Đánh giá sự hòa tan trong ống nghiệm liên quan đến hệ thống phân phối

thuốc nano
Hệ thống phân phối thuốc nano (NDDS) cung cấp giải pháp đầy hứa hẹn cho
việc dịch thuật các loại thuốc nano trong tương lai. Vì sinh khả dụng và kết quả
điều trị có thể được cải thiện bằng cách thay đổi sự giải phóng thuốc từ các
NDDS này, nên việc hiểu rõ động học giải phóng thuốc của chúng là điều cần
thiết. Hơn nữa, Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ yêu cầu đánh
giá nghiêm túc về tính an toàn, hiệu quả và tác động sức khỏe cộng đồng tiềm
tàng của vật liệu nano. Việc tăng thị phần của NDDS cũng đã kích thích ngành
công nghiệp dược phẩm phát triển các phiên bản gốc hiệu quả về chi phí sau khi
hết hạn bằng sáng chế và tính độc quyền liên quan. Tuy nhiên, không giống như
các dạng bào chế thông thường, cách xử lý NDDS trong cơ thể sống rất phức
tạp và khác với hoạt động trong ống nghiệm của chúng. Những thách thức đáng
kể tồn tại trong việc thiết lập mối tương quan in vitro-in vivo (IVIVC) do sự
hiểu biết chưa đầy đủ về biofat in vivo của hạt nano và tác động của nó đối với
các quy trình thử nghiệm in vitro. Một thiết kế giải thể hợp lý có thể đóng vai
trò là công cụ kiểm soát chất lượng và số lượng, đồng thời giúp phát triển
IVIVC có ý nghĩa mang lại lợi ích kinh tế thuận lợi. Các thông số kỹ thuật của
sản phẩm thuốc liên quan đến lâm sàng (các thuộc tính chất lượng quan trọng)
có thể được xác định bằng cách thiết lập mối liên hệ giữa hiệu quả in vitro và
phơi nhiễm in vivo. Sự hòa tan trong ống nghiệm cũng có thể đóng một vai trò
quan trọng để hiểu được độ thanh thải qua trung gian hòa tan và độ an toàn của
NDDS. Các phương pháp hòa tan in vitro phổ biến đối với NDDS và những hạn
chế của chúng sẽ được thảo luận trong bài tổng quan này, trong đó USP 4 đang
được quan tâm nhiều hơn gần đây. Các nhà nghiên cứu đang nỗ lực làm việc để
phát triển các thử nghiệm giải phóng in vitro có liên quan đến sinh học nhằm
đảm bảo hiệu quả điều trị tối ưu của các phiên bản gốc của các NDDS này. Bài
viết này tập trung vào những nghiên cứu này và trình bày những cân nhắc quan
trọng cho sự phát triển trong tương lai của các vấn đề liên quan đến lâm sàng
phương pháp giải phóng in vitro thuận lợi.
1. Hệ thống phân phối thuốc nano và các quy định hiện tại
Công nghệ nano đang nổi lên như một phương pháp đầy hứa hẹn để phát triển
công thức nhằm nâng cao hiệu quả điều trị và sự an toàn của các dạng bào chế
thông thường (Ventola, 2017). Hiện nay, các loại thuốc ở nhiều dạng bào chế có
kích thước nano khác nhau, chẳng hạn như liposome, protein và liên hợp thuốc-
protein, tinh thể nano, hạt nano polyme và các hệ thống dựa trên lipid khác, đã
gia nhập thành công vào thị trường và đang được sử dụng cho nhiều chỉ định
khác nhau. . Danh sách chi tiết các hệ thống phân phối thuốc nano được thương
mại hóa (NDDS) được trình bày trong Bảng 1. Các NDDS này đề xuất các chiến
lược đổi mới để cải thiện hiệu suất của thuốc so với các công thức thông thường.
NDDS có thể tăng cường khả năng hòa tan của thuốc, giảm sự thoái hóa của dạ
dày, giúp giải phóng thuốc có kiểm soát/duy trì hoặc kéo dài thời gian lưu thông
để cho phép tích lũy thuốc nhiều hơn và hiệu quả phân phối tốt hơn (Deng và
cộng sự, 2019). NDDS có thể phá vỡ các rào cản sinh lý (chẳng hạn như hệ
thống miễn dịch, độ thanh thải của thận, enzym và sự thoái hóa cơ học) để đạt
được nồng độ thuốc điều trị cao hơn, ngay cả với liều thấp hơn. Tăng tính thấm
của mạch máu và khả năng thoát bạch huyết kém của môi trường vi mô khối u
cho phép nhắm mục tiêu thụ động NDDS (ví dụ: Doxil®, Baxter Healthcare
Corp.), còn được gọi là hiệu ứng tăng cường tính thấm và duy trì (EPR). Nhắm
mục tiêu hoạt động dựa trên liên kết phối tử thụ thể. NDDS có thể được gắn vào
một phối tử thích hợp (ví dụ: kháng thể, protein) liên kết với các thụ thể có trên
các tế bào cụ thể (ví dụ: trastuzumab liên kết với thụ thể HER2) (Attia và cộng
sự, 2019). Hệ thống phân loại dược phẩm sinh học (BCS) đã tìm thấy tiện ích
rộng rãi trong phát triển sản phẩm thuốc bằng cách phân loại thuốc ứng cử viên
dựa trên độ hòa tan trong nước và tính thấm của ruột. Độ hòa tan thấp và/hoặc
hiệu suất thấp khả dụng có thể dẫn đến sinh khả dụng đường uống kém. Đối với
đường uống, NDDS (ví dụ: tinh thể nano/ huyền phù nano) với độ hòa tan và tốc
độ hòa tan động học cao giúp cải thiện sự hấp thu qua đường uống do kích thước
hạt giảm đáng kể và tăng tỷ lệ diện tích bề mặt trên thể tích. Liposome và NDDS
dựa trên lipid khác cũng có thể tăng cường khả năng thẩm thấu của thuốc bằng
cách tạo điều kiện thuận lợi cho sự tương tác giữa thuốc và màng tế bào ưa mỡ
(Dave và cộng sự, 2017). Đối với đường tiêm, NDDS có thể nâng cao đáng kể
khả năng hòa tan của thuốc chống ung thư kém hòa tan trong nước mà không
cần sử dụng các chất hòa tan độc hại, ví dụ, dầu thầu dầu polyethoxylated (ví dụ:
paclitaxel trong Abraxane®). Công nghệ nano mang lại cả sự nhiệt tình và mối
quan tâm về quy định. Tương thích sinh học, độc tính chưa biết, chất lượng vấn
đề kiểm soát và mở rộng quy mô là những trở ngại lớn cho sự phát triển của thị
trường NDDS. Cơ quan quản lý tiếp tục nỗ lực của chúng tôi để thu hẹp khoảng
cách kiến thức đáng kể. Cơ quan Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ
(FDA) tương tác với các cơ quan chính phủ khác để phát triển các sản phẩm và
công nghệ dược phẩm đổi mới, an toàn và hiệu quả nhằm tránh nỗ lực trùng lặp.
Trung tâm Nghiên cứu Độc chất Quốc gia phát triển các công cụ và quy trình
phân tích để đánh giá độ an toàn của vật liệu nano. Viện Ung thư Quốc gia đã
thành lập Phòng thí nghiệm Đặc tính Công nghệ nano với sự hợp tác của FDA và
Viện Tiêu chuẩn và Công nghệ Quốc gia để kiểm tra hiệu quả và độc tính của
các hạt nano. FDA đã ban hành một số hướng dẫn không ràng buộc dựa trên
khuyến nghị của báo cáo Công nghệ nano năm 2020 của FDA. Các tài liệu
hướng dẫn này thể hiện suy nghĩ hiện tại của FDA về việc sử dụng công nghệ
nano hoặc vật liệu nano, bao gồm “Dự thảo Hướng dẫn cho ngành—Sản phẩm
thuốc, bao gồm cả các sản phẩm sinh học, có chứa vật liệu nano” (FDA, 2017a);
“Xem xét liệu một sản phẩm được FDA quản lý có liên quan đến ứng dụng công
nghệ nano hay không” (FDA, 2014a); “Sản phẩm thuốc Liposome: Hóa học, Sản
xuất và Kiểm soát; Dược động học và sinh khả dụng ở người; và Tài liệu Ghi
nhãn” (FDA, 2018a); “Sử dụng Vật liệu nano trong Thực phẩm cho Động vật”
(FDA, 2015) “An toàn của Vật liệu nano trong Sản phẩm Mỹ phẩm” (FDA,
2014b), v.v. Liên minh Châu Âu cũng thúc đẩy sự phát triển của y học nano bằng
cách xuất bản các hướng dẫn, “tư vấn khoa học” và “hỗ trợ giao thức” thông qua
Ban Công tác Tư vấn Khoa học. Lực lượng đặc nhiệm đổi mới tại EMA cung
cấp một nền tảng để trao đổi thông tin giữa các nhà đổi mới và cơ quan quản lý
về các chủ đề bao gồm y học nano, phương pháp phân phối mới, mô hình hóa và
mô phỏng. Sáng kiến Thuốc Đổi mới là sự hợp tác giữa Ủy ban Châu Âu (đối
tác công) và Liên đoàn và Hiệp hội Công nghiệp Dược phẩm Châu Âu (đối tác
tư nhân) nhằm thúc đẩy sự phát triển nhanh chóng của các loại thuốc đổi mới an
toàn và hiệu quả bao gồm cả thuốc nano.
2. Kiểm tra độ phân giải in vitro: tầm quan trọng
Trong suốt quá trình phát triển sản phẩm thuốc, thử nghiệm độ hòa tan trong ống
nghiệm đã thu hút được sự chú ý nhiều hơn như một thử nghiệm thay thế về hiệu
quả của sản phẩm để có thể tránh được chi phí, thời gian, nhân công và nhu cầu
đo lường động học giải phóng thuốc trong cơ thể. Động học giải phóng thuốc là
thông số chính để đánh giá tính an toàn và hiệu quả của sản phẩm bằng cách
cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính của dạng bào chế. Nhiều nghiên cứu
đã được dành cho việc phát triển phương pháp và thiết bị hòa tan phù hợp để
cung cấp thông tin chi tiết về cơ chế giải phóng và động học từ các dạng bào chế
phức tạp như NDDS. Điều cực kỳ quan trọng là phải hiểu rõ động lực giải phóng
thuốc của NDDS để đáp ứng các mục tiêu điều trị cụ thể và xem xét kỹ lưỡng số
phận lâu dài của chúng để phát triển các loại thuốc nano an toàn hơn. Một loạt
các mô hình toán học cơ học đã được sử dụng để mô tả sự giải phóng thuốc từ
NDDS. Các mô hình này dựa trên cơ chế giới hạn tốc độ giải phóng thuốc như
khuếch tán, trương nở, xói mòn và hòa tan polyme (Fredenberg và cộng sự,
2011; Zolnik & Burgess, 2008). Mô hình động học phù hợp (ví dụ: định luật căn
bậc hai Higuchi, mô hình/luật lũy thừa Korsmeyer–Peppas, mô hình Hixson–
Crowell, mô hình Weibull, mô hình thời gian hỗ trợ tương hỗ) có thể được sử
dụng để khớp chính xác nhất với dữ liệu phát hành thuốc NDDS (Bruschi,
2015). Thử nghiệm độ hòa tan mang lại lợi ích và thúc đẩy quá trình phát triển
thuốc theo nhiều cách, bao gồm kiểm soát chất lượng, đảm bảo chất lượng, thử
nghiệm bổ sung, chứng minh tuyên bố trên nhãn và đánh giá những thay đổi nhỏ
trong công thức hoặc quy trình sản xuất.
2.1. Công cụ kiểm soát chất lượng cho NDDS
Thử nghiệm độ hòa tan trong ống nghiệm được sử dụng như một công cụ kiểm
soát chất lượng có giá trị đối với NDDS. Chỉ phân loại BCS là không đủ để dự
đoán các cấu hình giải phóng in vitro phức tạp (hai hoặc ba pha) và phản ứng
sinh lý in vivo của NDDS vì các thông số mô phỏng/quy trình bên cạnh các đặc
tính của thuốc sẽ làm phức tạp quá trình giải phóng thuốc (Kamaly và cộng sự,
2016). ). Chất lượng của NDDS được đảm bảo bởi thuộc tính chất lượng quan
trọng (CQA) (ví dụ: kích thước hạt, hiệu suất đóng gói và thế năng zeta), được
định nghĩa là bất kỳ đặc tính vật lý, hóa học hoặc sinh học nào cần được giữ
trong một phạm vi xác định. Giống như CQA khác, tính nhất quán của hồ sơ
phát hành trong ống nghiệm có thể giúp thiết lập “các thuộc tính vật liệu quan
trọng” (CMA) và “các thông số quy trình quan trọng” (CPP) (Bastogne, 2017)
cho NDDS. CMA bao gồm các thông số công thức (ví dụ: lượng thuốc, nồng độ
chất hoạt động bề mặt, tỷ lệ thuốc-polymer, tỷ lệ thuốc-lipid, tỷ lệ pha hữu cơ và
dung dịch nước) và CPP bao gồm các thông số sản xuất (ví dụ: nhiệt độ xử lý,
thời gian siêu âm, tốc độ khuấy, lưu lượng, tốc độ tiêm) có khả năng gây ra sự
thay đổi CQA. Krull và cộng sự đã khám phá tác động của các CMA khác nhau
(nghĩa là trọng lượng phân tử và nồng độ) của polyme tạo màng (hydroxy propyl
methyl cellulose) đối với các đặc tính của màng được nạp NP Griseofulvin
(thuốc BCS II). Họ đã chứng minh rằng CMA của polyme tạo màng có thể được
thay đổi để điều khiển quá trình giải phóng thuốc mà không ảnh hưởng đến tính
chất cơ học của màng, tính đồng nhất của hàm lượng thuốc hoặc khả năng tái
phân tán của NP thuốc (Krull và cộng sự, 2017). Hệ số tương tự (f2) và hệ số
khác biệt (f1), được trình bày lần lượt bởi các phương trình (1) và (2) (Anderson
và cộng sự, 1998; FDA, 1997b), là các phương pháp định tính (độc lập với mô
hình) để so sánh các cặp hòa tan. Hai cấu hình được coi là “tương tự” khi giá trị
f2 nằm trong khoảng từ 50 đến 100 và giá trị f1 nằm trong khoảng từ 0 đến 15.
Điều đáng chú ý là giá trị f2 là một hàm log, một sự khác biệt nhỏ trong cấu hình
sẽ dẫn đến sự sụt giảm lớn của f2 giá trị (Anderson và cộng sự, 1998; Kassaye &
Genete, 2013; Shah và cộng sự, 1998). Tuy nhiên, điều quan trọng cần lưu ý là
các CQA khác như kích thước hạt, phân bố kích thước, hiệu suất đóng gói, v.v.
cần được xác định cho NDDS (Stevens và cộng sự, 2015). Hiệu suất hòa tan
(DE), được biểu thị bằng phương trình (3) là một phương pháp định lượng khác
được Khan và Rhodes đề xuất vào năm 1975 để so sánh các đặc tính hòa tan.
trong đó n, số điểm thời gian; Rt, % thuốc tham chiếu trung bình hòa tan tại thời
điểm t sau khi bắt đầu nghiên cứu; Tt, % thuốc thử trung bình hòa tan tại thời
điểm t sau khi bắt đầu nghiên cứu; y, % hòa tan; và y100, độ hòa tan tối đa. Khu
t2

vực dưới đường cong, (∫ y . dt ) có thể được ước tính bằng cách sử dụng các
t1

phương pháp độc lập với mô hình (hình thang) hoặc phụ thuộc vào mô hình
(Anderson và cộng sự, 1998). Yuan và cộng sự đã thiết lập xét nghiệm USP 4 để
so sánh đặc tính hòa tan (sử dụng hệ số tương tự f2) của liposome doxorubicin
nội bộ và công thức liposome được FDA chấp thuận, Doxil®. Họ kết luận rằng
xét nghiệm như vậy có thể đóng vai trò là công cụ kiểm soát chất lượng cho các
công thức liposome chung (Yuan và cộng sự, 2017). Tăng và cộng sự. so. Thuốc
Amphotericin B được phát hành từ liposome được FDA phê chuẩn, AmBisome®
với các sản phẩm liposome chung khác nhau.

Hình 1 (a) Đánh giá tốc độ hòa tan của các phương pháp NP. Các nghiên cứu về
độ hòa tan in vivo không phải lúc nào cũng khả thi. Các xét nghiệm in vitro vô
bào có thể phản ánh hành vi hòa tan trong máu (trên đường đến các mô đích)
trong khi các xét nghiệm in vitro tế bào có thể phản ánh sự hòa tan bên trong tế
bào đích. (b) Các phương pháp hòa tan để kiểm tra liposome (dựa trên 56 ấn
phẩm được truy cập trong giai đoạn 2010–2020). Trong thập kỷ qua, hơn một
nghìn bài báo đã được xuất bản minh họa các nghiên cứu về độ hòa tan in vitro
khác nhau cho các NDDS khác nhau. Vì liposome là NDDS được phê duyệt
rộng rãi nhất nên một tài khoản đã được tạo riêng cho chúng
Đối với Amphonex® và Phosome®, giá trị hệ số tương tự lớn hơn 50 chứng tỏ
rằng thuốc được giải phóng từ hai công thức chung tương tự như sản phẩm thuốc
cải tiến. Trong nghiên cứu này, thử nghiệm giải phóng USP 4 in vitro được được
sử dụng như một công cụ kiểm soát chất lượng để hỗ trợ phát triển các công thức
liposome chung (Tang và cộng sự, 2019).
2.2. Đánh giá độc tính đối với NDDS
Tận dụng các ưu điểm trị liệu (điều trị và chẩn đoán) của vật liệu nano được thiết
kế cũng mở rộng các tương tác không mong muốn với môi trường, các ngăn sinh
học và các quá trình tế bào (Gupta & Xie, 2018). Khả năng NP tồn tại bên trong
cơ thể trong thời gian dài được gọi là “độ bền sinh học”. Nó không chỉ phụ thuộc
vào độ thanh thải (sinh lý và cơ học) mà còn phụ thuộc vào độ bền sinh học của
NP (khả năng kháng bẩm sinh của NP đối với các tác nhân cơ học, hóa học hoặc
sinh học). Thời gian lưu trú dài phản ánh khả năng tích lũy của chúng cao hơn và
sau đó là khả dụng sinh học cũng như độc tính tiềm ẩn cao hơn (Gualtieri và
cộng sự, 2018; OECD, 2018; Utembe và cộng sự, 2015). Kiến thức về tốc độ
hòa tan trong ống nghiệm và thời gian hòa tan có thể là nền tảng để hiểu được độ
thanh thải qua trung gian hòa tan và độ an toàn của NDDS. Thời gian hòa tan là
thời gian cần thiết để các hạt lớn nhất trong quần thể NP polydisperse hòa tan
hoàn toàn (Utembe et al., 2015). Hằng số tốc độ hòa tan có thể thu được bằng
hai phương pháp: (i) phương pháp nhiệt động bao gồm tính toán năng lượng tự
do Gibbs (G) (đối với hệ thống bao gồm NP, vật liệu hòa tan và dung môi) là
hàm của kích thước hạt (Hellmann & Tisserand, 2006 ; Machrafi, 2020; Tang,
2005) và (ii) phương pháp tiếp cận đồ họa sử dụng đồ thị tuyến tính của các quy
luật tỷ lệ tích hợp (ví dụ: bậc 0, bậc nhất, luật căn bậc hai Higuchi, mô hình
Weibull, v.v.).
2.3. IVIVC cho NDDS
FDA định nghĩa mối tương quan in vitro–in vivo (IVIVC) đối với các sản phẩm
thuốc là “một mô hình toán học dự đoán mô tả mối quan hệ giữa đặc tính in-
vitro của dạng bào chế và phản ứng in-vivo” (FDA, 1997a). Nó là chất thay thế
phù hợp cho đánh giá độ hòa tan một điểm và có thể được sử dụng để thiết lập
mối tương quan với các thông số dược động học in vivo của các NDDS khác
nhau (Alshora và cộng sự, 2018; Ha và cộng sự, 2014; Kim & Baek, 2014).
IVIVC có thể được phát triển ở bốn cấp độ khác nhau (Cardot & Davit, 2012;
FDA, 1997a; Qureshi, 2010): cấp độ A, tương quan điểm-điểm giữa đường cong
hòa tan in vitro và đường cong hòa tan in vivo (hoặc đường cong hấp thụ); mức
độ B, tương quan giữa thời gian hòa tan trung bình với thời gian lưu trú trung
bình (hoặc thời gian hấp thụ trung bình), dựa trên nguyên tắc thống kê.
Hình 2: (a) Phương pháp lọc máu. NP được đổ đầy bên trong túi lọc máu đặt vào
ngăn chứa môi trường bên ngoài. Các mẫu được thu thập theo khoảng thời gian
xác định từ ngăn bên ngoài. (b) Phương pháp lọc máu ngược. Các NP thiết lập
đối diện được đặt ở ngăn bên ngoài và bể chứa môi trường bên trong được lấy
mẫu để giải phóng thuốc. (c) Phương pháp lọc máu song song. Các ngăn cho và
nhận có thể tích bằng nhau được ngăn cách bằng màng lọc máu. Các mẫu được
lấy từ tế bào thu. (d) USP 4 (chảy qua tế bào). Bốn nền tảng khác nhau bao gồm
nền hòa tan, cụm máy bơm, môi trường hòa tan (bình chứa) và bộ thu phân đoạn.
(e) Hệ thống vòng hở. Dung môi mới từ bể chứa (bộ chọn phương tiện) liên tục
được bổ sung thông qua các tế bào dòng chảy để duy trì điều kiện chìm vô hạn.
(f) Hệ thống vòng kín. Khối lượng môi trường nhỏ được tuần hoàn nhiều lần từ
tế bào dòng chảy đến bể chứa. Việc lấy mẫu được thực hiện từ môi trường hòa
tan tuần hoàn
3. Phương pháp giải quyết in vitro
Hiện đang thiếu phương pháp hòa tan in vitro tiêu chuẩn cho NDDS. Các
phương pháp giải phóng thuốc khác nhau đang được các nhà nghiên cứu khác
nhau sử dụng. Với số lượng NDDS được bán trên thị trường ngày càng tăng,
người nộp đơn gốc có thể cần phải thiết kế một phương pháp giải phóng in vitro
mới cho sản phẩm thuốc độc nhất của họ. Tốc độ hòa tan của NP có thể được
xác định bằng các thử nghiệm in vitro (vô bào hoặc tế bào) hoặc in vivo như
trong Hình 1a. Các phương pháp vô bào in vitro hiện có bao gồm ba loại: màng
lọc, mẫu và phân tách, và dòng chảy liên tục. Điều kiện chìm thường được
khuyến nghị để hòa tan nhanh và hoàn toàn các dạng bào chế. Đối với các thuốc
hòa tan kém, chất hoạt động bề mặt phù hợp, ở nồng độ tối thiểu thích hợp (trên
nồng độ mixen tới hạn) thường được sử dụng để đạt được điều kiện chìm
(USP43-NF382S-online, 2020; Weng và cộng sự, 2020). Đôi khi việc duy trì các
điều kiện không chìm, bằng cách sử dụng lượng mẫu gần độ hòa tan bão hòa, đã
được báo cáo là chứng minh tốc độ hòa tan chậm và đặc tính hòa tan mang tính
phân biệt đối xử hơn đối với các thuốc hòa tan kém trong NDDS (Liu và cộng
sự, 2013). Hơn 1000 bài báo đã được xuất bản trong cơ sở dữ liệu PubMed trong
thập kỷ qua về các nghiên cứu về độ hòa tan in vitro trên các NDDS khác nhau.
Vì liposome là NDDS được tiếp thị và phê duyệt rộng rãi nên việc tìm kiếm
được thực hiện bằng các thuật ngữ chính - “liposome” và “sự hòa tan trong ống
nghiệm” và các bài báo chi tiết về nghiên cứu giải phóng liposome trong ống
nghiệm trong thập kỷ qua đã được tìm thấy (Hình 1b). Các phương pháp màng
lọc máu được sử dụng rộng rãi nhất; tuy nhiên, mức độ phổ biến của phương
pháp dòng chảy liên tục sử dụng thiết bị USP 4 đang ngày càng gia tăng.
3.1. Phương pháp màng lọc máu
Trong các phương pháp màng lọc máu (ví dụ: túi lọc máu, lọc máu ngược, lọc
máu song song), các NP được tách ra khỏi môi trường giải phóng thông qua
màng lọc máu. Trong kỹ thuật lọc máu thông thường, NP được đặt bên trong túi
lọc máu, trước đó đã được ngâm trong môi trường hòa tan, khuấy bằng bể nước
lắc hoặc máy khuấy từ (Hình 2a). Thuốc được giải phóng từ NP khuếch tán qua
màng lọc máu đến ngăn bên ngoài, nơi các mẫu được thu thập theo các khoảng
thời gian xác định để phân tích. Ngưỡng trọng lượng phân tử (MWCO) của
màng là thông số quan trọng nhất ảnh hưởng đến việc giải phóng thuốc trong
phương pháp lọc máu so với các thông số quan trọng khác bao gồm điều kiện
khuấy trộn, tỷ lệ giữa thể tích tế bào của người cho và người nhận (Shen &
Burgess, 2013). Ngược lại, phương pháp lọc máu ngược có thiết lập ngược lại để
khắc phục khả năng vi phạm tình trạng chìm (Hình 2b) (Calvo và cộng sự, 1996;
Xu và cộng sự, 2012). Trong thiết lập lọc máu song song, các ngăn cho và nhận
thể tích bằng nhau được ngăn cách bằng màng lọc máu (Hình 2c) (Chidambaram
& Burgess, 1999). Khi sử dụng phương pháp lọc máu, kích thước màng phải đủ
lớn để cho phép thuốc đi qua (MWCO gấp khoảng 100 lần kích thước thuốc)
(Xu và cộng sự, 2012) nhưng tránh chuyển chất mang thuốc (NDDS). Túi lọc
máu cũng có thể được sử dụng với thiết bị USP 1 và 2 (Bhagav và cộng sự,
2011). Màng lọc máu là kỹ thuật được sử dụng nhiều nhất; tuy nhiên, có một số
hạn chế của các phương pháp này:
1. Nếu bịt kín không đúng cách, có thể xảy ra rò rỉ môi trường/dạng bào chế từ
túi lọc máu.
2. Dữ liệu giải phóng không đầy đủ có thể được quan sát trong trường hợp điều
kiện không chìm hoặc thời gian cân bằng cao (D'Souza, 2014).
3. Cần kiểm tra khả năng liên kết giữa thuốc và màng lọc. Những phương pháp
này không thể được sử dụng nếu
 màng phù hợp với kích thước lỗ chân lông thích hợp không có sẵn.
4. Kết quả giải phóng không chính xác có thể thu được nếu quá trình lọc máu bị
giới hạn tốc độ bởi chính màng thay vì quá trình hòa tan (Heng và cộng sự,
2008).
3.2. Phương pháp lấy mẫu và riêng biệt
Các NP được đổ vào vỏ nang gelatin hoặc thêm trực tiếp vào môi trường giải
phóng được đựng trong cốc thủy tinh. Các NP phân tán được tách khỏi pha liên
tục theo các khoảng thời gian xác định trước bằng cách sử dụng các kỹ thuật
tách mẫu khác nhau, bao gồm siêu lọc, siêu ly tâm và siêu lọc ly tâm. Chất
nổi/dịch lọc thu hồi sau đó được phân tích để giải phóng thuốc (Ham và cộng sự,
2009; Morales-Cruz và cộng sự, 2012). Ngoài ra, hàm lượng thuốc bên trong các
NP riêng biệt có thể được phân tích sau khi tái cấu trúc chúng bằng dung môi
thích hợp (Sanna và cộng sự, 2012). Các phương pháp lấy mẫu và riêng biệt đưa
ra cách tiếp cận trực tiếp để theo dõi sự giải phóng thuốc trong ống nghiệm từ
NDDS với những thách thức thực tế sau:
1. Rất khó để tách NP khỏi môi trường giải phóng một cách hiệu quả mà
không ảnh hưởng đến đặc tính giải phóng thuốc. Việc giải phóng thuốc tiếp
tục diễn ra trong quá trình tách, có thể dẫn đến kết quả sai lệch (Shen &
Burgess, 2013)
2. Quá trình siêu ly tâm tốc độ cao và thời gian dài có thể dẫn đến mất ổn định
NP (Shen & Burgess, 2013).
3. Có thể xảy ra hiện tượng tắc bộ lọc và hấp phụ thuốc trên bề mặt bộ lọc khi
sử dụng phương pháp lọc để tách mẫu kỹ thuật (Kim và cộng sự, 1997).
4. Sự thay đổi về chỉ số độ hòa tan và kết quả không chính xác có thể xảy ra
do vấn đề làm ướt cố hữu của thuốc hòa tan kém (Heng và cộng sự, 2008).

Hình 3 Hệ thống phân phối thuốc nano (NDDS) cho các loại Hệ thống phân
loại dược phẩm sinh học (BCS) khác nhau. Thuốc loại I rất dễ phát triển.
NDDS cung cấp các giải pháp phân phối thuốc đầy hứa hẹn cho các loại thuốc
tiềm năng thuộc BCS loại II, III và IV bằng cách khắc phục các vấn đề về độ
hòa tan/thấm kém. (b) Hệ thống phân loại DCS. SLAD đánh dấu ranh giới giữa
thuốc DCS loại IIa và IIb. Dưới SLAD tất cả các liều có thể được hòa tan và
trên SLAD chỉ một phần liều được hòa tan (phần hòa tan giảm khi tăng liều).
Thuốc DCS loại IIa cho thấy sự hấp thu “giới hạn tốc độ hòa tan”. Việc giảm
kích thước hạt đơn giản có thể tạo ra các loại thuốc như vậy một cách phù hợp.
Do đó, kích thước hạt (ngược lại với tỷ lệ liều lượng/độ hòa tan trong phân loại
BCS) có thể dự đoán tốt hơn mức độ hấp thụ. Thuốc DCS loại IIb có khả năng
hấp thu “hạn chế độ hòa tan” và chúng gây ra những thách thức lớn về công
thức (sinh khả dụng phụ thuộc vào pH dạ dày và có thể xảy ra kết tủa ở ruột).
Những thuốc này vẫn được hấp thu không đầy đủ trừ khi được hòa tan thích
hợp (ví dụ: công thức dựa trên lipid hoặc hệ phân tán rắn vô định hình)
3.3. Phương pháp dòng chảy liên tục
Có thể thực hiện thử nghiệm độ hòa tan in vitro của NDDS trong dòng chảy
liên tục bằng thiết bị USP 4 kết hợp với lọc máu tế bào (Hình 2d). Mẫu thử
nghiệm (NDDS) được đặt trong các tế bào lọc máu sẵn sàng sử dụng được thiết
kế đặc biệt, thường được làm bằng este xenlulo (ví dụ: Float-A-Lyzer® G2).
Các loại tế bào dòng khác nhau (có sẵn ở các kích thước khác nhau và giới hạn
trọng lượng phân tử khác nhau) có thể được sử dụng cho các dạng bào chế khác
nhau. Các thông số thử nghiệm như thể tích, tốc độ dòng chảy và nhiệt độ của
phương tiện hòa tan có thể được điều chỉnh theo yêu cầu xét nghiệm. USP 4 rất
linh hoạt và có thể được sử dụng để thử nghiệm độ hòa tan của cả hai dạng bào
chế thông thường (bột, hạt, viên nén, viên nang, viên bao tan trong ruột, thuốc
đạn và hỗn dịch tiêm) và hệ thống phân phối thuốc mới, bao gồm các sản phẩm
giải phóng biến đổi, stent cấy ghép , thiết bị y tế phủ thuốc, liposome,
microspher, NP, v.v. (Singh & Aboul-Enein, 2006; Yoshida và cộng sự, 2015).
Nó có thể phục vụ như một giải pháp thay thế đầy hứa hẹn cho các phương
pháp thử nghiệm độ hòa tan thông thường do những ưu điểm sau:
1. Thành phần, độ pH và/hoặc tốc độ dòng của môi trường hòa tan có thể
được thay đổi trong quá trình thử nghiệm để mô phỏng thủy động lực học trong
lòng dạ dày hiệu quả hơn (Gite và cộng sự, 2016).
2. Vì dạng bào chế được phân lập từ môi trường chứa, nên việc lấy mẫu và
thay đổi môi trường có thể xảy ra mà không làm ảnh hưởng đến động lực học
bên trong USP 4, giúp nó có ưu thế hơn các phương pháp giải phóng in vitro
thông thường khác (D'Arcy và cộng sự, 2010; Eaton và cộng sự. , 2012; Singh
& Aboul-Enein, 2006; Yoshida và cộng sự, 2015).
 3. Khi vận hành ở cấu hình mở (Hình 2e), dung môi mới từ bể chứa liên tục
được bổ sung qua tế bào để tạo điều kiện chìm vô hạn cho các hợp chất hòa tan
kém, giúp quá trình phát triển IVIVC dễ dàng hơn.
4. Cấu hình vòng kín (Hình 2f) cho phép sử dụng dung lượng phương tiện nhỏ
để khắc phục giới hạn của các vấn đề định lượng.
5. Không cần thêm bước lọc nào nữa vì mọi hạt không hòa tan sẽ được giữ lại
trong tế bào (Heng và cộng sự, 2008).
Kiến thức về vận hành thủy động lực học (vật lý của dòng chất lỏng—được
điều chỉnh bởi các nguyên tắc bảo toàn khối lượng, động lượng và năng lượng)
có thể cải thiện độ chắc chắn và khả năng phân biệt đối xử của thử nghiệm hòa
tan (Shiko và cộng sự, 2011). Nó có thể hướng dẫn lựa chọn các điều kiện thử
nghiệm thích hợp, thiết kế các thiết bị thử nghiệm độ hòa tan và thậm chí giúp
giải thích các kết quả thử nghiệm. Mức độ đồng nhất và đối xứng dòng chảy
cao đã đạt được đối với USP 4 khi phần hình nón của tế bào hòa tan được lấp
đầy bằng các hạt thủy tinh 1 mm cùng với hạt hồng ngọc đỏ (Kakhi, 2009). Các
nghiên cứu được tóm tắt trong Bảng 2 chứng thực khả năng phân biệt đối xử
của USP 4 trong việc thử nghiệm NDDS.
4. Xem xét giải quyết invitro NDDS
Có một số yếu tố liên quan đến NDDS ảnh hưởng đến hiệu suất in vivo của sản
phẩm. Những yếu tố này bao gồm vật lý đặc tính hóa học của dược chất, các
thông số công thức, điều kiện môi trường và khả năng tương thích sinh học. Để
phát triển IVIVC có ý nghĩa, điều quan trọng là phải có được dữ liệu in vivo
trước; và phương pháp thử nghiệm độ hòa tan dự đoán trong ống nghiệm có thể
được thiết kế bằng cách điều chỉnh các yếu tố này để phù hợp với cấu hình in
vivo (Zolnik & Burgess, 2008).
4.1. Tính chất của thuốc
BCS cung cấp khuôn khổ để xác định CQA, yếu tố quyết định đối với sinh khả
dụng qua đường uống (FDA, 2018b). Nó có thể phản ánh hiệu quả in vivo, chủ
yếu dựa trên độ hòa tan của thuốc và tính thấm của ruột. Tỷ lệ sử dụng thuốc
trong nhóm BCS cụ thể có thể gợi ý các công nghệ phân phối thuốc tối ưu phù
hợp với loại thuốc đó (Hình 3a). IVIVC có ý nghĩa được mong đợi đối với
thuốc BCS loại II vì độ hòa tan là bước giới hạn tốc độ hấp thu. Đối với thuốc
thuộc BCS nhóm III, IVIVC khó có thể xảy ra hoặc có thể xảy ra tùy thuộc vào
tỷ lệ hòa tan và vận chuyển qua đường ruột tương đối. Đối với thuốc BCS loại
IV, IVIVC rất khó xảy ra. Hệ thống phân loại BCS sửa đổi- được gọi là hệ
thống phân loại khả năng phát triển (DCS)- cung cấp tầm quan trọng của kích
thước hạt trong việc xác định độ hấp thụ giới hạn tốc độ hòa tan (Butler &
Dressman, 2010). Vì kích thước hạt thuốc (thay vì tỷ lệ liều lượng/độ hòa tan)
là yếu tố dự báo tốt hơn về khả năng hấp thu giới hạn tốc độ hòa tan của thuốc
DCS loại IIa (Hình 3b), việc kiểm soát kích thước hạt sẽ quyết định sinh khả
dụng. Có thể đạt được sự hấp thu hoàn toàn qua đường uống của các loại thuốc
tinh thể như vậy bằng cách sử dụng dạng bào chế uống rắn tiêu chuẩn (do tác
dụng bù của tính thấm cao). Mặt khác, các hợp chất DCS loại IIb có độ hòa tan
bị hạn chế và chúng đặt ra những thách thức lớn về công thức (vì khả dụng sinh
học phụ thuộc vào pH dạ dày và sự kết tủa trong ruột có thể xảy ra). Những
thuốc này được hấp thu không hoàn toàn trừ khi được bào chế ở dạng bào chế
hòa tan thích hợp. Độ hòa tan/độ ổn định của thuốc phải được kiểm tra trong
môi trường mục tiêu (trong các điều kiện thủy động lực học liên quan) trước
khi thử nghiệm độ hòa tan của dạng bào chế thực tế để xác định sớm nhất các
vấn đề đó. Tuy nhiên, tùy thuộc vào thiết lập thử nghiệm, các điều kiện thử
nghiệm được sử dụng để đo độ hòa tan của thuốc có thể không phải lúc nào
cũng đúng trong quá trình thử nghiệm độ hòa tan trong ống nghiệm (ví dụ: sự
kết tụ của protein trong các mao mạch mịn của USP 4). Nên thử các phương
pháp giải phóng thay thế (như giải phóng phân tán) trong những trường hợp
như vậy (Janas và cộng sự, 2017).
4.2. Thông số công thức
Việc giải phóng thuốc từ NDDS có thể được tùy chỉnh bằng cách điều chỉnh
các thông số công thức (ví dụ: ma trận lipid, nồng độ polyme/chất ổn định,
dung môi, lượng thuốc) cũng như các điều kiện sản xuất (ví dụ: nhiệt độ, độ
đồng nhất) (Sedighi và cộng sự, 2019; Sharma và cộng sự, 2014). Hình dạng
của NP có thể ảnh hưởng đến phản ứng sinh lý trong tế bào người. Các hạt
nano polyethylen glycol poly(lactic-co-glycolic acid) hình kim (NP PLGA-
PEG) được phát hiện có khả năng gây độc tế bào đáng kể so với các NP hình
cầu (Zhang và cộng sự, 2017). Kích thước có thể ảnh hưởng đến độc tế bào
trong ống nghiệm tính chất của NP vì các hạt nhỏ hơn có xu hướng hấp thụ
nhiều phân tử sinh học hơn (protein-corona) (Xiong và cộng sự, 2013). Độc
tính và kích ứng có thể ảnh hưởng đến sự giải phóng thuốc trong cơ thể do phù
nề và sự hiện diện của các tế bào viêm như đại thực bào và bạch cầu trung tính
(Zolnik & Burgess, 2008).
4.3. Điều kiện môi trường
Sự tương tác giữa không gian và thời gian (tùy thuộc vào vị trí và thời gian)
của các yếu tố sinh học và/hoặc môi trường tạo thành một lớp phân tử sinh học
hấp phụ bề mặt tự phát xung quanh các NP- được gọi là “protein-corona”. Các
NP được hợp nhất với protein-corona của nó, hoạt động như một thực thể sinh
học và tương tác với các tế bào cũng như các rào cản vật lý, hóa học và miễn
dịch khác nhau bên trong cơ thể (Jain và cộng sự, 2017). Tùy thuộc vào đặc
tính hạt (ví dụ: kích thước, hình dạng, điện tích bề mặt, cấu trúc liên kết, tính
kỵ nước, hiệu quả đóng gói), protein-corona có thể được điều chỉnh để hình
thành một hệ thống phân phối thuốc nhắm mục tiêu hoàn hảo (Lu và cộng sự,
2019; Yeo và cộng sự, 2019; Zhang và cộng sự, 2019). Protein-corona này có
thể ảnh hưởng đến quá trình phân phối sinh học cũng như hoạt động giải phóng
NDDS (Behzadi và cộng sự, 2014). Do đó, việc hiểu rõ ràng tác động của
tương tác nano sinh học đến các hậu quả sinh học ở cả cấp độ tế bào và sinh lý
là rất quan trọng. Để thiết lập phương pháp giải phóng thuốc in vitro có ý nghĩa
và liên quan đến sinh học đối với NDDS, có thể cần xác định ảnh hưởng của
nồng độ liên quan đến sinh học của các thành phần huyết tương khác nhau (như
muối mật, phospholipid, cholesterol, albumin). Các protein corona cụ thể cần
được xác định và đánh giá về tương tác protein-thuốc bằng mô hình thích hợp
(Wallenwein và cộng sự, 2019). Có thể thêm chất hoạt động bề mặt tổng hợp
(ví dụ: SLS, Tween 80, CTAB) hoặc chất hoạt động bề mặt có liên quan đến
sinh học (muối mật, phospholipid), enzyme (ví dụ: pepsin) hoặc chất dung môi
(ví dụ: polyethylen glycol 400) cho các loại thuốc tan trong nước kém để có ý
nghĩa lâm sàng. độ hòa tan. Nếu cả protein và chất hoạt động bề mặt đều được
kết hợp trong môi trường thì cần nghiên cứu ảnh hưởng của sự tương tác và tác
động kết hợp của chúng đến độ hòa tan. Phương tiện truyền thông liên quan
đến lâm sàng có thể được phát triển theo chỉ định điều trị (ví dụ: nồng độ
albumin thấp để phản ánh tình trạng hạ albumin máu). Cần phải kiểm tra các
điều kiện nhiệt độ, pH, cường độ ion, tốc độ khuấy và tốc độ dòng chảy (USP
4) khác nhau để có được thử nghiệm hòa tan mạnh mẽ và phân biệt đối xử nhất.
Có thể cần phải thiết lập thử nghiệm độc đáo để bắt chước môi trường sinh lý
tùy thuộc vào mục đích sử dụng cụ thể (ví dụ: giải phóng thuốc hai giai đoạn để
bắt chước quá trình giải phóng thuốc trong tuần hoàn và giải phóng thuốc tại vị
trí mục tiêu, Xu và cộng sự, 2012; các túi nhận của người cho để bắt chước sự
giải phóng thuốc vào màng tế bào phospholipid, Shabbit và cộng sự, 2002).
Một thách thức lớn khác đối với việc cung cấp NP in vivo là khả năng thanh
thải nhanh chóng khỏi hệ tuần hoàn bằng hệ thống lưới nội mô, còn được gọi là
hệ thống thực bào đơn nhân (MPS) - bao gồm các tế bào Kupffer của gan và
đại thực bào của lá lách và tủy xương. Phủ bề mặt NP bằng polyethylen glycol
(PEG) là phương pháp thường được sử dụng để phá vỡ sự nhận biết miễn dịch
và tăng thời gian lưu thông toàn thân. Bạn có thể tìm thấy đánh giá kỹ lưỡng về
“PEGylation” trong nhiều bài viết trước đây (Fam và cộng sự, 2020; Suk và
cộng sự, 2016).
4.4. Tính tương thích sinh học
Một số tá dược có khả năng gây độc tế bào khi sử dụng ở nồng độ cao hơn. Các
dấu hiệu in vivo như lactate dehydrogenase (LDH), một enzyme tế bào, có thể
được sử dụng để kiểm tra tính toàn vẹn và hoại tử của màng tế bào. Các NP
PLGA đồng nạp Paclitaxel/methotrexate, được phủ PVA/P188, giải phóng
nhiều LDH hơn so với các NP được nạp thuốc riêng lẻ hoặc các loại thuốc tự
do (Madani và cộng sự, 2020). Các kỹ thuật hóa mô miễn dịch như xét nghiệm
ghi nhãn TdT dUTP Nick End có thể hình dung các tế bào apoptotic trong ống
nghiệm. Các NPGA PLGA được nạp Paclitaxel có khả năng gây apoptotic cao
hơn so với chỉ dùng thuốc (Mo & Lim, 2005). Nhiều kỹ thuật chuẩn bị NDDS
liên quan đến việc sử dụng dung môi hữu cơ. Dung môi còn sót lại có thể độc
hại và ảnh hưởng đến kích thước hạt thuốc, độ hòa tan và độ ẩm. Nhu cầu đo
lượng dung môi dư lượng đã được nhấn mạnh ở các giai đoạn chuẩn bị và tinh
chế khác nhau của liposome và NP polyme để phát triển NDDS hiệu quả và an
toàn (Dikpati và cộng sự, 2020). Hội đồng Quốc tế về Hài hòa các Yêu cầu Kỹ
thuật đối với Dược phẩm Dùng cho Con người (ICH) đã phát triển tài liệu Q3C
để khuyến nghị giới hạn chấp nhận được đối với dung môi tồn dư trong dược
phẩm vì sự an toàn của bệnh nhân. Hướng dẫn này áp dụng cho tất cả các dạng
bào chế và đường dùng. Nó nhóm các dung môi hiện có thành ba loại, dựa trên
mức độ nguy hiểm đối với sức khỏe và môi trường của từng cá nhân (ICH,
2019). ICH cũng đã phát triển các quy trình bảo trì để bao gồm các dung môi
mới và sửa đổi mức tiếp xúc hàng ngày cho phép của các dung môi đã được liệt
kê trong ICH Q3C khi có dữ liệu về độc tính mới của dung môi (FDA, 2017b).
FDA xác nhận tài liệu đi kèm hướng dẫn ICH Q3C nhằm khuyến nghị mức độ
an toàn của dung môi tồn dư trong dược phẩm (FDA, 2018c). Hóa học, sản
xuất và kiểm soát sản phẩm thuốc liposome; dược động học và sinh khả dụng
của con người; và hướng dẫn ghi nhãn yêu cầu cung cấp thông số kỹ thuật của
sản phẩm thuốc bao gồm (các) dung môi còn sót lại được sử dụng trong sản
xuất liposome (FDA, 2018a). Hướng dẫn về an toàn của vật liệu nano trong sản
phẩm mỹ phẩm (FDA, 2014b) cũng đòi hỏi sự hiểu biết thấu đáo về quy trình
sản xuất để xác định các chất phụ gia và tạp chất còn sót lại. Dikpati và cộng
sự. (2020) đã đưa ra những khuyến nghị hữu ích để giảm thiểu lượng dung môi
tồn dư trong NDDS. Đầu tiên, việc sử dụng các dung môi loại III (ví dụ:
axeton, ethyl axetat, dimethyl sulfoxide) hoặc các phương pháp điều chế không
dung môi/hạn chế dung môi (ví dụ: công nghệ chất lỏng siêu tới hạn, vi lỏng và
ép đùn cho NDDS dựa trên polymer hoặc đồng nhất hóa áp suất cao cho NDDS
dựa trên lipid) (Anton và cộng sự, 2012; Paliwal và cộng sự, 2014). Thứ hai,
việc sử dụng các thiết bị đo chuyên dụng hoặc dùng một lần để tránh lây nhiễm
chéo. Thứ ba, sự bay hơi quay kết hợp với các phương pháp sấy khô khác (ví
dụ: đông khô). Thứ tư, nhiều quy trình tinh chế (ví dụ: sắc ký loại trừ kích
thước, lọc máu, siêu lọc, ly tâm, điện di) (Paliwal và cộng sự, 2014; Robertson
và cộng sự, 2016).
4.5 Thử nghiệm giải phóng nhanh trong ống nghiệm
NDDS có thể được thiết kế để duy trì sự giải phóng thuốc trong vài ngày đến
vài tháng. Các thử nghiệm giải phóng nhanh trong ống nghiệm, dự đoán sự giải
phóng “theo thời gian thực”, có thể tăng tốc độ phân tích trong những trường
hợp này (Shen và cộng sự, 2016). Tuy nhiên, các điều kiện căng thẳng (nhiệt độ
cao và giá trị pH cực cao), được sử dụng để đẩy nhanh quá trình giải phóng
thuốc cũng có thể làm thay đổi cơ chế giải phóng (Shameem và cộng sự, 1999;
Zackrisson và cộng sự, 1995; Zolnik và cộng sự, 2006). Nó có thể khiến quá
trình thành lập IVIVC trở nên mệt mỏi hơn (Shen & Burgess, 2012).
5. IVIVC cho NDDS
Một IVIVC có ý nghĩa có thể dự đoán hiệu suất in vivo của NDDS từ các hành
vi in vitro của chúng (Shen & Burgess, 2015). So với các dạng bào chế thông
thường, việc thiết lập IVIVC cho các sản phẩm NDDS thậm chí còn khó khăn
hơn do cách bố trí các NP phụ thuộc vào kích thước và các tương tác không xác
định của chúng với các giao diện sinh học (ví dụ: sự hình thành protein-corona)
(Jain và cộng sự, 2017; Riviere, 2013; Yuan và cộng sự, 2019) cũng như thiếu
tiêu chuẩn hoặc hướng dẫn bổ sung cho các phương pháp thử nghiệm giải
phóng in vitro. Điều quan trọng là phải hiểu tác động của các đặc tính hóa lý
(kích thước hạt, sự phân bố kích thước, lượng thuốc, thế zeta, v.v.) và thiết lập
độ giống nhau về chất (Q1), độ giống nhau về số lượng (Q2) và độ tương
đương giải phóng thuốc trong ống nghiệm (Q3) cùng với các nghiên cứu dược
động học thông thường của các NDDS này (Au, 2017; FDA, 2018a; Luke,
2017; Shah và cộng sự, 2014; Zheng và cộng sự, 2017). Việc phát triển mô
hình IVIVC thành công đòi hỏi việc giải thể là bước giới hạn tốc độ trong quá
trình hấp thu thuốc. Convolution và deconvolutionlà hai cách tiếp cận cơ bản
để thiết lập mô hình IVIVC (Davanço và cộng sự, 2020; Gillespie, 1997; Jacob
& Nair, 2018; Margolskee và cộng sự, 2016). Một phương pháp thử nghiệm độ
hòa tan trong ống nghiệm mạnh mẽ, có thể lặp lại và đáng tin cậy, nhạy cảm
với công thức hoặc sự biến đổi của quy trình có thể đóng một vai trò quan trọng
trong việc phát triển IVIVC có ý nghĩa cho NDDS.
5.1. Đường dùng tiêm tĩnh mạch
Các công nghệ phân tích theo dõi hạt nano mới nổi cho phép xác định định tính
và định lượng vật liệu nano trong các mẫu in vitro và in vivo (Kim và cộng sự,
2019; Parsons và cộng sự, 2017). Ngoài ra, việc thiết kế các xét nghiệm liên
quan đến sinh học là lý do thuận lợi nhất cho việc thiết lập IVIVC cho NDDS
qua đường tiêm truyền. Các điều kiện thử nghiệm được tối ưu hóa dựa trên đặc
tính hóa lý của thuốc và điều kiện môi trường mà NDDS có thể tiếp xúc sau khi
tiêm tĩnh mạch. Việc ghi lại các thí nghiệm như vậy được thực hiện để đạt được
bí quyết thực nghiệm; và hướng dẫn thiết kế các chiến lược hòa tan in vitro
trong tương lai nhằm dự đoán hiệu suất in vivo đối với NDDS (Bảng 3). Từ
những nghiên cứu này, rõ ràng là có nhiều yếu tố đóng vai trò quan trọng trong
sinh khả dụng và sự tích lũy thuốc tại vị trí mục tiêu. Việc lựa chọn phương
pháp giải phóng in vitro có thể phụ thuộc vào việc liệu tỷ lệ giới hạn có bước
tiếp theo là loại khuếch tán, xói mòn hoặc sưng tấy. Thử nghiệm giải phóng liên
quan đến sinh học phải được phát triển với sự hiểu biết phù hợp về những yếu
tố quyết định độ ổn định của NDDS, sự hấp thu nội bào và đặc tính giải phóng
thuốc. Mô hình silico có thể là điểm khởi đầu phù hợp để thiết lập IVIVC bằng
cách mô tả dược động học của NDDS với dữ liệu động vật tiền lâm sàng. Mô
hình đã phát triển có thể được xác nhận thêm bằng cách sử dụng dữ liệu lâm
sàng của con người sau khi áp dụng tỷ lệ sinh khối. Hồ sơ giải phóng thuốc thu
được có thể cần chuẩn hóa (ví dụ: mô hình bốn bước) để loại trừ ảnh hưởng của
sự thẩm thấu màng và chuyển protein-thuốc. Việc giải mã các cấu hình dược
động học mô phỏng có thể cho phép dự đoán dược động học của con người đối
với các công thức NDDS mới (Jablonka và cộng sự, 2020).
5.2. Đường uống
Hấp thu qua đường miệng là một quá trình phức tạp gồm nhiều sự kiện sinh
học phụ thuộc lẫn nhau. Mô hình dược động học dựa trên sinh lý (PBPK) tích
hợp các sự kiện đồng thời này và mô phỏng ADME (hấp thụ, phân phối,
chuyển hóa và đào thải) để mô tả mức độ phơi nhiễm thuốc trong các khoang
sinh lý riêng lẻ (Li và cộng sự, 2017; Utembe và cộng sự, 2020). Các điều kiện
liên quan đến sinh học khác nhau đã được định hình để xây dựng IVIVC cho
đường uống NDDS (Bảng 4). Sự hòa tan liên quan đến sinh học kết hợp với mô
hình PBPK có thể hỗ trợ sự phát triển NDDS qua đường miệng và giảm thiểu
thử nghiệm trên động vật/con người (Kaur và cộng sự, 2018; Litou và cộng sự,
2019). Tuy nhiên, mô hình PBPK của NDDS rất khó khăn do các cơ chế vận
chuyển in vivo phức tạp như hấp thu MPS, hiệu ứng EPR, vận chuyển bạch
huyết và suy thoái enzyme (Li và cộng sự, 2017). Ngoài ra, mô hình cơ học của
NDDS bên cạnh các protein-corona dành riêng cho cơ quan vẫn còn ở giai đoạn
sơ khai (Utembe và cộng sự, 2020). Hơn nữa, độ hòa tan nội tại của thuốc có
tương quan tốt với tốc độ hòa tan của nó. Nhưng tốc độ giải phóng (và tỷ lệ
thuốc được giải phóng) có liên quan nghịch với độ ổn định vật lý của NP và
tính ưa mỡ của thuốc mẫu. Các hạt nano ổn định (không có thay đổi đáng kể về
kích thước hạt và PDI) có xu hướng bảo vệ khối thuốc và có tốc độ giải phóng
chậm (Weng và cộng sự, 2020). Do đó, việc giải phóng thuốc từ NP không phải
lúc nào cũng đơn giản, gây khó khăn cho việc phát triển các phương pháp mô
tả đặc tính cho NDDS đường uống. Các nhà nghiên cứu sử dụng các phương
pháp giải phóng in vitro khác nhau để kiểm tra NDDS qua đường uống
(phương pháp chèo, lấy mẫu và tách riêng cũng như lọc máu) mang lại kết quả
khác nhau so với kết quả in vivo. Weng và cộng sự. (2020) đã đề xuất một mẫu
mới và phương pháp riêng biệt kết hợp với thiết bị USP II (mái chèo) và kỹ
thuật siêu lọc ly tâm đã được kiểm chứng tốt để tách thuốc tự do khỏi NP một
cách hiệu quả nhằm đạt được mối tương quan tốt hơn giữa dữ liệu in vitro và
phản ứng in vivo đối với NP polyme. Hòa tan cũng là một quá trình đào thải
quan trọng bị ảnh hưởng mạnh mẽ bởi độ pH của môi trường vi mô (dịch ngoại
bào trung tính hoặc dịch nội bào có độ pH thấp) (Studer và cộng sự, 2010).
Nó đòi hỏi dữ liệu rộng rãi về độ hòa tan NDDS trong các môi trường GIT
khác nhau này, tập trung vào tốc độ hòa tan, tốc độ hằng số, bậc phản ứng, thời
gian bán hủy và thời gian sống (Utembe và cộng sự, 2015). Việc giải phóng
thuốc in vitro từ dạng bào chế qua đường uống thường được thử nghiệm trong
axit clohydric 0,1 N (pH 1,2), sau đó là dung dịch đệm photphat có độ pH 6,8
để mô phỏng môi trường dạ dày và ruột (Dudhipala và cộng sự, 2018). Việc lựa
chọn môi trường giải phóng có thể phụ thuộc vào độ hòa tan và vị trí hấp thu
của thuốc. Bharathi và cộng sự. (2012) đã nghiên cứu sự giải phóng thuốc của
các hạt nano eudragit được nạp valsartan chỉ ở pH 6,8 vì đây là một loại thuốc
có tính axit yếu và được hấp thụ chủ yếu ở độ pH lớn hơn 5. Ngược lại, độ hòa
tan của furosemide, một loại thuốc có tính axit yếu khác, được thử nghiệm ở
pH 1,2 . Thật vậy, furosemide có độ hòa tan thấp trong khí môi trường tric,
nhưng nó thể hiện sự hấp thu đặc hiệu tại vị trí ở dạ dày và ruột trên. Do đó cải
thiện khả năng hòa tan nồng độ trong dịch dạ dày trở nên quan trọng để cải
thiện sinh khả dụng tổng thể (Shariare và cộng sự, 2019). Weng và cộng sự. đã
đánh giá thành công việc giải phóng thuốc in vitro của ba loại thuốc hòa tan
trong nước kém từ các NP polyme. Axit clohydric 0,1 N được sử dụng cho
thuốc có tính bazơ yếu (itraconazol), dung dịch SDS 0,1% (w/v) cho hợp chất
không ion (cholecalciferol hoặc VitD3) và dung dịch muối đệm photphat (PBS,
pH = 7,4) cho thuốc có tính axit yếu ( flurbiprofen) (Weng và cộng sự, 2020).
Các mô hình động học thông thường có thể không phù hợp để xác định cấu
hình giải phóng phức tạp của NDDS qua đường miệng. Các mô hình động học
thực nghiệm mới phù hợp hơn nên được phát triển cho NDDS đường uống dựa
trên dữ liệu phát hành. Các NP (nhỏ hơn 200 nm) được đề xuất để cung cấp
một “con thoi” cho thuốc qua lớp nước không khuấy (UWL) gần bề mặt biểu
mô ruột. Cơ chế vận chuyển này dẫn đến nồng độ thuốc không liên kết cao hơn
để hấp thu. Trong mô hình tính thấm được biến đổi silicon (chiếm độ hòa tan và
kích thước NP) đã được phát triển để dự đoán chính xác hấp thụ in vivo các
thuốc hòa tan kém, hạn chế UWL từ NDDS (Stewart & Grass, 2020). Các mô
hình tính toán mới nổi khác có thể được áp dụng trong tương lai gần để dự
đoán sinh học in vivo của NDDS qua đường uống một cách đáng tin cậy hơn.
Ví dụ, các mô hình quan hệ hoạt động cấu trúc nano định lượng có thể được sử
dụng để dự đoán hoạt động sinh học và độc tính của NDDS (Fourches và cộng
sự, 2010; Kar và cộng sự, 2014; Muratov và cộng sự, 2020; Puzyn và cộng sự,
2011; Weissleder và cộng sự cộng sự, 2005; Yuan và cộng sự, 2021). Các mô
hình mối quan hệ cấu trúc-dược động học định lượng có thể tương quan với cấu
trúc và đặc tính hóa học của thuốc để dự đoán các thông số dược động học khác
nhau như độ thanh thải (Cl) (Dave & Morris, 2015; Zhivkova & Doytchinova,
2013), thời gian bán hủy (t1/2) (Durairaj et cộng sự, 2009), thể tích phân bố
biểu kiến (Vd; Ghafourian và cộng sự, 2004). Mô hình dược lý hệ thống định
lượng (QSP) minh họa rằng những khác biệt nhỏ trong thuộc tính NP có thể
dẫn đến mức phơi nhiễm khác nhau tại vị trí mục tiêu cho thấy rằng tương
đương sinh học toàn thân có thể không phản ánh chính xác sự tương đương
sinh học của vị trí mục tiêu (Lu và cộng sự, 2019). Abbiati và cộng sự. (2019)
đã thảo luận về ứng dụng tiềm năng của mô hình QSP để xác định việc phân
phối NP và nơi cư trú trong cơ thể.
6. Phần kết luận
Hiện đang thiếu phương pháp giải phóng thuốc in vitro mạnh mẽ và phù hợp về
mặt sinh học đối với NDDS. Nó dẫn đến sự lựa chọn tùy tiện các phương pháp
giải phóng của các nhà nghiên cứu khác nhau, trong đó phương pháp màng lọc
máu được sử dụng rộng rãi nhất. USP 4 nổi lên như một thử nghiệm hòa tan
khả thi do có nhiều ưu điểm khác nhau, bao gồm cả khả năng phân biệt đối xử
của nó. Tuy nhiên, cần có nhiều nghiên cứu hơn để chứng thực vị thế pháp lý
của nó; và để xác nhận tính phù hợp của nó để kiểm tra nhiều loại thuốc ứng cử
viên (loại BCS khác nhau), được xây dựng theo các NDDS khác nhau (ví dụ:
liposome, tinh thể nano, NP polyme và hệ thống dựa trên lipid). Hiện tại, FDA
khuyến khích thảo luận về cơ sở khoa học, tính khả thi và xác nhận phương
pháp để phát triển một phương pháp hòa tan đáng tin cậy và có thể lặp lại, nhạy
cảm với công thức hoặc quy trình biến đổi trong các phiên bản chung của
NDDS. Hơn nữa, các NP được hợp nhất với protein-corona của nó hoạt động
như một thực thể sinh học mới và ảnh hưởng đến sự phân bố sinh học cũng như
hoạt động giải phóng của NDDS. Việc xác định các protein hào quang cụ thể,
đánh giá sự tương tác giữa protein và thuốc và tác động tổng thể của chúng đến
khả năng hòa tan của thuốc có thể là công cụ giúp phát triển IVIVC có ý nghĩa.
Việc sử dụng môi trường thử nghiệm có liên quan đến sinh học và có liên quan
đến lâm sàng là một cách tiếp cận có giá trị để phát triển các thử nghiệm giải
phóng in vitro dự đoán đối với NDDS. Có thể cần phải thiết lập thử nghiệm hai
giai đoạn độc đáo để bắt chước quá trình giải phóng thuốc tại vị trí mục tiêu
cùng với quá trình giải phóng thuốc trong lưu thông để mô phỏng môi trường
sinh lý. Chúng tôi hy vọng rằng những cân nhắc được đề xuất có thể hướng dẫn
việc thiết kế các chiến lược hòa tan in vitro trong tương lai, dự đoán các đặc
tính dược động học in vivo, với kết quả thực sự là ý nghĩa kinh tế thuận lợi đi
kèm với các phiên bản chung của NDDS.
Tài liệu tham khảo
Alshora, D. H., Ibrahim, M. A., Elzayat, E., Almeanazel, O. T., & Alanazi, F.
(2018). Rosuvastatin calcium nanoparticles: Improving bioavailability by
formulation and stabilization codesign. PLoS One, 13(7), e0200218.
https://doi.org/10.1371/journal.pone. 0200218
Anderson, N. H., Bauer, M., Boussac, N., Khan-Malek, R., Munden, P., &
Sardaro, M. (1998). An evaluation of fit factors and dissolution effi ciency for
the comparison of in vitro dissolution profiles. Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis, 17(4–5), 811–822. https:// doi.org/10.1016/s0731-
7085(98)00011-9
Anselmo, A. C., & Mitragotri, S. (2019). Nanoparticles in the clinic: An update.
Bioengineering and Translational Medicine, 4(3), e10143.
https://doi.org/10.1002/btm2.10143
Anton, N., Bally, F., Serra, C. A., Ali, A., Arntz, Y., Mely, Y., Zhao, M.,
Marchioni, E., Jakhmola, A., & Vandamme, T. F. (2012). A new microfluidic
setup for precise control of the polymer nanoprecipitation process and
lipophilic drug encapsulation. Soft Matter, 8(41), 10628–10635.
https://doi.org/10.1039/C2SM25357G
Attia,M.F.,Anton,N.,Wallyn,J.,Omran,Z.,&Vandamme,T.F. (2019).An overview
of active and passive targeting strategies to improve the nanocarriers efficiency
to tumour sites. The Journal of Pharmacy and Pharmacology, 71(8), 1185–
1198. https://doi.org/10.1111/jphp.13098
Au, J. L.-S. (2017). Considerations for bioequivalence evaluation of nano-
particulate/molecular medicine. Retrieved from https://www.fda.gov/
media/108401/download
Au, J. L., Abbiati, R. A., Wientjes, M. G., & Lu, Z. (2019). Target site delivery
and residence of nanomedicines: Application of quantitative systems
pharmacology. Pharmacological Reviews, 71(2), 157–169.
https://doi.org/10.1124/pr.118.016816
Barzegar-Jalali, M., Adibkia, K., Valizadeh, H., Shadbad, M. R., Nokhodchi,
A., Omidi, Y., Mohammadi, G., Nezhadi, S. H., & Hasan, M. (2008). Kinetic
analysis of drug release from nanoparticles. Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences, 11(1), 167–177. https:// doi.org/10.18433/j3d59t
Barzegar-Jalali, M., & Dastmalchi, S. (2007). Kinetic analysis of
chlorpropamide dissolution from solid dispersions. Drug Development and
Industrial Pharmacy, 33(1), 63–70.
https://doi.org/10.1080/03639040600762636
Bastogne, T. (2017). Quality-by-design of nanopharmaceuticals– A state of the
art. Nanomedicine, 13(7), 2151–2157. https://doi.org/10.1016/
j.nano.2017.05.014
Behzadi, S., Serpooshan, V., Sakhtianchi, R., Müller, B., Landfester, K.,
Crespy, D., & Mahmoudi, M. (2014). Protein corona change the drug release
profile of nanocarriers: The “overlooked” factor at the nanobio interface.
Colloids and Surfaces. B, Biointerfaces, 123, 143–149.
https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2014.09.0
Bhagav, P., Upadhyay, H., & Chandran, S. (2011). Brimonidine tartrate-
eudragit long-acting nanoparticles: Formulation, optimization, in vitro and in
vivo evaluation. AAPS PharmSciTech, 12(4), 1087–1101.
https://doi.org/10.1208/s12249-011-9675-1
Bharathi, M., Chandra, S., Eswari, R., Raja, S., Allena, R. T., Brito, S., &
Bhaskar Reddy, K. (2012). Preparation and in vitro & in vivo charac terization
of valsartan loaded eudragit nanoparticles. Der Pharmacia Sinica, 3, 516–525.
Bhardwaj, U., & Burgess, D. J. (2010). A novel USP apparatus 4 based release
testing method for dispersed systems. International Journal of Pharmaceutics,
388(1–2), 287–294. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2010.01.009 Bruschi, M.
L. (2015). 5– Mathematical models of drug release. In M. L.
Bruschi (Ed.), Strategies to modify the drug release from pharmaceuti cal
systems (pp. 63–86). Woodhead Publishing. https://doi.org/10.1016/B978-0-08-
100092-2.00005-9
Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., & Khan, W. (2017). Liposomal
formulations in clinical use: An updated review. Pharma ceutics, 9(2), 1–33.
https://doi.org/10.3390/pharmaceutics9020012
Butler, J. M., & Dressman, J. B. (2010). The developability classification
system: Application of biopharmaceutics concepts to formulation development.
Journal of Pharmaceutical Sciences, 99(12), 4940–4954.
https://doi.org/10.1002/jps.22217
Calvo, P., Vila-Jato, J. L., & Alonso, M. J. (1996). Comparative in vitro
evaluation of several colloidal systems, nanoparticles, nanocapsules, and
nanoemulsions, as ocular drug carriers. Journal of Pharmaceutical Sciences,
85(5), 530–536. https://doi.org/10.1021/js950474+
Cao, X., Deng, W. W., Fu, M., Wang, L., Tong, S. S., Wei, Y. W., Xu, Y., Su, W.
Y., Xu, X. M., & Yu, J. N. (2012). In vitro release and in vitro in vivo
correlation for silybin meglumine incorporated into hollow-type mesoporous
silica nanoparticles. International Journal of Nanomedicine, 7, 753–762.
https://doi.org/10.2147/IJN.S28348
Cao, X., Deng, W., Fu, M., Zhu, Y., Liu, H., Wang, L., Zeng, J., Wei, Y., Xu, X.,
& Yu, J. (2013). Seventy-two-hour release formulation of the poorly soluble
drug silybin based on porous silica nanoparticles: In vitro release kinetics and
in vitro/in vivo correlations in beagle dogs. European Journal of
Pharmaceutical Sciences, 48(1–2), 64–71.
https://doi.org/10.1016/j.ejps.2012.10.012
Cardot, J. M., & Davit, B. M. (2012). In vitro-in vivo correlations: Tricks and
traps. The AAPS Journal, 14(3), 491–499. https://doi.org/10. 1208/s12248-012-
9359-0
Chidambaram, N., & Burgess, D. J. (1999). A novel in vitro release method for
submicron sized dispersed systems. AAPS PharmSci, 1(3), 32 40.
https://doi.org/10.1208/ps010311
D'Arcy, D. M., Liu, B., Bradley, G., Healy, A. M., & Corrigan, O. I. (2010).
Hydrodynamic and species transfer simulations in the USP 4 disso lution
apparatus: Considerations for dissolution in a low velocity pulsing flow.
Pharmaceutical Research, 27(2), 246–258. https://doi.org/ 10.1007/s11095-009-
0010-4
Davanço, M. G., Campos, D. R., & Carvalho, P. O. (2020). In vitro– In vivo
correlation in the development of oral drug formulation: A screenshot of the
last two decades. International Journal of Pharmaceutics, 580, 119210.
https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2020.119210 Dave, R. A., & Morris, M. E.
(2015). Quantitative structure-pharmacokinetic relationships for the prediction
of renal clearance in humans. Drug Metabolism and Disposition, 43(1), 73–81.
https://doi.org/10.1124/dmd.114.059857
Dave, V. S., Gupta, D., Yu, M., Nguyen, P., & Varghese Gupta, S. (2017).
Current and evolving approaches for improving the oral permeabil ity of BCS
Class III or analogous molecules. Drug Development and Industrial Pharmacy,
43(2), 177–189. https://doi.org/10.1080/ 03639045.2016.1269122
Deng, Y., Zhang, X., Shen, H., He, Q., Wu, Z., Liao, W., & Yuan, M. (2019).
Application of the nano-drug delivery system in treatment of car diovascular
diseases. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 7, 489.
https://doi.org/10.3389/fbioe.2019.00489
Díaz de Leon-Ortega, R., D'Arcy, D. M., & Fotaki, N. (2020). In vitro
conditions for performance evaluation of products for intravascular
administration: Developing appropriate test media using Amphotericin B as a
model drug. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 143, 105174.
https://doi.org/10.1016/j.ejps.2019.105174
Dikpati, A., Mohammadi, F., Greffard, K., Quéant, C., Arnaud, P., Bastiat, G.,
Rudkowska, I., & Bertrand, N. (2020). Residual solvents in nanomedicine and
lipid-based drug delivery systems: A case study to better understand processes.
Pharmaceutical Research, 37(8), 149. https://doi.org/10.1007/s11095-020-
02877-x
D'Souza, S. (2014). A review of in vitro drug release test methods for nano-
sized dosage forms. Advances in Pharmaceutics, 2014, 304757.
https://doi.org/10.1155/2014/304757 Dudhipala, N., Janga, K. Y., & Gorre, T.
(2018). Comparative study of nisoldipine-loaded nanostructured lipid carriers
and solid lipid nanoparticles for oral delivery: Preparation, characterization,
permeation and pharmacokinetic evaluation. Artificial Cells, Nanomedicine,
and Biotechnol, 46(Suppl. 2), 616–625.
https://doi.org/10.1080/21691401.2018.1465068 Durairaj, C., Shah, J. C.,
Senapati, S., & Kompella, U. B. (2009). Prediction of vitreal half-life based on
drug physicochemical properties: Quantitative structure-pharmacokinetic
relationships (QSPKR). Pharmaceutical Research, 26(5), 1236–1260.
https://doi.org/10.1007/ s11095-008-9728-7