية او المحاليل والشركات المصنعة لها‬2.2 ‫جدول‬
‫الشركة المصنعة‬ ‫المنشأ‬ ‫المواد الكيميائية‬ ‫ت‬
BHD Canada Agarose ‫آكارو‬ 1
Nuclease-Free Water
Sigma USA 2

‫صبغة بروميد االثيديوم‬

4
Siga USA Ethidium Bromide stain
‫محلي‬ ‫العراق‬ Liquid nitrogen ‫النتروجين السالل‬ 5
Promega USA TBE buffer ‫محلول دارئ‬ 6

27
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫الكحول االثيلي ذو تركيز ‪%70‬‬

‫‪Teeba‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪7‬‬
‫‪Ethanol 70%‬‬
‫الكحول االثيلي ذو تركيز ‪96‬‬
‫‪Teeba‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪8‬‬
‫‪96%Ethanol‬‬ ‫‪%‬‬
‫‪Geneaid‬‬ ‫‪Taiwan‬‬ ‫انزيم تحلل البروتين ‪Proteinase-K‬‬
‫‪9‬‬

‫‪Geneaid‬‬ ‫‪Taiwan‬‬ ‫انزيم تحلل الــ ‪RNase‬‬ ‫‪10‬‬

‫‪ .3.1.2‬العدد التشخيصية ‪Diagnostic kits:‬‬

‫العدد المستخدمة في الدراسة الحالية مع المادر جدول ث‪)3.2‬‬
‫جدول ‪ 3.2‬العدد المستخدمة في هذه الدراسة والشركات المصنعة لها‪.‬‬
‫‪TYPE OF KIT‬‬ ‫‪COMPANY‬‬ ‫‪ORIGIN‬‬

‫‪Go Taq®Green master mix PCR‬‬ ‫‪Biolabs‬‬ ‫‪Germany‬‬

‫‪Oligonucleotide Primers‬‬ ‫‪Macrogen‬‬ ‫‪Korea‬‬
‫‪DNA Ladder (100-1500) bp‬‬ ‫‪iNtRon‬‬ ‫‪Korera‬‬

‫‪. i-genomic Plant DNA extraction Mini Kit‬‬ ‫‪iNtRon‬‬ ‫‪Korera‬‬

‫)‪Catalogue number (17371‬‬

‫‪ .2.2‬طرائق العمل ‪Methods‬‬

‫‪ .1.2.2‬جمع العينات النباتية ‪Collection of plant samples‬‬
‫جمعت ‪ 91‬عينة غذالية وعل ية ثحبوب فول الاويا ‪-‬كسبة الاويا‪ ,‬حبوب الر ‪ ),‬باورة عشوالية ومن‬
‫ماادر مختل ة وهي كربا ‪ ,‬والنجف ‪ ,‬وبغداد‪ ,‬وو ارة الزراعة ‪ /‬قسم المحاصيل والبذوروكما موضحة في‬
‫الجدول ‪ 4.2‬لمحاول فول الاويا ومشتقاتها وكذلك جدول ‪ 5.2‬لمحاول الر على التوالي‪.‬‬

‫‪28‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫جدول ‪4.2‬اْلصناف قيد الدراسة مع مصدرها واصل نشؤها لمحصول فول الصويا ومشتقاتها‬
‫المصدر‬ ‫المنتج‬ ‫العينة‬ ‫الرمز‬ ‫ت‬
‫االسواق المحلية‬ ‫‪Suhol AL‬‬ ‫كسبة فول الاويا مستوردة امريكية‬ ‫‪S1‬‬ ‫‪.1‬‬
‫كربا‬ ‫‪Khairat Co‬‬ ‫‪Healthy Fead No.1‬‬

‫االسواق المحلية‬ ‫‪Suhol AL‬‬ ‫كسبة فول الاويا مستوردة برا يلة‬ ‫‪S2‬‬ ‫‪.2‬‬
‫كربا‬ ‫‪Khairat Co‬‬ ‫‪Healthy Fead No.2‬‬

‫االسواق المحلية‬ ‫‪Suhol AL‬‬ ‫كسبة فول الاويا مستوردة‬ ‫‪S3‬‬ ‫‪.3‬‬
‫كربا‬ ‫‪Khairat Co‬‬ ‫ارجنتينية‬
‫‪Healthy Fead No.3‬‬

‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪S4‬‬ ‫‪.4‬‬

‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Lee74‬‬ ‫‪S3‬‬ ‫‪.5‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Qt5‬‬ ‫‪S4‬‬ ‫‪.6‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪S5‬‬ ‫‪.7‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫حويجة‪101‬‬ ‫‪S6‬‬ ‫‪.8‬‬
‫الزراعة‪/‬بغداد‪/‬‬
‫ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫صويا ابا‬ ‫‪S7‬‬ ‫‪.9‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Energy 2‬‬ ‫‪S8‬‬ ‫‪.10‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪QTLI‬‬ ‫‪S9‬‬ ‫‪.11‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬

‫‪29‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Dh4‬‬ ‫‪S10‬‬ ‫‪.12‬‬

‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Dt84‬‬ ‫‪S11‬‬ ‫‪.13‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Basir‬‬ ‫‪S12‬‬ ‫‪.14‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Tn3‬‬ ‫‪S13‬‬ ‫‪.15‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪S16‬‬ ‫‪.16‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬‬ ‫‪Iraq‬‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪S17‬‬ ‫‪.17‬‬
‫بغداد‪ /‬ابوغريب‬

‫جدول ‪ 5.2‬اْلصناف قيد الدراسة مع مصدرها واصل نشؤها لمحصول الرز‪.‬‬

‫المصدر‬ ‫المنتج‬ ‫العينة‬ ‫الرمز‬ ‫ت‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Royal Staylon‬‬ ‫‪R1‬‬ ‫‪1‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Inidia Gate‬‬ ‫‪R2‬‬ ‫‪2‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪Pakistan‬‬ ‫‪Seven Start‬‬ ‫‪R3‬‬ ‫‪3‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪Pakistan‬‬ ‫‪ALtaiyab XL‬‬ ‫‪R4‬‬ ‫‪4‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪272‬‬ ‫‪R5‬‬ ‫‪5‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪U.S.A‬‬ ‫‪Chopstick‬‬ ‫‪R6‬‬ ‫‪6‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪El-manara‬‬ ‫‪R7‬‬ ‫‪7‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Maharaja‬‬ ‫‪R8‬‬ ‫‪8‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Almurad‬‬ ‫‪R9‬‬ ‫‪9‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Magellan‬‬ ‫‪R10‬‬ ‫‪10‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Beladi‬‬ ‫‪R11‬‬ ‫‪11‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪U.S.A‬‬ ‫‪Uncle Bens white rice‬‬ ‫‪R12‬‬ ‫‪12‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Durra‬‬ ‫‪R13‬‬ ‫‪13‬‬

‫‪30‬‬
‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Kohinoor‬‬ ‫‪R14‬‬ ‫‪14‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪U.S.A‬‬ ‫‪Adolphus‬‬ ‫‪R16‬‬ ‫‪15‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Shahjahan‬‬ ‫‪R17‬‬ ‫‪16‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪Iraqi‬‬ ‫‪Nafees‬‬ ‫‪R18‬‬ ‫‪17‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪Iraqi‬‬ ‫‪Baghdady‬‬ ‫‪R19‬‬ ‫‪18‬‬
‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪AL-reef‬‬ ‫‪R20‬‬ ‫‪19‬‬
‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Kass India‬‬ ‫‪R21‬‬ ‫‪20‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Basma‬‬ ‫‪R22‬‬ ‫‪21‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Babaker‬‬ ‫‪R23‬‬ ‫‪22‬‬

‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪/‬‬ ‫‪Thailand‬‬ ‫‪Good garish rice‬‬ ‫‪R24‬‬ ‫‪23‬‬

‫ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪/‬‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Bunjabi Almuhaidib‬‬ ‫‪R25‬‬ ‫‪24‬‬
‫ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪/‬‬ ‫‪Thailand‬‬ ‫‪Thai rice Normal‬‬ ‫‪R26‬‬ ‫‪25‬‬
‫ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪/‬‬ ‫‪Uruguay‬‬ ‫‪South American rice‬‬ ‫‪R27‬‬ ‫‪26‬‬
‫ابوغريب‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪/‬‬ ‫‪Thailand‬‬ ‫)‪Thai rice mark(R‬‬ ‫‪R28‬‬ ‫‪27‬‬
‫ابوغريب‬
‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Pakistan‬‬ ‫‪Cano‬‬ ‫‪R29‬‬ ‫‪28‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Shaalan‬‬ ‫‪R30‬‬ ‫‪29‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Thailand‬‬ ‫‪Thai to day‬‬ ‫‪R31‬‬ ‫‪30‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Thailand‬‬ ‫‪Yod Doy‬‬ ‫‪R32‬‬ ‫‪31‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪OURO‬‬ ‫‪R33‬‬ ‫‪32‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Kateer‬‬ ‫‪R34‬‬ ‫‪33‬‬

‫‪31‬‬
‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Codawari‬‬ ‫‪R35‬‬ ‫‪34‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Pakistan‬‬ ‫‪AL-sulatan‬‬ ‫‪R36‬‬ ‫‪35‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Jawahir‬‬ ‫‪R37‬‬ ‫‪36‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Mohsen‬‬ ‫‪R38‬‬ ‫‪37‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Bondi‬‬ ‫‪R39‬‬ ‫‪38‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Zain‬‬ ‫‪R40‬‬ ‫‪39‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Eldoha golden rice‬‬ ‫‪R41‬‬ ‫‪40‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Almasre‬‬ ‫‪R42‬‬ ‫‪41‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Eltaif‬‬ ‫‪R43‬‬ ‫‪42‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪White swan‬‬ ‫‪R44‬‬ ‫‪43‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Haley‬‬ ‫‪R45‬‬ ‫‪44‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Haley‬‬ ‫‪R46‬‬ ‫‪45‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Green Farms‬‬ ‫‪R47‬‬ ‫‪46‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪U.S.A‬‬ ‫‪Maxims‬‬ ‫‪R48‬‬ ‫‪47‬‬

‫االسواق المحلية‪/‬بغداد‬ ‫‪Egypt‬‬ ‫‪Abu Ali‬‬ ‫‪R49‬‬ ‫‪48‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Almazraah‬‬ ‫‪R50‬‬ ‫‪49‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Ishtar‬‬ ‫‪R51‬‬ ‫‪50‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪ALWAZEER‬‬ ‫‪R52‬‬ ‫‪51‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪KEEVA‬‬ ‫‪R53‬‬ ‫‪52‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪ALBAKHERA‬‬ ‫‪R54‬‬ ‫‪53‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪GIHAN‬‬ ‫‪R55‬‬ ‫‪54‬‬

‫‪32‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪AL-ALAMAIN‬‬ ‫‪R56‬‬ ‫‪55‬‬

‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Biriany King‬‬ ‫‪R57‬‬ ‫‪56‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬بغداد‬ ‫‪India‬‬ ‫‪BAKHSHAYESH‬‬ ‫‪R58‬‬ ‫‪57‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Firdos‬‬ ‫‪R59‬‬ ‫‪58‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Ahmed Gold‬‬ ‫‪R60‬‬ ‫‪59‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪DAAWAT‬‬ ‫‪R61‬‬ ‫‪60‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪MAHMOOD‬‬ ‫‪R62‬‬ ‫‪61‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Basmati Sela‬‬ ‫‪R63‬‬ ‫‪62‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Gulbaahar‬‬ ‫‪R64‬‬ ‫‪63‬‬

‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬ ‫‪India‬‬ ‫‪Basri‬‬ ‫‪R65‬‬ ‫‪64‬‬

‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫عنبر البركة‬ ‫‪R66‬‬ ‫‪65‬‬

‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫مشخاب ‪2‬‬ ‫‪R67‬‬ ‫‪66‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫عنبر عباسية‬ ‫‪R68‬‬ ‫‪67‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫عنبر ‪33‬‬ ‫‪R69‬‬ ‫‪68‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫برنامج ‪4‬‬ ‫‪R70‬‬ ‫‪69‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬

‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫ابا ‪1‬‬ ‫‪R71‬‬ ‫‪70‬‬

‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫مشخاب ‪1‬‬ ‫‪R72‬‬ ‫‪71‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬

‫‪33‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫عنبر ياسمين‬ ‫‪R73‬‬ ‫‪72‬‬

‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫فرات ‪1‬‬ ‫‪R74‬‬ ‫‪73‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬
‫و ارة الزراعة‪/‬محبة‬ ‫صنف محلي‬ ‫بحوث ‪1‬‬ ‫‪R75‬‬ ‫‪74‬‬
‫أبحاث الر في المشخاب‬

‫ووضعت العينات في اكياس باستيكية معقمة محكمة السد‪,‬والتي تم الحاول عليها خال مدة الدراسة التي‬
‫بدأت من شهر كانون االول ‪ 2019‬ولغاية شهر اذار ‪.2020‬‬
‫اتبعت الخبوات العزل المبينة في المخبط‪.1.2‬‬

‫‪Food sample‬‬

‫‪DNA extraction‬‬

‫‪DNA purification‬‬

‫‪GMO‬‬
‫‪scrineening‬‬

‫‪35 s &HA-NOS‬‬
‫‪PCR test‬‬

‫‪Positive‬‬ ‫‪Nagative‬‬

‫‪Comparitive‬‬
‫‪study‬‬
‫‪Sequencing Test‬‬

‫مخطط ‪ 1.2‬العمليات الرئيسية للكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا ‪.‬‬

‫‪34‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪ .2.2.2‬عزل الـ ‪ DNA‬من النماذج النباتية ‪DNA Isolation from Plant Samples:‬‬
‫تم عزل الـ ‪ DNA‬من العزالت النباتية الجافة ثحبوب فول الاويا – كسبة فول الاويا ‪,‬حبوب الر )‬
‫لذصناف المعتمدة في الدراسة باستعمال عدة استخاص )‪i-genomic DNA )Kit‬‬
‫‪plantextraction‬وحسب خبوات بروتوكول مجهزة من قبل شركة ‪. (Korea) intron‬‬
‫تم اللجو الى عدة االستخاص )‪ )IGDE‬في عزل الدنا للعزالت النباتية قيد الدراسة والتي اجريت وفق‬
‫تعليمات الشركة المانعة وكاالتي ‪:‬‬
‫‪ .1‬تم سحق العينات النباتية بواسبة الهاون الخزفي وتحت ظروف معقمة وبوجود النايتروجين السالل ‪ ,‬بعد‬
‫ذلك تمت تعبئة العينات المبحونة بشكل جيد داخل اكياس معقمة ومعلمة وتح ظ بدرجة حرارة الغرفة من‬
‫‪ 25 -15‬درجة سيليزسة‪.‬‬
‫‪ .2‬تم و ن حوالي ‪ 50mg‬من البذور المبحونة ووضعت الى انبوبة ابندروف‪,‬ثم اضيف حوالي ‪390‬‬
‫مايكروليترمن محلول ‪ Buffer PG‬الى انبوبة ابندروف التي تحتوي على العينة واضيف ‪ 7‬مايكروليتر‬
‫من محلول ‪ Enhancer solution‬و‪ 20‬مايكروليتر من محلول ‪ Protinase K‬و‪ 5‬مايكروليتر من‬
‫محلول ‪. Rnase A solution‬‬
‫‪ .3‬تم ح ظ الخليط في درجة حرارة ‪ 65‬درجة سليليزية لمدة ناف ساعة ثم مزج بهدو لمدة ‪ 15‬دقيقة‬
‫لغرض تجانس العينة‪.‬‬
‫‪ .4‬تم اضافة ‪ 100‬مايكروليتر من محلول ‪ PPT Buffer‬الى الخليط السابق ويح ظ لمدة خمس دقالق بالاللج‪.‬‬
‫‪ .5‬نبذ الخليط السابق باستخدام جها البرد مركزي لمدة خمس دقالق ‪ ,‬حوالي ‪ 13000‬دوررة ‪ ⁄‬دقيقة ‪.‬‬
‫‪ .6‬تم نقل حوالي ‪ 200‬مايكروليتر للجز البافي للخليط السابق الى انبوب ابندروف جديد ‪.‬‬
‫‪ .7‬تمت أضافة ‪ 650µl‬من محلول ث‪ ) Buffer PB‬ومزج بواسبة مايكروبايبيت‪ 6-5‬مرات من دون استعمال‬
‫الما ج الدوار‪.‬‬
‫‪ .8‬نقل الخليط الذي يحوي على حجم ‪ 650‬مايكروليترالى انبوبة ‪ Spine Column‬جديدة بعد ذلك يعمل له‬
‫طرد مركزي ‪ 13000‬دورة بالدقيقة ‪ ,‬تم التخلص من الخليط النا ل‪.‬‬
‫‪ .9‬ثم اضيف حوالي ‪ 700‬مايكروليتر من محلول ‪ Washing PWA‬وبعد ذلك ينبذ الخليط بالبرد المركزي‬
‫‪ 13000‬دورة بالدقيقة من اجل غسل الحامض النووي منقوص االوكسجين الملتاق بال لتر‪ ,‬وكذلك تم‬
‫‪ column‬جديد‪.‬‬ ‫التخلص من الخليط النا ل ومن ثم تستبدل العينة في انبوب‬

‫‪35‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪.10‬اضيف حوالي ‪ 700‬مايكروليتر من محلول ‪ Washing PWB‬وبعد ذلك نبذ الخليط بالبرد المركزي‬
‫‪ 13000‬دورة بالدقيقة من اجل غسل الالاني للحامض النووي منقوص االوكسجين الملتاق بال لتر‪.‬‬
‫‪ .11‬نبذ الخليط بجها البرد المركزي بسرعة ‪ 13000‬دورة بالدقيقة ولمدة دقيقتان ثم أ يل الراشح‪.‬‬
‫‪ .12‬نقل انبوب ال لتر الذي يحوي على الحامض النووي الى انبوب ابندروف جديد واضيف محلول ث ‪Puffer‬‬
‫‪ )PE‬الى انبوبة ابندروف بكمية ‪ 100 µl‬ثم نبذ الخليط بجها البرد المركزي بسرعة ‪ 13000‬دورة‬
‫بالدقيقة ولمدة دقيقة من اجل الحاول على الحامض النووي منقوص االوكسجين النقي‪.‬‬
‫‪ .13‬ح ظ الحامض النووي منقوص االوكسجين في التبريد من اجل عمل ت اعل سلسلة البوليمريز ‪.‬‬
‫‪ .3.2.2‬قياس تركيز ونقاوة الــ ‪DNA Concentration measurement and‬‬
‫‪purity: of DNA‬‬
‫أكشنننننننف عن الحنننامض النووي ‪ DNA‬المسنننننننتخلص من العيننننات بنننإسنننننننتخننندام جهنننا خننناص وهو‬
‫ألـنننننن‪ spectrophotometer‬ثشركة ‪ Thermo‬األمريكية) وذلك من خال عدة جوانب‪ :‬قياس نقاوة الحامض‬
‫النووي ‪ DNA‬من خال قرا ة اإلمتااصية بدرجة ث‪ )280 / 260‬نانومتر‪.‬‬
‫و تحديد تركيز الحامض النووي ث‪ .)DNA μg/ml‬ويتم القياس على النحو التالي‪:‬‬
‫‪ -1‬تشغيل جها ‪spectrophotometer‬‬
‫‪ -2‬تم تا ير ركيزة المقياس وذلك بوضع ‪ 20‬مايكرولتر من محلول )‪ buffer BE (Blank‬ويكمل الحجم‬
‫الى ‪ 1000‬مايكروليتر من محلول )‪ )ddH2O‬بإستخدام ميكروبايبيت معقمة على سبح ركيزة المقياس وإجرا‬
‫التا ير وبعدها تأنظف الركيزة لقياس العينات‪.‬‬
‫‪ -3‬تأحدد نقاوة عينات ألـ ‪ DNA‬المستخلص بقـــــــرا ة اإلمتااصـــــــية بجــــــها ‪spectrophotomete‬‬
‫على طولين موجيين ث‪ 260‬و ‪ )280‬نانومتر‪ ,‬اذ أن الحامض النووي ‪ DNA‬المستخلص يعتبر نقي عندما تكون‬
‫نسبة اإلمتااصية ‪ 2.0 –1.7‬ث‪.)Viljen et al., 2006‬‬
‫‪ .4.2.2‬الترحيل الكهربائي لمستخلص الـ ‪DNA‬‬
‫‪Agarose Gel Electrophoresis for DNA Extraction‬‬
‫‪ .1.4.2.2‬المحاليل المستخدمة في الترحيل الكهربائي‬
‫‪ .1‬دارىء )‪Tris- borate –EDTA buffer)TBE- 1X‬‬
‫حضر هذا المحلول من خال مزج ‪ 10‬مل من المحلول االصلي ‪TBE (10X) Stock‬واكمل الحجم الى‬
‫‪ 100‬مل من الما المقبر المعقم وح ظ بدرجة˚‪ 4C‬لحين االستعمال ليابح التركيز ‪X1‬‬

‫‪36‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪ .2‬محلول صبغة بروميد االثيديوم ‪Ethidium bromide )% 0.5‬‬

‫تم استعمال محلول الابغة بروميد االثيديوم الظهارحزم عينات الحمض النووي على المواد الهامية وتم‬
‫إضافة هذا المحلول المحمل بالابغة إلى عينات استخاص الحمض النووي ومنتج ت اعل البوليميرا المتسلسل‬
‫الذي سيتم ترحيله كهرباليا‪.‬‬
‫‪.3‬الدليل الحجمي للـ ‪DNADNA Molecular Size of Markers‬‬
‫جهز الدليل الحجمي المستعمل في هذه الدراسة من قبل شــركة ‪ iNtRon - Korera‬بـتركيــز ‪100‬‬
‫نانوغرامف مايكروليتر‪ ،‬وبحجم ‪ 500‬مايكروليتر ومدى يتراوح من ‪ 1500 -100‬وج قاعدي وكما موضح‬
‫في الجدول ‪.6.2‬‬
‫جدول ‪ 6.2‬الدليل الحجمي للـ ‪DNA‬‬
‫الوصف‬ ‫دليل‪DNA‬‬

‫‪ 100-1500‬وج قاعدي‬ ‫‪100 bp Plus DNA Ladder‬‬

‫‪ 11‬حزمة‬
‫‪– 700 – 600 – 500 – 400 – 300 – 200 – 100‬‬
‫‪ 1500 – 1000 – 900 – 800‬وج قاعدي‬
‫تظهر الحزم كافة بكالافة متساوية ما عدا الحزم‬
‫‪ 1500 ، 1000 ، 500‬تكون أكالر شدة وتألق ‪.‬‬
‫حجم التحميل الموصى به ‪5 μl‬ف ح رة‪.‬‬

‫‪ .2.4.2.2‬الترحيل الكهربائي على هالم االكاروز‪Agarose Gel Electrophoresis :‬‬

‫أجري الترحيل الكهربالي وفقا لـ‪Sambrook‬و‪ Russel‬ث‪ (2001‬كما ياتي‪:‬‬
‫‪ .1‬بدات عملية الهجرة الكهربالية بتحضير الهام ; وذلك بأذابة ‪ 1‬غم من االكارو في ‪ 100‬مل من‬
‫الدارى )‪ TBE (lX‬إذ تتم األذابة بتسخينه في فرن الموجي لمدة ‪ 60‬ثانية لحين إذابة كل األكارو‬
‫بعد ذلك ترك ليبرد بدرجة حرارة الغرفة‪.‬‬
‫‪ .2‬تمت اضافة ‪ 3‬مايكروليترمن محلول صبغة بروميد األثيديوم‪.‬‬

‫‪37‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪ .3‬سكب الهام في ص يحة اسناد االكارو ث‪ )Tray‬الخاصة بجها الهجرة الكهربالي وثبت مشط تكوين‬
‫الح ر ث ‪ )Comb‬على بعد ‪1‬سم من احدى حافتي الا يحة‪ ,‬وا الة ال قاعات الهوالية باستخدام راس‬
‫ماصة معقمة ‪.‬‬
‫‪ .4‬ترك الهام ليتالب لمدة ‪ 15‬دقيقة بعد ذلك رفع المشط من األكارو المتالب‪.‬‬
‫‪ .5‬تمت اضافة ‪ 5‬مايكروليتر من مزيجناتج ت اعل البلمرة المراد تهجيره في ح رة الهام‪.‬‬
‫‪ .6‬وكذلك تمت اضافة الدليل الحجمي ث‪ )DNAMarker‬بمقدار‪ 5‬مايكروليتر في ح رة الهام واستعمل‬
‫هذا لمعرفة حجم قبع ‪ DNA‬المعزولة‪,‬وثبتت الا يحة على ساندها في وحدة الترحيل ث‪)Cell unit‬‬
‫الحاوية على دارى )‪ TBE(IX‬وتم بعد ذلك تغبية الهام بأرت ا ث‪ )1-2‬مل من الدارى ن سه‪.‬‬
‫‪ .7‬تم وضع غبا جها الترحيل الكهربالي ‪ ,‬ووصلت االقباب ورحلت النماذج كهرباليا ب ولتية‬
‫مقدارها ث‪ )100‬فولت لمدة ساعة أي بمدة كافية تتناسب مع الو ن الجزيئي للـ‪ DNA‬المرحل‪.‬‬
‫‪ .8‬ضغط ر ايقاف الباقة الكهربالية ورفع غبا جها الترحيل الكهربالي بعد استكمال الوقت ‪,‬‬
‫ورفعت الا يحة من وحدة الترحيل الخاصة بالجها وج ت من المحلول دارى )‪ TBE (IX‬ومن‬
‫ثم تم الكشف عن حزم الدنا وتاويرها وذلك بتعريض الهام لاشعة فوق البن سجية ‪.‬‬
‫‪ .5.2.2‬ظروف تفاعل سلسلة تفاعل البوليميريز وتحليالت حزم التضخيم‬
‫‪Conventional PCR Condition and Amplification Analysis‬‬
‫‪ .1.5.2.2‬البادئات ‪Primers‬‬
‫البادلات النوعية تم تجهيزها من شركة ‪ ,Macrogen/korea‬البادي عبارة عن ساسل قايرة محددة من‬
‫‪ DNA‬أحادي السلسلة ث‪ ، )ssDNA‬والمعروف باسم ‪ oligodeoxy ribonucleotides‬أو ‪.oligomers‬‬
‫هذه الباديئات تحاذي خيوط متقابلة على طرفي الحمض النووي المستهدف‪.‬‬
‫‪ .1‬البادئات الخاصة لفول الصويا ‪Soy bean Specific Primers:‬‬
‫اسننتخدمت في هذه الدراسننة بادلات خاصننة للكشننف عن الجينات المعدلة وراثيا في البر الوراثية لمحاننول‬
‫فول الانننننويا ومشنننننتقاتها ثاعاف فول الانننننويا ) وهو البادي ‪ CaMV35S‬والمنهي ‪ , NOS‬ذات احجام‬
‫‪ 195 bp‬و ‪ 118 bp‬على التوالي )‪ (Zaulet et al., 2009‬والمجهزة من شننننننركننة ‪ Macrogen.‬وكمننا‬
‫موضح في الجدول )‪.)7.2‬‬

‫‪38‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫الجدول )‪ (7.2‬البادئات النوعية المصممة للكشف عن التعديل الوراثي بواسطة الـ ‪ PCR‬للدراسة الحالية‪.‬‬
‫ناتج‬ ‫)’‪(5’→ 3‬تسلسل النيوكليوتيدات‬ ‫اصل البادي‬ ‫اسم البادئ‬
‫الت اعل‬

‫‪Forward‬‬ ‫‪195 bp‬‬ ‫’‪5’-GCTCCTACAAATGCCATCA-3‬‬ ‫‪Cauliflower‬‬ ‫‪35S1‬‬

‫‪mosaic virus‬‬

‫‪Reverse‬‬ ‫’‪5’-GATAGTGGGATTGTGCGTCA-3‬‬ ‫‪35S2‬‬

‫‪Forward‬‬ ‫‪118 bp‬‬ ‫’‪5’-GCATGACGTTATTTATGAGATGGG-3‬‬ ‫‪Agrobacterium‬‬ ‫‪HANos-‬‬

‫‪tumefaciens‬‬ ‫‪118 F‬‬

‫‪Reverse‬‬ ‫’‪5-GACACCGCGCGCGATAATTTATCC-3‬‬ ‫‪HANos-‬‬

‫‪118 R‬‬

‫‪.2‬البادئات الخاصة لالرز ‪Rice Specific Primers‬‬

‫بسبب معظم المنتجات المعدلة وراثيا تحتوي إما على مح ز فيروس المو اييك ‪ CaMV- 35S‬أو المنهي‬
‫ث‪ ، nopaline synthase (Nos‬أو كليهما ‪ ،‬فإن معظم طرق فحص ‪ PCR‬تعتمد على الكشف عن هذه‬
‫التسلسات في المنتج )‪.)Forte et al., 2005‬‬
‫استخدمت في الدراسة الحالية بادلات خاصة للكشف عن الجينات المعدلة وراثيا في البر الوراثية لحبوب‬
‫الر وهو البادي ‪ CaMV35S‬والمنهي ‪ , NOS‬ذات احجام ‪ bp123‬و ‪ 118 bp‬على التوالي ‪(Safaei‬‬
‫)‪ . et al., 2019‬وكما موضح في الجدول )‪.(8.2‬‬
‫الجدول )‪ (8.2‬البادئات النوعية المصممة للكشف عن التعديل الوراثي بواسطة الـ ‪ PCR‬للدراسة الحالية‪.‬‬
‫اتجاه البادي‬ ‫ناتج‬ ‫)’‪(5’→ 3‬تسلسل النيوكليوتيدات‬ ‫اصل البادي‬ ‫اسم البادئ‬
‫الت اعل‬

‫‪Forward‬‬ ‫’‪5’-CCA CGT CTT CAA AGC AAG TGG-3‬‬ ‫‪Cauliflower‬‬ ‫‪P35S-cf3‬‬
‫‪mosaic virus‬‬
‫‪Reverse‬‬ ‫‪5’-TCC TCT CCA AAT GAA ATG AAC TTC‬‬ ‫‪P35S-cr4‬‬
‫‪123 bp‬‬
‫’‪C-3‬‬

‫‪Forward‬‬ ‫‪118 bp‬‬ ‫’‪5’-GCATGACGTTATTTATGAGATGGG-3‬‬ ‫‪Agrobacterium‬‬ ‫‪HANos-‬‬

‫‪tumefaciens‬‬ ‫‪118 F‬‬

‫‪Reverse‬‬ ‫’‪-5GACACCGCGCGCGATAATTTATCC-3‬‬ ‫‪HANos-‬‬

‫‪118 R‬‬

‫‪39‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬
‫‪.‬‬

‫‪.3‬تحضير البادئات االصلية‬

‫اتبعت الخبوات التالية لتحضير بادلات عمل الـ ‪: PCR‬‬
‫‪ ‬قبل فتح البادي المج ف بالتجميد ‪ ،‬تم نبذه بجها البرد المركزي لضمان أن حبيبات البادي تكون‬
‫في قا األنبوب‪.‬‬
‫وج البادلان ث‪ ) 35S2, 35S1‬باذابتهما في ‪ 320‬و‪ 300‬مايكروليتر من الما المقبر‬ ‫‪ ‬حضرت‬
‫الخالي من االيونات وعلى التوالي‪،‬وكذلك تمت اذابة المنهي‪HANos-118 R ,HANos-118 F‬‬
‫وج البادلان‬ ‫كل منهما في ‪ 300‬مايكروليتر من الما المقبر خالي من االيونات ‪ ,‬كذلك حضرت‬
‫ث‪ )P35S-cr4, P35S-cf3‬باذابتهما في ‪ 400‬مايكروليتر من الما المقبر الخالي من االيونات‬
‫حسب تعليمات الشركة المجهزة ‪ ,‬للحاول على محلول خزين ‪ Stock solution‬بتركيز ‪100‬‬
‫بيكومولرفمايكرولتر لكل بادي ‪.‬‬
‫‪ ‬تم اخذ ‪ 10‬مايكروليتر لكل عنار واذابته مع ‪ 90‬مايكروليتر من الما المعقم خالي من االيونات‬
‫للحاول على المحلول النهالي ‪ Work solution‬ذو تركيز ‪ 10‬بيكومولرفمايكرولتر‬
‫‪ ‬ح ظت البادلات بالتبريد لحين اجرا ت اعل سلسلة البوليمريز‪.‬‬
‫‪.2.5.2.2‬تفاعل سلسلة البوليميريز االعتيادي ‪:‬‬
‫‪Polymerase Chain Reaction Conventional‬‬
‫أ أجري العمل تحت ظروف معقمةمع ح ظ المحاليل كافة على الاللج‪,‬إذ تم تببيق المؤشنننننر الجزيئي المعتمد‬
‫في هذه الدراسة في تقنية الـ ‪ PCR‬االعتيادي وفق الخبوات االتية‪:‬‬
‫‪ -1‬تحضير محاليل العمل اليومي الجراء تفاعالت ‪ PCR‬االعتيادي‪:‬‬
‫‪ ‬وذلك من خال استعمال مكونات عدة الـ ‪ PCR‬ومحاليل البادلات مع مراعاة التبريد بوضع العدة في صندوق‬
‫ثلجي ‪.‬‬
‫اضيف ‪ 5µl‬من الدنا القالب في انبوبة معقمة سعة ‪ 0.5‬مل معلمة بأسم العزلة النباتية المراد فحاها‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫اضيف خليط الت اعل الرليسي ث‪ )Green master mix‬بمعدل ‪.12.5µl‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ ‬اضنننننني ت البوادى من المحلول الخزين بمعدل ‪ 1‬مايكرولتر لكل بادلة الى انبوب األبندروف الذي يحوي على‬
‫الخليط‪.‬‬
‫‪ ‬مزجت مكونات الت اعل بأستخدام الماصة الدقيقة من خال تحريكها بشكل دالري‬

‫‪40‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪ ‬نبذت االنابيب بوسناطة جها البرد المركزي لجمع القبرات المتلانقة في الجدران لضنمان ضنبط تراكيز مواد‬
‫الت اعل‪.‬‬
‫اكمل الحجم بالما المقبر الخالي من االيونات ليابح الحجم النهالي لمحلول الت اعل ‪ .25 µl‬وكما موضح في‬ ‫‪‬‬
‫جدول ‪. 9.2‬‬
‫جدول ‪ : 9.2‬مكونات تفاعل الـ ‪ PCR‬االعتيادي للباديء ‪ CaMV-35S promoter‬و المنهي ‪. Nos terminator‬‬

‫‪PCR REACTION MIXTURE‬‬ ‫)‪VOLUME IN ONEREACTION(ΜL‬‬

‫‪Sterile dd H2O‬‬ ‫‪5.5 μl‬‬
‫‪GoTaq®Green master mix PCR‬‬ ‫‪12.5 μl‬‬
‫) ‪Forward Primer ( 10 Pmol‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫) ‪Reverse Primer ( 10 Pmol‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫‪DNA‬‬ ‫‪5 μl‬‬
‫‪Final Volume for reaction‬‬ ‫‪25μl‬‬
‫‪.‬‬

‫‪ -2‬برنامج المدور الحراري لسلسلة تفاعل البوليميريز االعتيادي ‪)PCR‬‬

‫ن ذت التجربة في جها المبلمر الحراري الخاص بعزالت حبوب فول الاويا – كسبة فول الاويا وكذلك‬
‫حبوب الر حيالنقلت االنابيب الى جها الدوران الحراري ; )‪ (Thermocycler‬لبد الت اعل التضاع ي وفق‬
‫البرنامج الخاص لكل مجموعة من البادلات وكما موضح في الجدول )‪ )10.2‬وجدول )‪)11.2‬‬

‫‪41‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫) لعزالت فول الصككويا‬-118HANos‫ و‬CaMV 35S promoter ‫ االعتيادي لجين‬PCR ‫برنامج تفاعل الـكككككككك‬10.2 ‫جدول‬
.)Zaulet et al., 2009 ‫وكسبة الصويا‬
‫البادئ‬ ‫عدد الدورات‬ ‫الخطوات‬ ‫درجة الحرارة‬ ‫الثانية‬/‫الوقت‬
PRIMER NO. OF STEPS TEMPRETURE TIME
CYCLES
35S1 35S2 1 Initial 95C˚ ‫ دقيقة‬1
Denaturation
35 Cycles Denaturation 94C˚ 30 ‫ثانية‬
HANos- HANos- Annealing 62C˚ ‫ ثانية‬45
118 F 118 R Elongation 72C˚ ‫ ثانية‬55
1 Extension 72C˚ ‫ دقيقة‬5

‫) لعزالت حبوب الرز‬Nos terminator ‫ و‬CaMV 35S promoter ‫لجين‬PCR ‫برنامج تفاعل الـ‬11.2 ‫جدول‬
.(Safaei et al., 2019
‫البادئ‬ ‫عدد الدورات‬ ‫الخطوات‬ ‫درجة الحرارة‬ ‫الثانية‬/‫الوقت‬
PRIMER NO. OF STEPS TEMPRETURE TIME
CYCLES
35S1 35S2 1 Initial 94C˚ ‫ دقيقة‬5
Denaturation
35 Cycles Denaturation 94C˚ ‫ دقيقة‬1
HANos- HANos- Annealing 60C˚ ‫ ثانية‬40
118 F 118 R Elongation 72C˚ ‫دقيقة‬3
1 Extension 72C˚ ‫ دقيقة‬5
.

42
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫‪.3.5.2.2‬تفاعل سلسلة البوليميريز الثنائي‬

‫‪Polymerase Chain Reaction Duplex‬‬
‫‪ -1‬تحضير محاليل العمل اليومي الجراء تفاعالت ‪ PCR‬الثنائي‪:‬‬
‫تم تحضير محاليل العمل اليومي الجرا ت اعات الـ ‪, PCRDuplex‬تم استخدام البريقة الجزيئية الـ‬
‫‪ PCRDuplex‬للكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا لحبوب فول الاويا وكسبتها وكما موضح في الجدول‬
‫)‪.)12.2‬‬
‫جدول ‪12.2‬مكونات تفاعل سلسلة البوليميريز الثنائي‪PCRDuplex‬‬
‫‪PCR REACTION MIXTURE‬‬ ‫)‪VOLUME IN ONEREACTION(ΜL‬‬
‫‪Sterile dd H2O‬‬ ‫‪15 μl‬‬
‫‪GoTaq®Green master mix PCR‬‬ ‫‪25 μl‬‬
‫‪Forward Primer P35S‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫‪Reverse HA-nos Primer‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫‪DNA‬‬ ‫‪6 μl‬‬
‫‪Forward HA-nos Primer‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫‪Reverse HA-nos Primer‬‬ ‫‪1 μl‬‬
‫‪Final Volume for reaction‬‬ ‫‪50μl‬‬
‫‪.‬‬

‫‪ -2‬برنامج التدوير الحراري لسلسلة تفاعل البوليميريز الثنائي ‪:)PCR‬‬

‫ن ذت التجربة في جها المبلمر الحراري الخاص بعزالت حبوب فول الاويا – كسبة فول الاويا حيالنقلت‬
‫االنابيب الى جها الدوران الحراري )‪ (Thermocycler‬لبد الت اعل التضاع يعلى وفق برنامج خاص وكما‬
‫موضح في الجدول )‪.)13.2‬‬

‫‪43‬‬
 ‫المواد وطرق العمل‬ ‫الفصل الثاني‬

‫جدول ‪ 13.2‬برنامج التدوير الحراري في تفاعل الـ‪ Duplex PCR‬لجين ‪ 35S‬و‪ )118HA-Nos‬لعزالت‬
‫فول الصويا وكسبة الصويا ‪.‬‬
‫عدد الدورات‬ ‫الخطوات‬ ‫درجة الحرارة‬ ‫الوقت‪/‬الثانية‬
‫‪NO. OF CYCLES‬‬ ‫‪STEPS‬‬ ‫‪TEMPRETURE‬‬ ‫‪TIME‬‬
‫‪1‬‬ ‫‪Initial Denaturation‬‬ ‫˚‪95C‬‬ ‫‪ 5‬دقيقة‬
‫‪35‬‬ ‫‪Denaturation‬‬ ‫˚‪94C‬‬ ‫‪ 30‬ثانية‬
‫‪Annealing‬‬ ‫˚‪61C‬‬ ‫‪ 45‬ثانية‬
‫‪Elongation‬‬ ‫˚‪72C‬‬ ‫‪ 55‬ثانية‬
‫‪1‬‬ ‫‪Extension‬‬ ‫˚‪72C‬‬ ‫‪ 5‬دقيقة‬
‫‪.‬‬

‫‪ .6.2.2‬تحليل نتائج تسلسل الدنا ‪Data sequencing Analysis‬‬

‫بعد معرفة عدد الحزم المتضاع ة وأو انها الجزيئية‪,‬ارسل ما يقارب ‪ 20‬مايكروليتر من ناتج الت اعل‬
‫من عينة كسبة فول الاويا الامريكية المستوردة ث‪ ) S1‬عن طريق مكتب ايسكو العلمي الى كوريا الجنوبية‬
‫ومقارنتها مع تسلسات‬ ‫من اجل التاكد على تسلسل قواعد النايتروجينية باستخدام جها الـ ‪Sanger‬‬
‫الجينات المنشورة في موقع جين بنك العالمي للجينات ‪.NCBI‬‬
‫‪.7.2.2‬التحليل الكيميائي للعينات‬
‫بعد معرفة العينات المعدلة وراثيا خال عملية الكشف في الدراسة الحالية والتي تعود لكسبة فول الاويا‪,‬‬
‫وضعت العينات في اكياس تعبئة معقمة ومعلمة وارسلت العينات الى مختبر اعاف الواحة التابع للعتبة‬
‫العباسية المقدسة ;لغرض التحليل الكيميالي لبعض المكونات الكيميالية لعينات حبوب وكسبة فول الاويا‬
‫وذلك باستخدام جها ‪. Near-Infrared Spectroscopy‬‬
‫‪.8.2.2‬التحليل االحصائي ‪:‬‬
‫حللت النتالج باستخدام الحاسوب بواسبة برنامج االكسل لتحليل النتالج التحليل الكيميالي الصناف فول‬
‫الاويا وبعد الحاول على المعدل القياسي واالنحراف القياسي واختبرت النتالج تحت مستوى احتمالية‬
‫)‪)0.05‬‬

‫‪44‬‬
 ‫الفصل الثالث‬
‫النتائج والمناقشة‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪ .3‬النتائج والمناقشة ‪Results and Discussion‬‬

‫‪ .1.3‬جمع عينات فول الصويا ومشتقاته ‪:‬‬
‫جمعت ‪ 17‬عينة تعودلمحاول فول الاويا وكسبة فول الاويا من ماادر مختل ة وباورة عشوالية‬
‫‪ ,‬تضمنت ثاث عينات تعود لعينة كسبة فول الاويا مستوردة من االسواق المحلية ‪ /‬كربا وبنسبة‬
‫ث‪ )%17.6‬من مجمو العينات الكلي والبالغ ‪ 17‬عينة ‪ ,‬وكذلك ‪ 14‬عينة تعود لحبوب فول الاويا من‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪ /‬ابوغريب وبنسبة ث‪ )% 82.35‬من مجمو العينات الكلي والبالغة ‪ 17‬عينة من‬
‫مجمو العينات الكلي ‪ .‬وكما موضح في الجدول ث‪.)1.3‬‬
‫جدول ‪ 1.3‬مصادر واعداد العينات الخاصة بمحصول فول الصويا وكسبة فول الصويا المستخدمة في‬
‫الدراسة الحالية ‪.‬‬
‫النسبة‬
‫عدد العينات‬ ‫المصدر‬
‫المئوية ‪%‬‬
‫‪%17.6‬‬ ‫‪3‬‬ ‫االسواق المحلية ‪ /‬كربا‬
‫‪% 82.4‬‬ ‫‪14‬‬ ‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫‪% 100‬‬ ‫‪17‬‬ ‫المجمو‬

‫‪ .2.3‬استخالص الـ ‪ DNA‬والتاكد من سالمة الـ ‪ DNA‬المستخلص من عينات فول‬

‫الصويا لتفاعل‪ PCR‬االعتيادي ‪:‬‬
‫‪.1.2.3‬استخالص وتنقية الـ ‪ DNA‬لالنماط الوراثية لمحصول فول الصويا‪:‬‬
‫تم استخاص الـ ‪ DNA‬من العزالت النباتية الجافة ثحبوب وكسبة فول الاويا) لذصناف المعتمدة‬
‫في الدراسة الحالية وذلك باستعمال عدة استخاص ‪Extraction Kit‬مجهزة من قبل شركة‬
‫‪ Korea/intron‬وكما موضح في الشكل ‪.1.3‬‬

‫‪45‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫شكل ‪ : 1.3‬حزم الحمض النووي الجيني لتسعة طرز وراثي من حبوب فول الصويا وكسبة الصويا باستخدام ‪ ٪1‬جل‬
‫أجاروز عند ‪ 90‬فولت لمدة ساعة واحدة‪.‬المسار االول ‪ , S11 :‬المسار الثاني ‪ ,S1 :‬المسار الثالث ‪ , S4‬المسار الرابع ‪:‬‬
‫‪ , S7‬المسار الخامس ‪ , S8 :‬المسار السادس ‪ , S13 :‬المسار السابع ‪ , S17 :‬المسار الثامن ‪.S18 :‬‬

‫‪ .2.2.3‬تقديرتركيز و نقاوة الـ ‪ DNA‬المستخلص لالنماط الوراثية لمحصول فول الصويا‬

‫وكسبة فول الصويا‪:‬‬
‫تم التقدير النوعي للعينات المدروسة باستخدام جها الترحيل الكهربالي على هام االكارو وبعد‬
‫ترحيل العينات كهرباليا ‪ ,‬اذ يظهر الـ ‪ DNA‬ذو النوعية الجيدة على شكل حزمة ‪ , Band‬بينما يكون‬
‫الـ ‪ DNA‬سي النوعية مبعالرا )‪ .)Sierra& Escarpa, 2019‬وكما موضح في الشكل ث‪.)2.3‬‬
‫جدول ‪ 2.3‬تركيز ونقاوة مستخلصات عزالت فول الصويا ومشتقاتها بواسطة طريقة ‪i-‬‬
‫‪. genomic DNA Extraction method‬‬
‫االمتصاصية‬ ‫التركيز‬
‫العينة‬ ‫ت‬
‫‪A260\280‬‬ ‫‪μg/ml‬‬

‫كسبة فول الاويامستوردة االمريكية‬

‫‪1.92‬‬ ‫‪162.5‬‬ ‫‪.1‬‬
‫‪Healthy Fead No.1‬‬

‫كسبة فول الاويا مستوردة برا يلية‬

‫‪1.79‬‬ ‫‪100‬‬ ‫‪Healthy Fead No.2‬‬ ‫‪.2‬‬

‫كسبة فول الاويا مستوردة ارجنتينية‬

‫‪1.76‬‬ ‫‪292.5‬‬ ‫‪.3‬‬
‫‪Healthy Fead No.3‬‬

‫‪46‬‬
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪1.92‬‬ ‫‪130‬‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪.4‬‬

‫‪1.80‬‬ ‫‪132.5‬‬ ‫‪Lee74‬‬ ‫‪.5‬‬
‫‪1.94‬‬ ‫‪345‬‬ ‫‪Qt5‬‬ ‫‪.6‬‬
‫‪2.01‬‬ ‫‪422.5‬‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪.7‬‬
‫‪1.86‬‬ ‫‪282.5‬‬ ‫حويجة‪101‬‬ ‫‪.8‬‬
‫‪1.82‬‬ ‫‪127.2‬‬ ‫صويا ابا‬ ‫‪.9‬‬
‫‪1.76‬‬ ‫‪642.5‬‬ ‫‪Energy 2‬‬ ‫‪.10‬‬
‫‪1.72‬‬ ‫‪240‬‬ ‫‪QTLI‬‬ ‫‪.11‬‬
‫‪1.91‬‬ ‫‪167.5‬‬ ‫‪Dh4‬‬ ‫‪.12‬‬
‫‪1.84‬‬ ‫‪137.5‬‬ ‫‪Dt84‬‬ ‫‪.13‬‬
‫‪1.77‬‬ ‫‪160‬‬ ‫‪Basir‬‬ ‫‪.14‬‬
‫‪1.70‬‬ ‫‪280‬‬ ‫‪Tn3‬‬ ‫‪.15‬‬

‫‪1.69‬‬ ‫‪380‬‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪.16‬‬

‫‪1.76‬‬ ‫‪117.5‬‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪.17‬‬

‫ومن ثم اظهار حزم الـ ‪ DNA‬وذلك باستخدام االشعة فوق البن سجية ‪ , UV‬واعيد عزل الـ‬
‫‪ DNA‬من العينات ذات النوعية غير الجيدة مالا عينة فول الاويا ‪ Tn12‬كانت نسبة نقا ها اي‬
‫النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪ 280‬نانومتر بلغت حوالي ‪ 1.63‬وبعد اعادة‬
‫استخاصها مرة اخرى اعبت نقاوة جيدة بلغت ‪ ,1.69‬وكذلك عينة فول الاويا ‪ QTLI‬كانت نسبة‬
‫نقا ها اي النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪ 280‬نانومتر ‪ 1.55‬وبعد اعادة‬
‫استخاصها مرة اخرى اعبت نقاوة جيدة بلغت ‪ 1.72‬و تم التقدير الكمي من خال قياس تركيز‬
‫الحمض النووي‪DNA‬في العينات باستخدام مقياس البيف الضولي ‪Spectrophtomiter‬‬
‫)‪.)Nzilibiliet al., 2018‬‬
‫ان النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪ 280‬نانومتر تساعد في تقدير نقاوة الحمض‬
‫النووي اذ يجب ان تتراوح هذه النسبة بين ‪.(Saadedin et al., 2019) 2.0 -1.7‬‬

‫‪47‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫تم استخاص الحمض النووي لجميع األنماط الجينية لعزالت فول الاويا باستخدام هذه البريقة‬
‫المشار اليها اعاه‪ ،‬وبعد قياس التركيز والنقاوة‪ ،‬أظهرت النتالج أن أعلى التركيزات التي تم الحاول‬
‫عليها كانت ‪ 380 μg/ml , 422.5 μg/ml , 642.5μg/ml‬و‪ ، 345 μg/ml‬وكان اقل تركيز تم‬
‫الحاول عليه ‪ ,17.5 μg/ml1 ,100 μg/ml‬و‪ 127.2 μg/ml‬و ‪. 130 μg/ml‬‬
‫وأن أعلى نقا ث‪ )OD‬للحمض النووي ث‪ )A260 / A280‬تم الحاول عليه كان ‪, 2.01μg/ml‬‬
‫‪1.94 μg/ml‬و‪ 1.92 μg/ml‬و‪ 1.91 μg/ml‬وكان أدنى نقا مسجل ‪, 1.70μg/ml ,1.69 μg/ml‬‬
‫‪ 1.72 μg/ml‬وكذلك ‪.1.76 μg/ml‬‬
‫عند قياس النقاوة للحمض النووي لعزالت فول الاويا ‪ ،‬تم العالور على معظم قيم النقاوة بين ‪2.0-1.69‬‬
‫ثالجدول‪ ، ) 2.3‬مما يؤكد النقا الجيد للحمض النووي المستخرج وهذا ما اوضحته الدراسات السابقة‬
‫)‪.(Saadedin et al., 2019‬‬
‫‪ .3.3‬التحري عن المورثات المحتمل وجودها في عزالت فول الصويا‪:‬‬
‫يعتمد العراق على محاول فول الاويا التي يستوردها من الخارج وباسعار مرت عة ‪ ,‬والتي تستعمل‬
‫كعليقه في تغذية الحيوانات الداجنة كمادر أساسي للبروتين المجهز في العليقة ولتأثيرها المباشر في إنتاجية‬
‫فروج اللحم ونوعية اللحم المنتج )‪.) Epley,1998‬‬
‫تتبلب دراسات الحمض النووي ‪ DNA‬الجينومي عالي الجودة ‪ ،‬مع التأكيد على الحاجة إلى طرق استخراج‬
‫الحمض النووي غير المكل ة والسريعة والبسيبة‪.‬‬
‫‪.1.3.3‬الكشف عن الجين المشفر ‪CaMV-35S promoter‬و‪ nos-terminator‬في‬
‫حبوب فول الصويا وكسبة فول الصويا باستخدام تقنية سلسلة تفاعل البوليميريز االعتيادي‪:‬‬
‫يأعد المح ز ث‪ )35S1 , 35S2‬من اصل بكتيري من المورثات الشالعة االستخدام في عمليات التعديل‬
‫الوراثي وهو من اصل بكتيري ‪ ,‬يعد هذا الباديئ ث‪ ) 35S1 , 35S2‬متخاص في عملية نسخ الجين الهدف‬
‫‪,‬اجريت الت اعات التضاع ية لسلسلة الدنا لجميع االنماط الوراثية ‪ ,‬وباستخدام سلسلة ت اعل البوليميريز‬
‫االعتيادي بواسبة جها الترحيل الكهربالي باستخدام هام االكارو وفحص النتالج تحت األشعة فوق‬
‫البن سجية‪.‬‬
‫اظهرت النتالج عند استعمال بادلات متخااة في الكشف عن البادي ‪P-35S promoter‬عن وجود‬
‫حزمة ناتجة عن عملية التضخم في كل من المسار الرابع والخامس والسادس على التوالي عند الو ن‬
‫الجزيئي الموافق لـ ‪ 195‬وج قاعدي تحتوي البادي ن سه ‪ P-35S promoter‬مع عينة كسبة فول الاويا‬
‫المستوردة‪ Healthy Fead No.1‬ث‪ (S1‬في المسار الرابع ‪ ,‬ومع عينة كسبة فول الاويا ‪Healthy‬‬

‫‪48‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫)‪ Fead No.2 (S2‬في المسار الخامس وكذلك مع عينة كسبة فول الاويا ‪Healthy Fead No.3‬‬
‫ث‪ )S3‬في المسار السادس ‪.‬‬
‫بينما اعبت العينات الباقية نتالج سالبة عرفت بخلوها من التعديل الوراثي وكما موضح في الشكل ‪2.3‬‬
‫وجدول ‪.3.3‬‬

‫شكل ‪ ) 2.3‬الترحيل الكهربائي لناتج التفاعل التضاعفي لسلسة الدنا بأستعمال البادئات ‪P-35S promoter‬لعينات فول الصويا‬
‫على هالم االكاروز بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد ‪ 75‬وزمن ساعة ‪ .‬المسار االول ‪ :‬الدليل الحجمي ‪, )DNA Marker‬المسار الثاني ‪:‬‬
‫‪ , S9‬المسار الثالث ‪ , S10:‬المسار الرابع ‪ S1 :‬مع الباديء )‪ ,(P-35S promoter‬المسار الخامس ‪ S2 :‬مع الباديء ‪P-35S‬‬
‫‪, ) promoter‬المسار السادس ‪ S3 :‬مع الباديء ‪ , )P-35S promoter‬المسار السابع ‪ , S9 :‬المسارالثامن ‪ , S10 :‬المسار‬
‫التاسع ‪ , S11:‬المسار العاشر ‪ , S12:‬المسار الحادي عشر‪.S13:‬‬

‫جا ت نتالج هذه الدراسة مبابقة مع نتالج دراسات سابقة في رومانيا في الكشف عن البادي ‪P-35S‬‬
‫‪ promoter‬في خمسين عينة من مشتقات فول الاويا كانت هنالك خمس عينات من اصل خمسين عينة‬
‫معدلة وراثيا بهذا الجين أي بنسبة ث‪ )%10‬من المجمو الكليلمجمو العينات )‪.(Zaulet et al., 2009‬‬
‫كذلك جا ت نتالج هذه الدراسة مبابقة مع نتالج الدراسة السابقة في سوريا ‪,‬اذ وجدت ثاث عينات معدلة‬
‫وراثيا بن س البادي المستخدم في الدراسة الحالية لكل من عينتي الذرة المستوردة ‪ M3,M1‬وعينة كسبة‬
‫الاويا ‪ A1‬المستوردة وحسب ما اوضحته كا الدراستين لنواتج الــ ‪ PCR‬التي تظهر قبعة الــ ‪DNA‬‬
‫عند الو ن الجزيئي المتوقع لهذا البادي الموافق لـ ‪ bp 195‬في العينات المحورة فقط ثاالسعد‪.)2010,‬‬
‫تكون المورثات تحت تحكم المح زات والمنهيات ‪ ,‬يعد المنهي ‪ NOS terminator‬من اكالر التسلسات‬
‫المستخدمة بشكل اوسع لتنظيم المورثات المعدلة وراثيا وهومن اصلبكتيري هو يحدد اين تنتهي الرسالة‬
‫الوراثية ‪ ,‬ويكالر استعماله في عملية التحوير الوراثي ثاالسعد ‪.) 2012,‬‬

‫‪49‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫لوحظت النتالج عند استخدام بادلات متخااة في الكشف عن الباديئات ‪HA-nos118-‬‬

‫‪terminator‬عن وجود حزمة ناتجة عن عملية التضخم في كل من المسار الالانيوالالالث والرابع على التوالي‬
‫وجا قاعدياباستعمال جين المنهي ن سه ‪HA-nos118-‬‬ ‫عند الو ن الجزيئي الموافق لـ ‪118‬‬
‫‪terminator‬مع عينة كسبة فول الاويا )‪ Healthy Fead No.1 (S1‬في المسار الالاني ‪ ,‬ومع عينة‬
‫كسبة فول الاويا )‪ Healthy Fead No.2 (S2‬في المسار الالالث وكذلك مع عينة كسبة فول الاويا‬
‫‪ Healthy Fead No.3‬ث‪ )S3‬في المسار الرابع‪ .‬وكما موضح في الشكل ‪ .3.3‬وجدول ‪3.3‬حسب ما‬
‫اوضحته نتالج ت اعل سلسلة البوليميريز في جها الـ‪.PCR‬‬

‫شكل ‪ )3.3‬الترحيل الكهربائي لناتج التفاعل التضاعفي لسلسة الدنا لعزالت فول الصويا بأستعمال ثالث بادئات نوعية‬
‫)‪ )HA-nos118-terminator‬في هالم االكاروز بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد ‪ 75‬وزمن ساعة ‪ .‬المسار االول ‪ :‬الدليل‬
‫الحجمي ‪ , )DNA Marker‬المسار الثاني ‪ S1 :‬مع المنهي )‪ ,(HA-nos118-terminator‬المسار الثالث ‪ S2:‬مع‬
‫المنهي )‪ , ) HA-nos118-terminator‬المسار الرابع ‪ S3‬مع المنهي ‪.)HA-nos118-terminator‬‬

‫‪50‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫جدول ‪ 3.3‬نتائج اختبار العينات المدروسة والعائدة لمحصول فول الصويا حبوب فول الصويا‬
‫وكسبة فول الصويا) بالنسبة الى المورثات التي تم التحري عنها والتي تستعمل في التعديل‬
‫الوراثي ‪.‬‬
‫‪35S‬‬ ‫‪NOS‬‬ ‫العينة‬ ‫ت‬
‫كسبة فول الاويا مستوردة امريكية‬
‫‪+‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪1‬‬
‫‪Healthy Fead No.1‬‬
‫كسبة فول الاويا مستوردة برا يلة‬
‫‪+‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪2‬‬
‫‪Healthy Fead No.2‬‬
‫كسبة فول الاويا مستوردة ارجنتينية‬
‫‪+‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪3‬‬
‫‪Healthy Fead No.3‬‬
‫̶‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪4‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Lee74‬‬ ‫‪5‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Qt5‬‬ ‫‪6‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪7‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫حويجة‪101‬‬ ‫‪8‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫صويا ابا‬ ‫‪9‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Energy 2‬‬ ‫‪10‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪QTLI‬‬ ‫‪11‬‬
‫̶‬ ‫‪Dh4‬‬ ‫‪12‬‬
‫̶‬ ‫‪Dt84‬‬ ‫‪13‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Basir‬‬ ‫‪14‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Tn3‬‬ ‫‪15‬‬
‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Tn12‬‬ ‫‪16‬‬

‫̶‬ ‫̶‬ ‫‪Hassan‬‬ ‫‪17‬‬

‫‪51‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫االشارة ث‪ )+‬تعني الكالن معدل وراثيا ‪GMO‬‬

‫االشارة ث‪ )-‬تعني الكالن غير معدل وراثيا ‪No GMO‬‬
‫جا ت نتيجة هذه الدراسة مبابقة للدراسة السابقة)‪ .(Zaulet et al.,2009‬تشير الدراسة السابقة في‬
‫الكشف عن جين المنهي ‪ HA-nos118-terminator‬في خمسين عينة من مشتقات فول الاويا كانت‬
‫الكلي‬ ‫هنالك خمس عينات من اصل خمسين عينة معدلة وراثيا بهذا الجين أي بنسبة ث‪ )%10‬من المجمو‬
‫لمجمو العينات حيث كانت مشتقات الاويا معدلة وراثيا وتحوي كا الجينين البادي والمنهي في ن س‬
‫العينة ‪.‬‬
‫تم تقدير االو ان الجزيئية للحزمة المتضاع ة للدراسة الحالية على مواقع الحزم ذات االو ان الجزلية‬
‫المعروفة للدليل الحجمي ث‪ )DNA-Marker‬والموضحة في المسار االول على هام االكارو وكما‬
‫موضح في الشكل ث‪ )3.3‬اذ تبين ان الحزمة المتضاع ة تنحار بين الحجمين ‪ 200-100‬وج قاعدي‪.‬‬
‫وفي دراسة نشرت سابقا في ايران ‪ ,‬فحص الذرة وفول الاويا في األطعمة المانعة للكشف عن البادي‬
‫‪ CaMV 35S‬والمنهي ‪ NOS‬عن طريق تقنية الـ ‪ ، PCR‬اظهرت أن ‪ 25‬من اصل ‪ 100‬عينة ث‪)٪ 25‬‬
‫كانت إيجابية لوجود هذان البادلان )‪.)Arun et al. , 2013‬‬
‫‪ .4.3‬التحري عن المورثات المحتمل وجودها في عزالت فول الصويا وكسبة الصويا‬
‫باستخدام تقنية الـ ‪ PCR‬االعتيادي )‪ ) MonoPlex PCR‬والـ ‪ PCR‬الثنائي‬
‫)‪) Duplex PCR‬‬
‫تم استخدام اسلوبين جزيئيين للكشف عن المحاصيل المعدلة وراثيا لمحاول فول الاويا وكما موضح‬
‫كاالتي ‪.‬‬
‫االسلوب االول ‪ :‬الكشف بأستخدام سلسلة ت اعل البوليميريز ‪ , Monoplex PCR‬وجد عند ال حص‬
‫باستخدام جها الترحيل الكهربالي على هام االكارو وفحص النتالج تحت األشعة فوق البن سجية‪.‬‬
‫لوحظت النتالج عند استخدام بادلات متخااة في الكشف عن الباديئات ث‪) 35S1 , 35S2‬عن وجود‬
‫حزمة ناتجة عن عملية التضخم في المسار الرابع والعالد الى العينة ث‪ ,)S1‬والتي تظهر وجود قبعة الـ‬
‫‪ DNA‬عند الو ن الجزيئي المتوقع لهذا الموروث الموافق لـ ‪ 195‬وجا قاعديا باستعمال جين ‪P-35S‬‬
‫‪ .promoter‬وكذلك وجود حزمة ناتجة عن عملية التضخم في المسار الخامس والعالد الى العينة ث‪)S1‬‬
‫باستعمال جين ‪HA-nos118-terminator‬والتي تظهر وجود قبعة الـ ‪ DNA‬عند الو ن الجزيئي‬
‫المتوقع لهذا الموروث الموافق لـ ‪ 118‬وج قاعدي وكما موضح فيالشكل ث‪)4.3‬‬
‫االسلوب الالاني‪ :‬الكشف باستخدام سلسلة ت اعل البوليميريزالالنالي ث‪ .)Douplex PCR‬في هذه العملية تم‬
‫‪CaMV-35S‬‬ ‫استخدام اثنان من البوادي وهي الشالعة االستخدام في التعديل الوراثي وهما البادي‬

‫‪52‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪promoter‬و المنهي ‪ , Nos terminator‬اجريت الت اعات التضاع ية لسلسلة الدنا لجميع االنماط‬
‫الوراثية‪ ,‬رحلت التراكيب الوراثية باستخدام جها الترحيل الكهربالي على هام االكارو ‪ ,‬وفحص النتالج‬
‫تحت األشعة فوق البن سجية‪ .‬لوحظت النتالج عند استخدام بادلات متخااة في الكشف عن البادي ث‪35S2‬‬
‫‪ ) 35S1 ,‬والمنهي ‪ HA-nos118-terminator‬عن وجود ثاث عينات تعود لكسبة فول الاويا )‪S1‬‬
‫‪)S2+S3 +‬في كل من المسار االول والالاني والالالث معدلة وراثيا باحتوالها كا البادلين ‪CaMV-35S‬‬
‫‪promoter‬و المنهي ‪. Nos terminator‬حيالظهرت نتالج موجبة ذو حزمة ‪ 118‬قاعدة نايتروجينية‬
‫و‪ 195‬قاعدة نايتروجينية في كل مسار)‪ )S2+S3 + S1‬في اختبار‪ Douplex PCR‬مع التسلسل المكمل‬
‫له في الدنا القالب ث‪ )Template DNA‬وكما موضح فيالشكل ث‪ . )4.3‬والتي تظهر وجود قبعة الـ ‪DNA‬‬
‫عند الو ن الجزيئي المتوقع لهذا الموروث الموافق لـ ‪ 195‬وج قاعدي و الموافق لـ ‪ 118‬وج قاعدي‬

‫شكل ‪ ) 4.3‬الترحيل الكهربائي لناتج التفاعل التضاعفي لسلسة الدنا )‪ ( duplex PCR‬لعزالت فول الصويا بأستعمال بادئات نوعية ‪P-35S‬‬
‫‪DNA‬‬ ‫‪ promoter‬و المنهي ‪ Nos terminator‬في هالم االكاروز بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد ‪ 75‬وزمن ساعة‪ .‬المسار ‪ : M‬الدليل الحجمي‬
‫‪ , )Marker‬المساراالول ‪ S1 :‬مع المنهي ‪ + HA-nos118-terminator‬الباديء ‪ , P-35S promote‬المسار الثاني ‪ S2 :‬مع المنهي‬
‫‪+‬‬ ‫‪ + HA-nos118-terminator‬الباديء ‪ , P-35S promoter‬المسار الثالث ‪S3 :‬مع المنهي ‪HA-nos118-terminator‬‬
‫الباديء ‪, P-35S promote‬المسارالرابع ‪ S1:‬مع الباديء ‪, P-35S promoter‬المسار الخامس‪S1:‬مع المنهي ‪HA-nos118-‬‬
‫‪ , terminator‬المسار السادس ‪S4:‬مع المنهي‪ + HA-nos118-terminator‬الباديء ‪ , P-35S promote‬المسار السابع ‪S5:‬المنهي‬
‫‪ + HA-nos118-terminator‬الباديء ‪ S6 ,P-35S promote‬مع المنهي‪ + HA-nos118-terminator‬الباديء ‪.P-35S promote‬‬

‫‪53‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪ 5.3‬جمع عينات الرز‬

‫يأعد الر من محاصيل الحبوب المهمة والرليسة في العالم‪ ،‬اذ يحتل المرتبة الالانية من حيث األهمية بعد‬
‫الحنبة‪,‬ويتغذى عليه نحو ناف سكان العالم‪ ,‬ال سيما في منبقة الشرق األقاى واليابان والهند والاين‪,‬‬
‫ويعد الغذا الرليس لمئات المايين من سكان قارة آسيا ‪ ,‬وبلغت المساحة المزروعة منه عالميا بحدود‬
‫‪ 151541‬هكتار وأعبت إنتاجا كليا قدره ‪ 592831‬طن ر خـام أي بمـعدل غلة ‪ 4.2‬طنفهكتار‪,‬في العراق‬
‫يعد محاوال حبوبيا غذاليا مهما ويدخل في كالير من الاناعات الغذالية ;الرت ا نسبة البروتين والدهن‬
‫وبلغت المسـاحة المزروعة منه في جميع المحافظات عام ‪ 2010‬حوالي‪ 191895‬ألف دونم‪,‬أما المساحة‬
‫المزروعة في محافظتي النجف والقادسية ‪ 183487‬ألف دونم ‪ ,‬وبذلك تعد نسبة راعة الر في محافظتي‬
‫النجف والقادسية حوالي ‪ %95.6‬من مجمل المساحة المزروعة في العراق ثمحمد‪.)2014،‬‬
‫جمعت ‪ 74‬عينة من محاول الر باورة عشوالية ومن ماادر مختل ة ‪ ,‬تضمنت ‪ 37‬عينة من‬
‫عينات حبوب الر من االسواق المحلية ‪ /‬كربا وبنسبة ‪ , % 50‬والقسم االخر تضمنت خمس عينات‬
‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪ /‬ابوغريب وبنسبة ‪, ,% 6.8‬واثنان وعشرون عينة من االسواق المحلية ‪ /‬بغداد‬
‫وبنسبة ث‪ , )%29.3‬وعشر عينات تعود لحبوب الر من و ارة الزراعة‪/‬محبة أبحاث الر في المشخاب‬
‫وبنسبة ث‪ )% 13.5‬وكما موضحة في الجدول ‪.4.3‬‬
‫جدول‪ 4.3‬يبين مصادر واعداد العينات الخاصة بمحصول الرز المستخدمة في الدراسة الحالية‪.‬‬
‫النسبة المئوية ‪%‬‬ ‫عدد العينات‬ ‫المصدر‬
‫‪% 50‬‬ ‫‪37‬‬ ‫االسواق المحلية ‪/‬كربا‬
‫‪% 6.8‬‬ ‫‪5‬‬ ‫و ارة الزراعة‪ /‬بغداد‪ /‬ابوغريب‬
‫‪% 29.7‬‬ ‫‪22‬‬ ‫االسواق المحلية ‪ /‬بغداد‬
‫‪% 13.5‬‬ ‫‪10‬‬ ‫و ارة الزراعة‪/‬محبة أبحاث الر ‪ /‬المشخاب‬
‫‪74‬‬ ‫المجمو‬

‫وبعد ذلك تم سحقها بواسبة الهاون الخزفي وتحت ظروف معقمة وبوجود النايتروجين السالل ‪ ,‬بعد ذلك‬
‫تمت تعبئة العينات المبحونة بشكل جيد داخل اكياس معقمة ومعلمة مسبقا لحين االستخدام ‪.‬‬

‫‪54‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪ .6.3‬استخالص الـ ‪ DNA‬من عينات حبوب الرز لتفاعل ألـ ‪PCR‬‬

‫من أجل إجرا الكشف عن الكالنات المعدلة وراثيا استنادا إلى الحمض النووي الـ‪ ،DNA‬يجب‬
‫استخراج الحمض النووي أوال‪ .‬تتوفر العديد من طرالق استخاص الحمض النووي ‪ ،‬وقد تم استخدام العديد‬
‫منها من حيث قابليتها للتببيق على اكتشاف الكالنات المعدلة وراثيا في المواد النباتية واألغذية المشتقة من‬
‫النباتات تم إجرا استخاص الحمض النووي من عينات حبوب األر المجمعة بعد سحقها ‪(Yari et al.,‬‬
‫)‪.2013‬‬
‫تم استخاص الـ ‪ DNA‬من العزالت النباتية الجافة لمحاول الر لذصناف المعتمدة في الدراسة‬
‫الحالية وذلك باستعمال خبوات بروتوكول مجهزة من قبل شركة ‪ ، Korea / intron‬وهذه العدة ‪i-‬‬
‫‪genomic DNA extraction‬توفر طريقة سريعة وسهلة للحاول على ‪ DNA‬نقي من العزالت النباتية‬
‫‪ ,‬وفي بعض الحاالت تظهر لنا بعض المشاكل في عملية االستخاص ‪ ,‬على سبيل المالال عند استخاص‬
‫الدنا وترحيل بعض العينات في جها الترحيل الكهربالي بعض العينات التظهر حزم للحامض النووي او‬
‫تعبي حزم مشوهة ‪ ,‬كذلك عند قياس نقاوة البر الوراثية للـ ‪ DNA‬في جها الـ ‪Spectrophotomiter‬‬
‫تظهر بعض العينات ملوثة بالبروتينات كل هذه أاالمور تعبي نتالج خاطئة تؤثر على نتيجة العمل وبالتالي‬
‫ضرورة تببيق خبوات البروتوكول العدة ث ‪ ( Kit‬باورة صحيحة واجرا عملية االستخاص تحت‬
‫ظروف معقمة وفي بعض الحاالت تعاد عملية استخاص بعض العينات لاسباب المذكورة اعاه وذلك‬
‫لتحقيق تركيز ونقاوة عاليين يؤهلها للعمل الاحق ‪.‬‬
‫‪ . 7.3‬التاكد من سالمة الـ ‪ DNA‬المستخلص لتفاعل ‪ PCR‬لعينات محصول الرز‬
‫الخبوة االخرى بعد عملية االستخاص هو التأكد من سامة الـ ‪DNA‬لت اعل وحدة الـ ‪PCR‬‬
‫وهي خبوة اساسية البد من تن يذها ;الن عمل وحدة الـ ‪ PCR‬يعتمد عليه اذ يأعد حلقة الوصل مابين‬
‫عملية االستخاص ووحدة ت اعل الـ ‪ , PCR‬حيث غير ممكن اجرا الكشف عن العناصر المعدلة‬
‫الـ‬ ‫وراثيا بدون هذه الخبوة ‪,‬وتم فحص العينات المستخلاة بعد اجرا عملية النقاوة في جها‬
‫‪.Spectrophotomiter‬‬
‫إن أفضل طريقة للحاول على نتيجة في جها الترحيل الكهربالي وباستخدام هام االكارو وبعد‬
‫ترحيلها كهرباليا ‪ ,‬اذ يظهر الـ ‪ DNA‬ذو النوعية الجيدة على شكل حزمة ‪ , Band‬بينما يكون الـ‬
‫‪ DNA‬سي النوعية مبعالرا وغير واضح الحدود وكما موضح في الشكل شكل ث‪ )5.3‬والذي اظهر‬
‫نباقات الحمض النووي الجيني لتسعة طر وراثية من الر في جها الترحيل الكهربالي ‪ ,‬جميع‬
‫الحزم واضحة ومتجانسة أي غير مبعالرة )‪. (Piskata et al., 2019‬‬

‫‪55‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫شكل ‪ :5.3‬حزم الحمض النووي لتسعة طرز وراثية من الرزعلى ‪ ٪1‬جل أجاروز عند ‪ 90‬فولت لمدة ‪ 20‬دقيقة ‪ .‬تم‬
‫استخراج عينات الحمض النووي بطريقة ‪ .i-genomic DNA Extraction plant‬المسار االول ‪ , R23:‬المسار‬
‫الثاني ‪ , R20 :‬المسار الثالث ‪ , R2 :‬المسار الرابع ‪ ,R15 :‬المسار الخامس ‪ , R7:‬المسار السادس ‪ , R8:‬المسار‬
‫السابع ‪ , R55:‬المسار الثامن ‪ ,R27:‬المسار التاسع ‪.R40 :‬‬

‫‪ .1.7.3‬تقديرتركيز و نقاوة الـ ‪ DNA‬المستخلص لالنماط الوراثية لمحصول الرز‬

‫جدول ث‪ ) 5.3‬يوضح تركيز ونقاوة االنماط الوراثية لعزالت حبوب الر المستخلص ببريقة ‪i-genomic‬‬
‫‪. DNA Extraction‬‬
‫جدول ‪ 5.3‬تركيز ونقاوة االنماط الوراثية لعزالت حبوب الر ‪.‬‬
‫االمتصاصية‬ ‫التركيز‬
‫العينة‬ ‫الرمز‬ ‫ت‬
‫‪A260\280‬‬ ‫‪μg/ml‬‬
‫‪1.94‬‬ ‫‪345‬‬ ‫‪Royal Staylon‬‬ ‫‪R1‬‬ ‫‪1‬‬
‫‪1.78‬‬ ‫‪115‬‬ ‫‪Inidia Gate‬‬ ‫‪R2‬‬ ‫‪2‬‬
‫‪1.83‬‬ ‫‪432.5‬‬ ‫‪Seven Start‬‬ ‫‪R3‬‬ ‫‪3‬‬
‫‪2.1‬‬ ‫‪127.5‬‬ ‫‪ALtaiyab XL‬‬ ‫‪R4‬‬ ‫‪4‬‬
‫‪1.84‬‬ ‫‪197.5‬‬ ‫‪272‬‬ ‫‪R5‬‬ ‫‪5‬‬
‫‪1.91‬‬ ‫‪345‬‬ ‫‪Chopstick‬‬ ‫‪R6‬‬ ‫‪6‬‬
‫‪1.92‬‬ ‫‪450‬‬ ‫‪El-manara‬‬ ‫‪R7‬‬ ‫‪7‬‬
‫‪1.93‬‬ ‫‪182.5‬‬ ‫‪Maharaja‬‬ ‫‪R8‬‬ ‫‪8‬‬
‫‪1.95‬‬ ‫‪147.5‬‬ ‫‪Almurad‬‬ ‫‪R9‬‬ ‫‪9‬‬
‫‪1.94‬‬ ‫‪82.5‬‬ ‫‪Magellan‬‬ ‫‪R10‬‬ ‫‪10‬‬

‫‪56‬‬
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

1.99 327.5 Beladi R11 11

1.82 317.5 Uncle Bens white
R12 12
rice
1.93 267.5 Durra R13 13
1.94 87.5 Kohinoor R14 14

1.85 97.5 Adolphus R15 15

1.81 165 Shahjahan R16 16
1.94 272.5 Nafees R17 17
1.88 262.5 Baghdady R18 18
2.17 665 AL-reef R19 19
1.79 475.5 Kass India R20 20
1.85 390 Basma R21 21

1.97 92.5 Babaker R22 22

1.84 637.5 Good garish rice R23 23

1.99 127.5 Bunjabi Almuhaidib R24 24

1.92 375 Thai rice Normal R25 25

1.80 675 South American rice R26 26

1.92 262.5 Thai rice mark(R) R27 27

1.90 197.5 Cano R28 28

1.73 192.5 Shaalan R29 29

1.79 332.5 Thai to day R30 30

1.94 172.5 Yod Doy R31 31

1.82 112.5 OURO R32 32

1.86 152.5 Kateer R33 33

57
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

1.77 375 Codawari R34 34

1.85 195 AL-sulatan R35 35

1.83 550 Jawahir R36 36

1.90 125 Mohsen R37 37

1.88 332.5 Bondi R38 38

1.81 100 Zain R39 39

192.5 Eldoha golden rice

1.99 R40 40

1.83 157.5 Almasre R41 41

1.80 145 Eltaif R42 42

1.79 125 White swan R43 43

1.90 307.5 Haley R44 44

1.93 297.5 Haley R45 45

1.99 150 Green Farms R46 46

1.81 102.5 Maxims R47 47

1.82 117.5 Abu Ali R48 48

1.76 317.5 Almazraah R49 49

1.72 162.5 Ishtar R50 50

1.83 225 ALWAZEER R51 51

1.95 122.5 KEEVA R52 52

1.95 300 ALBAKHERA R53 53

1.92 127.5 GIHAN R54 54

58
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

1.80 360 AL-ALAMAIN R55 55

1.89 114.5 Biriany King R56 56

1.72 640 BAKHSHAYESH R57 57

1.72 342.5 Firdos R58 58

2.0 140 Ahmed Gold R59 59

1.79 357.5 DAAWAT R60 60

1.78 175 MAHMOOD R61 61

1.75 130 Basmati Sela R62 62

1.82 165 Gulbaahar R63 63

1.74 105 Basri R64 64

1.78 497.5 ‫عنبر البركة‬ R65 65

1.81 570 2 ‫مشخاب‬ R66 66

1.89 335 ‫عنبر عباسية‬ R67 67

1.89 225 33 ‫عنبر‬ R68 68

1.99 167.5 4 ‫برنامج‬ R69 96

1.85 115 1 ‫ابا‬ R70 70

1.91 375 1 ‫مشخاب‬ R71 71

1.93 170 ‫عنبر ياسمين‬ R72 72

1.86 570 1 ‫فرات‬ R73 73

1.81 387.5 1 ‫بحوث‬ R74 74

59
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫وكش ت النتالج عن قيم مختل ة ‪ ،‬واعيد عزل الـ‪ DNA‬من العينات ذات النوعية غير الجيدة مالا عينة الر‬
‫نو ‪ Kohinoor‬كانت نسبة نقا ها اي النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪ 280‬نانومتر‬
‫ث‪ ) OD 260 ⁄ OD 280‬بلغت حوالي ‪ 1.59‬وبعد اعادة استخاصها مرة اخرى اعبت نقاوة جيدة بلغت‬
‫‪ ,1.94‬وكذلك عينة الر ‪ Cano‬كانت نسبة نقا ها اي النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪280‬‬
‫نانومتر ث‪1.49 ) OD 260 ⁄ OD 280‬وبعد اعادة استخاصها مرة اخرى اعبت نقاوة جيدة بلغت‬
‫‪ ,1.90‬وكذلكعينة الر ‪ Kateer‬كانت نسبة نقا ها اي النسبة بين قرا ة الموجة ‪ 260‬نانومتر والموجة ‪280‬‬
‫نانومتر ث‪1.52 ) OD 260 ⁄ OD 280‬وبعد اعادة استخاصها مرة اخرى اعبت نقاوة جيدة ‪ , 1.86‬كان‬
‫أدنى تركيز للحمض النووي ‪ 82.5 μg/ml‬و ‪ 87.5 μg/ml‬و ‪ 100 μg/ml‬و ‪ 115 μg/ml‬في عينات‬
‫األر في حين أن أعلى تركيز كان ‪ μg/ml640 ، 665μg/ml، 675 μg/ml‬و‪ μg/ml637.5‬في‬
‫عينات الر ‪.‬‬
‫أظهرت نتالج الكالافة الضولية ث‪ )OD‬التي تشير إلى الجودة ثالنقا ) تباينا بين عينات الحمض النووي لذر‬
‫‪ ،‬عند ‪ A280 / A260‬كانت أدنى قيمة االمتااصية ‪ OD‬سجلت‪ 1.74 , 1.73 , 1.72‬و ‪ 1.80‬في‬
‫عينات األر بينما وصلت أعلى قيمة إلى ‪ 1.97 ،1.99 ، 2.11 ، 2.17‬في عينات األر عند قياس‬
‫الكالافة البارية لعينات الحمض النووي للر عند ‪ ، A280 / A260‬تراوحت القيم اإلجمالية بين ‪-1.78‬‬
‫‪ 1.99‬التي أشارت إلى نقا جيد للحمض النووي المستخرج‪ .‬تم االت اق على هذه النتيجة مع ث ‪Couto et‬‬
‫‪ al., (2013‬الذي أكد أن نسبة أعلى من ‪ 2.0‬تشير بشكل عام إلى تلوث بالحمض النووي الـ ‪ ، RNA‬في‬
‫حين أن النسبة األقل من ‪ 1.7‬تشير عادة إلى تلوث بالبروتين أثنا عملية االستخراج ; لذلك يجب أن يتراوح‬
‫الحمض النووي عالي الجودة بين ‪.2.0 - 1.7‬‬
‫وأشارت البيانات الحالية إلى أن جميع الحمض النووي المستخرج من الر مع سامة كافية لتحليل ‪.PCR‬‬
‫يشير الجدول ث‪ )5.3‬إلى نتالج الحمض النووي لجميع عينات األر ومعظم الحمض النووي المستخرج‬
‫ببريقة ‪ i-genomic plant DNA Extraction‬في هذه الدراسة أظهر نقاوة جيدة‪.‬‬
‫إن أفضل طريقة للحاول على نتيجة جيدة باستخدام هام االكارو في جها الترحيل الكهربالي ‪ ،‬يمكن‬
‫تعريف جودة عالية من ‪ DNA‬أو الحاول على ‪ DNA‬النقي )‪.(Schalamunet al.,2019‬‬
‫هناك العديد من الاعوبات في استخاص الحمض النووي من المواد الغذالية قد تكون مرتببة بربط الحمض‬
‫النووي بمكونات البعام وبالتالي تتداخل مع إطاق الحمض النووي & ‪.(Aboul-Maaty‬‬
‫)‪.Oraby, 2019‬‬
‫وأي انحراف يمكن أن يشير إلى وجود مواد مستخرجة بشكل مشترك يمكن أن يضعف توافر الحمض‬
‫النووي للبادي وبالتالي يؤثر على ك ا ة ت اعل البوليميرا المتسلسل )‪.(Manchester, 1995‬‬
‫نقاوة الحمض النووي المعزول هي الخبوة الرليسة لك ا ة عمل الـ ‪ PCR‬ث‪.)Gryson,2010‬‬

‫‪60‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪.8.3‬الكشف عن الجين المشفر الباديء‪ P35S‬والمنهي ‪NOS‬في الطرز الوراثية للرز‬

‫باستخدام تفاعل سلسلة البوليميريز‪.‬‬
‫في هذه الدراسة تم استخاص وتنقية الحامض النووي منقوص االوكسجين ‪ DNA‬من محلول الحمض‬
‫النووي من حبوب األر باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي ‪i-genomic plant DNA‬‬
‫‪ Extraction‬والمجهز من شركة ‪ .Intron/Korea‬كان نباق نسبة االمتااص إلى مراقبة الجودة وتركيز‬
‫الحمض النووي المستخرج للعيناتيتراوح على االغلب بين ‪ 1.7‬و ‪.1.9‬‬
‫لتحقيق هذا النباق كررنا المحاوالت في بعض الحاالت بنا ا على دراسات سابقة ‪ ،‬هذا المبلغ مقبول‬
‫لتضخيم ناتج الـ ‪ PCR‬ث‪.)Guertler et al., 2013‬‬
‫في دراسة سابقة لتقييم المخاطر ذكر أن الر المعدل وراثيا قد يزيدمن المخاوف بشأن المخاطر المتعلقة‬
‫باحة اإلنسان )‪. (Xue et al, 2012‬‬
‫باستخدام سلسلة ت اعل البوليميريز‪ PCR‬لم تسجل أي نتالج موجبة للبادلات النوعية المتخااة لكل‬
‫من البادي ‪ P35S-cf3‬والمنهي ‪ P35S-cf4‬لجميع عزالت محاول الر ‪ ,‬وجميع العزالت التي تم‬
‫استخاصها في هذه الدراسة لم تكن معدلة وراثيا ‪.‬‬
‫اظهرت النتالج خال الكشف عن المح ز ‪ CaMV 35S‬والمنهي ‪ NOS‬عند استخدام بادلات شالعة‬
‫االستخدام في التعديل الوراثي ‪ ,‬تبين عدم وجود تعديل وراثي لكافة عينات الر والموضحة في الشكل‬
‫ث‪ )6.3‬وجدول ث‪. (6.3‬‬

‫‪61‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫شكل ‪ 6.3‬الترحيل الكهربالي لناتج الت اعل التضاع ي لسلسة الدنا لعزالت الر بأستعمال ثاث بادلات نوعية ‪P-35S‬‬
‫‪promoter‬في هام االكارو بتركيز ‪ %1‬وفرق جهد ‪ 75‬و من ساعة ‪ .‬المسار ‪ : M‬الدليل الحجمي ث ‪)DNA Marker‬‬
‫‪ ,‬المسار االول ‪ R1 :‬مع البادي )‪ , (P-35S promoter‬المسار الالاني ‪R17 :‬مع البادي )‪ ,(P-35S promoter‬المسار‬
‫الالالث ‪ R20 :‬مع البادي )‪ ,(P-35S promoter‬المسار الرابع ‪R22:‬مع البادي )‪ ,(P-35S promoter‬المسار الخامس‬
‫‪R27 :‬مع مع البادي )‪ ,(P-35S promoter‬المسار السادس ‪R30 :‬مع البادي )‪ ,(P-35S promoter‬المسار السابع‬
‫‪R32:‬مع البادي )‪. (P-35S promoter‬‬
‫وفي دراسة نشرت سابقا قالمة من ‪ 24‬منتجا غذاليا تم شراؤها من السوق المحليةأشارت النتالج إلى أنه‬
‫من بين ‪ 24‬منتجا غذاليا تم اختبارها ‪ ،‬أعبت ثاثة منتجات نتالج إيجابية مع البادي ‪ CaMV35S‬أي‬
‫بنسبة ‪ ، ٪12.5‬أعبت بادلات ‪ NOS‬نتالج سلبية مع جميع العينات المختبرة‪. al.,2005))Oraby et‬وفقا‬
‫لدراسات سابقة نشرت عام ‪ 2019‬في دولة ايران ‪ ،‬وجدت ‪ 2‬من أصل ‪ 81‬أي بنسبة ث‪ )٪2.4‬عينة تم‬
‫اختبارها إيجابية لمح ز ‪ CaMV35S‬في حين لم يتم الكشف عن أي نتيجةإيجابية للمنهي ‪Safaeiet al.,‬‬
‫‪ .)2019) NOS‬أظهرت دراسة سابقة اجريت في الاين أن عينة من مجموعتين من عينات األر التي‬
‫تم اختبارها كانت إيجابية لمح ز ‪.) Mäde et al., 2006) CaMV 35S‬‬
‫في دراسة أخرى ‪ ،‬تم اختبارمالتي عينة ثبما في ذلك الذرة وفول الاويا واألر ) للكشف عن التعديل‬
‫الوراثي ‪ ،‬واستخدم وجان من جينات التحكم ث ‪ p35S‬و ‪ ، ) NOS‬وأوضحت هذه النتيجة أن ‪ 26‬و ‪٪44‬‬
‫من العينات معدلة وراثيا كانت لعينات فول الاويا والذرة على التوالي ‪ ،‬على النقيض من ذلك ‪ ،‬كانت‬
‫جميع عينات األر سلبية لهذين العنارين )‪. (Elsanhoty et al., 2013‬‬
‫كما اختتم باحالون آخرون أن ال حص الناجح للكالنات المعدلة وراثيا في المنتجات الغذاليةهي‬
‫بواسبة ت اعل سلسلة البوليميريزالـ ‪ PCR‬يمكن تحقيقه وي ضل عن البرالقاألخرى‪ ,‬ومن جانب اخر ‪،‬‬
‫أعلن باحالون آخرون عن إمكانية اكتشاف الكالنات المعدلة وراثيا ببريقة الـ‪ PCR‬التقليدي لهذين‬
‫العنارين )‪.(Rabiei et al., 2013‬‬

‫‪62‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫وفي دراسة عراقية منشورة سابقا تم اختبار ‪ 86‬عزلة من محاول الر كانت النتيجة جميع البر‬
‫الوراثية خالية من التعديل الوراثي باستعمال تقنية الـ ‪ PCR‬االعتيادي أي نسبة التعديل الوراثي ث‪)% 0‬‬
‫وذلك باستخدام عناصر شالعة االستخدام في التعديل الوراثي )‪.)Farhan, 2014‬‬
‫أظهرت دراسات سابقة اجريت في الهند أن المح ز ‪ CaMV35S‬من اصل ‪Agrobacterium‬‬
‫‪ tumefaciens‬كان م يدا في التعديل الوراثي لمحاول الر ‪ ,‬ذكرت مستوى عال من التعبير الجيني مع‬
‫المح ز‪.) Pipatpanukulet al., 2004) 35s‬‬
‫جدول ‪ 6.3‬نتائج اختبار االنماط الوراثية المدروسة لمحصول الرز بالنسبة الى المورثات التي تم‬
‫التحري عنها والتي تستعمل في التعديل الوراثي‪.‬‬
‫‪NOS‬‬ ‫‪35S‬‬ ‫العينة‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Royal Staylon‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Inidia Gate‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Seven Start‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪ALtaiyab XL‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪272‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Chopstick‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪El-manara‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Maharaja‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Almurad‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Magellan‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Beladi‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Uncle Bens white rice‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Durra‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Kohinoor‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Adolphus‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Shahjahan‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Nafees‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Baghdady‬‬

‫‪63‬‬
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

- - AL-reef

- - Kass India

- - Basma

- - Babaker

- - Good garish rice

- Bunjabi Almuhaidib

- - Thai rice Normal

- - South American rice

- - Thai rice mark(R)

- - Cano

- - Shaalan

- - Thai to day

- - Yod Doy

- - OURO

- - Kateer

- - Codawari

- - AL-sulatan

- - Jawahir

- - Mohsen

- - Bondi

- - Zain

- - Eldoha golden rice

64
‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

- - Almasre

- - Eltaif

- - White swan

- - Haley

- - Haley

- - Green Farms

- - Maxims

- - Abu Ali

- - Almazraah

- - Ishtar

- - ALWAZEER

- - KEEVA

- - ALBAKHERA

- - GIHAN

- - AL-ALAMAIN

- - Biriany King

- - BAKHSHAYESH

- - Firdos

- - Ahmed Gold

- - DAAWAT

- - MAHMOOD

- - Basmati Sela

65
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Gulbaahar‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪Basri‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫عنبر البركة‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫مشخاب ‪2‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫عنبر عباسية‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫عنبر ‪33‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫برنامج ‪4‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫ابا ‪1‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫مشخاب ‪1‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫عنبر ياسمين‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫فرات ‪1‬‬

‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫بحوث ‪1‬‬

‫‪ .9.3‬الكشــــــف عن تسلسل القواعــــــــــد النتروجينية لمـــــــــــورثة ‪ P35S‬و ‪HA-‬‬

‫‪ nos‬في مشتقات فول الصويا‬
‫أأجري الكشـــــــــــــــف عن تتابع تسلسل القــــــــــــواعد النتروجينية لمورثة ‪ P35S‬و ‪HA-nos‬‬
‫في مشتقات فول الاويا لبيان أوجه التشابه واإلختاف مع الموروثات ‪ P35S‬و‪ HA-nos‬القياسية‬
‫العالمية من خال تحليل تتابع تسلسل المــــــــــــــــــورث بوساطة ‪Multiple sequence aligment‬‬
‫في موقع المركز الوطني لمعلومات التقانة الحيوية ث‪, )NCBI‬إن الغرض من ألـ ‪ DNA sequencer‬هو‬
‫تأكيد لعينات مشتقات فول الاويا المحلية باإلضافة إلى معرفة مع من يكون تشابهها من بين العزالت‬
‫العالمــــــــــية‪ .‬وهذه النتالج تؤكــــد على صحــــــــــة تشخــــــيص كل من ناقل الكلونة ‪ P35S‬و ‪HA-‬‬
‫‪ NOS‬بعد مقارنتها مع عينات قياسية عالمــــــــــية لمعرفة تسلســــــــــل القواعد النتروجينية لهذه‬
‫الموروثات التي تأمالل المـــــــورثة المـــــــرجعية ث‪ )Refrence gene‬لتشخيص ناقل الكلونا لمشتقات فول‬
‫الاويا ‪.‬‬
‫إذ أظهرت نتالج تحليل القواعد النايتروجينية في كسبة فول الاويا االمريكية المستوردة ) ‪) S1‬‬
‫وجود تقارب بنسبة ‪ %100‬مع ناقل الكلونة القياسيي االمريكي )‪ (MN991175.1‬و ث‪)MN956899.1‬‬

‫‪66‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫حسب ما اوضحته الدراسات السابقة )‪ .) Alvarez et al.,2020‬إضافة إلى وجود تقارب بنسبة ‪% 100‬‬
‫للباحث )‪ Asano et al., (2020‬للناقل الكلونة نو ‪Gateway binary pB4GWcV DNA vector‬‬
‫والذي يحمل رقم قياسي ث‪, )AP019393‬حيث عمل على نبات األرابيدوبسيس ‪ Arabidopsis‬و كذلك‬
‫‪Vitis‬‬ ‫تشابهت مع الباحث )‪ Cai etal., (2018‬حيث عمل على نبات العنب لناقل الكلونة نو‬
‫‪ amurensiscytokinin oxidase‬والذي يحمل الرقم القياسي )‪ ) MK412539.1‬وكذلك تبابق‬
‫التسلسل قواعد النايتروجينية لهذه الدراسة مع ناقل الكلونة للباحث‪ et al., (2020)Komori‬والذي عمل‬
‫على محاول الر المعدل وراثيا ‪ transgenic rice‬في اليابان حيث سجل عترته ذو الرقم التسلسلي‬
‫ث‪ )LC506530.1‬في موقع المركز الوطني لمعلومات التقانة الحيوية ث‪ )NCBI‬من جانب اخر فقد تقاربت‬
‫تسلسل القواعد النايتروجينية في ناقل الكلونة لدراستنا الحالية لكل من موثات ‪ P35S‬و ‪ HA-nos‬مع‬
‫الباحث‪et al., (2019)Peyret‬اذ عمل على ناقل كلونة مانع لبا ميد ‪Synth cassette‬واثبت بانه يملك‬
‫كا الموروثين ‪ P35S‬و ‪ HA-nos‬في البا ميد ن سها في المملكة المتحدة حيث حال على تسلسل قياسي‬
‫ث‪ )MK521430‬وكذلك تبابقت النتالج مع الباحث )‪Soga et al.,( 2020‬اذ استخدم تلك البوائ في‬
‫الكشف عن الر المحور وراثيا وحال على تسلسل قياسي ث‪ )LC485253.1‬ولم نجد أي اختافات في‬
‫‪Gene‬‬ ‫موقع‬ ‫على‬ ‫المشورة‬ ‫النووي‬ ‫الحامض‬ ‫تسلسات‬ ‫في‬ ‫النايتروجينية‬ ‫القواعد‬
‫‪bankhttps://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi‬وكما موضح في الجدول ث‪.) 7.3‬‬
‫جدول‪ 7.3‬نسبة التشابه بين تسلسل القواعــــــــــد النتروجينية لناقل الكلونة للنباتات التي لها تشابه‬
‫نسبي مع تسلسل القواعــــــــــد النتروجينية لمـــــــــــورثة ‪ P35S‬و ‪ HA-nos‬في مشتقات فول‬
‫الصويا في الموقع العالمي ‪. Gene bank‬‬
‫‪Description of organisms‬‬
‫‪number‬‬
‫‪Accession‬‬

‫‪Max score‬‬

‫‪Total score‬‬

‫‪cover‬‬
‫‪Query‬‬

‫‪E. value‬‬

‫‪Per. Ident‬‬

‫‪MN956899.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪114‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector pDamBOB,‬‬

‫‪complete sequence‬‬
‫‪MN043929.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪76.3‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector pFLP19,‬‬
‫‪complete sequence‬‬
‫‪AP019393.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Gateway binary vector‬‬
‫‪pB4GWcV DNA, complete‬‬
‫‪sequence‬‬

‫‪67‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫‪AP019392.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Gateway binary vector‬‬

‫‪pB4GWnV3 DNA, complete‬‬
‫‪sequence‬‬
‫‪AP019391.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Gateway binary vector‬‬
‫‪pB4cVGW DNA, complete‬‬
‫‪sequence‬‬
‫‪AP019390.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Gateway binary vector‬‬
‫‪pB4nVGW3 DNA, complete‬‬
‫‪sequence‬‬
‫‪MN793977.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪76.3‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector pSMXL6-‬‬
‫‪SMXL6-no-EAR-HA,‬‬
‫‪complete sequence‬‬
‫‪MN780595.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪152‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector p35S-TCP1-‬‬
‫‪SRDX, complete sequence‬‬
‫‪MN728556.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪76.3‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector TCP1-CRISPR,‬‬
‫‪complete sequence‬‬

‫‪MN728555.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8‬‬ ‫‪100%‬‬ ‫‪76.3‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector PAPs-CRISPR,‬‬

‫‪complete sequence‬‬
‫‪MN728551.1‬‬ ‫‪100.00%‬‬ ‫‪1.8 100%‬‬ ‫‪76.3‬‬ ‫‪38.2‬‬ ‫‪Cloning vector pSMXL6-‬‬
‫‪SMXL6-HA, complete‬‬
‫‪sequence‬‬

‫اوضننننحت نتالج الدراسننننة الحالية بان تسننننلسننننل القواعد النايتروجينية لموروث ‪ p35S‬للدراسننننة الحالية‬
‫‪ , Sanger‬إذ أظهرت نتالج تحليل القوا عد‬ ‫والمرسنننننننل الى كوريا الجنوبية وتحليل ها بواسنننننن بة ج ها‬
‫النايتروجينية لموروث ‪ p35S‬في مشننننننتقات فول الاننننننوياالمحلية وجود تقارب بنسننننننبة ‪ %100‬مع ناقل‬
‫‪ pBOB11 ̵ C-Term complete sequence‬والنننذي يحمنننل الر قم القيننناسننننننن يي‬ ‫ال كلوننننة نو‬
‫‪ MN991175.1‬في موقع المركز الوطني لمعلومات التقانة الحيوية ث‪)NCBI‬وكما موضنننننح في الشنننننكل‬
‫)‪)8.3‬‬

‫‪68‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫الشكل )‪:)7.3‬التطابق القواعد النيتروجينية لموروث العزلة االمريكية المستوردة ‪ p35S‬للدراسة الحالية‬
‫‪ )Query‬مع العزلة المرجعية ‪.)Sbject‬‬

‫شكل )‪ ) A-8-3‬يوضح كروماتوكرافي لقمم تسلسالت الحامض النووي لموروث العزلة االمريكية المستوردة‬
‫‪ P35‬والذي يمثل خطوط ومنحنيات قواعد النايتروجينية ‪ .‬اللون االحمر يمثل القاعدة النايتروجينية الثايمين‪،‬‬
‫اللون االزرق يمثل القاعدة النايتروجينية السايتوسين ‪ ،‬اللون االسود يمثل القاعدة النايتروجينية الكوانين ‪،‬‬
‫واللون االخضر يمثل القاعدة النايتروجينية االدنين‪.‬‬

‫‪69‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫شكل )‪ ) B-8-3‬يوضح كروماتوكرافي لقمم تسلسالت الحامض النووي لموروث العزلة االمريكية المستوردة‬
‫‪ P35‬والذي يمثل خطوط ومنحنيات القواعد النايتروجينية ‪ .‬اللون االحمر يمثل القاعدة النايتروجينية الثايمين‪،‬‬
‫اللون االزرق يمثل القاعدة النايتروجينية السايتوسين ‪ ،‬اللون االسود يمثل القاعدة النايتروجينية الكوانين ‪،‬‬
‫واللون االخضر يمثل القاعدة النايتروجينية االدنين‪.‬‬

‫كذلك اوضحت نتالج الدراسة الحالية بان تسلسل القواعد النايتروجينية لموروث ‪ HA-nos‬والعالدة‬
‫‪ , Sanger‬إذ‬ ‫للعزلة االمريكية للدراسة الحالية والمرسل الى كوريا الجنوبية وتحليلها بواسبة جها‬
‫أظهرت نتالج تحليل القواعد النايتروجينية لموروث ‪ HA-nos‬في مشتقات فول الاوياالمحلية وجود‬
‫‪ pBOB11 ̵ C-Term complete sequence‬والذي‬ ‫تقارب بنسبة ‪ %100‬مع ناقل الكلونة نو‬
‫في موقع المركز الوطني لمعلومات التقانة الحيوية‬ ‫يحمل الرقم القياسيي )‪(JF927991.1‬‬
‫ث‪)NCBI‬وكما موضح في الشكل )‪)9.3‬‬

‫شكل ‪ 9-3‬تطابق القواعد النايتروجينة لموروث ‪ )HA-nos‬للعزلة االمريكية المستوردة للدراسة الحالية‬
‫‪ )Query‬مع العزلة العالمية ‪.)Sbject‬‬

‫‪70‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫شكل )‪( 10.3‬كروماتوكرافي لقمم تسلسالت الحامض النووي لموروث ‪ HA-nos‬للعزلة االمريكية‬
‫المستوردة والذي يمثل خطوط ومنحنيات قواعد النايتروجينية ‪ .‬اللون االحمر يمثل القاعدة النايتروجينية‬
‫الثايمين‪ ،‬اللون االزرق يمثل القاعدة النايتروجينية السايتوسين ‪ ،‬اللون االسود يمثل القاعدة النايتروجينية‬
‫الكوانين ‪ ،‬واللون االخضر يمثل القاعدة النايتروجينية االدنين‪.‬‬
‫‪ .10.3‬المكونات الكيميائية للفول الصويا‬
‫جدول ث‪ )8.3‬يتضمن نتالج التحليل اإلحاالي لمحتوى حبوب فول الاويا وكسبة فول الاويا من المركبات‬
‫الغذالية الرليسية المتماللة بالبروتين والدهن واأللياف والرماد بالاضافة الى محتواها من الرطوبة‬
‫جدول ث‪ )8.3‬التحليل الكيميالي لمحتوى حبوب فول الاويا وكسبة فول الاويا ‪.‬‬
‫‪No.‬‬ ‫‪Chemical composition‬‬ ‫اعالف الصويا المحورة وراثيا‬ ‫حبوب الصويا غير معدلة وراثيا‬

‫عدد العينات ‪3‬‬ ‫عدد العينات ‪3‬‬

‫المعدل واالنحراف القياسي‬ ‫المعدل واالنحراف القياسي‬

‫‪1‬‬ ‫‪Protein‬‬ ‫‪46.83±0.13a‬‬ ‫‪39.78 ± 0.77b‬‬

‫‪2‬‬ ‫‪Fat‬‬ ‫‪1.64± 0.11a‬‬ ‫‪1.29±0.22b‬‬

‫‪3‬‬ ‫‪Fiber‬‬ ‫‪3.32±0.19b‬‬ ‫‪4.01±0.26a‬‬

‫‪4‬‬ ‫‪Ash‬‬ ‫‪5.31±0.19b‬‬ ‫‪6. 23±0.16a‬‬

‫‪5‬‬ ‫‪Moisture‬‬ ‫‪8.59 ± 0.53b‬‬ ‫‪9.74 ± 0.31a‬‬

‫‪71‬‬
 ‫النتائج والمناقشة‬ ‫الفصل الثالث‬

‫تشير نتالج التحليل اإلحاالي لهذه البيانات إلى وجود فروقات معنوية عند مستوى احتمال ث‪ )0.05‬بين‬
‫المركبات الغذالية لكل من نوعي حبوب الاويا وكسبة فول الاويا ‪ .‬اذ ت وقت الكسبة المعدلة وراثيا في‬
‫محتواها من البروتين الخام ‪ Crude Protein‬ث‪ )% 46.83‬والدهن الخام ‪ Fat Crude‬ث‪ )1.64‬على‬
‫قرينتها غير المعدلة وراثيا في محتواها من ن س المكونين الغذاليين ث‪ )%39.78‬للبروتين الخام و‬
‫ث‪)%1.29‬للدهن الخام ‪ .‬فيما انخ ضت نسب كل من االلياف الخام ‪ FiberCrude‬ث‪ )% 3.32‬والرماد ‪Ash‬‬
‫ث‪ )% 5.31‬والرطوبة ‪ Moisture‬ث‪ )% 8.59‬لكسبة فول الاويا المعدلة وراثيا وعند مقارنتها بموكنات‬
‫قريناتها من ن س المكونات الغذالية ث‪ % 4.01‬و‪ % 6.23‬و‪ )% 9.74‬لالياف الخام والرماد والرطوبة‬
‫على التوالي ‪.‬‬
‫هذه النتالج تت ق مع جميع االبحاث العلمية السابقة ثالعبار‪ .)1980 ,‬التي تؤكد بان هنالك عاقة عكسية‬
‫بين محتوى المواد العل ية من كل من البروتين والرماد والبروتين والرطوبة وكذلك بين محتواها من‬
‫الدهن والرماد وايضا بين الدهن والرطوبة ‪ .‬ان مالل هذه النتالج تعد ايجابية وفي صالح كسبة فول الاويا‬
‫المنتجة من فول الاويا المعدلة وراثيا السيما وان كل من المحتوى البروتيني والدهن هما اهم المكونات‬
‫الغذالية في أي مادة عل ية وليست فقط كسبة فول الاويا وبالتالي هذا يخدم قبا الالروة الحيوانية بجميع‬
‫م اصلها االنتاجية السيما قبا الدواجن ثالجنابي ومحمد ‪ ; 1989,‬ابراهيم ‪ ; 2000,‬الياسين وعبد‬
‫العباس‪.) 2010,‬‬
‫ومن الجدير بالذكر ان كسبة فول الاويا والتي هي المنتج الالانوي ل‪by-product‬للعمليات استخاص‬
‫الزيت من بذور فول الاويا ‪ ,‬تعد اهم المواد العل ية التي تمالل المادر البروتيني النباتي االول التي تعتمد‬
‫عليه صناعة الدواجن ‪ .‬اذ اليمكن تحقيق تغذية صحيحة دون توليف عالق متزنة بمحتواها من البروتين‬
‫والباقة وال يتامينات والعناصر المعدنية ‪ ,‬علما ان مالل هكذا عالق غذالية اليمكن الوصول اليها من دون‬
‫كسبة فول الاويا التي قد تشكل مايقرب ‪ 4/1‬مكونات العليقة ‪ ,‬من جانب اخر فان كسبة فول الاويا هي‬
‫من اهم الماادر البروتينية الداخلة في توليف عالف الماشية سوا المنتجة للحليب او اللحم حيث تشكل ما‬
‫يقرب من ‪ 6 /1‬مكونات عالف هذه الحيوانات ‪ .‬ومن الجدير بالذكر فانه ومن المعروف ان كسبة فول‬
‫الاويا هي من اغنى الماادر البروتينية باالحماض االمينية االساسية وغير االساسية اال مة للنمو واالنتاج‬
‫‪.‬‬

‫‪72‬‬
‫االستنتاجات‬
‫والتوصيات‬
 ‫االستنتاجات والتوصيات‬ ‫الفصل الرابع‬

‫‪Conclusions andRecommendation‬‬ ‫‪-4‬االستنتاجات والتوصيات‬

‫‪ 1-4‬االستنتاجات‪Conclusions‬‬

‫‪ .1‬نستنتج من نتالج البحث‪ ,‬تم اللجو في عزل الدنا للنباتات باستخدام عدة استخاص‬
‫الحامض النووي في قيد الدراسة والتي اجريت وفق تعليمات الشركة المانعة ‪ ,‬أثبتت‬
‫النتالج أن هذه البريقة فعالة الستخاص ‪ DNA‬من العينات المدروسة بتركيز ونقاوة‬
‫عالية ‪.‬‬
‫‪ .2‬أشارت النتالج إلى أن ‪PCR‬التقليدية والـ‪PCR‬الالناليبنوعية وحساسية دقيقة وكذلك عالية‬
‫الموثوقية يمكن استخدامها للكشف عن االغذية المعدلة وراثيا محددة عن طريق استخدام‬
‫بادلات محددة تستهدف العناصر المشتركة في النباتات المعدلة وراثيا‪.‬‬
‫‪ .3‬لم تكن االعاف الحيوانية او مايسمى مشتقات فول الاويا في العراق خالية من التعديل‬
‫الوراثي اذ تم اكتشاف بعض اعاف الاويا المعدلة وراثيا ‪.‬‬
‫‪ .4‬ان عدم وجود مورثات معدلة وراثيا في المحاول باستخدام بادلات متخااة للكشف‬
‫عنها هذا اليعني خلو النبات من التعديل الوراثي ‪.‬‬
‫‪ .5‬نستنتج من الدراسة الحالية وعلى ضو النتالج المتحال عليها ‪ ,‬ان التعديل الوراثي الذي‬
‫اجري على محاول فول الاويا وهو من اهم المحاصيل الاناعية عالميا ذات التجارة‬
‫الرالقة ‪ ,‬وقد اثر بشكل مباشر على محتواه من المركبات الغذالية وباألخص محتواه من‬
‫البروتين والدهن اللذان يعدان من اهم المركبات الغذالية على اعتبار ان هذا المحاول يعد‬
‫من المحاصيل الاناعية العالمية ذات التجارة الرالقة وانه يزر بهدف انتاج الزيت‬
‫كمادر غذالي أوال باالضافة إلى إنتاج الكبسة منه والتي تعتبر من اهم ماادر البروتين‬
‫النباتي ذات االهمية البالغة والتي تدخل في تحضير االعاف الحيوانية السيما اعاف‬
‫الدواجن اال ان هذا التغير في الترتيب قد ال يخلو من اثار جانبية بسبب قلت االلياف‬
‫والمعدان الموجود في الرماد‬

‫‪73‬‬
 ‫االستنتاجات والتوصيات‬ ‫الفصل الرابع‬

‫‪2-4‬التوصيات‪Recommendation‬‬

‫‪ .1‬نوصي خال دراس تنا الحالية بضرورة مراقبة دخول المحاصيل المعدلة وراثيا الى البلد‬
‫منها مايدخل غذا لانسان ومنها ما يدخل غذا للحيوان كما في حالة االعاف الحيوانية‬
‫المستوردة وذلك من خاإلنشا مختبرات متخااة للكشف عن النباتات والمنتجات‬
‫المحورة وراثيا ‪.‬‬
‫‪ .2‬ال بد من اعداد خبط ستراتيجية من اجل تبوير الدراسات المتعلقة بالتعديل الوراثي لما‬
‫لها من تاثير على صحة االنسان ‪ ,‬ولهذا ت أعد هذه الدراسة اللبنة االساسية لتبوير القدرات‬
‫العلمية والتقنية في هذا المجال ‪ ,‬وكذلك تببيق قانون األمان الحيوي ; وذلك بهدف حماية‬
‫التنو الحيوي في بلدنا العراق ‪.‬‬
‫‪ .3‬ضننننرورة وضننننع وتبوير اآلليات لدراسننننة اآلثار المحتملة لهذه األحيا والمنتجات على‬
‫صننحة اإلنسننان والحيوان والبيئة وخاننوصننا تاثير تغير المحتوى الغذالي للنبات المحور‬
‫وراثيا‬

‫‪74‬‬
‫المصادر‬
‫والمراجع‬
 ‫المصادر والمراجع‬

‫المصادر العربية ‪:‬‬

‫إبراهيم‪ ,‬إسنننماعيل خليل ‪.‬ث‪ . ) 2000‬تغذية الدواجن ‪ .‬الببعة الالانية ‪ ,‬مببعة جامعة الموصنننل‬
‫و ارة التعليم العالي والبحث العلمي ‪.‬‬
‫اْل سعد‪ ,‬نور‪ ,‬الخياط‪ ,‬غ سان حمادة‪ ,‬خن شور‪ ,‬انس‪ ,‬الباهر‪ ,‬عبدهللا‪,‬عبدالقادر‪,‬احمد ‪.‬ث‪.)2010‬‬
‫الكشننننننف عن وجود منتجات معدلة وراثيا في األسننننننواق المحلية‪.‬مجلة جامعة دمشننننننق للعلوم‬
‫الزراعية ‪ .‬العددث‪.326 ̶ 311:)26‬‬
‫إسماعيل‪،‬أحمدمحمدعلي ‪ .‬ث‪ : ) 1997‬إنباتالبذور ‪ .‬جامعةقبر‪.‬‬
‫ألعبيدي ‪ ,‬جمعة ‪ .‬ث‪ . (2003‬السنلوك الوراثي وتقدير معامل التحديد لان ات اصنناف من فول‬
‫الانننويا ث‪ .) Glycine Max L.Merrill‬رسنننالة ماجسنننتير ‪,‬قسنننم المحاصنننيل الحقلية ‪ ,‬كلية‬
‫الزراعة ‪ ,‬جامعة تكريت ‪.‬‬
‫اْلميري ‪,‬عامر محمد علي ‪,‬جاسم محمد عزيز‪,‬بشير محمد اقديم‪.‬ث‪. ( 2009‬التركيب الكيميالي‬
‫لبذور بعض بعض اصناف فول الاويا‪ Glycine max‬وامكانية استعمالها في تانيع اغذية‬
‫االط ال الحبوبية المساعدة‪ .‬مجلة ام سلمة‬
‫الجنابي ‪ ,‬عبدالكريم ناصننننننر وعباهللا سننننننعيد محمد‪ .(1989).‬االسننننننس العلمية لتغذية الدجاج‬
‫‪.‬مببعة جامعة بغداد و ارة التعليم العالي والبحث العلمي‪..‬‬
‫جندل ‪ ,‬جاسننننننم ‪.‬ث‪ .) 2015‬االغذية المعدلة وراثيا ‪ .‬دار البداية ‪.‬الببعة االولى ناشننننننرون‬
‫ومو عون ‪.‬‬
‫الرفاعي ‪ ,‬عبدالرحيم توفيق ‪ ,‬سمير عبد الر اق شوكي ‪ ,‬ث‪ . )2002‬تقنيات القرن ‪ 21‬لتحسين‬
‫النبات باستخدام راعة ‪.‬الببعة االولى ‪ .‬دار ال كر العربي ‪.‬القاهرة ‪ .‬مار‪.‬‬
‫السككاهوكي ‪,‬مدحت ‪,‬عبدالباسننط عبدالر اق داوود ‪.‬ث‪ .) 2020‬جينوم وتربية النبات ‪.‬كلية علوم‬
‫الهندسة ‪-‬جامعة بغداد‬
‫السككعدي ‪ ,‬علي حمود ‪ ,‬فهيم عبدالكريم بن خيال ‪ ,‬رمضننان شننحاته عبية ‪ .‬ث‪ . )2012‬االغذية‬
‫المهندسة وراثيا ‪ .‬الببعة االولى ‪ .‬دار الرضوان للنشر والتو يع‪.‬‬
‫عبد العباس ‪ ,‬محمد حسنننن ‪.‬ث‪ .) 2007‬اسنننتخدام مركز بروتيني النباتي المحلي محل البروتين‬
‫النباتي والحيواني المسننننننتوردين في الانننننن ات االنتاجية للدجاج بيض المالدة ‪ .‬مجلة علوم‬
‫الزراعية العراقية‪.‬‬

‫‪75‬‬
 ‫المصادر والمراجع‬
‫العطار‪,‬علي عبد الكريم ‪.‬ث‪ .)1980‬التغذية العلمية للدجاج‪ .‬تأليف تيتوس وهري‪.‬كلية الزراعة‬
‫‪-‬جامعة البارة ‪ :‬ص ‪.312-149‬‬
‫محمد‪ ،‬كريم احمد‪ .‬ث‪ .)2014‬اقليم راعة الر في محافظتي النجف والقادسننية‪ .‬مجلة البحوث‬
‫الجغرافية في كلية التربية للبنات ‪ -‬جامعة الكوفة‪.‬‬
‫الياسككين‪,‬علي عبدالخالق‪.‬محمد حسننن عبالعباس‪.‬ث‪.) 2010‬تغذية البيور الداجنة‪.‬و ارة التعليم‬
‫العالي والبحث العلمي ‪ .‬جامعة بغداد‪.‬‬

‫‪76‬‬
 ‫المصادر والمراجع‬

: ‫المصادر االجنبية‬
Aboul-Maaty, N. A. F., & Oraby, H. A. S. (2019). Extraction of high-
quality genomic DNA from different plant orders applying a
modified CTAB-based method. Bulletin of the National Research
Centre, 43(1), 25–31.
Agnihotri, S., Burrell, K. E.,Wolf, A., Jalali, S., Hawkins, C., Rutka, J. T.,
& Zadeh, G. (2013). Glioblastoma, a brief review of history,
molecular genetics, animal models and novel therapeutic strategies.
Archivum immunologiae et therapiae experimentalis, 61(1), 25-41.
Ahmed, F.E. (1995). Applications of molecular biology to biomedicine
and toxicology. Journal of Environmental Science and Health,
13(1): 1-51.
Aljumali, J. M. A. (2011). Growth and yield of soybean as effect of
planting dates. Iraqi Journale. Agriculture. Scince. 42(5): 38-45.
Ahmad, M.M., Ali, A, Siddiqui, S. and Abdin, M.Z. (2017).
MethodsinTransgenic Technology. In Plant Biotechnology:
Principles and Applications. Springer
Singapore.p. 93-115.
Allison, S. & Palma, P.M. (1997). Commercialization of transgenic plants:
potential ecological risks. BioScience, 47:86–96.
Almofti; M.R, Hideyoshi, H, Yasuo, S., Almofti, A., Li, W. et al. (2003).
Lipoplex size determines lipofection efficiency with or without
serum. Molecular Membrane Biology, 20(1):35-43.
Alvarez, J. M., Schinke, A. L., Brooks, M. D., Pasquino, A., Leonelli, L.,
Varala, K., et al & Coruzzi, G. M. (2020). Transient genome-wide
interactions of the master transcription factor NLP7 initiate a rapid
nitrogen-response cascade. Nature communications, 11(1), 1-13.

77
 ‫المصادر والمراجع‬
Ammann, K. (2011). Molecular differences between GM-and non-GM
crops over-estimated. Nepal JBiotechnology, 1(1), 31-48.
Ammann, K., Jacot, Y., & Al Mazyad, P. R. (2001). Field release of
transgenic crops in Switzerland. An ecological risk assessment of
vertical gene flo Gene technisch veränderte Krankeits und
Schädlingsresistente Nutzpflanzen. Nature communications, 13(2),
111-131.
Andersen, V. (Ed.). (2020). Genetically Modified and Irradiated Food:
Controversial Issues: Facts Versus Perceptions. Academic Press.
Arnheim, N. and Erlich, H. (1992). Polymerase Chain Reaction strategy.
Anne Rev. Biochem. 61: 131-156.
Arora, N., & Mishra, A. (2011). Safety assessment of genetically modified
food crops. Allergy Asthma Immunology, 25(2), 53-60.
Arun, Ö. Ö., Yılmaz, F., & Muratoğlu, K. (2013). PCR detection of
genetically modified maize and soy in mildly and highly processed
foods. Food Control, 32(2), 525-531.
Asano, T., Nguyen, T. H. N., Yasuda, M., Sidiq, Y., Nishimura, K.,
Nakashita, H., & Nishiuchi, T. (2020). Arabidopsis Mapkkk δ-1 is
required for full immunity against bacterial and fungal infection.
Journal .Experimental Botany, 71(6), 2085-2097 .
Ausubel, F.M., Brent, R., Kingston, R.E.; Moore, D.D., Seidman, et al
.(2002). Short Protocols in Molecular Biology. 5th edn. John Wiley
and Sons Publications: New Yor
Babekova, R., Funk, T., Pecoraro, S., Engel, K. H., Baikova, D. andBusch,
U. (2008). Duplex polymerase chain reaction (PCR) for
thesimultaneous detection of CryIA(b)and the maize ubiquitin
promoter inthe transgenic rice line KMD1. Biotechnology Equip,
22(2):705–708.

78
 ‫المصادر والمراجع‬

Bua, B. and Ojirot, M. (2014). Assessing the Importance of Rice as Food

and Income Security Crop in Puti-puti Sub-county, Pallisa
District,Uganda. American Journal of Experimental Agriculture.
science domaininternational 4(5): 532-540.
Batista, R. and Oliveira, M. M. (2009).Facts and fiction of
geneticallyengineered food. Trends in Biotechnology, 27(5):277-
286.
Biłas, R., Szafran, K., Hnatuszko-Konka, K., & Kononowicz, A. K.
(2016). Cis-regulatory elements used to control gene expression in
plants. PlantCell, Tissue and Organ Culture, 127(2), 269-287.
Bomgardner, M. M. (2012). Replacing trans-fat. Chemical and
Engineering News, 90(11): 30-32.
Brar, D. S. and Khush, G. S. (1997). Alien introgression in rice. Plant
Molcular. Biological. 35: 35-47.
Bawa, A. S., & Anilakumar, K. R. (2013). Genetically modified foods:
safety, risks and public concerns a review. Journal of food science
and technology, 50(6), 1035-1046
Brar, D. S., Dalmacio, R., Elloran, R., Aggarwal, R., Angeles, R. and
Khush, G. S.( 1996). Gene transfer and molecular characterization
of introgression from wild Oryza species into rice. In: Rice Genetics
III. International Rice Research Institute, Manila, The Philippines,
pp. 477-486.
Breyer, D., Kopertekh, L. and Reheul, D. (2014). Alternatives to antibiotic
resistance marker genes for in vitro selection of Genetically
Modified Plants–Scientific Developments; Current Use, operational
access and biosafety considerations. critical reviews in plant
sciences; 33(4): 286-330.

79
 ‫المصادر والمراجع‬
Breckling, B., Reuter, H., Middelhoff, U., Glemnitz, M., Wurbs, A.,
Schmidt, G., & Windhorst, W. (2011). Risk indication of genetically
modified organisms (GMO): modelling environmental exposure and
dispersal across different scales: oilseed rape in Northern Germany
as an integrated case study. Ecological indicators, 11(4), 936-941.
Cai,L; Lu Z., Qiantang F., and Zeng F.(2018). Identification and
expression analysis of cytokinin metabolic genes IPTs, CYP735A
and CKXs in the biofuel plant Jatropha curcas, Peer Journal, 6:
812-899.
Carrière, Y., Fabrick, J. A., & Tabashnik, B. E. (2016). Can pyramids and
seed mixtures delay resistance to Bt crops. Trends in Biotechnology,
34(4), 291-302.
Chai, R., Zhang, G., Sun, Q., Zhang, M., Zhao, S., & Qiu, L. (2013).
Liposome-mediated mycelial transformation of filamentous fungi.
Fungal biology, 117(9), 577-583.
Chakrabarty, S., Jin, M., Wu, C., Chakraborty, P., & Xiao, Y. (2020).
Bacillus thuringiensis vegetative insecticidal protein family Vip3A
and mode of action against pest Lepidoptera. Pest Management
Science, 76(5), 1612-1617
Chen, Q., Shinozaki, D., Luo, J., Pottier, M., Havé, M., Marmagne, A.,
...& Masclaux-Daubresse, C. (2019). Autophagy and nutrients
management in plants. Cells, 8(11), 1426-1478.
Couto, M., Sudre, A., Lima. M. and Bomfim , T.(2013). Comparison of
techniques for DNA extraction and agarose gel staining of DNA
fragments using samples of Cryptosporidium. Federal Rural
University of Rio de Janeiro, Seropedica, Rio de Janeiro, Brazil,
Journal. Veterinarian Medicine. 58(10):535–542.

80
 ‫المصادر والمراجع‬
Darbani, B., Farajnia, S., Noeparvar, S., Stewart, E., Moharnmadi, S. et
al. (2008). Plant transformation. Needs and futurity of the
transgenes. Biotechnology, 7: 403-412.
Daveya, M. R., Anthony, P., Power, J. B. and Lowe, K. C. (2005). Plant
protoplasts statusand biotechnological perspectives . biotechnology
advances ,23(2) :131-171.
Dona, A. and Arvanitoyannis, I. S. (2009). Health risks of genetically
modified foods. Critical reviews in food science and nutrition, 49(2):
164-175.
Ellis, J. R., Villareal, C. P. and Juliano, B. O.( 1986). Protein content,
distribution and retention during milling of brown rice. Qual. Plant.
Plant Foods Hum. Nutrition. 36 (1): 17-26.
Elsanhoty, R. M., Al-Turki, A. I., & Ramadan, M. F. (2013). Prevalence
of genetically modified rice, maize, and soy in Saudi food products.
Applied biochemistry and biotechnology, 171(4), 883-899.
El-Zaeem, S. Y., Ahmed, M. M. M., Salama, M. E., & El-Maremie, H. A.
(2011). Production of salinity tolerant Nile tilapia, Oreochromis
niloticus through traditional and modern breeding methods: II.
Application of genetically modified breeding by introducing foreign
DNA into fish gonads. African Journal of Biotechnology, 10(4), 684-
695.
Epley, R.J. (1998) . Meat tenderness Regentes of the University of
Minnesata Fagan, J. (2003). DNA Based Methods for Detection and
Quantificationof GMOs: Principles and Standards. In: Testing of
GeneticallyModified Organisms in Foods Ed. F.E. Ahmed. Food
Products Press, Animprint of The Haworth Press, 6:163-215.
Farhan, Y.I. (2014). Detection of Genetically Modified Rice by different
type of PCR. M.S.C. Thesis, instituted of Genetic Engineering and
Biotechnology, University of Baghdad Iraq.
81
 ‫المصادر والمراجع‬
Freese, W.and Schubert, D. (2004). Safety testing and regulation of
geneticallyengineeredfoods. Biotechnology and Genetic
Engineering Reviews, 21: 229-324.
Forte, V. T., Di Pinto, A., Martino, C., Tantillo, G. M., Grasso, G. et al.
(2005). A general multiplex-PCR assay for the general detection of
genetically modified soya and maize. Food Control, 16(6): 535-539.
Gryson, N. (2010). Effect of food processing on plant DNA degradation
and PCR-based GMO analysis: a review. Analytical and
bioanalytical chemistry, 396(6), 2003-2022.
Guertler, P., Harwardt, A., Eichelinger, A., Muschler, P., Goerlich, O., &
Busch, U. (2013). Development of a CTAB buffer-based automated
gDNA extraction method for the surveillance of GMO in seed.
European Food Research and Technology, 236(4), 599-606.
Hernandez-Garcia, C. M., & Finer, J. J. (2014). Identification and
validation of promoters and cis-acting regulatory elements. Plant
Science, 217, 109-119.
Higuchi, D., Von Berlodingen, C.H., Sensabough, G.F. and Erlich, H.A.
(1988). DNA typing from single hairs. Nucl. Acids Reserch. 33(2):
543-546.
Hilbeck, A., & Otto, M. (2015). Specificity and combinatorial effects of
Bacillus thuringiensis Cry toxins in the context of GMO
environmental risk assessment. Frontiers in Environmental Science,
3: 71-112.
Ho, M. W., Ryan, A. and Cummins, J. (1999). Cauliflower mosaic viral
promoter-a recipe for disaster. Microbial Ecology in Health and
Disease, 11(4): 194-197.
Holst-Jensen, A., Bertheau, Y., de Loose, M., Grohmann, L., Hamels, S.,
Hougs, L., Wulff, D. (2012). Detecting un-authorized genetically

82
 ‫المصادر والمراجع‬
modified organisms (GMOs) and derived materials. Biotechnology
advances, 30(6), 1318-1335.
HUANG, J. K., & PENG, B. W. (2015). Consumers' perceptions on GM
food safety in urban China. Journal of Integrative Agriculture,
14(11), 2391-2400.
Husaini, A. M., Abdin, M. Z., Parray, G. A., Sanghera, G. S., Murtaza, I.,
Alam, T., & Khan, H. N. (2010). Vehicles and ways for efficient
nuclear transformation in plants. genetically modified crops, 1(5),
276-287.
Jeschke, J. M., Keesing, F., & Ostfeld, R. S. (2013). Novel organisms:
comparing invasive species, GMOs, and emerging pathogens.
Ambio, 42(5), 541-548.
Jiang, C., Xu, S., Zhang, S., & Jia, L. (2012). Chitosan functionalized
magnetic particle-assisted detection of genetically modified
soybeans based on polymerase chain reaction and capillary
electrophoresis. Analytical biochemistry, 420(1), 20-25.
Jin, Y., Goodman, R. E., Tetteh, A. O., Lu, M., & Tripathi, L. (2017).
Bioinformatics analysis to assess potential risks of allergenicity and
toxicity of HRAP and PFLP proteins in genetically modified bananas
resistant to Xanthomonas wilt disease. Food and Chemical
Toxicology, 109, 81-89.
Kikkert, J.R.; Vidal, J.R. and Reisch, B.I. (2004). Stable transformation
of plant cells by particle bombardment/biolistics. Transgenic Plants:
Methods and Protocols, pp. 61-78.
Kamle, S., & Ali, S. (2013). Genetically modified crops: detection
strategies and biosafety issues. Gene, 522(2), 123-132.
Komori,T., Sun, Y., Kashihara, M., Uekawa, N., Kato, N., Usami, S., ...&
Bortiri, E. (2020). High-throughput phenotypic screening of random

83
 ‫المصادر والمراجع‬
genomic fragments in transgenic rice identified novel drought
tolerance genes. Theoretical and Applied Genetics,6 ,1-11.
Kim, S. R., &An, G. (2012). Bacterial transposons are co-transferred with
T-DNA to rice chromosomes during Agrobacterium-mediated
transformation. Molecules and cells, 33(6), 583-589.
Komatsu, A.; Ohtake, M.; Hasegawa, H., Terakawa, T. and Wakasa, K.
(2006). Transgenic Rice for Animal Feed with High Tryptophan
content generated by a Selectable Marker and vector backbone-free
technology. Journal. Plant Biotechnology, 23: 39-46.
Krenek, P., Samajova, O., Luptovciak, I., Doskocilova, A., Komis, G., &
Samaj, J. (2015). Transient plant transformation mediated by
Agrobacterium tumefaciens: Principles, methods and applications.
Biotechnology Advances, 33(6), 1024-1042.
Krishnan, H. B., Jang, S., KW. S., Kerley, M. S., Oliver, M. J., & Trick,
H. N. (2011). Biofortification of soybean meal: immunological
properties of the 27 kDa γ-zein. Journal of agricultural and food
chemistry, 59(4), 1223-1228.
Lacroix, B., & Citovsky, V. (2016). A functional bacterium-to-plant DNA
transfer machinery of Rhizobium etli. PLoS pathogens, 12(3). (6),
1154-11925.
Lazzeri, P. A., Brettschneider, R., Lührs, R., & Lörz, H. (1991). Stable
transformation of barley via PEG-induced direct DNA uptake into
protoplasts. Theoretical and Applied Genetics, 81(4), 437-444.
Made, D., Degner, C., & Grohmann, L. (2006). Detection of genetically
modified rice: a construct-specific real-time PCR method based on
DNA sequences from transgenic Bt rice. European Food Research
and Technology, 224(2), 271.
Man, Y. C., Aida, A. A., Raha, A. R., & Son, R. (2007). Identification of
pork derivatives in food products by species-specific polymerase
84
 ‫المصادر والمراجع‬
chain reaction (PCR) for halal verification. Food control, 18(7), 885-
889.
Manchester, K.L. (1995). Value of A260/A280 ratios for measurement
ofpurity of nucleic acids. Journal. Biotechniques, 19:208–210.
Matas, A. J., Gapper, N. E., Chung, M. Y., Giovannoni, J. J., & Rose, J.
K. (2009). Biology and genetic engineering of fruit maturation for
enhanced quality and shelf-life. Current opinion in biotechnology,
20(2), 197-203.
Moellenbeck, D.J., Peters, M.L., Bing, J.W., Rouse, J.R., Higgins, L.S. et
al. (2001). Insecticidal Proteins from Bacillus thuringiensis protect
corn from corn rootworms. Nature biotechnology, 19(7): 668-672.
Miki, B. and McHugh, S. (2004). Selectable Marker Genes in Transgenic
Plants: applications; alternatives and biosafety. Journal of
Biotechnology, 107(3): 193-232.
Moghissi, A. A., Pei, S., & Liu, Y. (2016). Golden rice: Scientific,
regulatory and public information processes of a genetically
modified organism. Critical reviews in biotechnology, 36(3), 535-
541.
Mullis, K.B. and Faloona, F. (1987). Specific synthesis of DNA in vitro
via a polymerase catalysed chain reaction. Methodsin in Enzymol.
25: 155-335.
Maghari, B. M., & Ardekani, A. M. (2011). Genetically modified foods
and social concerns. Avicenna journal.medical biotechnology, 3(3),
109-136.

Nábrádi, A., & Popp, J. (2011). Economics of GM crop cultivation.

Apstractapplied Studdiesin AgribusInessand Commerce, 5(3), 7-19.
Nzilibili, S. M. M., Ekodiyanto, M. K. H., Hardjanto, P., & Yudianto, A.
(2018). Concentration and Purity DNA Spectrophotometer: Sodium
85
 ‫المصادر والمراجع‬
Monofluorophosphate forensic impended effect. Egyptian Journal of
Forensic Sciences, 8(1): 34-44.
Oliveira, P. H., Touchon, M., & Rocha, E. P. (2014). The interplay of
restriction-modification systems with mobile genetic elements and
their prokaryotic hosts. Nucleic acids research, 42(16), 10618-
10631.
Oraby, H. A., Hassan, A. A. and Abou Mossallam, A. A. (2005).
Screening food products for the presence of CaMV 35S promoter
and NOS 3′ terminator. Journal of the Science of Food and
Agriculture, 85(12): 1974-1980.
Păcurar, D. I., Thordal-Christensen, H., Păcurar, M. L., Pamfil, D., Botez,
C., & Bellini, C. (2011). Agrobacterium tumefaciens: From crown
gall tumors to genetic transformation. Physiological and molecular
plant pathology, 76(2), 76-81.
Park, S. B., Kim, H. Y., & Kim, J. H. (2015). Multiplex PCR system to
track authorized and unauthorized genetically modified soybean
events in food and feed. Food Control, 54, 47-52.
Paganelli, A., Gnazzo, V., Acosta, H., Lopez, S.L. and Carrasco,
A.E.(2010). Glyphosate-based herbicides produce teratogenic
effects onvertebrates by impairing retinoic acid signalling. Chemical
Research inToxicology 23: 1586-95.
Park, S. B.; Kim, H. Y. and Kim, J. H. (2015). Multiplex PCR system to
track authorized and unauthorized Genetically Modified Soybean
events in Food and Feed. Food Control, 54: 47-52.
Pauli, U., Liniger, M., Zimmermann, A. and Schrott, M. (2000).Extraction
and Amplification of DNA from 55 Foodstuffs. Journal.
Mitt.Lebensm Hygiene, 91:491-501.
Pauwels, K., De Keersmaecker, S. C., De Schrijver, A., du Jardin, P.,
Roosens, N. H., & Herman, P. (2015). Next-generation sequencing
86
 ‫المصادر والمراجع‬
as a tool for the molecular characterisation and risk assessment of
genetically modified plants: Added value or not. Trends in Food
Science & Technology, 45(2), 319-326.
Pavone, V., Goven, J., & Guarino, R. (2011). From risk assessment to in-
context trajectory evaluation-GMOs and their social implications.
Environmental Sciences Europe, 23(1), 3-11 .
Peyret, H., Brown, J. K., & Lomonossoff, G. P. (2019). Improving plant
transient expression through the rational design of synthetic 5′ and 3′
untranslated regions. Plant methods, 15(1), 108-127.
Pipatpanukul, T., Bunnag, S., Theerakulpisut, P., & Kosittrakul, M.
(2004). Transformation of indica rice (Oryza sativa L.) cv. RD6
mediated by Agrobacterium tumefaciens. Transformation, 26(1), 2-
9.
Premanandh, J. (2011). Global consensus–Need of the hour for
genetically modified organisms (GMO) labeling. Journal of
Commercial Biotechnology, 17(1), 37-44.
Rabiei, M., Mehdizadeh, M., Rastegar, H., Vahidi, H., & Alebouyeh, M.
(2013). Detection of genetically modified maize in processed foods
sold commercially in Iran by qualitative PCR. Iranian journal of
pharmaceutical research, 12(1), 25-81.
Racoczy-Trijanowska, M. (2002). Alternative methods of
planttransformation. Jornal. Cell Molecular Biology, 7(3):849-858.
Rani, S. J. and Usha, R. (2013). Transgenic plants: Types; benefits; public
concerns and future. Journal of Pharmacy Research, 6(8): 879-883.
Rzymski, P., & Królczyk, A. (2016). Attitudes toward genetically
modified organisms in Poland: to GMO or not to GMO. Food
Security, 8(3), 689-697.
Raymond, P., Gendron, L., Khalf, P., Dibley, K., Bhat, S. et al. (2010).
Detection and Identification of Multiple Genetically Modified events
87
 ‫المصادر والمراجع‬
using DNA insert fingerprinting. Journal. Analytical and
Bioanalytical Chemistry, 396(6): 2091-2102.
Robinson, C. (2013). Don’t look; don’t find: Health hazards of Genetically
Modified Food. Journal of the Canadian Association of
Naturopathic Doctors, 20: 17-24.
Rommens, C.M. (2004). All-native DNA Transformation: a new approach
to Plant Genetic Engineering. Trends in plant science, 9(9): 457-464.
Rosellini, D. (2011). Selectable Marker Genes from Plants: Reliability and
Potential. In Vitro.Cellular and Developmental Biology-Plant,
47(2): 222-233.
Saadedin, S. M., Abbas, M. R., & Suleiman, A. A. (2019). Detection of
CaMV-35S Promoter and NOS Terminator in Genetically Modified
Tomato Seed in Iraqi Markets. Iraqi journal of biotechnology,
18(2).51-72.
Safaei, P., Aghaee, E. M., Khaniki, G. J., Afshari, S. A. K., & Rezaie, S.
(2019). A simple and accurate PCR method for detection of
genetically modified rice. Journal of Environmental Health Science
and Engineering, 1-5.
Samac, D. A.; Tesfaye, M.; Dornbusch, M.; Saruul, P. and Temple, S. J.
(2004). A comparison of constitutive promoters for expression of
transgenes in alfalfa (Medicago sativa). Transgenic research, 13(4):
349-361.
Schalamun, M., Nagar, R., Kainer, D., Beavan, E., Eccles, D., Rathjen, J.
P., & Schwessinger, B. (2019). Harnessing the MinION: An example
of how to establish longread sequencing in a laboratory using
challenging plant tissue from Eucalyptus pauciflora. Molecular
ecology resources, 19(1), 77-89.
Schnurr, M. A. (2013). Biotechnology and bio-hegemony in Uganda:
unraveling the social relations underpinning the promotion of
88
 ‫المصادر والمراجع‬
genetically modified crops into new African markets. Journal of
Peasant Studies, 40(4), 639-658.
Scorza, R., Callahan, A., Levy, L., Damsteegt, V., Webb, K. et al. (2001).
Post-transcriptional Gene silencing in plum pox virus Resistant
Transgenic European plum containing the plum pox potyvirus coat
protein Gene. Transgenic Research, 10(3): 201-209.
Singh, P., Kumar, R., Sabapathy, S.N. and Bawa, A.S. (2008). Functional
and Edible uses of Soy protein products. Comprehensive reviews in
food science and food safety, 7(1): 14-28.
Soga, K., Kimata, S., Narushima, J., Sato, S., Sato, E., Mano, J., & Kondo,
K. (2020). Development and Testing of an Individual Kernel
Detection System for Genetically Modified Soybean Events in Non-
identity-preserved Soybean Samples. Biological and
Pharmaceutical Bulletin, 43(8), 1259-1266.
Sood, P., Bhattacharya, A. and Sood, A. (2011). Problems and Possibilities
of Monocot Transformation. Journal. BiologicalPlant arum, 55:1-
15.
Stein, A. J. and Rodríguez-Cerezo, E. (2010). International trade and the
global pipeline of new GM crops. Journal. Nature Biotechnology,
28: 23-25.
Świątkiewicz, S. Y. L., Twardowska, M., Markowski, J., Mazur, M. A. Ł.
G. O.., Sieradzki, Z. B. I.., & Kwiatek, K. (2010). Fate of transgenic
DNA from Bt corn and Roundup Ready soybean meal in broilers fed
GMO feed. Bull Vet Inst Pulawy, 54, 237-242.
Sierra,T., Crevillen, A. G., & Escarpa, A. (2019). Electrochemical
detection based on nanomaterials in CE and microfluidic systems.
Electrophoresis, 40(1), 113-123 .
Tabashnik, B. E., Huang, F., Ghimire, M. N., Leonard, B. R., Siegfried,
B. D. et al. (2011). Efficacy of Genetically Modified Bt toxins
89
 ‫المصادر والمراجع‬
against insects with Different Genetic mechanisms of Resistance.
Nature biotechnology, 29(12), 1128-1131.
Tam, P. D. (2015). Genetically modified organism (GMO) detection by
biosensor based on SWCNT material. Current Applied Physics,
15(3), 397-401.
Tripathi, L. (2005). Techniques for Detecting Genetically Modified Crops
and Products. African Journal of Biotechnology, 4(13), 1472-1479.
Tsatsakis, A. M., Nawaz, M. A., Tutelyan, V. A., Golokhvast, K. S.,
Kalantzi, O. I., Chung, D. H., & Chung, G. (2017). Impact on
environment, ecosystem, diversity and health from culturing and
using GMOs as feed and food. Food and Chemical Toxicology, 107,
108-121.
Van Putten, M. C., Kleter, G. A., Gilissen, L. J. W. J., Gremmen, B.,
Wichers, H. J., & Frewer, L. J. (2011). Novel foods and allergy:
Regulations and risk-benefit assessment. Food control, 22(2), 143-
157.
Venken, K. J. T., Bellen, H. J. (2007). Transgenesis upgrades for
Drosophila melanogaster. J0urnal. Development, 124: 3571-3584.
Viljoen, C. D, Dajee, B. K. and Botha, G. M. (2006). Detection of GMO
in food products in South Africa: Implications of GMO labelling.
African Journal. Biotechnology, 5:73–82.
Viljoen, C. D, Dajee, B. K. and Botha, G. M. (2006). Detection of GMO
in food products in South Africa: Implications of GMO labelling.
African Journal. Biotechnology, 5:73–82.
Wang, W., Deng, Y., Li, S., Liu, H., Lu, Z. et al. (2013). A novel
Acetylcholine Bioensor and its Electrochemical behavior. Journal of
Biomedical nanotechnology, 9(4): 736-740.
Wang, X., Teng, D., Guan, Q., Tian, F., & Wang, J. (2015). Detection of
genetically modified crops using multiplex asymmetric polymerase
90
 ‫المصادر والمراجع‬
chain reaction and asymmetric hyperbranched rolling circle
amplification coupled with reverse dot blot. Food chemistry, 173,
1022-1029.
Wong, T. B. (2013). Playing Politics with Food: Comparing Labeling
Regulations of Genetically Engineered Foods Across the North
Atlantic in the United States and European Union. San Joaquin
Agriculture. 23: 243-297.
Wang,Y., Guo, G., Wang, H., Yang, X., Shao, F., Yang, C., & Yang,Y.
(2014). Comparative study of bacteriological culture afluorescence
quantitative PCR (RT-PCR) and multiplex PCR-based reverse line
blot (mPCR/RLB) hybridization assay in the diagnosis of bacterial
neonatal meningitis. San Joaquin Agriculture, 14(1), 224.
Wolt, J. D., Keese, P., Raybould, A., Fitzpatrick, J. W., Burachik, M., Gray
& Wu, F. (2010). Problem formulation in the environmental risk
assessment for genetically modified plants. Transgenic research,
19(3), 425-436.
Wolfenbarger, L.L. and Phifer, P.R. (2000). The Ecological risks and
Benefits of Genetically Engineered Plants. Science, 290(5499),
2088-2093.
Xue,K., Yang, J., Liu, B., & Xue, D. (2012). The integrated risk assessment
of transgenic rice Oryza sativa: A comparative proteomics approach.
Food chemistry, 135(1), 314-318.
Yari, H., Alireza, E., Reza, H., Khosrav, M. and Pourmehdi, S. (2013).
Optimization of a rapid DNA extraction protocol in rice focusing on
age of plant and EDTA concentration. Journal. Medical and
Bioengineering, 2(3):218-223.
Ye, X., Al-Babili, S., Klöti, A., Zhang, J., Lucca, P. et al. (2000).
Engineering the Provitamin A (β-carotene) Biosynthetic pathway

91
 ‫المصادر والمراجع‬
into (carotenoid-free) Rice endosperm. Science, 287(5451): 303-
305.
Young, J. L., & Dean, D. A. (2015). Electroporation-mediated gene
delivery. In Advances in genetics(89): 49-88.
Zaulet, M., Rusu, L., Kevorkian, S., Luca, C., Mihacea, S., Badea, E. M.,
& Costache, M. (2009). Detection and quantification of GMO and
sequencingoftheDNAamplifiedproducts.Romania Biotechnological
Letters, 14(5), 4733-4746.
Zhu, D., Liu, J., Tang, Y., & Xing, D. (2010). A reusable DNA biosensor
for the detection of genetically modified organism using magnetic
bead-based electrochemiluminescence. Sensors and Actuators B
Chemical, 149(1), 221-225.

92
Summery

Summery

Most foods are produced at the present time using genetic engineering
techniques or what is known as gene technology, which is a method used
to transfer genes from one organism to another with the aim of giving
desired traits or characteristics and that most of the gene transfer operations
take place randomly among the genetic material, which raises concerns
about the inability of DNA In controlling the metabolic processes in the
long run.

Polymerase chain reaction (PCR) technology for GMO detection is the

most reliable option due to its high sensitivity and specificity. It is used in
most countries of the world.

91 samples were collected for each of the soybean beans and their
secondary derivatives, as well as the rice grains, which were obtained
during the current study period, which started from December 2019 to
March 2020. DNA was isolated from dry plant isolates (soybeans and their
secondary derivatives and rice grains) of the approved cultivars using
prepared protocol steps. This kit provides a fast and easy way to obtain
pure DNA from plant isolates.

When measuring the optical density OD of the DNA of all isolates, most
of the purity values were found between (1.7 - 2.0).

During the current study, the polymerase chain reaction technique was
used to investigate the common primers used in genetic modifications in
plants, which are both the CaMV-35S promoter and the Nos terminator.
Two molecular methods were used to investigate genetically modified
a
Summery

crops, which are soybeans and soybean meal, as follows: The first method
is detection using the Monoplex PCR chain, the second method is detection
using the douplex PCR chain reaction.

The current results showed that three genotypes out of seventeen

genotypes belonging to the soybean cake were genetically modified
containing the Promoter and terminator of the same sample for the samples
of the American imported soybean meal Healthy Fead No. 1, and the
Brazilian imported soybean meal Healthy Fead No. 2. Healthy Feed No.3
Argentine soybean meal, using both Monoplex PCR and douplex PCR.

The promoter for the CaMV-35S promoter recorded the product of 195
base pairs in three genotypes of GM soybean feed, as well as the catalyst
record of the terminator of the product of 118 base pairs in three genotypes
of the GM soybean meal, The molecular weights of the replicated beam
were estimated on the sites of the beams with known partial weights of the
DNA-Marker.

The results of this study were compared with previous studies, as it was
found that the multiplicative beam is confined between the two sizes 100-
200 base pairs, and this was confirmed by the relationship between the
molecular weight of the volumetric guide beams and the distance that those
multiplying beams moved on the acarose gel. Whereas, no positive results
were recorded for the specific primers of P35S-cf3 and terminator P35S-
cf4 for all rice crop isolates using the polymerase chain reaction (PCR).
A sample of genetically modified US soybean meal was sent to South
Korea in order to confirm the sequence of nitrogen bases for the promoter
and terminator and to compare it with the sequences published on the NCBI
website. The results of the current study indicated that there was 100%
b
Summery

conformity with the nitrogen base sequences for the studies published on
the NCBI website.

The chemical components of soybean crops were studied, where the

comparison between the chemical components of genetically modified and
non-genetically modified crops showed the existence of fundamental
differences in the components if the percentage of proteins and fats in
genetically modified plants increased than in non-genetically modified
plants. Genetically modified and these changes may have economic
benefits that harm them to the health of animals, and thus humans, are not
clear and need in-depth studies.

The present study summarizes that the use of different molecular

methods such as the polymerase chain reaction are valuable and useful
tools for the detection of genetically modified crops. The main step for
detecting the results of genetically modified crops is the use of the
appropriate DNA extraction method and its suitability for subsequent
analysis.

c
Ministry of Higher Education
& Scientific Research
University of Kerbala/College of Science
Department of Biology

Detection of genetically medication

among imported fruits and studying
effects on duration of storage
A thesis

Submitted to the council of the

College of Science – University of Karbala

In partial of fulfillment of requirements for degree of Master of

Science in Biology

By

Basim Abdul Wahid Jasur

B.Sc. Kerbala University 2007

Supervised by

Assist / Prof.
Prof.
Dr.Khaled A.Hussain
Dr.Mohanad M. Ahmed

1442 A.H 2020 A.D