VARENJE HRANE

PROTEOLITIČKI ENZIMI
- enzimi uključeni u katabolizam proteina -

1. EGZOPEPTIDAZE – Aminopeptidaze i Karboksipeptidaze

2. ENDOPEPTIDAZE
 EGZOPEPTIDAZE
KOORDINATIVNI KOMPLEKS Zn2+ U Karboksipeptidazi A

His196

N
Zn
N

Glu72 O
His69
 EGZOPEPTIDAZE
Glu270

PROMENA
Tyr
Tyr248
KONFORMACIJE
Zn 248
Karboksipeptidaza A

Arg145

Glu270

Zn
S

Arg145
 EGZOPEPTIDAZE

Vezivanje supstrata (Tyr-Gly) za aktivno mesto Karboksipeptidaze A

OH
Hidrofobni džep

CH2 H2N
O
C Arg145
H C C
H2+N
N O
H
O
H
Glu 270 C O Tyr248
O
O C H

Zn CH2 N
+ H
Arg127
 EGZOPEPTIDAZE
Mehanizam katalize Karboksipeptidaze A
OH
OH OH

CH2
O
CH2 CH2 HOH H C C
O Nukleofilni O
H C C napad H C C N O

H N O Glu270 H N O H H

O O O
Zn Zn
Glu 270 C Glu 270 C Glu 270 C OH
O C O O C O O C O

CH2 CH2
+
Arg127 CH2

N H N H N H

R R R
Enzim-supstrat Kovalentni anhidridni Produkti
kompleks intermedijer reakcije
 ENDOPEPTIDAZE

1 ENZIM Pepsin Himotripsin Tripsin

2 Mesto
sinteze Mukoza želuca Pankreas Pankreas

3 ZIMOGEN PEPSINOGEN HIMOTRIPSINOGEN TRIPSINOGEN

4 Mesto
delovanja želudac 12-palačno crevo 12-palačno crevo

5 Aktivacija Pepsin + pH2 Tripsin + Tripsin +

Enteropeptidaza Himotripsin
 ENDOPEPTIDAZE

Mehanizam aktivacije PEPSINOGENA

Pepsin + pH2
Pepsinogen
(neaktivna forma)
+ +
H3 N 44 H
ak3N COOH COOH

Inhibitor pepsina
Pepsin
(aktivna forma)
 ENDOPEPTIDAZE

SPECIFIČNOST DELOVANJA Pepsina

Aromatična
R R
aminokiselina

O O
N CH C N CH C

H H

HOH

Aromatična
R aminokiselina

O O
N CH C OH + H N CH C

H H
 ENDOPEPTIDAZE
Mehanizam aktivacije HIMOTRIPSINOGENA
Himotripsinogen
1 122 136 201 245
(neaktivna forma)

Cys S S Cys Cys S S Cys

Tripsin
Arg Ile

p-Himotripsin
1 15 16 122 136 201 245
(aktivna forma)

Cys S S Cys Cys S S Cys

Himotripsin
Ser14-Arg15 + Thr147-Asn148

Leu Ile Thr Ala

a-Himotripsin
1 13 16 122 136 146 149 201 245
(aktivna forma)

Cys S S Cys Cys S S Cys

A-lanac B-lanac C-lanac

 ENDOPEPTIDAZE

SPECIFIČNOST DELOVANJA Himotripsina

Aromatična
R
aminokiselina R
O O
N CH C N CH C

H H
SPECIFIČNOST DELOVANJA
HOH Pepsina

Aromatična Aromatična
R
aminokiselina R
aminokiselina R
O O O O
N N
CH CH
C C
OH +
N CH
H C
N CH C

H H H H
 ENDOPEPTIDAZE
Organizacija katalitičkog centra Himotripsina

Ser195

His57

Asp102
KATALITIČKA
TRIJADA
 ENDOPEPTIDAZE

Mehanizam aktivacije TRIPSINOGENA

Enteropeptidaza

+
H3 N Val (Asp)4 Lys15 Ile16 Val COOH

H2O

+
H3 N Val (Asp)4 Lys15 COOH

+
H2 N Ile16 Val COOH

Tripsin
 ENDOPEPTIDAZE

SPECIFIČNOST DELOVANJA Tripsina

Bazna
R
aminokiselina R
O O
N CH C N CH C

H H

HOH

Bazna
aminokiselina R
O O
N CH C OH + H N CH C

H H
 SERIN PROTEAZE

Enzim Poreklo Funkcija

Himotripsin pankreas digestija proteina

Tripsin pankreas digestija proteina

Elastaza pankreas digestija proteina

Trombin serum vertrebrata zgru{avanje krvi

Plazmin serum vertrebrata razaranje tromba

Akrozomalna
akrozom spermatozoida penetracija jajne }elije
proteaza
razaranje kokona nakon
Kokonaza larva moljca
metamorfoze

Proteaze A i B Streptomyces griseus razlaganje proteina van }elije

Subtilizin Bacillus subtilis razlaganje proteina van }elije

 AMILAZE, LIZOZIM, FOSFORILAZE
- enzimi uključeni u katabolizam polisaharida -

1. HIDROLITIČKI ENZIMI – a- i b- amilaza, Lizozim

- Katalizuje hidrolizu glikozidne veze u polisaharidu-

2. FOSFORILITIČKI ENZIMI – Glikogen fosforilaza

- Katalizuje fosforilizu glikozidne veze u polisaharidu-
 ENZIMOLOGIJA - Amilaze

a-amilaza
- sintetišu je pljuvačne žlezde i pankreas

- hidrolizuje skrob nasumično: produkti maltoza, glukoza, a-dekstrini

b-amilaza
- sintetišu je neke biljke i bakterije

- hidrolizuje skrob od neredukujućeg kraja: produkt maltoza

HIDROLIZA PEPTIDOGLIKANA Lizozimom
Veza koju
hidrolizuje
lizozim
NAG NAM NAG NAM

CH2 OH CH2 OH CH2 OH CH2 OH

6 b(1-4) 6 6 b(1-4) 6
H 5 O H
5 O H 5 O H
5 O
H H H H
4 OH H 1 O 4 OR H 1 O 4 OH H 1 O 4 OR H 1
3 2 3 2 3 2 3 2
H H b(1-4) H H
H NH C CH3 H NH C CH3 H NH C CH3 H NH C CH3
O O O O

H2O
Lizozim

NAG NAM NAG NAM

CH2 OH CH2 OH CH2 OH CH2 OH

6 b(1-4) 6 OH 6 b(1-4) 6
H 5 O H
5 O H 5 O H
5 O
H H H H
1 O 4 O 4 OR H
4 OH H OR H 1 4
OH H 1 1
3 2 3 2 3 2 3 2
H H HO H H
H NH C CH3 H NH C CH3 H NH C CH3 H NH C CH3
O O O O
NATIVNA KONFORMACIJA Lizozima
BELANCETA JAJETA
Jedan polipeptid - 129 ak, 14,6 kD
 NAČIN VEZIVANJA PEPTIDOGLIKANA ZA Lizozim

Mesto delovanja
lizozima
Ala107 Gln57
Phe34 Asn37
Asp101 Trp63 C Arg114
C C
C
C O O O H2N O +
O O H N CH3 H2N NH2
CH2OH

CH2OH
CH2OH
NAM HC
NAG O
CH2 H O N O NAM NAG O CH2
O O O O
A O B O C D O E O F
HO O O N H O H
OH CH2 O
N H O H N O NAG O C O N H O NAMN H
C C O H O CH3 H C C
CH3 R H R O CH3 R O CH3
O CH3

prsten D u konformaciji
N N H2N O O
C H2N O C
Asn59
Trp62 polustolice
C
Glu35
Gln57
Asn44
 ŠEMA MOGUĆNOSTI HIDROLIZE GLIKOZIDNE VEZE

Mesta vezivanja monomera na enzimu

A B C D E F
Nema hidrolize; NAM se ne
NAM NAG NAM NAG NAM NAG može vezati za mesto C niti
za mesto E na enzimu

Moguća hidroliza D E
NAG NAM NAG NAM NAG NAM
glikozidne veze

NAG NAM NAG NAM + NAG NAM Produkti reakcije

 MEHANIZAM DELOVANJA Lizozima
F
F
O
O E
E H C H
4
C H O
4 H
O O H O 1 O O
C C H O O C C+ O O
O 1 C O 1 C
Glu35 Glu35
D D
Asp52 Asp52

C
H C
2 O
B H H B
A O O H O A
C C H O O
Glu35
O 1 C
D
Asp52

C
B
A
 FOSFORILIZA GLIKOGENA

GLIKOGEN

= mesta granjanja

CH2 OH CH2 OH CH2 OH CH2 OH

6 6 6 6
5 O H 5 O H 5 O H
H
H
H
H
Pi H 5 O H H
H
4 OH H 1 4 OH H 1 4
H
OH H 1 + 4 OH H 1
3 2 3 2 3 2
HO O OR Gilikogen HO 3 2 2
OPO 3 HO OR
H OH a(1-4) H OH H OH
fosforilaza H OH

GLIKOGEN Glukozo-1-fosfat GLIKOGEN

(n ostataka) (n - 1 ostataka)
 LOKACIJA FUNKCIONALNIH MESTA Fosforilaze a

NH2-terminus
Mesto
Mesto vezivanja Ser14
vezivanja
AMP-a

Mesto
vezivanja
piridoksal-fosfata
Mesto (PLP-a)
vezivanja
glikogena

Aktivno
mesto enzima
 KATALITIČKI MEHANIZAM Glikogen fosforilaze

CH2OH CH2OH CH2OH

O a(1-4) veza O O
HO 4 HO 4 HO 4
1 1 1
+
HO HO HO
OH OH OH
C4-neredukujući O R O
kraj
O P O
O O H O O
HO R
P P O
O O
1
O O
2 Glukozo-1-fosfat
H
O O H O O O O H
P P P

O O O O O O
+ + +
PLP BH PLP BH PLP BH

ENZIM ENZIM ENZIM

 PROCES KATABOLIZMA GLIKOGENA
Bočni lanac
a(1-6) glikozidna veza
C4-neredukujući
A krajevi
Glavni lanac

Glukozo-1-fosfat Fosforilaza

a b c z
B
h i j k l
d e f g
Transferaza
z
TANDEM ENZIM
a b c
C h i j k l (160 kDa)
d e f g

Glukoza
z a-1,6-glukozidaza

D a b c h i j k l
d e f g
 LIPAZE
- enzimi uključeni u katabolizam lipida -

1. HIDROLITIČKI ENZIMI – Pankreatična lipaza (triacilglicerol

lipaza), 2–monoacilglicerol lipaza, triacilglicerol lipaze, fosfolipaze
- Katalizuje hidrolizu estarske veze u kompleksnim lipidima-