REPLIKACIJA DNK

binarna deoba

replikacija
sestrinske hromatide

replikacija
 pirimidini

azotna baza

citozin timin uracil

purini

fosfatna
grupa
pentoza
adenin guanin
fosfodiestarska
veza

dezoksiriboza riboza
mali žleb veliki
žleb
 replikacija DNK je semikonzervativna

dvolančana DNK

denaturacija
DNK

nukleotidi
 EKSPERIMENT MESELSON-STAHL-a
parentalni molekul prva replikacija druga replikacija na
od 15 N na 14 N medijumu 14
N medijumu

+ + + +

H H H L L H H L LL LL L H

(15 N) (14 N) (14 N)

H = (15 N) L = (14 N)
 5’ 3’ 5’ 3’
O H O H
O O
O-P=O
- O-P=O
-

O O
O O
CH2 O
T A CH2 CH2 O
T A CH2
O O
O-P=O
- -
O-P=O
O H H O O H H O
-
O-P=O O-P=O
-

O O O O
CH2 O G C CH2 CH2 O G C CH2
O O

=O
=O
-
O-P=O -
O-P-O-P-OH O-P=O
-

3’ OH H H O O O O H H O

+ -
O-P=O
=O

=O

=O

O
O-P-O-P-O-P-O
-
CH2 O T A O
CH2 T A O
CH2
CH2 O
O O O
O O

OH H O-P=O
-
O-P=O
-

O OH H O
prekursor: 3’
dezoksiribonukleozid-trifosfat
5’ 5’
 3’
replikaciona viljuška 5’
5’
3’
3’
smer replikacije 5’
3’
5’

5’
3’
3’

5’
vodeći lanac 3’
5’

5’ zaostajući lanac
3’

Okazaki fragmenti 5’
 replikaciona viljuška

zaostajući lanac

vodeći lanac

stari novi novi stari

lanac lanac lanac lanac
 smerovi rasta
replikacionih viljuški

vodeći lanac DNK zaostajući lanac DNK

novosintetisana
DNK

zaostajući lanac
vodeći lanac
DNK
DNK
origin stari
(~ 100 nt) lanac
novi replikacione viljuske
lanac

bidirekciona
replikacija
 mesta početka replikacije

replikaciona viljuška 30 000nt-300 000nt

replikacioni
novosintetisani mehurovi
lanci
 20-80 mesta početka replikacije se aktivira istovremeno

ne aktiviraju se sva mesta početka replikacije istovremeno – vreme

aktivacije zavisi od stepena kondenzacije hromatina

ne aktiviraju se rano sva mesta početka replikacije prebacivanjem

iz heterohromatina u euhromatin

ukoliko se neko mesto početka replikacije

inaktivira replikacija se odvija nesmetano
 ’’LICENSING’’ FAKTORI
ORC (origin recognition complex) je
stalno vezan za oridžin

helikaza

Cdc6 i Cdt1 se u G1 vezuju za ORC i naprave pre-replikacioni kompleks

koji privlači ostale proteine neophodne za otpočinjanje replikacije.

Licensing faktori se sintetišu samo u G1 i nakon formiranja inicijatorskog

replikacionog kompleksa se otpuste i inaktiviraju.
 smer replikacije
replikacija

helikaza
DNK polimeraza

SSB proteini

primaza

helikaze
ligaza
polimeraze
ligaze
topoizomeraze Okazaki
fragment
helikaza
DNK helikaza
DNK polimeraza
 Topoizomeraza I

prekid kontrolisana rotacija ligacija

 topoizomeraza I

tirozin

vezivanje i rotacija 3` ligacija

isecanje kraja
 Topoizomeraza II

ATPazni
domen
ATPazni
domen
DNK polimeraze
1957.
 DNK POLIMERAZE U ĆELIJAMA SISARA


jedro
+ + + +
mitohondrije +
5’ - 3’ polimerizaciona
aktivnost + + + + +
3’ - 5’ egzonukleazna
aktivnost + + +
udružena sa
primazom +
 5’ 3’ 5’ 3’
O H O H
O O
O-P=O
- O-P=O
-

O O
O O
CH2 O
T A CH2 CH2 O
T A CH2
O O
O-P=O
- -
O-P=O
O H H O O H H O
-
O-P=O O-P=O
-

O O O O
CH2 O G C CH2 CH2 O G C CH2
O O

=O
=O
-
O-P=O -
O-P-O-P-OH O-P=O
-

3’ OH H H O O O O H H O

+ -
O-P=O
=O

=O

=O

O
O-P-O-P-O-P-O
-
CH2 O T A O
CH2 T A O
CH2
CH2 O
O O O
O O

OH H O-P=O
-
O-P=O
-

O OH H O
prekursor: 3’
dezoksiribonukleozid-trifosfat 5’
5’
 matrica za
vodeći lanac
novosintetisani
vodeći lanac

DNK polimeraza ε/δ

PCNA

novi prajmer

DNK helikaza
RPA
RNK prajmer
DNK polimeraza α / primaza

novosintetisani
zaostajući lanac
spojnica

DNK polimeraza δ gradi novi Okazaki fragment

RNK prajmer
(prethodno napravljenog fragmenta)
DNK polimeraza

pogrešno ugrađeni nukleotid

3`-5` egzonukleazna aktivnost

’’PROOFREADING’’ AKTIVNOST DNK POLIMERAZE
( 3’ – 5’ egzonukleazna aktivnost )

T T T T C*
5’ P P P OH P P P OH

3’ P P P P P P
A A A A A A A

T T T T C
5’ P P P P OH

3’ P P P P P P
A A A A A A A
 T T T T C T
5’ P P P P OH OH P P P OH

3’ P P P P P P
A A A A A A A

...
 5` 3`

5` 3`
verovatnoća za grešku na osnovu komplementarnosti nukleotida
10-4

aktivnost DNK polimeraze

samokoretorska aktivnost DNK polimeraze

poprvka pogrešno ugrađenih nukleotida

10-9
 RFC

spojnica

DNK polimeraza
 matrica za
vodeći lanac
novosintetisani
vodeći lanac

DNK polimeraza ε/δ

PCNA

novi prajmer

DNK helikaza
RPA
RNK prajmer
DNK polimeraza α / primaza

novosintetisani
zaostajući lanac
spojnica

DNK polimeraza δ gradi novi Okazaki fragment

RNK prajmer
(prethodno napravljenog fragmenta)
Pol α- primaza
 SBB
helikaza vodeći DNK lanac
DNK pol III
RNK
početnica primaza
DNK DNK pol III zaostajući DNK lanac
DNK pol I ligaza
 RNaza H1
prepozna i ukloni
RNK iz dsRNK/DNK
hibrida do
poslednjeg rNT

uklanjanje
RNK početnica

DNK ligaza
 DNK

replikacija

zaostajući lanac RNK početnica

vodeći lanac

uklanjanje RNK
početnice

5` problem
 TELOMERE

hromozom

10 000nt GGGTTA
CCCAAT
REPLIKACIJA TELOMERA
deo zaostajućeg lanca ne
može se sintetisati 1. posle ukljanjanja RNK
početnice sa zaostajućeg DNK
telomeraza sa lanca njegov 5’ kraj ostaje kraći
sopstvenom RNK od matričnog DNK lanca

2. telomeraza produžava
matrični lanac DNK

2. telomeraza produžava
matrični lanac DNK

RNK početnica

3. DNK polimeraza
završava zaostajući lanac
DNK polimeraza PCNA
 telomeraza
RNK
martica

DNK nukleotid
 nukleozomi

replikacija

transkripcija

~250bp iza
~300 bp ispred
 zaostajući
lanac

helikaza
vodeći lanac

DNK polimeraza
vodeći lanac
DNK

zaostajući
lanac DNK replizom
 DNK polimeraza
PCNA

topoizomeraza
DNK helikaza

primaza
matrični DNK
lanci

novi
Okazaki fragment

RNK početnica RPA

Okazaki fragment
DNK polimeraza
 zaostajući lanac

primaza

helikaza

vodeći lanac