‫ از طریق‬WWW، GPHER، FTP ‫یا ایمیل به ما در اینترنت بپیوندید‬:

WWW: http://www.thomson.com

GPHER: gopher.thomson.com: ®
FTP: ftp.thomson.com ‫ یک سرویس‬IDP
‫ایمیل‬: findit@kiosk.thomson.com
‫‪ I‬روشهای‬
‫تکنیک های‬

‫‪PANN‬‬
‫‪# MI‬‬
‫‪،‬منتشر شده توسط چاپمن و هال‪ ،‬اثر علمی تامسون‬
‫انگلستان ‪ SE1 8HN،‬ردیف مرزی ‪ ،6-2‬لندن‬

‫انگلستان ‪ SE1 8HN،‬تامسون ساینس‪ ،‬ردیف مرزی ‪ ،6-2‬لندن‬

‫‪Thomson Science، 115 Fifth Avenue, New York, NY 10003, USA‬‬

‫‪،‬تامسون ساینس‪ ،‬سوئیت ‪ ،750‬خیابان بازار ‪ ،400‬فیالدلفیا‬

‫ایاالت متحده آمریکا ‪PA 19106،‬‬

‫آلمان ‪Thomson Science، Pappelallee 3، 69469 Weinheim،‬‬

‫چاپ اول ‪1973‬‬

‫تجدید چاپ ‪1976‬‬

‫چاپ دوم ‪1984‬‬

‫چاپ دوم با جلد شومیز ‪1988‬‬

‫چاپ سوم ‪1998‬‬

‫‪© 1973، 1984، 1998 JB Harborne‬‬

‫است ‪ ITP‬تامسون ساینس یک بخش از انتشارات بین المللی تامسون‬

‫هنگ کنگ ‪ Best-set Typesetter Ltd.،‬توسط ‪ Palatino‬تایپ‌ست در ‪10/12‬‬

‫‪ St Edmundsbury Press، Bury St Edmunds،‬چاپ شده در بریتانیای کبیر توسط‬
‫سافولک‬

‫)‪ (PB‬و ‪ISBN 0 412 57260 5 (HB) 2 57270 412 0‬‬

‫‪،‬تمامی حقوق محفوظ است‪ .‬هیچ بخشی از این نشریه قابل تکثیر نیست‬
‫‪،‬در یک سیستم بازیابی ذخیره شده یا به هر شکل یا به هر وسیله ای منتقل می شود‬
‫الکترونیکی‪ ،‬مکانیکی‪ ،‬فتوکپی‪ ،‬ضبط یا غیره‪ ،‬بدون‬
‫اجازه کتبی قبلی ناشران برنامه های کاربردی برای‬
‫اجازه باید به مدیر حقوق در لندن داده شود‬
‫آدرس ناشر‬

‫ناشر هیچ گونه نمایندگی‪ ،‬صریح یا ضمنی‪ ،‬با‬

‫با توجه به صحت اطالعات موجود در این کتاب و‬
‫نمی تواند هیچ گونه مسئولیت یا مسئولیت قانونی در قبال هر گونه خطا یا‬
‫حذفیاتی که ممکن است انجام شود‬

‫فهرست فهرست این کتاب از کتابخانه بریتانیا در دسترس است‬

‫"شماره کارت کاتالوگ کتابخانه کنگره‪7027-98 :‬‬

‫دانشگاه عادل قاسم‬

‫‪! AuSomelt‬آسیب رفیق‬

‫‪o0001214‬‬

‫‪372.362‬‬
‫‪HAR‬‬

‫‪، manufac‬چاپ بر روی کاغذ متنی بدون اسید ©‬

‫دائم( ‪ANSI/NISO Z39.48-1992‬‬

‫‪-- =.‬‬
‫فهرست‬

‫اول‬ ‫پیشگفتار چاپ‬

‫دوم‬ ‫پیشگفتار چاپ‬
‫سوم‬ ‫پیشگفتار چاپ‬
‫نامه‬ ‫واژه‬

‫روش های تجزیه و تحلیل گیاه ‪1‬‬

‫مقدمه ‪1.1‬‬
‫روش های استخراج و جداسازی ‪1.2‬‬
‫روش های جداسازی ‪1.3‬‬
‫روش های شناسایی ‪1.4‬‬
‫تجزیه و تحلیل نتایج ‪1.5‬‬
‫برنامه های کاربردی ‪1.6‬‬

‫ترکیبات فنلی ‪2‬‬

‫مقدمه ‪2.1‬‬
‫فنل ها و اسیدهای فنولیک ‪2.2‬‬
‫فنیل پروپانوئیدها ‪2.3‬‬
‫رنگدانه های فالونوئیدی ‪2.4‬‬
‫آنتوسیانین ‪2.5‬‬
‫فالونول ها و فالون ها ‪2.6‬‬

‫فالونوئیدهای جزئی‪ ،‬گزانتون ها و استیلبن ها ‪2.7‬‬

‫تانن ‪2.8‬‬
‫رنگدانه کینون ‪2.9‬‬

‫ترپنوئیدها ‪3‬‬
‫مقدمه ‪3.1‬‬
‫روغنهای ضروری ‪3.2‬‬
‫دیترپنوئیدها و جیبرلین ها ‪3.3‬‬
‫تری ترپنوئیدها و استروئیدها ‪3.4‬‬
‫کاروتنوئیدها ‪3.5‬‬
‫مطالب ‪vi‬‬

‫اسیدهای آلی‪ ،‬لیپیدها و ترکیبات مرتبط ‪4 151‬‬

‫اسیدهای گیاهی ‪4.1 151‬‬
‫اسیدهای چرب و لیپیدها ‪4.2 159‬‬
‫آلکان ها و هیدروکربن های مرتبط ‪4.3 170‬‬
‫پلی استیلن ها ‪4.4 174‬‬
‫ترکیبات گوگردی ‪4.5 179‬‬

‫ترکیبات نیتروژن ‪5 187‬‬

‫مقدمه ‪5.1 187‬‬
‫اسیدهای آمینه ‪5.2 189‬‬
‫آمین ها ‪5.3 198‬‬
‫آلکالوئیدها ‪5.4 203‬‬
‫گلیکوزیدهای سیانوژنیک ‪5.5 214‬‬
‫ایندول ‪5.6 218‬‬
‫پورین ها‪ ،‬پیریمیدین ها و سیتوکینین ها ‪5.7 222‬‬
‫کلروفیل ‪5.8 227‬‬

‫قندها و مشتقات آنها ‪6 235‬‬

‫مقدمه ‪6.1 235‬‬
‫مونوساکاریدها ‪6.2 236‬‬
‫الیگوساکاریدها ‪6.3 244‬‬
‫الکل های قند و سیکلیتول ها ‪6.4 249‬‬

‫ماکرومولکول ‪7 256‬‬
‫مقدمه ‪7.1 256‬‬
‫اسیدهای نوکلئیک ‪7.2 257‬‬
‫پروتئین ‪7.3 265‬‬
‫پلی ساکاریدها ‪7.4 278‬‬

‫‪ A 291‬ضمیمه‬

‫توصیه شده برای همه کالس های اصلی ‪ TLC‬لیستی از سیستم های‬
‫از مواد شیمیایی گیاهی‬

‫ضمیمه ب ‪294‬‬
‫چند آدرس مفید‬

‫شاخص ‪295‬‬
‫پیشگفتار چاپ اول‬

‫‪.‬در حالی که کتاب های زیادی در مورد روش های ارگانیک و زیستی موجود است‬
‫تجزیه و تحلیل شیمیایی‪ ،‬اکثریت یا در درجه اول مربوط به‬
‫استفاده از یک تکنیک خاص (مثالً کروماتوگرافی کاغذی) یا دارند‬
‫برای مخاطبان شیمیدانان یا بیوشیمیانی که کار می کنند نوشته شده است‬
‫عمدتا با بافت های حیوانی‪ .‬بنابراین‪ ،‬هیچ راهنمای ساده ای برای روش های مدرن وجود ندارد‬
‫تجزیه و تحلیل گیاه وجود دارد و هدف از جلد حاضر پر کردن این است‬
‫شکاف‪ .‬این در درجه اول برای دانش آموزان در علوم گیاهی که دارای‬
‫پس زمینه گیاه شناسی یا بیولوژیکی عمومی‪ .‬همچنین باید ارزش داشته باشد‬
‫به دانشجویان بیوشیمی‪ ،‬فارماکوژنزی‪ ،‬علوم غذایی و طبیعی‬
‫شیمی آلی محصوالت‬

‫اکثر کتاب های کروماتوگرافی‪ ،‬در حالی که به طرز تحسین برانگیزی نیازهای آن را پوشش می دهند‬
‫پژوهشگران تمایل دارند دانش آموز را با لیست های طوالنی حالل غرق کنند‬
‫سیستم ها و معرف های اسپری که می توانند برای هر کالس آلی استفاده شوند‬
‫تشکیل دهنده‪ .‬هدف در اینجا ساده کردن وضعیت فقط با فهرست کردن است‬
‫چند تکنیک توصیه شده خاص که دارای ارز گسترده ای هستند‬
‫آزمایشگاه های فیتوشیمیایی جزئیات کافی برای اجازه دادن به ارائه شده است‬
‫دانش آموز از تکنیک ها برای خود استفاده کند و بیشتر بخش ها شامل‬
‫‪.‬چند آزمایش عملی مقدماتی که می تواند در کار کالسی استفاده شود‬

‫پس از مقدمه ای کلی بر تکنیک های فیتوشیمیایی‪ ،‬کتاب‬

‫شامل فصل های جداگانه ای است که روش های شناسایی فنلی را توضیح می دهد‬
‫ترکیبات‪ ،‬ترپنوئیدها‪ ،‬اسیدهای چرب و ترکیبات مرتبط‪ ،‬نیتروژن‬
‫‪-‬ترکیبات‪ ،‬قندها و مشتقات و ماکرومولکول های آنها‪ .‬در‬
‫وسوسه شده است که تقریبا ً هر کالس از گیاهان ارگانیک را پوشش دهد‬
‫‪.‬تشکیل دهنده‪ ،‬اگرچه در برخی موارد‪ ،‬حساب لزوما ً مختصر است‬
‫علت محدودیت فضا با این حال توجه ویژه ای به آن شده است‬
‫شناسایی تنظیم‌کننده‌های رشد گیاهی درون‌زا و روش‌های آن‬
‫غربالگری گیاهان برای مواد مورد عالقه فارماکولوژیک‪ .‬هر فصل‬
‫با یک بخش مرجع کلی‪ ،‬که یک راهنمای کتابشناختی است‪ ،‬به پایان می رسد‬
‫به متون پیشرفته تر‬

‫در حالی که تنوع شیمیایی بسیار زیاد متابولیسم ثانویه در‬

‫گیاهان به مدت طوالنی مورد توجه قرار گرفته اند‪ ،‬تغییرات در متابولیسم اولیه (مثالً در‬
‫پیشگفتار چاپ اول ‪viii‬‬

‫آنزیم های تنفس و مسیرهای فتوسنتزی) تنها دارد‬

‫اخیراً آشکار شده است‪ .‬با تحقق چنین شیمیایی‬
‫‪،‬تنوع در هر دو مولکول کوچک و بزرگ پادشاهی گیاهی‬
‫سیستم‌شناسان به فیتوشیمی برای ریختن مواد جدید عالقه‌مند شده‌اند‬
‫نور بر روابط گیاهی رشته جدیدی از سیستماتیک بیوشیمیایی‬
‫توسعه یافته است و از آنجایی که کتاب حاضر با برخی نوشته شده است‬
‫با تاکید بر جنبه های مقایسه ای‪ ،‬باید ابزار مفیدی باشد‬
‫پژوهشگران در این زمینه‬

‫در آماده سازی این کتاب برای چاپ توصیه هایی به نویسنده شده است‬
‫و پیشنهادات بسیاری از همکاران او به خصوص دوست دارد‬
‫و خانم کریستین تشکر کنید ‪ TA Smith‬دکتر ‪ T. Swain،‬دکتر ‪ EC Bate-Smith،‬از دکتر‬
‫ویلیامز برای کمک های ارزشمندشان‪ .‬او همچنین از کارکنان شرکت قدردانی می کند‬
‫‪.‬و هال برای دیدن سریع کتاب از طریق مطبوعات ‪[opman‬‬

‫‪، JBH‬ریدینگ‬
‫ژوئن ‪1973‬‬
‫پیشگفتار چاپ دوم‬

‫از زمان آماده سازی نسخه اول‪ ،‬چندین مورد اصلی وجود داشته است‬
‫پیشرفت در تکنیک های فیتوشیمیایی معرفی کربن‬
‫‪.‬اکنون اطالعات ساختاری بسیار دقیق تری را ارائه می دهد ‪ NMR‬طیف سنجی ‪13‬‬
‫می افزاید قدرتمند و بسیار ‪ HPLC‬پیوند بر روی مولکول های پیچیده‪ ،‬در حالی که‬
‫ابزار تحلیلی حساس به تسلیحات کروماتوگراف‪ .‬با‬
‫امکان دستیابی به ترکیبات غیر فرار از نوع ‪HPLC،‬‬
‫‪-‬برای مواد فرار ایجاد می کند‪ .‬توسعه دیدنی ‪ GLC‬جداسازی هایی که‬
‫در تکنیک های طیف سنجی جرمی نیز تغییراتی رخ داده است‪ .‬برای‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬در دسترس بودن منبع بمباران سریع اتم باعث می شود‬
‫برای تعیین وزن مولکولی هر دو بسیار حساس ممکن است ‪ FAB-MS‬در‬
‫و ترکیبات غیر فرار گیاهی این تکنیک ها به اختصار در‬
‫بخش های مناسب این نسخه جدید‬

‫در طول دهه گذشته‪ ،‬تعداد سازه های جدید گزارش شده است‬
‫منابع گیاهی به شدت افزایش یافته است و در میان برخی از طبقات‬
‫ترکیب طبیعی‪ ،‬تعداد مواد شناخته شده دو برابر شده است‬
‫در این بازه زمانی کوتاه مشکالت همگام شدن با‬
‫‪.‬ادبیات فیتوشیمیایی در نتیجه همه این فعالیت ها کامالً در نظر گرفته شده است‬
‫انجام شده است ‪ Chemical Abstracts‬قادر است‪ ،‬اگرچه جستجوهای کامپیوتری از طریق‬
‫بار دانشمندانی را که توانایی پرداخت این امکانات را داشتند‪ ،‬کاهش داد‪ .‬به ترتیب‬
‫برای کمک به حداقل خواننده دانش آموز‪ ،‬منابع ادبیات در این ثانیه‬
‫نسخه به طور گسترده به روز شده است تا بیشترین مورد را در نظر بگیرد‬
‫پیشرفت های اخیر‪ .‬عالوه بر این‪ ،‬برخی از آزمایش های عملی جدید انجام شده است‬
‫برای کمک به دانش آموز در توسعه تخصص در مطالعه اضافه شده است‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬القای فیتوالکسین در گیاهان و فعل و انفعاالت آللوپاتیک‬
‫بین گیاهان‬

‫از اولین نسخه‪ ،‬تکنیک‌های فیتوشیمیایی در‬

‫ارزش فزاینده در تحقیقات اکولوژیکی‪ ،‬به دنبال درک این موضوع‬
‫ترکیبات اندری نقش بسزایی در تعیین انتخاب غذا دارند‬
‫از حیواناتی که از گیاهان تغذیه می کنند‪ .‬تالش زیادی صرف شده است‬
‫تجزیه و تحلیل جمعیت گیاهان برای سموم یا عوامل بازدارنده تغذیه‪ .‬اکثر‬
‫چنین ترکیباتی به جز گیاه در نسخه اول گنجانده شد‬
‫پیشگفتار چاپ دوم ‪X‬‬

‫تانن ها بنابراین بخش جدیدی در مورد تجزیه و تحلیل تانن در آن گنجانده شده است‬
‫‪.‬فصل ‪2‬‬

‫با این نسخه جدید‪ ،‬فرصت اضافه شدن دو مورد استفاده شده است‬
‫برای همه کالس های کارخانه های فرعی ‪ TLC‬ضمائم ‪ -‬چک لیستی از رویه های‬
‫موضع و لیستی از آدرس های مفید برای فیتوشیمیدانان‪ .‬برخی از خطاها در‬
‫چاپ اول تصحیح شده است‪ ،‬اما دیگران ممکن است باقی بماند و نویسنده‬
‫‪.‬از پیشنهادات برای بهبود بیشتر استقبال می کند‬

‫مانند چاپ اول‪ ،‬نویسنده به طور قابل توجهی از آن بهره برده است‬
‫کمک و مشاوره بسیاری از همکاران او مایل است به ویژه تشکر کند‬
‫همکارانش در واحد فیتوشیمی و شاگردانش که دارند‬
‫خوکچه هندی مایل به توسعه فیتوشیمیایی جدید بود‬
‫رویه ها‬

‫ریدینگ‪ ،‬جفری بی‪ .‬هاربورن‬

‫دسامبر ‪1983‬‬
‫پیشگفتار چاپ سوم‬

‫از سال ‪ 1984‬که چاپ دوم آن منتشر شد‪ ،‬وجود نداشته است‬
‫هر گونه اکتشاف شگفت انگیز در روش های فیتوشیمیایی با این وجود‪ ،‬آن را‬
‫یک دوره تثبیت بوده است‪ ،‬زمانی که بهبود روش های موجود‬
‫معرفی شده اند‪ .‬اولین مجله ای که به طور خاص به گیاه می پردازد ‪ods‬‬
‫تجزیه و تحلیل‪ ،‬به نام تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی‪ ،‬در سال ‪ 1990‬راه اندازی شد‪ .‬استفاده از‬
‫به عنوان یک ابزار تحلیلی در حال حاضر تقریبا ً در هر کالسی گسترش یافته است ‪HPLC‬‬
‫متابولیت ثانویه و این در طول دوره در نظر گرفته شده است‬
‫تجدید نظر در ویرایش دوم ارجاعات جدید به ادبیات اولیه‬
‫افزوده شده‪ .‬بخش هایی در مورد آلکالوئیدها‪ ،‬آمین ها‪ ،‬ایریدوئیدها‪ ،‬چربی دوست‬
‫فالونوئیدها‪ ،‬گلوکوزینوالت ها و سسکوی ترپن الکتون ها همه بوده اند‬
‫منبسط‪ .‬کاربرد روش های فیتوشیمیایی در گیاهان اتوس‬
‫اهمیت گیاه شناسی در سال های اخیر به طور قابل توجهی افزایش یافته است و الف‬
‫شرح مختصری از کاربرد فیتوشیمی در گیاهان دارویی دارد‬
‫به فصل ‪ 1‬اضافه شد‬

‫سال ‪ 1990‬نقطه عطفی مهم برای فیتوشیمیدانان بود‪ .‬انتشارات را دید‬

‫‪،‬دیکشنری محصوالت طبیعی‪ ،‬ویرایش شده توسط جان باکینگهام‬
‫تحت تأثیر چپمن و هال‪ .‬این فرهنگ لغت ارائه می دهد‬
‫کارگر فیتوشیمیایی برای اولین بار با لیست کامل همه شناخته شده‬
‫ترکیبات شیمیایی گیاهی (و حیوانی) و عالوه بر آن در حال تنظیم‬
‫به روز شده است‪ .‬اکنون می توان به سرعت به این سوال پاسخ داد‪ :‬آیا من الف را پیدا کرده ام‬
‫ماده گیاهی جدید یا نه؟ انبوهی از کتاب ها و بررسی ها در مورد روش های‬
‫تجزیه و تحلیل گیاهان در دهه اخیر ظاهر شده است و اینها بوده است‬
‫‪.‬در پایان هر فصل به فهرست های مرجع مناسب اضافه می شود‬

‫کند‬ ‫ویرایش جدید‪ ،‬نویسنده مایل است یک بار دیگر تشکر‬ ‫در تهیه این‬
‫وی‬ ‫در سرویس تحقیقات فیتوشیمیایی در ریدینگ و همچنین‬ ‫همکاران‬
‫اند‬ ‫در طول سال ها‪ ،‬که بسیاری از آنها را امتحان کرده‬ ‫بسیاری از دانشجویان محقق‪،‬‬
‫کند‬ ‫همچنین از خانم والری نوریس به خاطر او تشکر می‬ ‫رویه های شرح داده شده در اینجا او‬

‫کمک کارشناسان در تهیه این نسخه‪ ،‬و ناشران برای‬

‫تشویق آنها‬

‫خواندن جفری بی هاربورن‬

‫فوریه ‪1998‬‬
‫واژه نامه‬

‫‪-‬‬

‫اختصارات عمومی‬

‫طیف سنجی جرمی = ‪ MS‬کروماتوگرافی الیه نازک = ‪TLC‬‬

‫تحرک نسبت به = ;‪ R‬کروماتوگرافی مایع گازی = ‪GLC‬‬

‫جلو‬

‫زمان ماند نسبی = ‪ RR،‬کروماتوگرافی کاغذ = ‪PC‬‬

‫نانومتر فرابنفش = نانومتر = ‪UV‬‬

‫وزن مولکولی = ‪ mol.wt.‬مادون قرمز = ‪IR‬‬

‫مولر = ‪ M‬تشدید مغناطیسی هسته ای = ‪NMR‬‬

‫کروماتوگرافی مایع با کارایی باال = ‪HPLC‬‬

‫مواد شیمیایی‬

‫استامید )تری متیل سیلیل( ‪BSA = N,O-bis‬‬

‫پلی وینیل پیرولیدون (برای حذف فنل ها) = ‪PVP‬‬

‫هیدروکسی تولوئن بوتیله (آنتی اکسیدان) = ‪BHT‬‬

‫اتیلن دی آمین تتراستیک اسید (عامل کالت کننده) = ‪EDTA‬‬
‫تریس = تریست هیدروکسی متیل) متیل آمین (بافر)‬

‫فنیل متان سولفونیل فلوراید = ‪PMSF‬‬

‫سدیم دودسیل سولفات = ‪SDS‬‬

‫پشتیبانی های کروماتوگرافی‬

‫کیزلگوهر = خاک دیاتومه‬

‫دکالسو = سیلیکات آلومینیوم سدیم‬

‫دی اتیل آمینو اتیل تیمار شده است = ‪DEAE-cellulose‬‬

‫تیمار شده با پلی اتیلن ایمین = ‪PEI-cellulose‬‬

‫اپی کلروهیدرین‪-‬تری اتانوالمین‪-‬قلیا تیمار شده = ‪ECTEOLA-cellulose‬‬

‫‪ xiii‬واژه نامه‬

‫پلیمر متیل سیلوکسان = ‪ OV‬پلی فنیل اتر = ‪PPE‬‬

‫روغن سیلیکون = ‪ SE‬تریکسیلنیل فسفات = ‪TXP‬‬

‫نیتریل سیلیکون = ‪ XE‬دی اتیلن گلیکول سوکسینات = ‪DEGS‬‬

‫سلیت اسید شسته = ‪ Embacel‬گریس استاپ خروس = ‪Apiezon L‬‬

‫پشتیبانی از پلی اتیلن گلیکول = ‪Carbowax‬‬

‫کروموسورب = ساپورت آجر نسوز پوروپک = پلیمر استایرن‬

‫‪ octadecylsilane‬پشتیبانی = ‪ODS‬‬

‫حالل های کروماتوگرافی‬

‫اسید فرمیک = ‪ HCO، H‬متانول = ‪MeOH‬‬

‫اسید استیک = ‪ HOAc‬اتانول = ‪EtOH‬‬

‫کلروفرم = ‪ CHCl.‬ایزو پروپانول = ‪iso-PrOH‬‬

‫متیلن دی کلراید = ‪ CH,Cl,‬بوتانول‪n-BuOH = n-‬‬

‫اتیل استات = ‪ EtOAc‬ایزو بوتانول = ‪iso-BuOH‬‬

‫استون = ‪ Me، CO‬فنل = ‪PhOH‬‬

‫متیل اتیل کتون = ‪ MeCOEt‬دی اتیالمین = ‪NHEt،‬‬

‫بنزن = ‪ CH.‬دی اتیل اتر = ‪Et,O‬‬

‫‪1‬‬
‫روشهای تجزیه و تحلیل گیاهان‬

‫‪1.1‬‬ ‫مقدمه ‪1‬‬

‫‪1.2‬‬ ‫روش های استخراج و جداسازی ‪4‬‬
‫‪1.3‬‬ ‫روش های جداسازی ‪7‬‬
‫‪1.4‬‬ ‫روش های شناسایی ‪16‬‬
‫‪1.5‬‬ ‫تجزیه و تحلیل نتایج ‪30‬‬
‫‪1.6‬‬ ‫برنامه های کاربردی ‪32‬‬

‫مقدمه ‪1.1‬‬

‫‪.‬موضوع فیتوشیمی یا شیمی گیاهی در دوباره توسعه یافته است‬

‫صد سال به عنوان یک رشته متمایز‪ ،‬جایی در بین محصول طبیعی‬
‫شیمی آلی و بیوشیمی گیاهی و ارتباط نزدیکی با هر دو دارد‪ .‬آی تی‬
‫مربوط به تنوع بسیار زیاد مواد آلی است‬
‫ساخته شده و انباشته شده توسط گیاهان و برخورد با ساختار شیمیایی‬
‫‪،‬این مواد‪ ،‬بیوسنتز‪ ،‬گردش و متابولیسم آنها‬
‫‪.‬توزیع طبیعی و عملکرد بیولوژیکی آنها‬

‫در تمام این عملیات ها روش هایی برای جداسازی‪ ،‬تصفیه مورد نیاز است‬
‫‪.‬و شناسایی بسیاری از ترکیبات مختلف موجود در گیاهان‬
‫بنابراین‪ ،‬پیشرفت در درک ما از فیتوشیمی به طور مستقیم است‬
‫مربوط به بهره برداری موفقیت آمیز از تکنیک های شناخته شده‪ ،‬و شرایط‬
‫توسعه مداوم تکنیک های جدید برای حل مشکالت برجسته‬
‫همانطور که ظاهر می شوند‪ .‬یکی از چالش های فیتوشیمی انجام همه موارد است‬
‫عملیات فوق بر روی مقادیر بسیار کم مواد‪ .‬فری‬
‫بنابراین‪ ،‬حل یک مشکل بیولوژیکی مثالً در تنظیم رشد گیاه‬
‫در بیوشیمی فعل و انفعاالت گیاهی و حیوانی‪ ،‬یا در درک‬
‫منشا گیاهان فسیلی به شناسایی طیف وسیعی از مجموعه ها بستگی دارد‬
‫ساختارهای شیمیایی که ممکن است فقط برای مطالعه در میکروگرم در دسترس باشند‬
‫مقادیر‬

‫هدف این کتاب ارائه مقدمه ای برای اولین بار است‬

‫ارائه روشهای موجود برای تجزیه و تحلیل مواد گیاهی و‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪2‬‬

‫برای ارائه کلیدی برای ادبیات موضوع‪ .‬هیچ چیز جدیدی برای آن ادعا نشده است‬
‫‪.‬روش های شرح داده شده در اینجا در واقع‪ ،‬هدف ترسیم این روش‌ها است‬
‫هایی که بیشترین استفاده را داشته اند‪ .‬دانشجو یا کارگر پژوهشی‪od‬‬
‫سپس می تواند به سرعت تکنیک های خود را برای حل تکنیک های خود توسعه دهد‬
‫‪.‬چالش ها و مسائل‬

‫برخی از آموزش در تکنیک های آزمایشگاهی شیمی ساده به عنوان فرض می شود‬
‫‪.‬یک پس زمینه با این حال‪ ،‬این امکان برای گیاه شناسان و سایر دانشمندان گیاهی وجود دارد‬
‫با شیمی بسیار کمی‪ ،‬به انجام فیتوشیمی‪ ،‬زیرا بسیاری از ‪Tists،‬‬
‫‪،‬تکنیک ها ساده و سرراست هستند‪ .‬مانند سایر دروس عملی‬
‫دانش آموز باید تخصص خود را توسعه دهد‪ .‬بدون دستور العمل‪ ،‬اما دقیقا‬
‫نوشته شده است‪ ،‬می تواند در آزمایشگاه جایگزین عقل سلیم و‬
‫نمونه های عملی ‪..k‬توانایی فکر کردن به چیزها از اصول اولیه‬
‫آزمایش هایی که می توان از طریق آنها برای کسب تجربه کار کرد‬
‫در اکثر بخش‌های فصل‌های بعدی مشاهده می‌شود‪ .‬اینها به راحتی می توانند باشند‬
‫برای دوره های آزمایشگاهی سازگار شده است و بسیاری از آنها قبالً برای این مورد استفاده شده اند‬
‫هدف‬

‫محدوده و تعداد ساختارهای مولکولی گسسته تولید شده توسط‬

‫گیاهان بسیار بزرگ هستند و سرعت کنونی پیشرفت دانش ما در مورد این است‬
‫آنها که یک مشکل عمده در تحقیقات فیتوشیمیایی‪ ،‬گردآوری آنهاست‬
‫‪،‬داده های موجود در مورد هر کالس خاص از ترکیب‪ .‬برآورد شده است‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬که اکنون بیش از ‪ 10000‬آلکالوئید گیاهی شناخته شده وجود دارد‬
‫عالقه دارویی به آلکالوئیدهای جدید مانند آلکالوئیدهای جدید است‬
‫‪.‬کشف و توصیف می شود‪ ،‬احتماالً با سرعت یک روز‬

‫از آنجایی که تعداد مواد شناخته شده بسیار زیاد است‪ ،‬معرفی ویژه‬
‫در هر فصل از کتاب مطالبی نوشته شده است که نشان دهنده ساختار‬
‫تنوع طبیعی موجود در هر کالس از ترکیبات‪ ،‬به تشریح آن‬
‫ترکیباتی که معموالً وجود دارند و این ماده شیمیایی را نشان می دهند‬
‫تنوع با فرمول های نماینده در هر کجا که باشد ارجاع داده می شود‬
‫‪.‬ممکن است‪ ،‬به لیست های اخیر از ترکیبات شناخته شده در هر کالس‬
‫را نشان می دهد‪ .‬مقادیر‪ ،‬واکنش های رنگی و طیفی ‪ R‬جداول گنجانده شده است که‬
‫خواص بیشتر ترکیبات رایج گیاهی این جداول‬
‫عمدتا ً برای مقاصد توضیحی یا مقایسه ای ارائه می شوند و نیستند‬
‫به معنای جامع بودن‬

‫پیشرفت فیتوشیمیایی کمک زیادی به توسعه‬

‫روشهای سریع و دقیق غربالگری گیاهان به ویژه‬
‫مواد شیمیایی و تاکید در این کتاب ناگزیر بر کروماتوگرافی است‬
‫تکنیک‪ .‬این روش ها نشان داده اند که بسیاری از مواد منشاء‬
‫به طور کلی تصور می شود که نسبتا ً نادر در وقوع هستند تقریبا ً جهانی هستند‬
‫توزیع در قلمرو گیاهی اهمیت تداوم نظرسنجی ها‬
‫‪،‬گیاهان برای مواد فعال بیولوژیکی نیازی به استرس ندارند‪ .‬قطعا‬
‫روش های تشخیص اولیه کالس های خاصی از ترکیبات هستند‬
‫‪.‬در فصول بعدی به تفصیل مورد بحث قرار گرفته است‬

‫اگرچه اصطالح "گیاه" در اینجا برای اشاره به پادشاهی گیاهی استفاده می شود‬
‫به طور کلی‪ ،‬بر گیاهان عالی و روش های تجزیه و تحلیل تأکید شده است‬
‫مقدمه ‪3‬‬

‫برای میکروارگانیسم ها با هیچ جزئیات خاصی برخورد نمی شود‪ .‬به عنوان یک ژنرال‬
‫قانون‪ ،‬روش های مورد استفاده در گیاهان عالی برای شناسایی آلکالوئیدها‪ ،‬آمینو‬
‫‪.‬اسیدها‪ ،‬کینون ها و ترپنوئیدها را می توان مستقیما ً روی سیستم میکروبی اعمال کرد‬
‫تم‪ .‬در بسیاری از موارد‪ ،‬جداسازی بسیار آسان‌تر است‪ ،‬زیرا آلودگی‌های فرعی‬
‫موضع هایی مانند تانن ها و کلروفیل ها معموالً وجود ندارند‪ .‬در یک‬
‫در موارد کمی‪ ،‬به دلیل انعطاف پذیری میکروبی‪ ،‬ممکن است دشوارتر باشد‬
‫دیواره سلولی و نیاز به استفاده از اختالل مکانیکی برای آزادسازی برخی از‬
‫مواد موجود‬

‫تعدادی از ترکیبات آلی مانند پنی سیلین و‬

‫آنتی بیوتیک های تتراسایکلین (ترنر‪1971 ،‬؛ ترنر و آلدریج‪ ،)1983 ،‬که‬
‫به طور خاص در میکروارگانیسم ها یافت می شوند و شناسایی آنها وجود ندارد‬
‫به دلیل محدودیت فضا در اینجا پوشش داده شده است‪ .‬گلسنگ ها نیز یک محدوده ایجاد می کنند‬
‫از رنگدانه های خاص‪ ،‬از جمله دپسیدون ها و دپسیدها‪ .‬اینها هستند‬
‫‪،‬تجزیه و تحلیل با روش های میکروشیمیایی ویژه‪ ،‬بر اساس واکنش های رنگی‬
‫تکنیک های کروماتوگرافی و طیفی یک حساب جامع از‬
‫شیمی گلسنگ ها توسط کولبرسون (‪ )1969‬ارائه شده است‪ .‬تجزیه و تحلیل از‬
‫‪.‬رنگدانه های گلسنگ در اینجا در فصل ‪( 2‬ص ‪ )101‬به اختصار ذکر شده است‬

‫ترکیبات شیمیایی گیاهان را می توان در چند دسته طبقه بندی کرد‬

‫‪،‬راه های مختلف؛ در این کتاب‪ ،‬طبقه بندی بر اساس منشاء بیوسنتزی‬
‫‪.‬خواص حاللیت و وجود گروه های عاملی کلیدی خاص‬
‫فصل ‪ 2‬ترکیبات فنلی را پوشش می دهد‪ ،‬موادی که به آسانی وجود دارند‬
‫به دلیل ماهیت آبدوست آنها و منشاء مشترک آنها از‬
‫‪،‬پیش ساز معطر شیکیمیک اسید فصل ‪ 3‬به ترپنوئیدها می پردازد‬
‫که همگی دارای خواص لیپیدی و منشا بیوسنتزی از ایزوپنتنیل هستند‬
‫پیروفسفات فصل ‪ 4‬به اسیدهای آلی‪ ،‬لیپیدها و غیره اختصاص دارد‬
‫کالس های ترکیبی که به صورت بیوسنتزی از استات به دست می آیند‪ .‬فصل ‪ 5‬است‬
‫بر روی ترکیبات نیتروژنی گیاهان‪ ،‬مواد اساسی شناسایی شده توسط آنها‬
‫‪-‬فصل ‪ Dragendorff.‬پاسخ مثبت به نین هیدرین یا معرف‬
‫‪.‬به کربوهیدرات های محلول در آب و مشتقات آنها می پردازد ‪ter 6‬‬
‫در نهایت‪ ،‬فصل ‪ 7‬به طور خالصه به درشت مولکول های گیاهان‪ ،‬هسته ای می پردازد‬
‫اسیدها‪ ،‬پروتئین ها و پلی ساکاریدها که به راحتی از آنها جدا می شوند‬
‫‪.‬سایر ترکیبات با وزن مولکولی باال‬

‫در ادامه این فصل مقدماتی‪ ،‬پیشنهاد شده است که‬

‫به طور کلی روش های استخراج‪ ،‬جداسازی و شناسایی‪ .‬آ‬
‫‪.‬بخش پایانی شامل نمونه هایی از کاربرد فیتوشیمی است‬
‫روش های کال در زمینه های مختلف علوم گیاهی‬

‫دو اثر مرجع عمده در مورد روش های گیاهی موجود است‬
‫است ‪ PM Dey‬با ‪ Methods in Plant Biochemistry‬تحلیل و بررسی‪ .‬اولین مورد با عنوان‬
‫و جی بی هاربورن به عنوان ویراستار سریال‪ .‬این در یک مجموعه ‪ 10‬جلدی ظاهر شده است‬
‫دومی‪ ،‬روش‌های مدرن تجزیه و تحلیل گیاهان‪ ،‬سری جدید است ‪(1989-1997).‬‬
‫جکسون‪ ،‬که انتشار آن در سال ‪ 1985‬آغاز شد ‪ ].F.‬و ‪ HF Linskens‬ویرایش شده توسط‬
‫و به حدود ‪ 20‬جلد رسیده است‪ .‬بسیاری از متون دیگر از جمله به‬
‫روشهای فیتوشیمیایی و اینها در منابع در پایان ذکر شده است‬
‫است ‪ Phytochemical Analysis‬این و فصل های بعدی یک مجله فعلی‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪4‬‬

‫ارتباط مستقیم با خوانندگان این کتاب دارد‪ .‬مجالت دیگری که ممکن است باشد‬
‫مجله کروماتوگرافی‪ ،‬بیوشیمی تحلیلی و مجله مورد مشاوره هستند‬
‫‪.‬علوم کروماتوگرافی‬

‫روشهای استخراج و جداسازی ‪1.2‬‬

‫مواد گیاهی ‪1.2.1‬‬

‫در حالت ایده آل‪ ،‬بافت های تازه گیاهی باید برای تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی و‬
‫مواد باید در عرض چند دقیقه در الکل در حال جوش فرو بریزند‬
‫مجموعه‪ .‬گاهی اوقات گیاه مورد مطالعه در دسترس و مادی نیست‬
‫ممکن است باید توسط یک کلکسیونر ساکن در قاره دیگری تامین شود‪ .‬در چنین‬
‫در موارد‪ ،‬دستمال تازه چیده شده‪ ،‬به صورت خشک در یک کیسه پالستیکی نگهداری می شود‪ ،‬معموالً باقی می ماند‬
‫در شرایط خوبی برای تجزیه و تحلیل در طی چند روز مورد نیاز برای ترانس‬
‫بندر از طریق پست هوایی‬

‫از طرف دیگر‪ ،‬ممکن است گیاهان قبل از استخراج خشک شوند‪ .‬اگر این کار انجام شود‪ ،‬همینطور است‬
‫ضروری است که عملیات خشک کردن تحت شرایط کنترل شده انجام شود‬
‫اقداماتی برای جلوگیری از وقوع تغییرات شیمیایی بیش از حد باید خشک شود به عنوان‬
‫‪ a‬در سریع ترین زمان ممکن‪ ،‬بدون استفاده از دماهای باال‪ ،‬ترجیحا در‬
‫بادکش خوب پس از خشک شدن کامل‪ ،‬گیاهان را می توان قبل از تجزیه و تحلیل نگهداری کرد‬
‫‪،‬برای مدت زمان طوالنی در واقع‪ ،‬تجزیه و تحلیل برای فالونوئیدها‪ ،‬آلکالوئیدها‬
‫کینون ها و ترپنوئیدها با موفقیت بر روی هرباریوم انجام شده اند‬
‫بافت گیاهی با قدمت چندین ساله‬

‫‪.‬یکی از نمونه‌های استفاده از مواد گیاهی‪ ،‬آنالیز اسانس است‬

‫که بر روی نمونه های نوع برگ پونه‪ ،‬ماده انجام شد ‪sis‬‬
‫ساخته شده قبل از ‪ 1800‬به دست آمده است ‪ Linneaus‬از مجموعه اصلی‬
‫تغییرات کمی در محتوای اسانس ممکن است ‪).‬هارلی و بل‪(1967 ،‬‬
‫در هر دو بافت برگ و میوه با گذشت زمان رخ می دهد و این احتمال باید وجود داشته باشد‬
‫در نظر گرفته شده است‪ .‬به عنوان مثال‪ ،‬سندفورد و هاینز (‪ )1971‬دریافتند که‬
‫به آرامی افزایش یافت ‪، Myristica fragrans‬میزان میریستسین در میوه های جوز هندی‬
‫‪.‬با گذشت زمان کاهش یافت ‪ f-pinene‬در ذخیره سازی‪ ،‬در حالی که محتوای فرارتر‬
‫از طرفی فالونوئیدها و آلکالوئیدها در نمونه های هرباریوم هستند‬
‫‪ Strychnos nuxvomica‬به طور قابل مالحظه ای پایدار با زمان؛ بنابراین‪ ،‬یک نمونه برگ از‬
‫در ابتدا در سال ‪ 1675‬جمع آوری شد‪ ،‬هنوز هم حاوی ‪ ٪2-1‬وزنی آلکالوئید بود‬
‫‪).‬فیلیپسون‪(1982 ،‬‬

‫‪.‬برخی از زیر کالس های پلی فنل بهتر است تحت کنترل بیشتری استخراج شوند‬
‫‪ con-‬نسبت به موارد ذکر شده در باال‪ .‬به عنوان مثال‪ ،‬بازده ‪ led‬شرایط‬
‫تانن متراکم از برگ بید در هنگام اندازه گیری بیشترین مقدار را دارد‬
‫‪.‬بر روی برگ های تازه ای که به جای خشک شدن در هوا با خالء خشک شده اند ساخته می شوند‬
‫در مقابل‪ ،‬گلیکوزیدهای فنلی ساده در همان گیاهان بهترین هستند‬
‫‪.‬پس از خشک کردن ساده در هوا استخراج شد (اوریانس‪)1995 ،‬‬

‫آزادسازی بافت گیاهی مورد مطالعه از آلودگی با‬

‫گیاهان دیگر نکته واضحی است که باید در این مرحله مراقب آن باشید‪ .‬ضروری است‪ ،‬برای‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬به کارگیری گیاهانی که عاری از بیماری هستند‪ ،‬یعنی فاقد بیماری هستند‬
‫روشهای استخراج و جداسازی ‪5‬‬

‫تحت تأثیر عفونت ویروسی‪ ،‬باکتریایی یا قارچی قرار می گیرد‪ .‬نه تنها ممکن است محصوالت از‬
‫سنتز میکروبی در چنین گیاهانی تشخیص داده می شود‪ ،‬اما ممکن است عفونت نیز وجود داشته باشد‬
‫متابولیسم گیاه را به طور جدی تغییر می دهد و محصوالت غیرمنتظره می تواند باشد‬
‫‪.‬تشکیل شده است‪ ،‬احتماالً در مقادیر زیاد‬

‫هنگام جمع آوری مواد گیاهی پایین تر نیز ممکن است آلودگی ایجاد شود‬
‫تحلیل و بررسی‪ .‬زمانی که قارچ های رشد انگلی روی درختان جمع آوری می شوند‪ ،‬اینطور است‬
‫حذف تمام بافت درخت از نمونه ها مهم است‪ .‬گزارش های قبلی (پاریس‬
‫و همکاران‪ )1960 ،‬اسید کلروژنیک‪ ،‬یک محصول معمولی گیاهی باالتر‪ ،‬در دو‬
‫قارچ ها تقریبا ً به دلیل آلودگی نادرست هستند‪ .‬تکرار‬
‫‪.‬تجزیه و تحلیل بر روی مواد با دقت تمیز شده هیچ شواهدی از این عارضه را نشان نداد‬
‫‪).‬نتایج منتشر نشده ‪ Hora FB،‬و ‪ (Harborne JB‬پوند موجود است‬
‫باز هم‪ ،‬خزه ها اغلب در ارتباط نزدیک با گیاهان عالی رشد می کنند و همینطور است‬
‫گاهی اوقات به دست آوردن آنها بدون چنین بستر دشوار است‪ .‬در نهایت‪ ،‬در مورد‬
‫‪.‬از گیاهان عالی‪ ،‬گاهی اوقات ممکن است مخلوطی از گیاهان به اشتباه جمع آوری شوند‬
‫ممکن است دو گونه چمن نزدیک به هم در کنار هم در مزرعه رشد کنند‬
‫به اشتباه فرض شده است که یکسان است‪ ،‬یا یک گیاه ممکن است با‬
‫‪.‬درک اینکه دارای یک انگل است (مانند دودر‪ ،‬کوسکوتا)‬
‫‪.‬با آن در هم آمیخته است )‪epitymum‬‬

‫در تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی‪ ،‬هویت گیاهی گیاهان مورد مطالعه قرار گرفت‬
‫باید توسط یک مرجع تایید شده در برخی از مراحل تأیید اعتبار شود‬
‫تحقیق و بررسی‪ .‬اشتباهات زیادی در مورد هویت گیاه در این گیاه رخ داده است‬
‫گذشته از اینکه ضروری است در هنگام گزارش‪ ،‬صحت مطالب را تأیید کنید‬
‫مواد جدید از گیاهان یا حتی مواد شناخته شده از گیاهان جدید‬
‫منابع هویت مطالب یا باید فراتر از سؤال باشد‬
‫به عنوان مثال یک گونه معمولی جمع آوری شده در زیستگاه مورد انتظار توسط یک مزرعه(‬
‫‪ a‬گیاه شناس) یا باید بتوان هویت را توسط‬
‫‪.‬کارشناس طبقه بندی به این دالیل‪ ،‬امروزه در گیاهان گیاهی رایج است‬
‫‪ a‬تحقیقات شیمیایی برای سپرده گذاری یک نمونه کوپن از یک گیاه بررسی شده در‬
‫هرباریوم شناخته شده است‪ ،‬به طوری که می توان در آینده به گیاه اشاره کرد‬
‫‪.‬در صورت لزوم مطالعه شود‬

‫استخراج ‪1.2.2‬‬

‫نحوه استخراج دقیق به طور طبیعی به بافت و‬

‫محتوای آب مواد گیاهی استخراج شده و بر اساس نوع‬
‫ماده ای که در حال جداسازی است‪ .‬به طور کلی‪" ،‬کشتن" گیاه مطلوب است‬
‫بافت‪ ،‬یعنی جلوگیری از اکسیداسیون یا هیدرولیز آنزیمی‪ ،‬و غوطه ور شدن‬
‫بافت برگ یا گل تازه را که در صورت لزوم به طور مناسب برش داده شود‬
‫‪،‬جوشاندن اتانول راه خوبی برای دستیابی به این هدف است‪ .‬الکل‪ ،‬در هر صورت‬
‫‪،‬یک حالل همه منظوره خوب برای استخراج اولیه است‪ .‬متعاقبا ً‬
‫مواد را می توان در مخلوط کن خیس کرد و فیلتر کرد اما این فقط واقعا ً است‬
‫در صورت تالش برای استخراج جامع ضروری است‪ .‬هنگام انزوا‬
‫مواد از بافت سبز‪ ،‬موفقیت استخراج با الکل است‬
‫ارتباط مستقیمی با میزان حذف کلروفیل در حالل دارد‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪6‬‬

‫و هنگامی که بقایای بافت‪ ،‬در استخراج مکرر‪ ،‬کامالً عاری از آن باشد‬

‫رنگ سبز‪ ،‬می توان فرض کرد که تمام وزن مولکولی پایین‬
‫‪.‬پوند استخراج شده است‬

‫روش شیمیایی کالسیک برای به دست آوردن ترکیبات آلی‬

‫‪.‬از بافت خشک شده گیاه (چوب قلب‪ ،‬دانه های خشک‪ ،‬ریشه‪ ،‬برگ) ادامه می یابد‬
‫استخراج مواد پودری در دستگاه سوکسله با طیف وسیعی از‬
‫حالل ها که به نوبه خود با اتر‪ ،‬نفت و کلروفرم شروع می شوند (تا جداسازی‬
‫میزان لیپیدها و ترپنوئیدها) و سپس استفاده از الکل و اتیل استات (برای‬
‫ترکیبات قطبی تر)‪ .‬این روش هنگام کار بر روی آن مفید است‬
‫‪.‬مقیاس گرمی با این حال‪ ،‬به ندرت می توان به تفکیک کامل اجزای تشکیل دهنده دست یافت‬
‫مواد و ترکیبات مشابه ممکن است بازیافت شوند (به نسبت های مختلف)‬
‫در چند کسری‬

‫عصاره به دست آمده با فیلتراسیون از طریق سلیت روی آب شفاف می شود‬

‫پمپ می شود و سپس در خالء متمرکز می شود‪ .‬این در حال حاضر معموال در انجام می شود‬
‫یک اواپراتور چرخشی که محلول های حجیم را تا حد کوچک متمرکز می کند‬
‫حجم ها‪ ،‬بدون ضربه‪ ،‬در دمای بین ‪ 30‬تا ‪ 40‬درجه سانتی گراد‪ .‬عصاره‬
‫تولید اجزای فرار از گیاهان نیاز به اقدامات احتیاطی خاصی دارد‬
‫‪.‬اینها بعداً در فصل ‪ 3‬مورد بحث قرار می گیرند‬

‫میانبرهایی در روش های استخراج وجود دارد که فرد با آنها یاد می گیرد‬
‫تمرین‪ .‬به عنوان مثال‪ ،‬هنگام جداسازی اجزای محلول در آب از برگ‬
‫‪،‬بافت‪ ،‬لیپیدها باید دقیقا ً در مراحل اولیه برداشته شوند‬
‫‪.‬قبل از تغلیظ‪ ،‬با شستشوی مکرر عصاره با نفت‬
‫در واقع‪ ،‬هنگامی که یک عصاره اتانولی مستقیم روی یک چرخشی متمرکز می شود‬
‫اواپراتور‪ ،‬تقریبا ً تمام کلروفیل و لیپید در کناره رسوب می کند‬
‫فالسک‪ ،‬و با مهارت‪ ،‬غلظت را می توان درست به سمت راست برد‬
‫نقطه ای که می توان کنسانتره آبی را با پیپت خارج کرد‪ ،‬تقریبا ً‬
‫کامالً عاری از ناخالصی های لیپیدی‬

‫عصاره غلیظ ممکن است کریستال ها را در حالت ایستاده رسوب دهد‪ .‬اگر چنین است‪ ،‬اینها‬
‫باید از طریق فیلتراسیون جمع آوری شده و همگنی آنها توسط آن مورد آزمایش قرار گیرد‬
‫‪.‬کروماتوگرافی در چندین حالل (به بخش بعدی مراجعه کنید)‬

‫‪.‬اگر یک ماده واحد وجود داشته باشد‪ ،‬کریستال ها را می توان با دوباره خالص سازی کرد‬
‫تبلور و سپس مواد برای تجزیه و تحلیل بیشتر در دسترس است‪ .‬که در‬
‫در بیشتر موارد‪ ،‬مخلوطی از مواد در کریستال ها و آن وجود خواهد داشت‬
‫‪.‬سپس الزم است آنها را دوباره در یک حالل مناسب حل کنیم و جدا کنیم‬
‫ترکیبات را با کروماتوگرافی ارزیابی کنید‪ .‬بسیاری از ترکیبات نیز باقی می مانند‬
‫در مشروب مادر و اینها نیز در معرض کروماتوگرافی قرار می گیرند‬
‫تقسیم بندی به عنوان یک اقدام احتیاطی استاندارد در برابر از دست دادن مواد‪ ،‬تمرکز‬
‫عصاره های تراشیده شده باید در یخچال و مقداری تولوئن نگهداری شوند‬
‫‪.‬برای جلوگیری از رشد قارچ اضافه شده است‬

‫هنگام بررسی مشخصات فیتوشیمیایی کامل یک گیاه معین‬

‫گونه ها‪ ،‬تفکیک عصاره خام به منظور جداسازی مطلوب است‬
‫طبقات اصلی مواد تشکیل دهنده از یکدیگر‪ ،‬قبل از کروماتوگرافی‬
‫تحلیل و بررسی‪ .‬یک روش مبتنی بر قطبیت های مختلف که ممکن است‬
‫استفاده شده بر روی یک گیاه حاوی آلکالوئید در شکل ‪ 1.1‬نشان داده شده است‪ .‬را‬
‫روش های جداسازی ‪7‬‬

‫برگ یا گل تازه‬

‫به مدت ‪ 5‬دقیقه همگن کنید‬

‫فیلتر کنید ‪ wt)،‬جلد‪ .‬یا ‪MeOH-H,0 (4:1) {10x‬‬

‫فیلتر باقیمانده‬
‫عصاره گیری با تبخیر تا ‪ 1/10‬حجم (<‪ 40‬درجه سانتیگراد)‬
‫‪ MH,S04‬فیلتر اسیدی به ‪EtOAc (x 5)، 2‬‬
‫)‪ CHCl (x 3‬استخراج با‬
‫عصاره الیه اسید آبی ‪ CHCI3‬باقیمانده فیلتر‬
‫تبخیر کنید ‪ pH 10‬را تا ‪. Basify‬فیبر [تبخیر لر‬
‫‪ NH، OH،‬ساعت‬
‫‪ | in. i Wi‬عمدتا ً عصاره خنثی عصاره قطبی متوسط(‬
‫‪ CHCl;-MeOH‬ترپنوئیدها و( )چربی ها‪ ،‬موم ها( )‪re ones aride‬‬
‫)دو بار ‪ TLC (3:1،‬یا ‪) PC‬فنولیک ‪ TLC‬جدا توسط ‪ ana Las‬یا‬
‫‪،‬را ببینید ‪ CHC‬روی سیلیس و ‪ GLC‬روی سیلیس یا ‪Lhapler‬‬
‫به فصل ‪ 4‬مراجعه کنید) (به فصل های ‪ 2،3‬مراجعه کنید){‬
‫پایه آبی ‪CHCl;-MeOH‬‬
‫الیه ها را استخراج کنید‬
‫تبخیر کنید‬
‫خشک‪ ،‬تبخیر عصاره با‬
‫‪MeOH‬‬
‫عصاره است ‪ MeOH‬عصاره پایه‬
‫اکثر آلکالوئیدها) عصاره قطبی{‬
‫روی سیلیس یا {کواترنری ‪TLC‬‬
‫آلکالوئیدهای الکتروفورز و‬
‫)‪ N‬اکسیدهای )به فصل ‪ 5‬مراجعه کنید(‬

‫)به فصل ‪ 5‬مراجعه کنید{‬

‫شکل ‪ 1.1‬یک روش کلی برای استخراج بافت های تازه گیاهی و تکه تکه کردن‬
‫‪.‬با توجه به قطبیت به کالس های مختلف تقسیم می شوند‬

‫مقدار و نوع ترکیبات جدا شده به بخش های مختلف‬

‫البته از گیاهی به گیاه دیگر متفاوت خواهد بود‪ .‬همچنین‪ ،‬چنین روشی ممکن است داشته باشد‬
‫‪.‬هنگامی که مواد حساس تحت بررسی هستند‪ ،‬اصالح شوند‬

‫روش های جداسازی ‪1.3‬‬

‫کلی ‪1.3.1‬‬

‫جداسازی و خالص سازی ترکیبات گیاهی عمدتا ً انجام می شود‬

‫‪:‬با استفاده از یک یا دیگر یا ترکیبی از چهار تکنیک کروماتوگرافی‬
‫مایع گازی ‪ (TLC)،‬کروماتوگرافی الیه نازک ‪ (PC)،‬کروماتوگرافی کاغذی‬
‫و کروماتوگرافی مایع با کارایی باال )‪ (GLC‬کروماتوگرافی‬
‫‪.‬انتخاب تکنیک تا حد زیادی به حاللیت مناسب بستگی دارد ‪(HPLC).‬‬
‫به خصوص است ‪. PC‬پیوندها و نوسانات ترکیباتی که باید جدا شوند‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪8‬‬

‫‪،‬قابل استفاده برای ترکیبات گیاهی محلول در آب‪ ،‬یعنی کربوهیدرات ها‬
‫‪.‬اسیدهای آمینه‪ ،‬بازهای اسید نوکلئیک‪ ،‬اسیدهای آلی و ترکیبات فنلی‬
‫‪.‬روش انتخابی برای جداسازی تمام اجزای محلول در چربی است ‪TLC‬‬
‫یعنی لیپیدها‪ ،‬استروئیدها‪ ،‬کاروتنوئیدها‪ ،‬کینون های ساده و کلروفیل ها‪ .‬توسط‬
‫‪.‬می یابد ‪ vola-‬کاربرد اصلی خود را با ‪ GLC‬در مقابل‪ ،‬تکنیک سوم‬
‫ترکیبات کاشی‪ ،‬اسیدهای چرب‪ ،‬مونو و سسکوی ترپن ها‪ ،‬هیدروکربن ها‬
‫و ترکیبات گوگردی با این حال‪ ،‬فرار از گیاه جوش باالتر‬
‫اجزای تشکیل دهنده را می توان با تبدیل آنها به استرها و‪/‬یا افزایش داد‬
‫تری متیل سیلیل اترها به طوری که کالس های کمی وجود دارد که به طور کامل هستند‬
‫نامناسب متناوبا‪ ،‬اجزای کمتر فرار ‪ GLC‬برای جداسازی‬
‫روشی که کارایی ستون را ترکیب می کند‪ ،‬جدا کرد ‪ HPLC،‬را می توان با‬
‫با سرعت تحلیل عالوه بر این‪ ،‬ممکن است اشاره شود که وجود دارد‬
‫همپوشانی قابل توجهی در استفاده از تکنیک های فوق و اغلب یک‬
‫ممکن است بهترین باشد ‪ GLC‬و ‪ TLC‬یا ‪ HPLC‬و ‪ TLC، TLC‬و ‪ PC‬ترکیب‬
‫رویکردی برای جداسازی یک کالس خاص از ترکیب گیاهی‬

‫‪.‬تمام تکنیک های فوق را می توان هم در میکرو و هم در کالن استفاده کرد‬

‫‪.‬بر روی الیه های ضخیم جذب انجام می شود ‪، TLC‬مقیاس برای کارهای آماده سازی‬
‫روی صفحات ضخیم کاغذ صافی‪ .‬برای انزوا در یک حتی بزرگتر ‪ PC‬و ‪ent‬‬
‫در مقیاس بیش از این‪ ،‬معموالً از کروماتوگرافی ستونی همراه با استفاده می شود‬
‫جمع آوری کسر خودکار این روش ترکیب خالص را به دست می دهد‬
‫نت ها به مقدار گرم‬

‫‪.‬یک تکنیک دیگر که کاربرد نسبتا ً گسترده ای در فیتوشیمی دارد‬

‫الکتروفورز است‪ .‬در وهله اول‪ ،‬این تکنیک فقط کاربردی است ‪istry‬‬
‫کابل به ترکیباتی که حامل بار هستند‪ ،‬یعنی اسیدهای آمینه‪ ،‬مقداری‬
‫‪،‬آلکالوئیدها‪ ،‬آمین ها‪ ،‬اسیدهای آلی و پروتئین ها‪ .‬با این حال‪ ،‬عالوه بر این‬
‫کالس های رنگ آمیزی از ترکیبات خنثی (قندها‪ ،‬فنل ها) را می توان به حرکت درآورد‬
‫در میدان الکتریکی با تبدیل آنها به مجتمع های فلزی (مثالً با استفاده از‬
‫سدیم بورات)‪ .‬سارجنت (‪ )1969‬مقدمه ساده ای را ارائه کرده است‬
‫تکنیک های الکتروفورتیک‬

‫الکتروفورز مویرگی‪ ،‬که در حال حاضر در مد است‪ ،‬در انجام می شود‬

‫لوله های سیلیسی ذوب شده با سوراخ بسیار کوچک به طول حدود یک متر‪ .‬ولتاژ باال‬
‫در انتهای کاتد تمرین می شود‪ .‬را ‪ UV‬اعمال می شود و تشخیص )‪(30kV‬‬
‫‪،‬نمونه‪ ،‬اعمال شده در انتهای آند‪ ،‬می تواند در حد یک نانوگرم باشد‬
‫اما غلظت باید نسبتا باال باشد‪ .‬این تکنیک ثابت کرده است‬
‫‪،‬به عنوان یک ابزار تحلیلی ارزشمند برای اکثر کالس های متابولیت ثانویه‬
‫‪.‬اما به ویژه برای پلی فنل های گیاهی (توماس‪-‬باربران‪)1995 ،‬‬

‫‪.‬عالوه بر تکنیک‌هایی که تاکنون ذکر شد‪ ،‬از چند تکنیک دیگر نیز استفاده می‌شود‬
‫متحد در تحقیقات فیتوشیمیایی جداسازی با عصاره مایع‪-‬مایع ساده‬
‫هنوز در زمینه کاروتنوئید از ارزش خاصی برخوردار است (به فصل ‪ ،3‬ص ‪ 138‬مراجعه کنید)‪ .‬را‬
‫وسیله ای برای استخراج خودکار مایع‪-‬مایع‪ ،‬همانطور که در کریگ گنجانده شده است‬
‫دستگاه توزیع ضد جریان‪ ،‬مدتی است که در دسترس بوده است‬
‫اما زمانی که تکنیک های دیگر شکست می خورند‪ ،‬از آن به عنوان آخرین راه حل استفاده می شود‪ .‬آ‬
‫‪.‬دستگاه راحت تری برای استخراج مایع‪-‬مایع ساخته شده است‬
‫نامیده می شود که )‪ (DCCC‬کروماتوگرافی ضد جریان قطره ای‬
‫روش های جداسازی ‪9‬‬

‫‪.‬در مقیاس آماده سازی عمدتا ً برای جداسازی مواد محلول در آب کار می کند‬
‫جداسازی پروتئین های گیاهی و ‪).‬و همکاران‪ (Hostettmann 1986 ،‬دانش آموزان‬
‫اسیدهای کلئیک اغلب به تکنیک های خاصی نیاز دارند که هنوز ذکر نشده است‪ ،‬مانند‬
‫فیلتراسیون از طریق ژل سفادکس‪ ،‬کروماتوگرافی میل ترکیبی و دیفرانسیل‬
‫اولتراسانتریفیوژ‬

‫از آنجایی که در جاهای دیگر در مورد کروماتوگرافی بسیار نوشته شده است (به عنوان مثال رجوع کنید به‬
‫در اینجا فقط الزم است که جدایی اصلی را مورد بحث قرار دهیم ‪Heftmann، 1992)،‬‬
‫تکنیک هایی که در تحقیقات فیتوشیمیایی به کار می روند و برای دادن الف‬
‫‪.‬چند ارجاع پیشرو به دیگر متون موجود‬

‫کروماتوگرافی کاغذی ‪1.3.2‬‬

‫یکی از اصلی‌ترین مزیت‌های رایانه شخصی‪ ،‬راحتی زیاد در انجام آن است‬

‫جداسازی به سادگی بر روی ورق های کاغذ فیلتر‪ ،‬که هر دو به عنوان‬
‫وسیله ای برای جداسازی و به عنوان تکیه گاه‪ .‬مزیت دیگر این است‬
‫مقادیر تعیین شده بر روی کاغذ‪ ،‬به طوری که ‪ R.‬تکرارپذیری قابل توجهی از‬
‫چنین اندازه گیری ها پارامترهای ارزشمندی برای استفاده در توصیف موارد جدید هستند‬
‫ترکیبات گیاهی در واقع‪ ،‬برای موادی مانند آنتوسیانین ها‪ ،‬که‬
‫را ندارند‪ .‬بیشترین است ‪، R‬سایر خصوصیات فیزیکی کامالً مشخص‬
‫ابزار مهمی برای توصیف و تشخیص رنگدانه های مختلف است‬
‫‪).‬هاربورن‪(1967 ،‬‬

‫‪.‬کروماتوگرافی روی کاغذ معموالً شامل پارتیشن یا جذب می شود‬

‫‪:‬کروماتوگرافی یونی در پارتیشن‪ ،‬ترکیبات به صورت تقسیم بندی می شوند‬
‫و )بوتانول‪ n-‬به عنوان مثال( بین یک حالل الکلی تا حد زیادی غیر قابل امتزاج با آب‬
‫‪،‬بوتانول‪-‬اسید استیک‪-‬آب (‪، n-4:1:5‬اب‪ .‬مخلوط حالل کالسیک‬
‫در واقع به عنوان وسیله ای ابداع شد )‪ BAW‬به اختصار( )الیه باالیی‬
‫بوتانول و در نتیجه بهبود‪ n-‬افزایش محتوای آب الیه‬
‫هنوز به طور گسترده قابل استفاده است ‪، BAW‬کاربرد مخلوط حالل در واقع‬
‫‪،‬به عنوان یک حالل عمومی برای بسیاری از طبقات ترکیبات گیاهی‪ .‬در مقابل‬
‫‪.‬در حالل های آبی است ‪ PC‬نیروهای جذب یکی از ویژگی های اصلی‬
‫آب خالص یک حالل کروماتوگرافی همه کاره قابل توجه است‬
‫می توان برای جداسازی پورین ها و پیریمیدین های رایج و‬
‫همچنین برای ترکیبات فنلی و گلیکوزیدهای گیاهی قابل استفاده است‬
‫‪.‬عمومی‬

‫انتخاب دستگاه برای کامپیوتر تا حدی به مقدار آن بستگی دارد‬

‫افقی یا دایره ای می گیرد ‪ PC‬فضای آزمایشگاهی موجود برای مثال‬
‫استاندارد دارد‪ .‬به طرز چشمگیری خوب است ‪ TLC‬فضای کمی بیشتر از یک مخزن‬
‫وضوح و برای مثال برای جداسازی کاروتنوئیدها استفاده می شود‪ .‬در بیشتر‬
‫آزمایشگاه‌ها‪ ،‬رایانه شخصی با فرود‪ ،‬در مخازنی انجام می‌شود که جای آن‬
‫کاغذهای تاریخ واتمن به اندازه ‪ 46‬در ‪ 57‬سانتی متر‪ .‬کامپیوتر نزولی بیشتر است‬
‫مفید است زیرا در صورت تمایل‪ ،‬حالل می تواند به راحتی بیش از حد مورد استفاده قرار گیرد‪ .‬این است‬
‫‪.‬همچنین برای جداسازی دو بعدی کمی راحت تر است‬

‫‪.‬طیف قابل توجهی از کاغذهای صافی اصالح شده در تجارت موجود است‬
‫‪،‬به طور خاص برای دستیابی به جداسازی های کروماتوگرافی خاص‪ .‬مثال‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪10‬‬

‫خواص قطبی سلولز را می توان با ترکیب سیلیس کاهش داد‬

‫اسید یا آلومینا وارد کاغذها می شود و آنها را برای جداسازی مناسب تر می کند‬
‫لیپیدها مقاالت را نیز می توان در آزمایشگاه اصالح کرد‪ ،‬به عنوان مثال‪ ،‬توسط‬
‫"خیساندن آنها در پارافین یا روغن سیلیکون به منظور انجام "معکوس‬
‫‪،‬کروماتوگرافی فازی‪ ،‬دوباره برای لیپیدها‪ .‬برای جداسازی در مقیاس بزرگ‬
‫ورقه های ضخیم کاغذ فیلتر کروماتوگرافی موجود است (واتمن شماره ‪3‬‬
‫یا ‪ 3‬میلی‌متر) و اینها با چندین میلی‌گرم ماده در هر بار مقابله می‌کنند‬
‫ورق‬

‫تشخیص داده می شوند ‪ UV-fluorescent‬ترکیبات معموالً به صورت رنگی یا ‪ PC،‬در‬

‫لکه ها‪ ،‬پس از واکنش با یک معرف کروموژنیک‪ ،‬به عنوان اسپری یا استفاده می شود‬
‫به عنوان یک شیب برای ورقه های بزرگ‪ ،‬غوطه ور کردن معموال آسان تر است اما محتوای حالل‬
‫اسپری باید به منظور تسهیل در خشک شدن سریع اصالح شود‬
‫بنابراین از انتشار در طول غوطه وری جلوگیری کنید‪ .‬سپس کاغذ ممکن است در آن گرم شود‬
‫به منظور توسعه رنگ ها‬

‫مقدار فاصله ای است که یک ترکیب در کروماتوگرافی حرکت می کند ;‪R‬‬

‫نسبت به جلوی حالل با اندازه گیری فاصله از‬
‫منشاء به مرکز نقطه تولید شده توسط ماده‪ ،‬و این است‬
‫تقسیم بر فاصله بین مبدا و جلوی حالل (یعنی‬
‫مسافتی که حالل طی می کند)‪ .‬این همیشه به صورت کسری و دروغ ظاهر می شود‬
‫هستند ‪ R;s‬بین ‪ 0.01‬و ‪ .0.99‬راحت است که این را در ‪ 100‬ضرب کنیم و‬
‫گاهی اوقات است )‪، R; (X100‬نقل شده است‪ .‬در جای دیگر )‪ (X100‬در این کتاب به عنوان روپیه‬
‫‪.‬شناخته می شود‪ .‬ارزش ‪ hR‬به عنوان‬

‫مقادیر یک سری از ترکیبات ساختاری مرتبط ;‪ R‬هنگام مقایسه‬

‫‪،‬مفید است ‪، Ry‬پوند‪ ،‬اشاره به ثابت کروماتوگرافی دیگر‬
‫‪:‬است‪ .‬با بیان ‪ R‬ارزش‪ .‬این مربوط به‬

‫]‪Ry = og 2- - 1‬‬
‫اف‬

‫;‪ R‬واقعی‪ .‬و ‪ R‬داده های فالونول ‪-5‬متیل اترها‪ :‬مقایسه ;‪ R‬جدول ‪1.1‬‬
‫‪ AR،،‬محاسبه شده از‬

‫*)‪Re (X100‬‬

‫‪Flavonol Forestal 50% HOAc PhOH BAW‬‬

‫‪Kaempferol 62 44 58 91‬‬
‫کوئرستین ‪76 28 31 45‬‬
‫‪Myricetin 29 21 10 41‬‬
‫کامفرول ‪ 5‬متیل اتر‬

‫ارزش واقعی ‪82 78 43 70‬‬

‫‪ AR، 70 41 76 89‬مقدار پیش‌بینی‌شده از‬

‫کوئرستین ‪ -5‬متیل اتر (آزالیاتین) ‪55 42 29 53‬‬
‫میریستین ‪ -5‬متیل اتر ‪27 23 21 37‬‬

‫‪.‬کاغذ ‪ Whatman No. 1‬اندازه گیری بر روی *‬

‫روش های جداسازی ‪11‬‬

‫‪،‬برای ارتباط تحرک کروماتوگرافی با ساختار شیمیایی ارزشمند است‬

‫مقادیر در یک سری همولوگ معموال ثابت هستند‪ .‬بنابراین‪ ،‬با ‪ AR،‬از آنجایی که‬
‫ها برای تعداد هیدروکسیل ثابت هستند‪، AR‬ترکیبات فالونوئیدی‬
‫و ‪ (Bate-Smith‬و جایگزین های گلیکوزیل موجود در مولکول‬
‫استفاده شود‪ .‬ارزش یک ‪ R‬وستال‪ .)1956 ،‬این روش می تواند برای محاسبه‬
‫عضو ناشناخته یک سری از ترکیبات‪ ،‬به منظور تسهیل‬
‫جستجوی ترکیب خاص در عصاره های گیاهی چنین رویه ای‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬در توصیف یک متیل اتر جدید استفاده شد‬
‫پیش بینی شده و واقعی‪ .‬ارزش ها خیلی خوب بود ‪ R‬که در آن ‪kaempferol،‬‬
‫‪.‬توافق (جدول ‪( )1.1‬هاربورن‪)1969 ،‬‬

‫در ادبیات گسترده در رایانه شخصی‪ ،‬یک حساب مقدماتی مفید نوشته شده است‬
‫است‪ .‬کتاب‌هایی که در رایانه شخصی هستند )‪ Peereboom (1971‬برای تازه کار‬
‫‪،‬هستند )‪ Lederer (1957‬و ‪ Lederer‬از نظر عام با ارزش است‪ .‬داده ها ‪ R‬به عنوان منابع‬
‫‪.‬لینسکنز (‪ )1959‬و شرما و زوایگ (‪)1971‬‬

‫کروماتوگرافی الیه نازک ‪1.3.3‬‬

‫می توان به تطبیق پذیری‪ ،‬سرعت اشاره کرد ‪ PC‬در مقایسه با ‪ TLC‬از مزایای ویژه‬
‫و حساسیت تطبیق پذیری به دلیل این واقعیت است که تعدادی از متفاوت است‬
‫جاذب ها عالوه بر سلولز ممکن است روی یک صفحه شیشه ای یا موارد دیگر پخش شوند‬
‫پشتیبانی و برای کروماتوگرافی به کار گرفته شد‪ .‬اگر چه ژل سیلیکا بیشتر است‬
‫‪.‬به طور گسترده استفاده می شود‪ ،‬الیه ها ممکن است از اکسید آلومینیوم‪ ،‬سلیت‪ ،‬کلسیم ساخته شوند‬
‫‪،‬سیوم هیدروکسید‪ ،‬رزین تبادل یونی‪ ،‬فسفات منیزیم‪ ،‬پلی آمید‬
‫سفادکس‪ ،‬پلی وینیل پیرولیدون‪ ،‬سلولز و از مخلوط دو یا‬
‫به دلیل بیشتر بودن آن است ‪ TLC‬بیشتر از مواد فوق سرعت بیشتر‬
‫ماهیت فشرده جاذب هنگامی که روی صفحه پخش می شود و یک مزیت است‬
‫‪ TLC‬در هنگام کار با ترکیبات حساس در نهایت‪ ،‬حساسیت‬
‫از مواد می تواند باشد ‪ pg‬به گونه ای است که جداسازی در مقادیر کمتر از‬
‫‪.‬در صورت لزوم به دست می آید‬

‫کار زیاد پخش بود ‪ TLC،‬یکی از معایب اولیه‬

‫صفحات شیشه ای با جاذب‪ ،‬کار تا حدودی با مقدمه بعدی آسان شد‬
‫‪،‬مجرای دستگاه های پخش خودکار‪ .‬با این وجود‪ ،‬حتی با وجود اینها‬
‫اقدامات احتیاطی خاصی الزم است‪ .‬صفحات شیشه ای باید با احتیاط باشند‬
‫برای از بین بردن چربی با استون تمیز می شود‪ .‬سپس دوغاب سیلیکاژل (یا‬
‫جاذب دیگر) در آب باید برای مدت معینی به شدت تکان داده شود‬
‫فاصله زمانی (مثالً دهه ‪ )90‬قبل از انتشار‪ .‬بسته به اندازه ذرات‬
‫جاذب‪ ،‬همی هیدرات سولفات کلسیم (‪ )%15‬ممکن است الزم باشد به آن اضافه شود‬
‫به چسباندن جاذب به شیشه کمک می کند‪ .‬در نهایت‪ ،‬بشقاب ها پس از پخش‬
‫‪.‬باید با هوا خشک شود و سپس با حرارت دادن در فر در دمای ‪ 110-100‬درجه سانتیگراد فعال شود‬
‫‪.‬به مدت ‪ 30‬دقیقه در برخی از جداسازی ها‪ ،‬اصالح مناسب سودمند است‬
‫جاذب را با افزودن یک نمک معدنی (مثال نیترات نقره برای‬
‫‪.‬و این بهترین کار زمانی است که صفحه در حال پخش شدن است )‪argentation TLC‬‬
‫دلیل دیگر استفاده از صفحات پوشش داده شده در آزمایشگاه این است که‬

‫رطوبت سیلیکاژل را می توان کنترل کرد‪ ،‬عاملی که وجود دارد‬

‫‪.‬برای برخی جدایی ها حیاتی است‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪12‬‬

‫‪.‬با این حال‪ ،‬امروزه استفاده از صفحات از پیش روکش شده تجاری معمول است‬
‫در اکثر کارها تولید اساسی است‪ ،‬زیرا اینها یکنواخت تر هستند و ارائه می دهند‬
‫نتایج تکرارپذیرتر طیف وسیعی از این صفحات موجود است‬
‫جاذب های مختلف‪ ،‬پوشش داده شده بر روی شیشه‪ ،‬ورق های آلومینیومی یا پالستیک‪ .‬اینها‬
‫ممکن است با یا بدون نشانگر فلورسنت‪ ،‬اضافه کردن آن باشد‬
‫‪،‬امکان تشخیص تمام ترکیباتی که فلورسانس را خاموش می کنند‬
‫با طول موج ‪ 254‬نانومتر مشاهده می شود‪ .‬بیشترین ‪ UV‬هنگامی که صفحه در نور‬
‫آن است که با همان ریزذرات ریز پوشش داده شده است ‪ TLC‬نوع اخیر صفحه‬
‫استفاده می شود‪ .‬چنین کروماتوگرافی است ‪ HPLC‬سیلیس که در ستون های‬
‫نامیده می شود و معموالً جداسازی کارآمدتر و سریعتر را ارائه می دهد ‪HPTLC‬‬
‫‪.‬نسبت به الیه های سیلیسی معمولی‬

‫و در داخل استفاده شده است ‪ PC‬نسبت به ‪ TLC‬طیف وسیع تری از حالل ها برای‬
‫‪.‬به طور کلی‪ ،‬عرض جغرافیایی بیشتری در نسبت های دقیق حل های مختلف وجود دارد‬
‫مقادیر به طور قابل توجهی کمتر بازتولید می شوند ‪ R،‬دریچه های مورد استفاده در سیستم حالل‬
‫غیر از روی کاغذ است و بنابراین گنجاندن یک یا چند مورد ضروری است‬
‫ترکیبات مرجع به عنوان نشانگر امکان استانداردسازی شرایط وجود دارد‬
‫‪.‬اما این یک فرآیند بسیار خسته کننده است ‪ TLC،‬در ;‪ R‬برای اندازه گیری دقیق‬
‫معموالً از طریق صعود انجام می شود‪ ،‬در مخزنی که با کاغذ روکش شده است به طوری که ‪TLC‬‬
‫افقی ‪. TLC‬اتمسفر داخل با فاز حالل اشباع شده است‬
‫به کار گرفته می شود‪ ،‬چه زمانی که صفحات باید با حالل بیش از حد پر شوند و چه زمانی‬
‫‪.‬در ترکیب با الکتروفورز استفاده می شود ‪TLC‬‬

‫معموال توسط ‪ TLC‬تشخیص ترکیبات روی صفحات‬

‫با اسپری کردن‪ ،‬مساحت کوچکتر صفحه (‪ 20×20‬سانتی متر) این امر را نسبتا ً مناسب می کند‬
‫رویه ساده یک مزیت نسبت به کامپیوتر این است که صفحات شیشه ای ممکن است‬
‫یک معرف تشخیص مفید برای استروئیدها و ‪ conc. H,SO,‬اسپری شده با‬
‫لیپیدها‬

‫آماده سازی با استفاده از ضخامت (تا ‪ 1‬میلی متر) به جای نازک انجام می شود ‪TLC‬‬
‫صفحات تولیدی موجود است ‪ (0.25-0.10mm).‬الیه های جاذب‬
‫‪.‬برای این‪ .‬اجزای جدا شده با خراش دادن مواد جاذب بازیابی می شوند‬
‫در مکان های مناسب روی صفحه توسعه یافته‪ ،‬پودر را شستشو دهید‬
‫با حاللی مانند اتر و در نهایت سانتریفیوژ برای حذف‬
‫جاذب‬

‫استحکام الیه های جاذب روی شیشه به اندازه ای است که امکان پذیر است‬
‫‪،‬به طور مکرر یک صفحه با یک یا چند سیستم حالل مختلف ایجاد کنید‬
‫خشک کردن صفحه در بین توسعه‪ .‬متناوبا‪ ،‬یک مضرب‬
‫ابداع شده توسط ون سومر (‪ ،)1969‬می تواند مورد استفاده قرار گیرد‪ .‬این ‪ TLC،‬سیستم حذف‬
‫شامل برش یک صفحه شیشه ای مستطیل شکل طوالنی است که با جاذب با‬
‫یک برش شیشه در مراحل مناسب در جداسازی پیچیده و یکنواخت‬
‫اسپری جاذب تازه روی صفحه در بین جداسازی ها‪ .‬زیاد‬
‫در کتاب ها شرح داده شده است ‪ TLC‬سایر اصالحات رویه اصلی‬
‫‪.‬ذکر شده در زیر ‪ TLC‬در‬

‫بسیار زیاد است‪ .‬جامع ترین کتاب در ‪ TLC‬ادبیات‬

‫موضوع احتماالً توسط استال (‪ )1969‬ویرایش شده است‪ .‬یک مقدمه ساده است‬
‫کتاب تروتر (‪ .)1963‬دیگر کمک های مهم آثار‬
‫روش های جداسازی ‪13‬‬

‫بابیت (‪ ،)1963‬کرشنر (‪ )1978‬و تاچ استون و دابینز (‪ .)1978‬آ‬

‫با صفحات رنگی از جداسازی الیه های نازک فراوان‪ ،‬بوده است ‪ TLC،‬اطلس‬
‫‪.‬تولید شده توسط واگنر و بالد (‪)1996‬‬

‫کروماتوگرافی مایع گازی ‪1.3.4‬‬

‫پیچیده و گران قیمت است ‪ GLC‬دستگاه مورد نیاز برای‬

‫دیگر وجود ندارد ‪، GLC‬الزم است‪ .‬با این حال‪ ،‬در اصل ‪ TLC‬یا ‪ PC‬به آنچه برای‬
‫‪.‬نسبت به سایر روش های کروماتوگرافی پیچیده است‬

‫‪:‬دارای چهار جزء اصلی به شرح زیر است ‪ GLC‬دستگاه‬

‫ستون یک لوله باریک بلند (مثالً ‪ 3‬متر در ‪ 1‬میلی متر) معموالً از فلز است )‪(1‬‬
‫ساخته شده به شکل یک سیم پیچ برای حفظ فضا‪ .‬این با یک بسته بندی شده است‬
‫فاز ثابت (به عنوان مثال ‪ ٪15-5‬روغن سیلیکون) روی یک پودر بی اثر‬
‫بسته بندی ضروری نیست و جایگزین ‪).‬کروموسورب دبلیو‪ ،‬سلیت و غیره(‬
‫به طور مستقیم از یک ستون سیلیسی باز استفاده می شود که در آن فاز ساکن است‬
‫‪).‬مویرگی ‪ (GLC‬به صورت یک الیه روی سطح داخلی پخش می شود‬

‫بخاری برای گرم کردن تدریجی ستون از ‪ 50‬به )‪(2‬‬

‫درجه سانتی گراد با نرخ استاندارد و برای حفظ دما در باالتر ‪350‬‬
‫در صورت لزوم محدود کنید دمای ورودی ستون جداگانه است‬
‫کنترل می شود تا نمونه بتواند به سرعت همان طور که هست تبخیر شود‬
‫به ستون منتقل شد‪ .‬نمونه محلول در اتر یا هگزان می باشد‬
‫توسط سرنگ زیرپوستی از طریق یک الستیک به درگاه ورودی تزریق می شود‬
‫سپتوم‬

‫‪.‬جریان گاز از یک گاز حامل بی اثر مانند نیتروژن یا آرگون تشکیل شده است )‪(3‬‬
‫جداسازی ترکیبات روی ستون به عبور از آن بستگی دارد‬
‫‪.‬گاز با سرعت کنترل شده عبور می کند‬

‫یک دستگاه تشخیص برای اندازه گیری ترکیبات همانطور که هستند مورد نیاز است )‪(4‬‬
‫ستون را جارو کرد تشخیص اغلب بر اساس هر کدام است‬
‫یونیزاسیون شعله یا جذب الکترون روش سابق مستلزم‬
‫گاز هیدروژن به مخلوط گاز اضافه شود و در آن بسوزد‬
‫آشکارساز واقعی دستگاه تشخیص به یک پتانسیومتر متصل است‬
‫ضبط کننده‪ ،‬که نتایج جداسازی را به صورت مجموعه ای از‬
‫‪.‬قله هایی با شدت های مختلف (شکل ‪ 1.2‬را ببینید)‬

‫‪،،‬بیان کرد ‪ R‬را می توان بر حسب حجم احتباس ‪ GLC‬نتایج‬

‫که حجم گاز حامل مورد نیاز برای شستشوی یک جزء از آن است‬
‫که زمان مورد نیاز برای آن است ‪ R،‬ستون‪ ،‬یا بر حسب زمان ماندگاری‬
‫شستشوی نمونه این پارامترها تقریبا ً همیشه در بیان می شوند‬
‫که ممکن است باشد ‪ RR)،‬یا ‪ RRy‬به عنوان( اصطالحات مربوط به یک ترکیب استاندارد‬
‫به عصاره نمونه اضافه می شود یا می تواند به شکل حالل باشد‬
‫‪.‬برای حل کردن آن نمونه استفاده می شود‬

‫ماهیت فاز ساکن هستند ‪ GLC‬متغیرهای اصلی در‬

‫ستون و دمای عملیات اینها با توجه به تنوع هستند‬
‫قطبیت و فرار ترکیبات جدا شده زیاد‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪14‬‬

‫‪\ 5‬‬

‫ارتفاع قله‬

‫‪70 60 50 40 30 20‬‬
‫زمان ماندگاری (دقیقه)‬

‫از جداسازی مخلوط استرول استات موجود در ‪ GLC‬شکل ‪ 1.2‬اثر‬

‫دانه جو دوسر کلید‪ ،1 :‬کلسترول؛ ‪ ،2‬براسیکاسترول؛ ‪ ،3‬کامپسترول؛ ‪ ،4‬استیگماسترول؛‬
‫فاز ثابت ‪ %1‬است ‪، A'-avenasterol.‬و ‪، A*-avenasterol; 7‬سیتوسترول؛ ‪5، 6‬‬
‫سیکلوهگزان متانول سوکسینات ‪ %2 +‬پلی وینیل پیرولیدون روی گاز اسید شسته‬
‫‪).‬از شوالیه ها‪ P 225 (1965 ،‬کروم‬

‫دسته هایی از مواد به طور معمول به مشتقات تبدیل می شوند (به ویژه به‬
‫زیرا این امکان را به آنها می دهد ‪ GLC،‬تری متیل سیلیل اترها) قبل از قرار گرفتن در معرض‬
‫جداسازی در دمای پایین تر‬

‫‪.‬داده های کمی و کیفی را در مورد گیاهان فرعی ارائه می دهد ‪GLC‬‬
‫مواضع‪ ،‬از آنجایی که اندازه گیری های منطقه زیر قله نشان داده شده در‬
‫‪.‬به طور مستقیم با غلظت های مختلف مرتبط است )شکل ‪ GLC (1.2‬اثر‬
‫اجزاء را در مخلوط اصلی قرار دهید‪ .‬دو فرمول کلی وجود دارد‬
‫عرض قله در نصف ارتفاع ‪ X‬برای اندازه گیری این مناطق‪( :‬الف) ارتفاع قله‬
‫از مساحت قله (این فقط برای قله های متقارن صدق می کند)‪ ،‬و (ب) ‪= 94٪‬‬
‫مساحت قله معادل مثلثی است که با رسم مماس ایجاد می شود‬
‫از طریق نقاط عطف مناطق اوج را می توان به طور خودکار تعیین کرد‬
‫‪.‬به عنوان مثال با استفاده از یکپارچه ساز الکترونیکی‬

‫را می توان به گونه ای تنظیم کرد که جدا شود ‪ GLC‬دستگاه‬

‫اجزاء بیشتر در معرض تجزیه و تحلیل طیفی یا دیگر قرار می گیرند‪ .‬رایگان ترین‬
‫و )‪ (MS‬به طور خودکار به طیف سنجی جرمی ‪، GLC‬بنابراین‬
‫در سال‌های اخیر به‌عنوان یکی از دستگاه‌ها ظهور کرده است ‪ GC-MS‬دستگاه ترکیبی‬
‫‪.‬مهمترین تکنیک برای آنالیز فیتوشیمیایی است‬

‫وجود دارد‪ ،‬تعداد کمی از آنها این کار را کرده اند ‪ GLC‬اگرچه کتاب ها و بررسی های متعددی در مورد‬
‫‪ -‬با در نظر گرفتن مخاطبان فیتوشیمیایی نوشته شده است‪ .‬یک معرفی مفید‬
‫متن داستان‪ ،‬از نقطه نظر عملی‪ ،‬متن سیمپسون (‪ )1970‬است‪ .‬یک متن‬
‫روش های جداسازی ‪15‬‬

‫سروکار دارد ‪ GLC‬به طور خاص با کاربردهای بیوشیمیایی‬

‫‪.‬برچفیلد و استورز (‪)1962‬‬

‫)‪ (HPLC‬کروماتوگرافی مایع با کارایی باال ‪1.3.5‬‬

‫است ‪ GLC‬از نظر حساسیت و توانایی آن در ارائه هر دو مشابه با ‪HPLC‬‬

‫داده های کمی و کیفی در یک عملیات واحد‪ .‬در آن تفاوت دارد‬
‫فاز ثابت متصل به یک پلیمر متخلخل در یک سوراخ باریک نگه داشته می شود‬
‫ستون فوالد ضد زنگ و فاز متحرک مایع با فشار وارد می شود‬
‫گران تر است ‪ HPLC‬تحت فشار قابل توجهی دستگاه‬
‫عمدتا ً به این دلیل که یک سیستم پمپاژ مناسب مورد نیاز است و همه ‪ GLC،‬از‬
‫‪.‬برای مقاومت در برابر فشارهای وارده‪ ،‬اتصاالت باید به صورت پیچی متصل شوند‬
‫فاز متحرک یک مخلوط حالل قابل اختالط است که یا باقی می ماند‬
‫ثابت (جدایی ایزوکراتیک) یا ممکن است به طور مداوم در آن تغییر کند‬
‫نسبت‪ ،‬با گنجاندن یک محفظه اختالط در تنظیم (شیب‬
‫شستشو)‪ .‬ترکیبات به عنوان شستشو از ستون توسط‬
‫ابزاری از یک آشکارساز‪ ،‬که معموال در اشعه ماوراء بنفش اندازه گیری می شود‪ .‬یک محاسبات‬
‫ممکن است انتگرال‌کننده اضافه شود تا داده‌ها را در زمان ظهور و کل مدیریت کند‬
‫‪.‬عملکرد را می توان از طریق یک ریزپردازنده کنترل کرد‬

‫این است که روش قبلی ‪ GLC‬و ‪ HPLC‬تفاوت عمده بین‬

‫به طور معمول در دمای محیط عمل می کند‪ ،‬به طوری که ترکیبات ‪dure‬‬
‫در طول این مدت در معرض امکان تنظیم مجدد حرارتی قرار نمی گیرند‬
‫ممکن است باشد ‪ HPLC‬جدایش‪ ،‬جدایی‪ .‬با این حال‪ ،‬کنترل دمای ستون‬
‫سودمند برای جداسازی بحرانی به طوری که ترموستاتیک کنترل می شود‬
‫ژاکت ممکن است مورد نیاز باشد‪ .‬ستون‪ ،‬که معموال با بسیار بسته بندی شده است‬
‫‪،‬ذرات کروی کوچک سیلیس پوشیده شده یا با فاز ساکن پیوند خورده اند‬
‫به ویژه نسبت به مسمومیت با ناخالصی حساس است‪ ،‬به طوری که ضروری است‬
‫عصاره های گیاهی را قبل از تزریق در سر‪ ،‬تصفیه و فیلتر کنید‬
‫ستون‬

‫عمدتا ً برای آن دسته از ترکیبات استفاده می شود که غیر ‪HPLC‬‬

‫فرار‪ ،‬به عنوان مثال ترپنوئیدهای باالتر‪ ،‬فنول ها از همه نوع‪ ،‬آلکالوئیدها‪ ،‬لیپیدها و‬
‫‪.‬قندها بهترین عملکرد را برای ترکیباتی دارد که می توان آنها را در دستگاه فوق العاده تشخیص داد‬
‫نواحی بنفش یا مرئی طیف نمونه ای از جداسازی‬
‫در شکل ‪ 1.3‬نشان داده شده است‪ .‬برای قندها که نشان نمی دهند ‪ HPLC‬فالونوئیدها توسط‬
‫ممکن است از یک آشکارساز ضریب شکست استفاده شود‪ ،‬اما این ‪ UV،‬هر گونه جذب‬
‫جدا شده اند ‪ HPLC‬یک روش کمتر حساس است‪ .‬پروتئین ها توسط‬
‫‪.‬ستون های سفادکس اصالح شده‪ ،‬ژل سیلیکا یا مبدل های یونی‬

‫مدرن‪ ،‬از ستون های از پیش بسته بندی شده استفاده می شود ‪ HPLC‬در اکثر جداسازی های‬
‫و انواع زیادی از تولید کنندگان در دسترس هستند‪ .‬با این حال‪ ،‬این است‬
‫انجام اکثر جداسازی ها با استفاده از میکرو متخلخل سیلیس امکان پذیر است‬
‫؛ پیوند خورده است‪ C،‬ستون ذرات (برای ترکیبات غیر قطبی) یا فاز معکوس‬
‫ستون فاز (برای ترکیبات قطبی) (همیلتون و سیول‪ .)1982 ،‬یکی‬

‫جزئیات عملی نهایی نیاز به ذکر دارد‪ .‬حالل ها باید فوق خالص باشند‬
‫‪.‬و قبل از استفاده باید گاز زدایی شود‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪16‬‬

‫‪ ) C. nudum‬رکتوم ‪] C.‬‬
‫‪204 --~_ 20 §--~،‬‬
‫‪30 RN ] Se‬‬
‫~‪~Sy3G 30‬‬
‫* ‪\ My3G‬‬
‫\ در ‪40 { 40‬‬
‫* \ ‪J‬‬
‫\\‬
‫{ ‪© 50 N @ 50‬‬
‫‪. ® :‬آر‬
‫\ ‪G‬‬
‫‪La3 \ : Lag Sy3¢‬‬
‫\ ‪60 \ 60‬‬
‫‪My3G * 1 N‬‬
‫‪70; \ 70 -‬‬
‫‪AY‬‬
‫\‬
‫‪80 1 \ 80 1‬‬
‫‪L‬‬
‫‪0 2 4 6 810 12 14 16 18 0 2 4 6 810 12 14 16 18‬‬
‫)دقیقه( )دقیقه(‬

‫که در آن ‪ Chondropetalum،‬از فالونوئیدهای دو گونه ‪ HPLC‬شکل ‪ 1.3‬آثار‬

‫;رکتوم ‪ A، C.‬ترکیبات یکسان اما در مقادیر متفاوت وجود دارد‪ .‬کلید‪ :‬گونه‬
‫‪-‬الری سیترین ‪ B، C. nudum; My3G = myricetin 3-galactoside; La3G = 3‬گونه‬
‫‪.‬سیرنجتین ‪-3‬گاالکتوزید‪ .‬پیک چهارم = سیرنجتین ‪-3‬دی گلیکوزید = ‪ Sy3G‬گاالکتوزید؛‬
‫شستشوی گرادیان با ‪ (25cm X 4.6mm)،‬ستون ;‪ Spherisorb 17:00 C‬جدایی در‬
‫و تشخیص در )‪ MeOH-H,0-HOAc (18:1:1‬و )‪MeOH-H,0-HOAc (1:18:1‬‬
‫نانومتر ‪365‬‬

‫‪.‬آخرین تکنیک کروماتوگرافی است که به فیزیولوژی اضافه شده است ‪HPLC‬‬

‫اسلحه خانه توشیمیدان جدا از هزینه های دستگاه و‬
‫حالل ها‪ ،‬مهم ترین و همه کاره ترین روش گیاهان کمی است‬
‫‪.‬تجزیه و تحلیل اما هنوز باید خود را برای جدایی در مقیاس مقدماتی ثابت کند‬

‫روش های شناسایی ‪1.4‬‬

‫کلی ‪1.4.1‬‬

‫در شناسایی یک ترکیب گیاهی‪ ،‬پس از جداسازی و خالص سازی‪ ،‬آن را انجام می دهند‬
‫ابتدا برای تعیین کالس ترکیب و سپس کشف آن ضروری است‬
‫روش های شناسایی ‪17‬‬

‫کدام ماده خاص در آن کالس است‪ .‬همگنی آن باید باشد‬

‫از قبل به دقت بررسی شده است‪ ،‬یعنی باید به عنوان یک نقطه در داخل حرکت کند‬
‫کالس ترکیب معموالً واضح است ‪ PC.‬و‪/‬یا ‪ TLC‬چندین سیستم‬
‫آن ‪ UV‬خواص و ‪ R.‬از پاسخ آن به تست های رنگ‪ ،‬حاللیت آن و‬
‫‪:‬ویژگی های طیفی آزمایش‌های بیوشیمیایی نیز ممکن است ارزشمند باشند‬
‫گلوکوزیداز تایید کرد‪ B-‬وجود یک گلوکزید را می توان با هیدرولیز با‬
‫یک گلیکوزید روغن خردل با هیدرولیز با میروزیناز و غیره‪ .‬برای‬
‫‪.‬تنظیم‌کننده‌های رشد‪ ،‬یک سنجش زیستی بخش ضروری شناسایی است‬

‫شناسایی کامل در کالس به اندازه گیری سایرین بستگی دارد‬

‫‪.‬خواص و سپس مقایسه این داده ها با داده های موجود در ادبیات‬
‫این خواص شامل نقطه ذوب (برای مواد جامد)‪ ،‬نقطه جوش (برای‬
‫‪ RR،‬یا ‪ R.‬مایعات)‪ ،‬چرخش نوری (برای ترکیبات فعال نوری) و‬
‫‪ a‬با این حال‪ ،‬داده های به همان اندازه آموزنده در مورد ‪).‬در شرایط استاندارد(‬
‫ماده گیاهی ویژگی های طیفی آن است‪ :‬از جمله اشعه ماوراء بنفش‬
‫و طیف جرمی )‪ (NMR‬رزونانس مغناطیسی هسته ای ‪ (IR)،‬مادون قرمز ‪(UV)،‬‬
‫معموالً می توان یک ترکیب گیاهی شناخته شده را شناسایی کرد )‪ (MS‬اندازه گیری‬
‫‪-‬بر اساس فوق مقایسه مستقیم با مواد معتبر (در صورت وجود‬
‫قادر) ‪ ،‬باید به عنوان تایید نهایی انجام شود‪ .‬اگر مواد اصیل باشد‬
‫در دسترس نیست‪ ،‬مقایسه دقیق با داده های ادبیات ممکن است برای آن کافی باشد‬
‫شناسایی‪ .‬اگر ترکیب جدیدی وجود داشته باشد‪ ،‬تمام داده های فوق باید باشد‬
‫برای توصیف آن کافی است‪ .‬با این حال‪ ،‬با ترکیبات جدید‪ ،‬ترجیح داده می شود‬
‫قادر به تایید شناسایی از طریق تخریب شیمیایی یا توسط‬
‫تهیه ترکیب از طریق سنتز آزمایشگاهی‬

‫شناسایی ترکیبات گیاهی جدید توسط کریستالوگرافی اشعه ایکس در حال حاضر انجام شده است‬
‫معمول است‪ ،‬و می تواند هر زمان که ماده به اندازه کافی به دست می آید استفاده شود‬
‫مقدار و به صورت کریستالی از‪ .‬به ویژه در این مورد ارزشمند است‬
‫‪.‬از ترپنوئیدهای پیچیده‪ ،‬زیرا هم ساختار و هم استریوشیمی را فراهم می کند‬
‫در همان عملیات امتحان کنید‬

‫اکنون نظرات مختصری در مورد تکنیک های طیفی مختلف داده خواهد شد‬
‫‪.‬و اهمیت نسبی آنها برای شناسایی فیتوشیمیایی‬
‫برای بررسی دقیق‌تر روش‌های طیفی‪ ،‬خواننده ارجاع داده می‌شود‬
‫به یکی از بسیاری از کتاب های موجود در مورد کاربرد طیف سنجی‬
‫‪،‬روشهای شیمی آلی (ویلیامز و فلمینگ‪1966 ،‬؛ شاینمن‬
‫‪).‬هاروود و کالریج‪1970، 1974; 1996 ،‬‬

‫طیف سنجی فرابنفش و مرئی ‪1.4.2‬‬

‫طیف جذبی ترکیبات گیاهی را می توان در بسیار اندازه گیری کرد‬

‫محلول رقیق در برابر یک حالل خالی با استفاده از مشخصات ثبت خودکار‬
‫تروفوتومتر برای ترکیبات بی رنگ‪ ،‬اندازه گیری ها در‬
‫؛ برای ترکیبات رنگی‪ ،‬محدوده است)‪ (nm‬محدوده ‪ 200‬تا ‪ 400‬نانومتر‬
‫تا ‪ 700‬نانومتر طول موج ماکزیمم و مینیمم جذب ‪200‬‬
‫طیف یون به دست آمده (بر حسب نانومتر) و همچنین شدت آن ثبت می شود‬
‫جذب (یا چگالی نوری) در حداکثر و حداقل خاص‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪18‬‬

‫جذب‬

‫‪1 L‬‬
‫‪250 300 350 400 450‬‬

‫)‪ (nm‬طول موج‬

‫‪ A،‬شکل ‪ 1.4‬طیف جذب فرابنفش گزانتون منگیفرین‪ .‬منحنی‬

‫است‪ .‬حداکثر طول موج در ‪ 316 ،258 ،240‬و ‪ 364‬نانومتر است‪ .‬حداقل ‪٪ EtOH‬حالل ‪95‬‬
‫در ‪ 285 ،248 ،215‬و ‪ 338‬نانومتر هستند‪ .‬شدت نسبی جذب در حداکثر‬
‫‪N NaOH.‬قطره ‪ B، 95% EtOH + 2 2‬به ترتیب ‪ 50 ،100 ،82‬و ‪ 37‬درصد می باشند‪ .‬منحنی‬

‫فقط ردی از مواد مورد نیاز است‪ ،‬زیرا طیف استاندارد ‪).‬شکل ‪(1.4‬‬
‫سلول فتومتریک (‪ 1×1‬سانتی متر) تنها ‪ 3‬میلی لیتر محلول را در خود جای می دهد و با استفاده از دستگاه مخصوص‬
‫‪.‬سلول ها‪ ،‬تنها یک دهم این حجم باید برای طیف سنجی در دسترس باشد‬
‫متری چنین اندازه گیری های طیفی در شناسایی مهم هستند‬
‫بسیاری از ترکیبات گیاهی‪ ،‬برای نظارت بر مواد شوینده کروماتوگرافی‬
‫ستون ها در طول تصفیه محصوالت گیاهی و برای غربالگری نفت خام‬
‫عصاره های گیاهی برای حضور کالس های خاصی از ترکیبات مانند‬
‫پلی استیلن ها‬

‫استفاده می‌شود‪ ،‬اتانول ‪ 95‬درصد است ‪ UV‬حاللی که به طور گسترده برای طیف‌سنجی‬
‫کالس‌های ترکیب مقداری حاللیت در آن نشان می‌دهند‪ .‬مطلق تجاری‬
‫روشهای شناسایی ‪19‬‬

‫الکل باید اجتناب شود‪ ،‬زیرا حاوی بنزن باقی مانده است که‬
‫‪،‬کوتاه‪ .‬حالل های دیگری که اغلب مورد استفاده قرار می گیرند آب هستند ‪ UV‬جذب در‬
‫متانول‪ ،‬هگزان‪ ،‬نفت و اتر‪ .‬حالل هایی مانند کلروفرم و‬
‫‪.‬به طور کلی باید از مصرف پیریدین اجتناب کرد‪ ،‬زیرا آنها به شدت در ‪ -200‬جذب می شوند‬
‫منطقه ‪ 260‬نانومتری؛ با این حال‪ ،‬آنها برای اندازه گیری کامالً مناسب هستند‬
‫در ناحیه مرئی طیف با رنگدانه های گیاهی مانند‬
‫کاروتنوئیدها‬

‫‪.‬هنگامی که مواد به عنوان ترکیبات کریستالی و موتور آنها جدا می شوند‬

‫وزن لکولی شناخته شده یا قابل تعیین است‪ ،‬سپس شدت‬
‫ثبت می شود‪ ،‬جایی که ‪ log €‬حداکثر طول موج معموالً بر حسب‬
‫غلظت بر حسب گرم مول در لیتر‪ = 1 ،‬سلول = ‪، C‬جذب = ‪e¢ = A/C] (A‬‬
‫طول مسیر بر حسب سانتی متر‪ ،‬معموالً ‪ .)1‬با ترکیباتی که هیچکدام‬
‫غلظت و وزن مولکولی مشخص نیست‪ ،‬مقادیر جذب دارند‬
‫مورد استفاده قرار گیرد‪ .‬در این موارد‪ ،‬ارتفاع ماکزیمم های مختلف ممکن است باشد‬
‫در مقایسه با در نظر گرفتن جذب حداکثر به عنوان درصدی از آن‬
‫اوج شدید‬

‫خالص سازی مقدماتی ضروری برای مطالعات طیفی و گیاهان است‬

‫اجزایی که خواص جذب مشخصه ای از خود نشان می دهند باید باشند‬
‫به طور مکرر تصفیه می شود تا زمانی که این خواص ثابت شود‪ .‬در کروماتوگرافی‬
‫تصفیه ها‪ ،‬میزان ناخالصی های جذب کننده اشعه ماوراء بنفش موجود در فیلتر‬
‫کاغذ را می توان با استفاده از آبکش یک کاغذ خالی تهیه کرد‬
‫همزمان با نمونه‪ ،‬برای تعادل در اسپکتروفتومتر در برابر‬
‫مایع شوینده حاوی آن نمونه رویه مشابهی باید اتخاذ شود‬
‫‪.‬انجام می شود ‪ TLC‬هنگامی که تصفیه بر روی صفحات‬

‫کاربرد اندازه گیری های طیفی برای اهداف شناسایی می تواند باشد‬
‫‪،‬با تکرار اندازه‌گیری‌های انجام‌شده در محلول خنثی تا حد زیادی افزایش می‌یابد‬
‫یا در حضور خاص ‪ pH‬یا در محدوده ای از مقادیر مختلف‬
‫نمک های معدنی به عنوان مثال‪ ،‬هنگامی که قلیایی به محلول های الکلی اضافه می شود‬
‫ترکیبات فنلی‪ ،‬طیف ها به طور مشخص به سمت تغییر می کنند‬
‫طول موج‌های طوالنی‌تر (آنها تحت تغییرات باتوکرومیک قرار می‌گیرند) با افزایش در‬
‫جذب (شکل ‪ .)1.4‬در مقابل‪ ،‬هنگامی که قلیایی به محلول خنثی اضافه می شود‬
‫با استفاده از اسیدهای کربوکسیلیک آروماتیک‪ ،‬تغییر در جهت مخالف است‬
‫به سمت طول موج های کوتاه تر (تغییرهای هیپسوکرومیک)‪ .‬واکنش هایی مانند‬
‫احیای شیمیایی (با بوروهیدرید سدیم) یا هیدرولیز آنزیمی می تواند‬
‫به همان اندازه در کووت سلولی یک اسپکتروفتو ضبط کننده دنبال می شود‬
‫اندازه گیری متر و جذب در فواصل زمانی معین انجام می شود‬
‫‪.‬نشان می دهد که آیا احیا یا هیدرولیز صورت گرفته است‬

‫و طیف مرئی در شناسایی اجزای ناشناخته ‪ UV‬ارزش‬

‫آشکارا به پیچیدگی نسبی طیف و به مربوط است‬
‫موقعیت کلی حداکثر طول موج اگر ماده ای الف را نشان دهد‬
‫باند جذب منفرد بین ‪ 250‬تا ‪ 260‬نانومتر‪ ،‬می تواند هر یک از یک باشد‬
‫تعداد قابل توجهی از ترکیبات (مانند یک فنل ساده‪ ،‬یک پورین یا‬
‫پیریمیدین‪ ،‬یک اسید آمینه معطر و غیره)‪ .‬اگر‪ ،‬با این حال‪ ،‬آن را نشان می دهد سه‬
‫‪،‬قله های متمایز در منطقه ‪ 500-400‬نانومتر‪ ،‬با جذب کمی در جاهای دیگر‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪20‬‬

‫جدول ‪ 1.2‬خواص طیفی طبقات مختلف رنگدانه گیاهی‬

‫)‪ (nm‬محدوده فرابنفش * )‪ (nm‬طبقه رنگدانه محدوده طیفی مرئی‬

‫کلروفیل ها‬
‫)‪ 660-640‬و ‪) 470-430‬سبز(‬
‫فیکوبیلین ها‬
‫کوتاه ‪ 650-615 UV‬یا ‪ 570-540‬شدید )قرمز و آبی(‬
‫جذب سیتوکروم به دلیل‬
‫پیوست پروتئین ‪) 605-545‬زرد(‬
‫گاهی باند فرعی(‬
‫)در ‪440-415‬‬
‫آنتوسیانین ها‬
‫‪ 550-475‬حدود‪) 275 .‬به رنگ ارغوانی یا قرمز(‬
‫بتاسیانین ها‬
‫‪) 270-250 554-530‬به رنگ ارغوانی(‬
‫کاروتنوئیدها‬

‫‪) 500-400 -‬زرد تا نارنجی(‬

‫یک قله اصلی با دو(‬
‫)قله ها یا انحرافات جزئی‬
‫آنتراکینون ها‬
‫‪ 4-3 460-420‬قله شدید )زرد(‬
‫بین ‪ 220‬تا ‪290‬‬
‫چالکون و‬

‫‪) 260-240 430-365‬زرد( ‪Aurones‬‬

‫فالونول های زرد‬
‫‪) 270-250 390-365‬زرد(‬

‫و ‪، pH‬همه مقادیر تقریبی هستند‪ .‬مقادیر واقعی با توجه به حالل مورد استفاده *‬
‫وضعیت فیزیکی رنگدانه‬

‫تقریبا ً مطمئنا ً یک کاروتنوئید است‪ .‬عالوه بر این‪ ،‬اندازه گیری های طیفی در‬
‫دو یا سه حالل دیگر و مقایسه با داده های ادبیات ممکن است‬
‫‪.‬حتی مشخص کنید که کدام کاروتنوئید خاص است‬

‫عبارات فوق حاکی از آن است که طیف های جذبی خاص هستند‬

‫ارزش در مطالعات رنگدانه گیاهی و این قطعا برای هر دو آب صادق است‬
‫و مواد رنگی گیاهی محلول در چربی (جدول ‪ .)1.2‬کالس های دیگر که‬
‫نشان دادن خواص جذب مشخصه شامل ترکیب غیر اشباع‬
‫پوند (به ویژه پلی استیلن)‪ ،‬ترکیبات معطر به طور کلی‬
‫‪ UV‬و کتون ها‪ .‬عدم وجود کامل )به عنوان مثال اسیدهای هیدروکسی سینامیک(‬
‫‪ -‬جذب همچنین اطالعات ساختاری مفیدی را ارائه می دهد‪ .‬این نشان می دهد‬
‫وجود لیپیدها یا آلکان های اشباع در بخش های لیپیدی گیاه‬
‫عصاره ها یا اسیدهای آلی‪ ،‬آمینو اسیدهای آلیفاتیک یا قندهای موجود در آب‬
‫کسرهای محلول‬

‫به دلیل محدودیت های فضا‪ ،‬خواص طیفی تنها بسیار‬

‫تعداد محدودی از ترکیبات گیاهی را می توان در این کتاب آورده است‪ .‬اینها هستند‬
‫روشهای شناسایی ‪21‬‬

‫عمدتا ً در قالب جداول ماکزیمم طیفی اما تعداد کمی ثبت شده است‬
‫‪-‬تصاویر منحنی های طیفی در صفحات بعدی گنجانده شده است‪ .‬برای بیشتر کام‬
‫جداول جامع داده های طیفی‪ ،‬خواننده به یکی از آنها ارجاع داده می شود‬
‫مجموعه‌ای از چنین داده‌هایی مانند هرشنسون (‪ )1966 ،1961 ،1956‬یا‬
‫النگ (‪ .)1959‬متون مفید مقدماتی برای طیف سنجی جذبی هستند‬
‫گیالم و استرن (‪ )1957‬و ویلیامز و فلمینگ (‪ .)1966‬بیشتر‬
‫متن پیشرفته ای است که به طور خاص با طیف های محصوالت طبیعی سروکار دارد‬
‫اسکات (‪ .)1964‬همچنین گزارش جامعی از بیوشیمیایی وجود دارد‬
‫‪.‬طیف سنجی توسط مورتون (‪)1975‬‬

‫‪ (IR).‬طیف سنجی مادون قرمز ‪1.4.3‬‬

‫‪.‬ممکن است بر روی مواد گیاهی در یک رکورد خودکار اندازه گیری شود ‪ IR‬طیف‬
‫‪.‬یا در محلول (در کلروفرم یا کربن) ‪ IR‬اسپکتروفتومتر‬
‫تتراکلرید (‪ ، )%1-5‬به صورت مولد با روغن نوژول یا در حالت جامد‪ ،‬مخلوط شده‬
‫با بروماید پتاسیم در مورد دوم‪ ،‬یک دیسک نازک در زیر آماده می شود‬

‫)™‪ (cm‬فرکانس‬

‫‪4000 2000 1600 1300 11001000 900 800 700‬‬

‫‪ITT LL 1 1 T 1 TT 1 T To IT‬‬
‫)آ(‬
‫!‪ol‬‬
‫س‬
‫‪3 n‬‬
‫]<‬
‫]‪[72‬‬
‫س‬
‫<‬
‫)ب(‬
‫]‪[+‬‬
‫‪QO‬‬
‫&‬
‫بیماری‬
‫س‬
‫]‪[72‬‬
‫‪2‬‬
‫]][ |‬
‫‪1 [| [1 le 1 1 i 1 —l dl 1‬‬

‫)‪ (um‬طول موج‬

‫‪،‬شکل ‪ 1.5‬طیف مادون قرمز دو آلکالوئید حاصل از دود تنباکو‪ .‬کلید‪( :‬الف) هارمان‬
‫توجه داشته باشید ‪ (I).‬و مصنوعی )‪ (I‬؛ (ب) نورهارمان‪ ،‬طبیعی)‪ (I‬و مصنوعی )‪ (I‬طبیعی‬
‫و ‪ UV‬به طور سنتی در مقایسه با ‪ IR‬که طیف های‬
‫‪.‬طیف های مرئی (شکل ‪ .)1.4‬بنابراین‪ ،‬نوارهای جذب در اینجا رو به پایین هستند‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪22‬‬

‫جدول ‪ 1.3‬فرکانس های مادون قرمز مشخصه برخی از کالس های محصوالت طبیعی‬

‫*کالس ترکیب موقعیت های تقریبی نوارهای مشخصه‬

‫™‪cm‬باالی ‪1200‬‬

‫)‪ (M)، 1455 (5)، 1380 (M‬آلکان ‪2860 ،)5( 2940‬‬

‫‪ (WM)، 1850 (W) 1650 (WM)، 1410 (W).‬آلکن ‪3050‬‬

‫)‪ (WM)، 2100-1700 (W)، 1600، 1580، 1500 (WM‬آروماتیک ‪3050‬‬
‫‪ (M)، 2225 (W)، 2150 (WM)، 1300 (W).‬استیلن ‪3310‬‬

‫)‪)، 1410 (M‬گسترده( ‪ (WM)، 3600-2400‬الکل‌ها و فنول‌ها ‪3610‬‬

‫‪ (W)، 2680 (W)، 1820-1650 (S)، 1420 (WM).‬آلدهیدها و کتونها ‪2750‬‬

‫)‪ (S‬استرها و الکتون ها ‪1680-1820‬‬

‫‪، M)، 1760 (S)، 1710 (S).‬وسیع( ‪ (W)، 3400-2500‬اسیدهای کربوکسیلیک ‪3520‬‬
‫)‪)، 1610 (M‬متغیر( ‪ (M)، 3400 (M)، 3400-3100‬آمین ‪3500‬‬
‫‪ (W-5).‬سیانید ‪2225‬‬

‫)‪ (VS‬ایزوسیانات ‪2270‬‬

‫باندها در منطقه "اثر انگشت" برای سادگی حذف شده اند‪ .‬داده های اقتباس شده از برند و*‬
‫‪.‬اگلینتون (‪)1965‬‬

‫شرایط بی آب از پودری حاوی حدود ‪ 1‬میلی گرم ماده‬

‫‪ -‬با استفاده از قالب و پرس‪ .‬محدوده اندازه گیری ‪mg KBr‬و ‪ 10‬تا ‪100‬‬
‫است و طیف طول می کشد )‪mm‬یا ‪ 2.5‬تا ‪cm™' (15‬اندازه از ‪ 4000‬تا ‪667‬‬
‫معمولی به دست آمده در این ‪ IR‬حدود سه دقیقه باید ضبط شود‪ .‬طیف‬
‫‪.‬راه در شکل ‪ 1.5‬نشان داده شده است‬

‫باالی ‪ 1200‬سانتی متر‪ ،‬نوارهای طیفی یا ‪ IR‬ناحیه در طیف‬

‫اوج به دلیل ارتعاشات پیوندهای فردی یا گروه های عملکردی در‬
‫"™‪cm‬مولکول مورد بررسی (جدول ‪ .)1.3‬منطقه زیر ‪1200‬‬
‫نوارهایی را به دلیل ارتعاشات کل مولکول نشان می دهد و به دلیل‬
‫پیچیدگی آن‪ ،‬به عنوان منطقه "اثر انگشت" شناخته می شود‪ .‬شدت های‬
‫باندهای مختلف به صورت ذهنی در مقیاسی ساده به عنوان هر دو ثبت می شوند‬
‫‪ (W).‬یا ضعیف )‪ (M‬قوی (‪ ،)5‬متوسط‬

‫‪.‬این واقعیت که بسیاری از گروه های عملکردی را می توان با ویژگی های آنها شناسایی کرد‬
‫‪.‬یکسان باشد ‪ IR‬فرکانس‌های ارتعاش سه‌گانه (جدول ‪ )1.3‬باعث می‌شود که طیف‬
‫ساده ترین و اغلب مطمئن ترین روش برای تخصیص یک ترکیب به آن است‬
‫‪.‬بیشترین استفاده را در گیاهان دارویی دارد ‪ IR‬کالس با وجود این‪ ،‬طیف‌سنجی‬
‫مطالعات شیمیایی به عنوان یک دستگاه «اثرانگشت» برای مقایسه طبیعی با‬
‫به شما کمک می کند ‪ IR‬یک نمونه مصنوعی (نگاه کنید به شکل ‪ .)1.5‬پیچیدگی طیف‬
‫خود به ویژه برای این منظور خوب است و چنین مقایسه هایی بسیار است‬
‫‪.‬در شناسایی کامل بسیاری از انواع گیاهان مهم است‬
‫به طور گسترده برای شناسایی استفاده شده است ‪ IR‬به عنوان مثال‪ ،‬طیف ‪ent‬‬
‫در یک پیش از جداسازی ‪ GLC‬اجزای اسانس شناخته شده به عنوان آنها توسط‬
‫مقیاس انحرافی‬

‫برای آلکالوئیدهای "چاپ انگشتی" است ‪ IR‬نمونه ای از استفاده از طیف‬

‫در شکل ‪ 1.5‬آورده شده است‪ .‬دو جزء کمیاب از دود تنباکو شناسایی شده است‬
‫روشهای شناسایی ‪23‬‬

‫‪ KBr‬به عنوان باز هارمان و نورهارمان‪ ،‬با استفاده از روش دیسک‬

‫ممکن است اشاره شود که برخی از جزئیات ‪).‬پوندکستر و کارپنتر‪(1962 ،‬‬
‫در ناحیه اثر انگشت هر دو آلکالوئید طبیعی وجود ندارد‬
‫نمونه ها‪ ،‬احتماالً به دلیل وجود آثار ناخالصی است‪ .‬ممکن است نیز باشد‬
‫مشاهده کردند که اگرچه آلکالوئیدها از نظر ساختار بسیار مشابه هستند (آنها‬
‫)متیل نورهارمان است‪ C-‬تفاوت فقط در این است که هارمان مشتق‬
‫‪.‬آنها تشخیص داد ‪ IR‬آنها را می توان به راحتی با طیف‬

‫‪،‬همچنین می‌تواند به طور مفید به روشن‌سازی ساختار کمک کند ‪ IR‬طیف‌سنجی‬

‫هنگامی که ترکیبات جدید در گیاهان مواجه می شوند‪ .‬اگرچه وجود دارد‬
‫ذکر شده است ‪ IR‬بسیاری از ارتباط بین ساختار شیمیایی و جذب‬
‫در پیک ها‪ ،‬تفسیر واقعی یک طیف پیچیده می تواند دشوار باشد‬
‫‪-‬و عملیات به تجربه زیادی نیاز دارد‪ .‬با برخی از کالس های کام‬
‫‪-‬پوند‪ ،‬با این حال‪ ،‬تفسیر می تواند یک موضوع نسبتا ساده باشد‪ .‬اقدامات‬
‫فرکانس کربونیل بین ‪ 1800‬تا ‪ 1650‬سانتی متر در‬
‫کینون ها می توانند یکباره نشان دهند که آیا گروه کربونیل با کیلیت است یا خیر‬
‫یک هیدروکسیل مجاور یا نه‪ .‬برای مثال‪ ،‬با آنتراکینون ها‪ ،‬غیر‬
‫کینون های کالت دارای نواری بین ‪ 1678‬تا ‪ 1653‬سانتی متر هستند‪ .‬یک کینون‬
‫‪.‬و در ‪ -1637‬نشان می دهد ™‪cm‬دو باند‪ ،‬در ‪ a-OH 1647-1675‬با یک‬
‫‪.‬دارای نوارهایی در ‪ -1675‬است ‪ a-OH‬و یک کینون با دو گروه ;'™‪1621cm‬‬
‫‪ cm.‬و در ‪1661cm™' 1608-1645‬‬

‫می توان از کاتالوگ های مختلفی استفاده کرد‪ ،‬به عنوان مثال ‪ IR،‬برای منابع داده های‬
‫‪ IR‬هرشنسون (‪ .)1964 ،1959‬برای بررسی مقدماتی خوب در مورد‬
‫‪ -‬را ببینید‪ .‬یک متن کاربردی مقدماتی محبوب )‪، Eglinton (1970‬طیف سنجی‬
‫‪.‬کتاب که اکنون در چاپ سوم خود است‪ ،‬کتاب کراس و جونز (‪ )1969‬است‬

‫)‪ (MS‬طیف سنجی جرمی ‪1.4.4‬‬

‫‪.‬ام اس‪ ،‬از زمان معرفی نسبتا ً اخیر خود (حدود ‪ ،)1960‬انقالبی داشته است‬
‫تحقیقات بیوشیمیایی را روی محصوالت طبیعی انجام داده و کار را آسان کرده است‬
‫فیتوشیمیدان از بسیاری جهات ارزش تکنیک این است که‬
‫فقط به مقادیر میکروگرمی از مواد نیاز دارد که بتواند آن را فراهم کند‬
‫وزن مولکولی دقیق و اینکه ممکن است قطعه قطعه شدن پیچیده ای ایجاد کند‬
‫‪.‬الگویی که اغلب مشخصه آن خاص است (و ممکن است شناسایی کند)‬
‫‪.‬ترکیب‬

‫ام اس‪ ،‬در اصل‪ ،‬از مقادیر ناچیز یک ماده آلی تشکیل شده است‬
‫‪.‬ترکیب و ثبت الگوی تکه تکه شدن بر اساس جرم‬
‫بخار نمونه در سیستم فشار کم جرم پخش می شود‬
‫‪.‬طیف سنج که در آن با انرژی کافی یونیزه می شود تا باعث قطعه قطعه شود‬
‫پیوندهای شیمیایی یونهای با بار مثبت حاصل هستند‬
‫شتاب در میدان مغناطیسی که پراکنده می شود و اجازه می دهد تا فراوانی نسبی‬
‫اندازه‌گیری‌های رقص یون‌ها با نسبت جرم به بار معین‪ .‬نتیجه‬
‫‪،‬رکورد فراوانی یون در مقابل جرم‪ ،‬نمودار طیفی جرمی را تشکیل می دهد‬

‫که به این ترتیب از یک سری خطوط با شدت های مختلف در موارد مختلف تشکیل شده است‬
‫‪.‬واحدهای جرمی (نگاه کنید به شکل ‪)1.6‬‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪24‬‬
‫"‪1001 [M-OHI‬‬
‫*]‪Z gob {M-CH,OH‬‬
‫ه‬
‫[‬
‫‪E‬‬
‫‪o‬‬
‫‪2‬‬
‫=‬
‫لس آنجلس‬
‫‪[2‬‬

‫ن‬
‫‪50 100 150 200 250‬‬

‫‪m/z‬‬

‫‪.‬شکل ‪ 1.6‬طیف جرمی زاتین تنظیم کننده رشد‬

‫‪.‬در بسیاری از موارد‪ ،‬برخی از ترکیبات اصلی از تبخیر زنده می مانند‬

‫فرآیند یون و به عنوان پیک یون مولکولی ثبت می شود‪ .‬بسیار دقیق‬
‫سپس اندازه گیری جرم (تا ‪ 0.0001‬واحد جرم) را می توان بر روی آن انجام داد‬
‫خاص‪ .‬دقت به اندازه ای است که دقیق را نشان می دهد )و هر یون دیگری(‬
‫فرمول مولکولی ماده‪ ،‬به طوری که تجزیه و تحلیل عنصری معمولی‬
‫دیگر وجود ندارد )که معموالً به چندین میلی گرم ماده نیاز دارد( ‪sis‬‬
‫‪.‬الزم است‬

‫که توسط ‪ IR‬و ‪ UV‬بر خالف اسپکتروفتومترهای‬

‫‪ NMR‬خود شیمیدان گیاهی‪ ،‬ابزاری برای تشخیص طیف جرمی و‬
‫مینیشن ها گران تر و بسیار پیچیده تر هستند‪ ،‬به طوری که آنها‬
‫‪،‬معموال توسط پرسنل آموزش دیده اداره می شوند‪ .‬بنابراین‪ ،‬فیتوشیمیدان‬
‫نمونه خود را برای تجزیه و تحلیل تحویل می دهد و نتایج را در قسمت پس می گیرد‬
‫شکل نمودار نشان داده شده در شکل ‪ .1.6‬این تکنیک با موفقیت کار می کند‬
‫تقریبا ً با هر نوع ترکیب گیاهی با وزن مولکولی کم و‬
‫حتی برای تجزیه و تحلیل پپتید استفاده شده است‪ .‬آن ترکیباتی که‬
‫تبدیل می شوند ‪ MS‬بیش از حد غیرفرار برای تبخیر در ابزار‬
‫تری متیل سیلیل اترها‪ ،‬متیل استرها یا مشتقات مشابه‪ .‬این درست است‬
‫اغلب همراه با استفاده می شود ‪. MS‬جیبرلین ها (نگاه کنید به ص ‪)124‬‬
‫و عملیات ترکیبی در یک حرکت کیفی و ‪GLC،‬‬
‫شناسایی کمی بسیاری از اجزای ساختاری پیچیده‬
‫‪.‬که ممکن است با هم در یک عصاره گیاهی خاص وجود داشته باشد‬

‫کافی باشد ‪ MS‬یک مثال باید برای نشان دادن ارزش اندازه‌گیری‌های‬
‫تحقیقات فیتوشیمیایی این مورد زاتین است‪ ،‬اولین مورد طبیعی‬
‫تنظیم کننده رشد سیتوکینین حلقه ای که از گیاهان عالی جدا می شود‪ .‬آن‬
‫ساختار به عنوان پورین ‪-4(-6‬هیدروکسی متیل‪-‬ترانس‪-2-‬بوتنیالمینو) جلوگیری کرد‬
‫)شکل ‪ MS (1.6‬استخراج شده توسط شانون و لتهام (‪ ;)1966‬نتایج‬
‫به طور قابل توجهی در این شناسایی کمک کرد‪ .‬بنابراین‪ ،‬یک برجسته وجود داشت‬
‫‪ C,H,;ON;.‬یون مولکولی در ‪ ،219‬تایید کننده فرمول مولکولی‬
‫نشان داد ‪ m / z‬حضور یک الکل اولیه توسط قطعات در‬
‫محل آلکیل ‪ m/z 188 (M-CH,0OH).‬و )‪202 (M-OH‬‬
‫‪.‬نشان داده شد ‪ m/z 148‬با قطعه ‪ N-‬اتصال گروهی در‬
‫روشهای شناسایی ‪25‬‬

‫‪.‬به دست آمد ‪ char-‬در نهایت‪ ،‬تایید هسته آدنین از‬

‫‪ m/z 136، 135‬قطعات فعال (نشان داده شده توسط بیشتر مشتقات آدنین) در‬
‫‪.‬و ‪108‬‬

‫پیشرفت های فنی جدید همچنان در طیف سنجی جرمی پدیدار می شوند‬
‫‪.‬و طیف‌سنج‌های مدرن ممکن است با بمباران اتمی سریع ارائه شوند‬
‫و سپس قادر به تجزیه و تحلیل شکننده یا غیر فرار هستند )‪ (FAB‬منبع‬
‫ترکیبات آلی‪ ،‬از جمله نمک ها و وزن مولکولی باالتر‬
‫‪،‬در تجزیه و تحلیل گلیکوزیدهای گیاهی ‪ MS‬مواد قبالً هنگام استفاده از‬
‫گلیکوزیدی در این فرآیند از بین رفتند و از تشخیص فرار کردند‪ O-‬قندهای‬
‫می توان یون های مولکولی را برای نمونه اصلی به دست آورد ‪ FAB-MS‬اکنون با‬
‫گلیکوزید‬

‫برخی از کاربردهای فراوان داده های ام اس در تحقیقات بیوشیمیایی گیاهی‬

‫در دو رساله پوشش داده شده است (والر‪1972 ،‬؛ والر و درمر‪ .)1980 ،‬را‬
‫در طیف سنجی عمومی اشاره می کند ‪ MS‬خواننده همچنین به گزارش های‬
‫‪.‬کتاب هایی که قبالً در این بخش ذکر شد‬

‫)‪ (NMR‬طیف سنجی تشدید مغناطیسی هسته ای ‪1.4.5‬‬

‫اساسا ً وسیله ای برای تعیین فراهم می کند ‪ NMR‬طیف سنجی پروتون‬

‫ساختار یک ترکیب آلی با اندازه گیری حرکت مغناطیسی‬
‫اتم های هیدروژن آن در بیشتر ترکیبات‪ ،‬اتم های هیدروژن‬
‫‪ -CH،-، -CH، -CHO، -NH،،‬به گروه های مختلف متصل می شوند (به عنوان‬
‫رکوردی از ‪ NMR‬و غیره) و طیف پروتون ‪-CHOH-‬‬
‫‪-‬تعداد اتم های هیدروژن در این شرایط مختلف‪ .‬نمی تواند‪ ،‬چگونه‬
‫همیشه‪ ،‬هر گونه اطالعات مستقیم در مورد ماهیت اسکلت کربن از‬
‫‪،‬به دست آورد ‪ NMR‬مولکول؛ این را فقط می توان با طیف سنجی کربن‪13-‬‬
‫‪.‬که بعدا شرح داده می شود‬

‫در عمل‪ ،‬نمونه ماده در محلول‪ ،‬در یک بی اثر قرار می گیرد‬

‫حالل‪ ،‬بین قطب های یک آهنربای قدرتمند و پروتون ها متحمل می شوند‬
‫تغییرات شیمیایی مختلف با توجه به محیط مولکولی آنها‬
‫نسبی اندازه گیری می شوند ‪ NMR‬در داخل مولکول اینها در دستگاه‬
‫‪.‬که یک ترکیب بی اثر است ‪ (TMS)،‬به یک استاندارد‪ ،‬معموالً تترمتیل سیالن‬
‫پوندی که می توان بدون احتمال به محلول نمونه اضافه کرد‬
‫واکنش شیمیایی رخ می دهد‬

‫اندازه گیری می شوند‪ .‬جایی که )‪ t (tau‬شیفت های شیمیایی در واحدهای & (دلتا) یا‬
‫تفاوت در ‪، Av‬فرکانس رادیویی‪ = Av X 10*/‬و ‪T=100 8‬‬
‫در ‪ TMS‬فرکانس جذب نمونه و ترکیب مرجع‬
‫واحدهای هرتز از آنجایی که کل فرکانس رادیویی معموالً ‪ 60‬مگا هرتز (‪ )60‬است‬
‫میلیون هرتز) و شیفت ها در واحدهای هرتز اندازه گیری می شوند‬
‫نامیده می شود همچنین‪ ،‬شدت سیگنال ها ممکن است یکپارچه شود ‪ ppm‬به عنوان‬
‫‪.‬تعداد پروتون هایی که در هر فرکانس تشدید می شوند را نشان می دهد‬

‫باید بی اثر و بدون آن باشد ‪ NMR‬حالل برای اندازه گیری‬

‫‪،‬پروتون ها بنابراین‪ ،‬یکی محدود به استفاده از تتراکلرید کربن است‬
‫دوترو استون ‪ (D،0)،‬اکسید دوتریوم ‪ (CDCl،)،‬دوتروکلروفرم‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪26‬‬

‫جدول ‪ 1.4‬برخی از ویژگی های شیفت های شیمیایی رزونانس مغناطیسی هسته ای پروتون‬
‫از طبقات مختلف محصوالت گیاهی‬

‫)‪ (ppm‬کالس نوع پروتون محدوده شیفت‪6 ،‬‬

‫‪ CH,-R 0.85-0.95‬آلکان ها و اسیدهای چرب‬
‫‪R-CH,-R 1.20-1.35‬‬
‫‪ CH,-C=C 1.60-1.69‬آلکن‬
‫‪-CH=C 5.20-5.70‬‬
‫‪ HC=C 2.45-2.65‬استیلن‬
‫‪ Ar-H 6.60-8.00‬ترکیبات معطر‬
‫‪Ar-CH، 2.25-2.50‬‬
‫‪Ar-CHO 9.70-10.00‬‬
‫‪ N-CH، 2.10-3.00‬ترکیبات نیتروژن‬
‫‪N-CHO 7.90-8.10‬‬
‫‪ NH‬متغیر‬

‫یا دی متیل سولفوکسید دوتره شده‪ .‬ترکیبات قطبی هستند )‪(CD، COCD،‬‬
‫اغلب در حالل های موجود و آنها به ندرت محلول یا نامحلول هستند‬
‫برای اندازه گیری باید به تری متیل سیلیل اترها تبدیل شوند (نگاه کنید به‬
‫شکل ‪ .)1.7‬حداقل ‪ 5-10‬میلی گرم نمونه مورد نیاز است و این استفاده از آن را محدود می کند‬
‫در بسیاری از آزمایش‌های فیتوشیمیایی با این حال‪ ،‬در ‪ NMR‬طیف‌سنجی‬
‫‪.‬ابزارهایی که برای آنالیز فقط به نمونه میلی گرم نیاز دارند‪ ،‬اکنون در دسترس هستند‬
‫این است که نمونه می تواند در ‪ MS‬نسبت به ‪ NMR‬یکی از مزیت های طیف سنجی‬
‫حداقل بدون تغییر پس از عمل بازیابی شود و برای موارد دیگر استفاده شود‬
‫تعیین ها‬

‫می تواند باشد ‪ NMR‬همانند سایر تکنیک های طیفی‪ ،‬طیف سنجی پروتون‬
‫توسط شیمیدان گیاهی به عنوان یک روش انگشت نگاری استفاده می شود‪ .‬باید اینطور باشد‬
‫با این حال‪ ،‬به یاد داشته باشید که پیچیدگی طیف مستقیم است‬
‫مربوط به تعداد انواع مختلف پروتون موجود‪ ،‬به طوری که بسیار‬
‫آلکالوئید پیچیده جایگزین در واقع ممکن است سیگنال های کمتری نسبت به یک آلکالوئید ساده بدهد‬
‫برای ساختاری است ‪ NMR‬هیدروکربن آلیفاتیک کاربرد عمده پروتون‬
‫تعیین‪ ،‬در ترکیب با سایر تکنیک های طیفی‪ .‬استفاده از آن برای‬
‫تعیین کالس ترکیب بسیار قابل توجه است‪ .‬چند نمونه‬
‫تغییرات شیمیایی که نمونه ای از کالس های خاصی از محصوالت طبیعی است‬
‫در جدول ‪ 1.4‬آمده است‪ .‬پروتون های معطر (چه در مشتقات بنزن یا‬
‫‪.‬در ترکیبات هتروسیکلیک) به وضوح از پروتون های آلیفاتیک متمایز هستند‬
‫اغلب ممکن است فراهم شود ‪ NMR‬در یک کالس از ترکیبات نیز‪ ،‬اندازه گیری های‬
‫ابزار شناسایی ساختارهای فردی‬

‫می تواند بسیار پیچیده باشد‪ .‬به عنوان مثال‪ ،‬با توجه به ‪ NMR‬طیف پروتون‬
‫‪،‬برهمکنش بین پروتون های متصل به اتم های کربن مجاور‬
‫‪.‬سیگنال‌های ترال ممکن است به‌جای قله‌های منفرد به‌صورت «دوگانه» یا «سه‌گانه» ظاهر شوند‬
‫بنابراین‪ ،‬تفسیر به مهارت زیادی نیاز دارد‪ .‬با وجود این‪ ،‬فیزیولوژی مفید‬
‫روشهای شناسایی ‪27‬‬

‫اطالعات شیمیایی را می توان بدون نیاز به تجزیه و تحلیل به دست آورد‬

‫طیف با جزئیات نزدیک دو مثال این را نشان خواهد داد‪ .‬اول‪ ،‬در حالی که بازدارنده‬
‫استخراج ساختار اسید استرکولیک‪ ،‬شیمیدانان در ابتدا نتوانستند آن را بپذیرند‬
‫که این اسید چرب منحصر به فرد دارای یک حلقه سیکلوپروپان ظاهراً کشیده است‬
‫در ساختار و فرمول های جایگزین که در آن پیوند دوگانه بود‬
‫قرار دادن در موقعیت های مجاور حلقه سیکلوپروپان ترجیح داده شد‪ .‬را‬
‫به وضوح نشان داد که باید دارای یک باشد ‪ NMR‬با این حال‪ ،‬طیف پروتون‬
‫حلقه سیکلوپروپن‪ ،‬از آنجایی که هیچ سیگنالی برای پروتون در الفین وجود نداشت‬
‫‪.‬منطقه (‪ )8 5.7-5.2‬و فرمول های جایگزین بنابراین غیر ممکن بود‬

‫مثال دوم از مطالعه ساختاری فالونوئید زرد است‬

‫رنگدانه‪ ،‬تامبولتین این را کارگران اصلی هندی توصیف کردند‬
‫در ‪ NMR‬که آن را جدا کرد‪ ،‬به عنوان یک فالونول آگلیکون اما طیف پروتون‬
‫یک بار نشان داد که وجود یک واحد قند نامشخص‪ ،‬از آنجا که وجود دارد‬
‫سیگنال در ‪ 5.15‬و ‪ 5.25‬و به دلیل پروتون های قند به خوبی از سیگنال جدا شده است‬

‫‪H-2" Hs Hs MAMAN‬‬
‫‪H-6 "H-5' H-3‬‬

‫‪EE IE WAT IS TATA ITU Er ANN ATE SUR EUS Bo AA Sa‬‬

‫|‪I" I TE TOS HE HR OI AA 3 [NN HE A YS ON WW | PIS NT WON UE NS WS S‬‬

‫‪8-0 7-0 6-0 5-0‬‬

‫)‪PPM (8‬‬

‫‪.‬فالون لوتئولین (به عنوان تری متیل سیلیل اتر) ‪ NMR‬شکل ‪ 1.7‬طیف پروتون‬
‫توجه داشته باشید که شش پروتون در ‪ (Mabry, 1969).‬است ‪ TMS‬تغییرات شیمیایی نسبت به‬
‫لوتئولین به خوبی از هم جدا شده است‪ .‬اگر لوتئولین بیشتر جایگزین شود‪ ،‬موقعیت‬
‫‪.‬جایگزینی از ناپدید شدن یکی از شش سیگنال مشخص است‬
‫‪.‬آن در این مشابه است ‪ 8 NMR‬جایگزین است و طیف )به متن مراجعه کنید( ‪Tambuletin‬‬
‫‪.‬منطقه به لوتئولین با این تفاوت که سیگنال دوگانه در ‪ 8 6.5‬ناپدید شده است‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪28‬‬

‫توسط پروتون های متصل به هسته فالون نشان داده شده است (بین ‪ 6‬و ‪)6 7.5‬‬
‫بنابراین‪ ،‬رنگدانه به وضوح یک گلیکوزید بود‪ ،‬نه یک آگلیکون ‪).‬شکل ‪ 1.7‬را ببینید (‬
‫‪).‬هاربورن و همکاران‪(1971 ،‬‬

‫است ‪ NMR‬تشخیص سیگنال های اتم های کربن در دستگاه‬

‫ممکن است‪ ،‬به دلیل وجود مقادیر کم (حدود ‪ )٪1.1‬کربن ‪13‬‬
‫همراه با کربن ‪ 12‬در مواد طبیعی گیاهی‪ .‬مغناطیسی کوچکتر‬
‫در مقایسه با یک پروتون به این معنی است که ‪ C‬گشتاور تولید شده توسط‬
‫پالسی ‪ NMR‬سیگنال خیلی ضعیف تره فقط از زمان پیشرفت های فنی‬
‫‪.‬است ‪ C-NMR‬و آنالیز تبدیل فوریه دارای طیف‌سنجی‬
‫در دسترس است و حتی با این پیشرفت ها‪ ،‬زمان ابزار بیشتری ممکن است‬
‫مورد نیاز است‪ .‬این روش به طور گسترده ای در ‪ NMR‬نسبت به پروتون‬
‫تجزیه و تحلیل ساختاری‪ ،‬اگر چه نیاز به یک نمونه وزن در مورد‬
‫‪.‬میلی گرم هنوز یک محدودیت است ‪10‬‬

‫‪ C‬استفاده می شود‪ ،‬اما محدوده ‪ NMR‬حالل های مشابهی مانند پروتون‬

‫‪ TMS‬پایین فیلد از ‪ ppm‬رزونانس بسیار بیشتر است‪ ،‬یعنی ‪200-0‬‬
‫‪ -‬برای تشدید پروتون‪ .‬بنابراین‪ ،‬درجه سانتیگراد ‪ ppm‬در مقایسه با محدوده ‪10-0‬‬
‫بسیار تفکیک‌شده‌تر هستند و در بیشتر موارد‪ ،‬هر کربن ‪ NMR‬طیف‌های‬
‫در داخل مولکول (نگاه کنید به شکل ‪ )1.8‬را می توان به یک سیگنال جداگانه اختصاص داد‪ .‬مانند‬
‫اتم های کربن جایگزین متفاوتی دارند ‪)،‬به جدول ‪ 1.4‬مراجعه کنید( ‪ NMR‬با پروتون‬
‫ایجاد تغییرات در محدوده های خاص‪ .‬به عنوان مثال‪ ،‬اتم های کربن آلیفاتیک می دهند‬
‫تغییر بین ‪ 0‬تا ‪ 40‬پی پی ام‪ ،‬کربن های معطر بین ‪ 110‬تا ‪150‬‬
‫‪ ppm‬و کربن های کتونی بین ‪ 160‬تا ‪ppm 230‬‬

‫است ‪ NMR‬اساسا مکمل پروتون ‪ C-NMR‬طیف‌سنجی‬

‫و ترکیب این دو تکنیک بسیار قدرتمند است‬
‫ابزاری برای توضیح ساختاری ترپنوئیدها‪ ،‬آلکالوئیدها یا‬
‫فالونوئیدها در تجزیه و تحلیل گلیکوزیدها مفید است‪ ،‬در نشان دادن‬

‫‪101.3‬‬

‫برای اتم های کربن مختلف )‪ ppm‬بر حسب( ‪ TMS‬شکل ‪ 1.8‬تغییر کربن‪ 13-‬نسبت به‬
‫‪ Corydalis‬از ‪ spirobenzylisoquinoline sibiricine‬در مولکول آلکالوئید‬
‫‪sibirica (Fumariaceae).‬‬
‫روشهای شناسایی ‪29‬‬

‫ارتباط بین قطعات قند و تنظیمات آنها هم پروتون و هم‬

‫با موفقیت در ساختار و ‪ C-NMR‬اندازه‌گیری‌های‬
‫‪.‬سایر تجزیه و تحلیل های پروتئین ها و سایر ماکرومولکول ها (نگاه کنید به جونز‪)1980 ،‬‬
‫برای گیاه نوشته نشده است ‪ NMR‬هیچ راهنمای ساده ای برای طیف سنجی‬
‫دانشمند با این حال‪ ،‬آثار زیادی وجود دارد که با کاربرد آن در ارتباط هستند‬
‫شیمی آلی (به عنوان مثال جکمن‪1959 ،‬؛ شاینمن‪ )1970 ،‬یا به بیوشیمی‬
‫‪).‬به عنوان مثال جیمز‪istry (1975 ،‬‬

‫در ساختار ‪ NMR‬در دهه گذشته‪ ،‬استفاده از طیف‌سنجی‬

‫تبیین طبیعی محصوالت گیاهی به طور قابل توجهی پیشرفت کرده است‪ .‬این دارد‬
‫از طریق تولید طیف با وضوح باال با استفاده از توان بیشتر‬
‫ابزارهای مفید و از طریق توسعه رویه های اضافی‬
‫‪،‬تعیین شده است‪ .‬راحت‪ ،‬پر سر و صدا‪ ،‬نامناسب )هسته ای ‪ Overhauser‬اثر( ‪ NOE‬به عنوان‬
‫و غیره (دروم‪ .)1986 ،‬بسیاری از سازه های پیچیده بوده است ‪DEPT‬‬
‫با استفاده از این تکنیک ها حل می شود‪ .‬عالوه بر این‪ ،‬کریستالوگرافی اشعه ایکس دارای‬
‫برای تجزیه و تحلیل ساختاری کامل به آسانی در دسترس قرار می گیرند‬
‫چنین مولکولی‬

‫معیارهای شناسایی فیتوشیمیایی ‪1.4.6‬‬

‫‪ a‬همانطور که در باال ذکر شد‪ ،‬یک ترکیب شناخته شده کشف شده در‬
‫منبع گیاهی جدید را می توان بر اساس کروماتوگرافی و‬
‫مقایسه طیفی با مواد معتبر نمونه های معتبر ممکن است باشد‬
‫توسط مجدد ‪)،‬مراجعه کنید ‪ B‬به پیوست ( به صورت تجاری از یک شرکت تامین کننده‬
‫جداسازی از یک منبع شناخته شده یا‪ ،‬به عنوان آخرین راه حل‪ ،‬با درخواست از‬
‫دانشمندی که در ابتدا آن را جدا و توصیف کرد‪ .‬وسعت‬
‫مقایسه ای که باید انجام شود با توجه به کالس موجودات ترکیبی متفاوت است‬
‫مطالعه شده است‪ ،‬اما به عنوان یک اصل کلی‪ ،‬مطلوب است که از معیارهای بسیاری استفاده شود‬
‫تا حد امکان از صحت شناسایی مطمئن شوید (نگاه کنید به‬
‫‪).‬جدول ‪1.5‬‬

‫مقایسه کروماتوگرافی باید بر اساس کروماتوگرافی مشترک باشد‬

‫از ترکیب با مواد معتبر‪ ،‬بدون جداسازی‪ ،‬حداقل در‬
‫مبنای اصلی مقایسه باشد‪ ،‬وجود دارد ‪ TLC‬چهار سیستم اگر‬
‫مزایای آشکار در استفاده از جاذب های مختلف (مانند سلولز و‬
‫‪.‬سیلیکاژل) و همچنین حالل های مختلف روی یک جاذب (جدول ‪)1.5‬‬
‫در صورت امکان‪ ،‬مقایسه مجهول و استاندارد بر اساس مطلوب است‬
‫و ‪ GLC‬سه معیار کروماتوگرافی مجزا‪ ،‬به عنوان مثال با زمان ماند توسط‬
‫و تحرک نسبی روشن ‪ TLC‬روی رایانه شخصی و ‪ R.‬یا توسط ‪ TLC‬در ;‪ R‬و ‪HPLC‬‬
‫الکتروفورز دوباره‪ ،‬برای مقایسه طیفی‪ ،‬دو یا چند روش‬
‫‪ "H-NMR‬و ‪، UV، IR، MS‬باید تا جایی که ممکن است اتخاذ شود‪ .‬در حالت ایده آل‬
‫‪.‬همه طیف ها باید با هم مقایسه شوند‬

‫با مواد گیاهی جدید‪ ،‬معموالً امکان ایجاد آن وجود دارد‬

‫‪،‬ساختار بر اساس اندازه گیری های طیفی و کروماتوگرافی‬
‫به خصوص در رابطه با آنهایی که بر روی ترکیبات شناخته شده در‬
‫همین سریال تایید ساختار ممکن است با مواد شیمیایی امکان پذیر باشد‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪30‬‬

‫جدول ‪ 1.5‬نوع معیارهای مورد نیاز برای شناسایی گیاهان شناخته شده‬
‫دانش آموزان شناسایی ‪-6‬هیدروکسی لوتئولین ‪-7‬متیل اتر در برگ های کروکوس‬
‫حداقل‬

‫ویژگی معیار ثبت شده است‬

‫‪، mp 245-6°C‬خواص فیزیکی پودر زرد ‪1.‬‬

‫‪ C, ,H,,0,‬یافت شده ‪ MS 316.0574‬فرمول مولکولی توسط یون مولکولی ‪2.‬‬

‫به ‪ 316.0582‬نیاز دارد‬

‫یون قطعه توسط دمتیالسیون در ‪ MS‬الگوی تکه تکه شدن ‪3.‬‬

‫‪.‬و غیره )به ‪ 301.0345‬نیاز دارد ‪301.0344 (C,;H,O،‬‬

‫‪.‬و ماکسیما در ‪ 346 ،273 ،254‬نانومتر‪ ،‬و غیره( ‪ UV‬خواص طیفی ‪4.‬‬

‫با قلیایی و غیره‬ ‫)تغییر‬

‫روی صفحه ‪5.‬‬ ‫زرد در نور روز ‪ TLC‬رنگ‬
‫قهوه ای تیره در‬ ‫‪UV = NH،‬‬
‫سلولز ‪6. TLC‬‬ ‫)‪ n-BuOH-HOAc-H، 0 (4:1:5‬در ‪ R. 0.73‬روی‬

‫‪٪ HOAc‬در ‪R; 0.59 50‬‬

‫)‪ CHCl، ~HOAc-H، 0 (90:45:6‬در ‪R، 0.67‬‬

‫‪ CH، ~ MeCOEt-MeOH‬در ‪ R. 0.36‬روی پلی آمید ‪7. TLC‬‬

‫)‪(4:3:3‬‬
‫تبدیل شیمیایی د متیالسیون با کلرید پیریدینیم ‪8.‬‬

‫‪-hydroxyluteolin‬به ‪6‬‬

‫تبدیل به یک ترکیب شناخته شده در یک زمان‪ ،‬یک مرحله ضروری‬

‫در شناسایی ساختاری‪ ،‬تعیین فرمول مولکولی بود‬
‫با تجزیه و تحلیل میکرو‪ ،‬حداقل با تعیین کربن‪ ،‬هیدروژن‪ .‬چنین‬
‫ریز آنالیز هنوز بسیار مطلوب است‪ ،‬اما زمانی که تنها میکروگرم از‬
‫مواد موجود هستند‪ ،‬می توان از اندازه گیری دقیق جرم استفاده کرد‬
‫یون مولکولی‪ ،‬تعیین شده توسط طیف سنجی جرمی (به بخش ‪ 1.4.4‬مراجعه کنید‬
‫‪،‬و جدول ‪ .)1.5‬مشتق سازی با ترکیبات جدید نیز ارزشمند است‬
‫به عنوان مثال تهیه استات ها‪ ،‬متیل اترها و غیره از زمان تجزیه و تحلیل آنها‬
‫تایید مفیدی از فرمول مولکولی اصلی ارائه می دهد‬
‫ماده‬

‫تجزیه و تحلیل نتایج ‪1.5‬‬

‫تحلیل کیفی ‪1.5.1‬‬

‫است‬ ‫‪.‬تجزیه و تحلیل گیاهی زیادی به جداسازی و شناسایی بخش های مختلف اختصاص داده شده‬
‫ها با‬ ‫اجزای تشکیل دهنده آندری در یک گونه خاص یا گروهی از گونه‬
‫باشند‬ ‫انتظار این است که برخی از اجزای تشکیل دهنده ممکن است بدیع یا غیرعادی‬
‫دیگر‬ ‫ساختار در چنین مواردی‪ ،‬مهم است که تشخیص دهیم که بسیاری از موارد‬
‫تجزیه و تحلیل نتایج ‪31‬‬

‫اجزای به راحتی جدا شده یا معموالً وجود دارند یا جهانی هستند‬

‫در وقوع‪ .‬ساکارز ممکن است از یک گیاه آبی متبلور شود‬
‫کنسانتره و سیتوسترول از کسر فیتوسترول‪ .‬جالب تر‬
‫‪.‬اجزاء اغلب در مقادیر کمتری وجود دارند‬

‫هنگامی که یک ساختار ظاهرا جدید به دست آمده است‪ ،‬الزم است‬

‫به دقت بررسی کنید که قبال گزارش نشده باشد‪ .‬مرجع ممکن است‬
‫به مجموعه های مختلف ادبیات موجود (مثالً فرهنگ لغت‬
‫اما جستجوی کامپیوتری در )‪Alkaloids, Southon and Buckingham, 1989‬‬
‫نیز مطلوب است‪ .‬بهترین منبع اطالعات در مورد ‪Chemical Abstracts‬‬
‫‪،‬محصوالت طبیعی شناخته شده دیکشنری محصوالت طبیعی است (باکینگهام‬
‫این به هفت جلد‪ ،‬با سه ضمیمه بعد‪ ،‬اجرا می شود ‪1994).‬‬
‫‪.‬به صورت سی دی رام موجود است‬

‫انگیزه دیگر برای تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی‪ ،‬تعیین خصوصیات‬

‫یک اصل فعال مسئول برخی از اثرات سمی یا مفید نشان داده شده است‬
‫‪،‬توسط یک عصاره گیاهی خام هنگامی که در برابر یک سیستم زنده آزمایش می شود‪ .‬در اینگونه موارد‬
‫نظارت بر مراحل استخراج و جداسازی در آن ضروری است‬
‫در هر مرحله به منظور دنبال کردن ماده فعال به عنوان خالص شده است‪ .‬را‬
‫فعالیت گاهی اوقات می تواند در طول شکنش ناپدید شود‪ ،‬به دلیل پایداری و‬
‫یک ترکیب کریستالی خالص ممکن است در نهایت به دست آید که فاقد آن باشد‬
‫فعالیت عصاره اصلی احتمال آسیب به اکتیو‬
‫اصل در طول انزوا و شخصیت پردازی باید همیشه رعایت شود‬
‫ذهن‬

‫به طور مشابه‪ ،‬درک این نکته ضروری است که تولید مصنوعات است‬
‫ویژگی مشترک آنالیز گیاهی بسیاری از ترکیباتی که رخ می دهد‬
‫در بافت های گیاهی کامالً ناپایدار هستند و تقریبا ً به طور اجتناب ناپذیری ممکن است دچار آن شوند‬
‫تغییر در طول استخراج رنگدانه های پالستید‪ ،‬کلروفیل ها و‬
‫کاروتنوئیدها در طول کروماتوگرافی مستعد تغییر هستند‬
‫‪،‬همه گلیکوزیدهای گیاهی در معرض هیدرولیز هستند ‪).‬فصل ‪ 3‬و ‪ 4‬را ببینید (‬
‫چه آنزیمی یا غیر آنزیمی‪ ،‬در طول جداسازی‪ ،‬در حالی که استرها ممکن است‬
‫در حضور حالل های الکلی‪ ،‬ترانس استریفیکاسیون می شوند‪ .‬را‬
‫ترپن‌های فرار مستعد بازآرایی‌های مولکولی هستند‬
‫فعال نوری ‪ racemization‬تقطیر با بخار (فصل ‪ )3‬و‬
‫‪،‬اجزای تشکیل دهنده ممکن است رخ دهند‪ ،‬مگر اینکه اقدامات احتیاطی خاصی انجام شود‪ .‬از نو‬
‫پروتئین ها ممکن است در طی مراحل جداسازی در معرض حمله پروتئاز قرار گیرند‬
‫‪).‬فصل ‪(7‬‬

‫عالوه بر این‪ ،‬مصنوعات ممکن است ناخواسته از آزمایشگاه معرفی شوند‬

‫تجهیزات در طول تصفیه رایج ترین افزودنی بوتیل است‬
‫ایزوفتاالت که نرم کننده ای است که تقریبا ً همیشه گیاه را آلوده می کند‬
‫عصاره ها علیرغم وجود آن در واقع به عنوان یک ترکیب گیاهی گزارش شده است‬
‫منشاء آشکار از یک بطری شستشوی پالستیکی مورد استفاده اپراتور در طول‬
‫انزوا برای اجتناب از مصنوعات‪ ،‬الزم است که خام اولیه را بررسی کنید‬

‫عصاره گیاه برای دیدن اینکه آیا یک ترکیب تنها پس از تصفیه گسترده جدا شده است یا خیر‬
‫‪.‬در واقع در آنجا وجود دارد‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪32‬‬

‫تجزیه و تحلیل کمی ‪1.5.2‬‬

‫به همان اندازه که اندازه گیری های کیفی روی عصاره گیاه مهم است‬
‫تعیین مقادیر اجزای موجود در ساده ترین حالت‬
‫روش‪ ،‬داده های کمی را می توان با وزن کردن مقدار به دست آورد‬
‫مواد گیاهی در ابتدا استفاده شده (با فرض بافت خشک شده) و مقدار‬
‫محصول به دست آمده چنین بازدهی به عنوان درصدی از کل یک خواهد بود‬
‫حداقل رقم‬
‫‪.‬کاتیون تلفات را می توان با اضافه کردن وزن شناخته شده زیر خالص تخمین زد‬
‫موضع به عصاره خام‪ ،‬تکرار تصفیه و تعیین‬
‫مقدار بازیافت شده اگر بافت تازه استخراج شود‪ ،‬یک عامل تبدیل (بیشتر‬
‫‪.‬برگ های گیاه ‪ 90‬درصد آب هستند) برای بیان نتیجه به صورت درصد مورد نیاز است‬
‫وزن خشک سن‬

‫اندازه گیری های کمی را می توان روی خشک شده‪ ،‬پودر نیز انجام داد‬
‫‪،‬مواد گیاهی برای تعیین محتوای کل قند‪ ،‬نیتروژن‪ ،‬پروتئین‬
‫فنل‪ ،‬تانن و غیره‪ .‬برخی از روش هایی که می توان از آنها استفاده کرد‬
‫در فصول بعدی ذکر شود‪ .‬چنین رویه هایی در معرض خطا هستند‬
‫به تداخل سایر اجزای موجود‪ .‬آیا چنین بازدارنده ای‬
‫مین گذاری ها از نظر مثالً مقدار ارزش زیادی دارند‬
‫‪.‬گیاهخواری یک اندام گیاهی خاص باید مورد ارزیابی قرار گیرد‬

‫در حالت ایده آل‪ ،‬در اندازه گیری های کمی‪ ،‬مقادیر فرد‬
‫اجزای درون یک کالس خاص از اجزا باید تعیین شوند‬
‫به دست می آید‪ .‬مقادیر ‪ HPLC‬یا ‪ GLC‬و این در حال حاضر به راحتی توسط‬
‫برای مثال می توان اسیدهای چرب متصل به لیپیدهای گیاهی خنثی را تعیین کرد‬
‫به روشی کامالً تکرارپذیر پس از صابون سازی‪ ،‬متیل استر برای‬
‫شبیه ‪).‬فصل ‪ GLC (4‬جفت گیری و کمی سازی متیل استرها توسط‬
‫برای تعیین مقدار استفاده کرد ‪ HPLC‬معموالً می توان از اندازه گیری های‬
‫رنگدانه های فالونوئیدی در ارقام و ژنوتیپ های مختلف گل های باغی‬
‫‪).‬فصل ‪(2‬‬

‫اهمیت تکرار اندازه گیری ها به گونه ای که بتوان آنها را دید‬

‫معنی دار بودن از نظر آماری واضح است اما همیشه قابل قدردانی نیست‪ .‬تغییر‬
‫در مقادیر با توجه به پارامترهای محیطی نیاز به حذف و‬
‫‪.‬نمونه برداری باید در رابطه با سن و منشاء گیاه در نظر گرفته شود‬
‫‪.‬راهنمایی در مورد این موارد در اکثر متون مدرن گیاهی موجود است‬

‫برنامه های کاربردی ‪1.6‬‬

‫کلی ‪1.6.1‬‬

‫‪.‬در حالی که روش های فیتوشیمیایی امروزه نقش ثابتی در عمل دارند‬
‫به نام همه شاخه های علوم گیاهی‪ ،‬همیشه اینطور نبوده است‪ .‬با اينكه‬
‫این روش ها بدیهی است که در تمام مواد شیمیایی و بیوشیمیایی ضروری هستند‬
‫مطالعات‪ ،‬کاربرد آنها در حوزه های کامالً بیولوژیکی فقط دارد‬
‫در دو دهه اخیر آمده است‪ .‬حتی در رشته های بسیار دور از‬
‫‪،‬زنده‬
‫آ‬

‫برنامه های کاربردی ‪33‬‬

‫آزمایشگاه شیمی به عنوان سیستماتیک‪ ،‬جغرافیای گیاهی‪ ،‬اکولوژی و‬

‫‪.‬دیرین گیاه شناسی‪ ،‬روش های فیتوشیمیایی برای حل مهم شده اند‬
‫انواع خاصی از مشکالت را ایجاد می کند و بدون شک در اینجا با آنها استفاده می شود‬
‫افزایش فرکانس در آینده‬

‫‪.‬در این کتاب تنها جایی برای ذکر چند مورد از کاربردهای فراوان وجود دارد‬
‫روش های فیتوشیمیایی برخی از برنامه های کاربردی آشکار در‬
‫کشاورزی‪ ،‬در تغذیه و صنایع غذایی و در داروسازی‬
‫تحقیق باید بدیهی تلقی شود‪ .‬برنامه های زیر به سادگی هستند‬
‫برای نشان دادن ارزش تکنیک های فیتوشیمیایی در برخی از آنها ارائه شده است‬
‫شاخه های اصلی علوم گیاهی‬

‫فیزیولوژی گیاهی ‪1.6.2‬‬

‫سهم عمده مطالعات فیتوشیمیایی در فیزیولوژی گیاهی‬

‫بدون شک در تعیین ساختارهای شیمیایی‪ ،‬بیوسنتزی هستند‬
‫منشا و نحوه عملکرد هورمون های رشد طبیعی در نتیجه‬
‫ادامه همکاری در طول سال ها بین فیزیولوژیست ها و‬
‫‪:‬فیتوشیمیدانان‪ ،‬پنج دسته از تنظیم کننده های رشد در حال حاضر شناخته شده اند‬
‫اکسین ها‪ ،‬سیتوکینین ها‪ ،‬آبسیزین ها‪ ،‬جیبرلین ها و اتیلن‪ .‬روش های تشخیص‬
‫متفاوت است‪ ،‬در ادامه مورد بحث قرار خواهد گرفت ‪ PC‬تا ‪ TLC‬تا ‪ GLC‬که از ‪tion،‬‬
‫صفحات به شرح زیر است‪ :‬اکسین ها (ص ‪ ،)218‬سیتوکینین ها (ص ‪ ،)226‬آبسیسین ها (ص ‪ )122‬و‬
‫جیبرلین ها (ص ‪ .)127‬یکی از قابل توجه ترین جنبه های جیبرلین‬
‫گروه هورمون ها تعداد زیادی از ساختارهای شناخته شده (بیش از‬
‫‪.‬صد)‪ ،‬ظاهراً همه با طیف مشابهی از خواص رشد‬
‫نیاز به روش های بسیار دقیق تشخیص و تمایز بین‬
‫ترکیبی برای آنها شد ‪ GC-MS‬جیبرلین ها منجر به توسعه‬
‫تحلیل و بررسی‪ .‬کتاب کلی در مورد روش های جداسازی رشد گیاه‬
‫‪.‬مواد‪ ،‬ویرایش شده توسط هیلمن (‪ ،)1978‬می تواند برای اطالعات بیشتر مورد مشورت قرار گیرد‬
‫‪.‬دم الزامات الزم برای تجزیه و تحلیل دقیق هورمونی بسیار مهم است‬
‫توسط ریو و کروزیر (‪ )1980‬مورد توجه قرار گرفت‪ .‬یک بررسی عالی از‬
‫است ‪ Horgan‬تکنیک ها‪ ،‬از جمله استفاده از روش رادیو ایمونواسی‪ ،‬روش‬
‫ششمین کالس تنظیم کننده رشد که اخیراً شرح داده شده است ‪(1981).‬‬
‫‪.‬براسینوستروئیدها؛ روش های تجزیه و تحلیل استروئید در صفحه آورده شده است‪134 .‬‬

‫آسیب شناسی گیاهی ‪1.6.3‬‬

‫تکنیک های فیتوشیمیایی در درجه اول برای آسیب شناس مهم هستند‬
‫خصوصیات شیمیایی فیتوتوکسین ها (محصوالت سنتز میکروبی‬
‫پایان نامه تولید شده در گیاهان عالی در صورت هجوم باکتری های قارچ) و‬
‫فیتوالکسین ها (محصوالت متابولیسم باالتر گیاه در پاسخ تشکیل می شوند‬
‫به حمله میکروبی)‪ .‬طیف وسیعی از ساختارهای شیمیایی مختلف درگیر هستند‬
‫در هر دو مورد‪ .‬آشناترین فیتوتوکسین ها لیکوماراسمین و فوزاریک هستند‬
‫اسید‪ ،‬مشتقات اسید آمینه که عوامل پژمرده کننده در گوجه فرنگی هستند‪ .‬دیگر‬
‫سمومی که جدا شده اند عبارتند از گلیکوپپتیدها‪ ،‬نفتاکینون ها یا‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪34‬‬

‫برخی از فیتوتوکسین ها از نظر شیمیایی حساس هستند ‪sesquiterpenoids (Durbin، 1981).‬‬

‫به طوری که در هنگام جداسازی آنها باید احتیاطات خاصی صورت گیرد‬
‫‪.‬شناسایی‬

‫فیتوالکسین ها نیز بنا به گیاه ساختارهای متفاوتی دارند‬

‫باشند ‪ sesquiterpenoid‬منبع (بیلی و منسفیلد‪ .)1982 ،‬آنها ممکن است‬
‫‪ Pisum).‬از ‪ (pisatin‬ایزوفالوانوئید ‪ Solanum tuberosum)،‬ریشیتین از(‬
‫یا فنولیک (اورچینول) )‪ Vicia faba‬ویرون اسید از( استیلنیک ‪sativum)،‬‬
‫شناسایی ایزوفالوانوئیدها و استیلن ها ‪ Orchis militaris).‬از‬
‫به ترتیب در فصول ‪ 2‬و ‪ 5‬و روشی برای‬
‫‪.‬القای فیتوالکسین به عنوان یک آزمایش عملی در فصل ‪ 2‬گنجانده شده است‬

‫مواد «پیش عفونی» (مواد ثانویه طبیعی)‬

‫توسط برخی از پاتولوژیست های گیاهی به عنوان مهم در انتقال‬
‫مقاومت در برابر بیماری به گیاهان ترکیبات فنلی مانند فلوریدزین‬
‫در سیب‪ ،‬تانن در تمشک‪ ،‬عمدتا در اینجا دخیل هستند‪ .‬روش های‬
‫‪.‬شناسایی چنین ترکیباتی به طور مفصل در فصل ‪ 2‬پوشش داده شده است‬
‫نمونه های دیگری از ترکیبات گیاهی که به عنوان مشخص شده اند‬
‫فیتوالکسین ها یا مواد پیش از عفونی را می توان در بررسی یافت‬
‫‪.‬گرییر و هاربرن (‪)1994‬‬

‫بوم شناسی گیاهی ‪1.6.4‬‬

‫دو حوزه تحقیقاتی که ترکیبات گیاهی ثانویه در آنها قابل توجه است‬
‫‪-‬اکولوژی گیاهی در تعامالت گیاه‪-‬حیوان و گیاه‪-‬گیاه است‪ .‬آنا‬
‫مشکالت لیتیک در هر دو مورد به دلیل محدودیت بسیار دشوار است‬
‫مقدار مواد بیولوژیکی در اختیار فیتوشیمیدان‪ .‬برای‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬در پیگیری سرنوشت ترکیبات ثانویه در تغذیه حشرات‬
‫روی گیاهان‪ ،‬الزم است اندام های مختلف حشره را تجزیه و تحلیل کرد تا ببیند‬
‫جایی که ترکیبات ذخیره می شوند؛ چنین تحلیل هایی اغلب پیچیده و‬
‫‪.‬زمان بر‬

‫ترکیباتی که تاکنون شناخته شده اند که در فعل و انفعاالت گیاه و حیوان نقش دارند‬
‫‪،‬در درجه اول آلکالوئیدها و گلیکوزیدهای قلبی‪ ،‬گلیکوزیدهای روغن خردل‬
‫سیانوژن ها‪ ،‬استروئیدها یا ترپن های فرار‪ .‬ترکیبات گیاهی ممکن است متفاوت باشد‬
‫به عنوان جاذب تغذیه یا دافع عمل می کنند‪ ،‬اثرات هورمونی بر روی بدن دارند‬
‫حشرات و یا مکانیسم دفاعی مفیدی را در برابر حشرات فراهم کنند‬
‫‪ (Harborne 1993).‬شکار‬

‫فعل و انفعاالت گیاه و گیاه شامل مواد به اصطالح آللوپاتیک است که‬
‫یک گیاه از ریشه یا برگ خود تراوش می کند تا از رشد آن جلوگیری کند‬
‫سایر گونه های گیاهی در مجاورت آن‪ .‬ترکیبات یا فرار هستند‬
‫ترپن ها (به عنوان مثال سینئول) یا اسیدهای فنولیک ساده‪ ،‬بسته به اینکه آیا‬
‫این گیاه در آب و هوای نیمه گرمسیری یا معتدل رشد می کند‪ .‬را‬
‫مطالعه فیتوشیمیایی آللوپاتی می تواند دشوار باشد زیرا نیاز به آن دارد‬
‫تعیین روی عصاره های برگ کامل‪ ،‬شیرابه های طبیعی برگ و روی خاک‬
‫نمونه ها نیز گردش سریع احتمالی مواد فعال در خاک‬
‫‪،‬همچنین خطر تحلیلی دیگری در این زمینه فراهم می کند (پاتنام و تانگ‬
‫‪1986).‬‬
‫برنامه های کاربردی ‪35‬‬
‫کشت بافت گیاهی ‪1.6.5‬‬

‫فیتوشیمی نقش مهمی در کشت بافت گیاهی در تشخیص‬

‫تجزیه و تحلیل محصوالت متابولیسم ثانویه که ممکن است باشد‬
‫در چنین بافت هایی تشکیل می شود‪ .‬در طول کشت‪ ،‬غلظت ثانویه‬
‫‪.‬متابولیت ها ممکن است بسته به هورمون های گیاهی اضافه شده متفاوت باشد‬
‫وجود نور و عوامل دیگر در برخی موارد متابولیت ها تولید می شوند‬
‫که در گیاهی که بافت از آن گرفته شده وجود ندارد‪ .‬برای‬
‫به عنوان مثال‪ ،‬آنتوسیانین ها ممکن است در کشت گیاهانی تولید شوند که فاقد آن هستند‬
‫رنگ سیانیک ترکیبات فعال دارویی جدید ممکن است برای‬
‫در کشت سلولی یا کالوس و تکنیک های فیتوشیمیایی خوبی ایجاد می شود‬
‫برای تشخیص آنها الزم است‪ .‬تولید چنین ساختارهایی ممکن است الکی باشد‬
‫در کشت سلولی با افزودن عصاره سلولی باکتری یا قارچ (استافورد و‬
‫‪).‬پازولز‪1997 ،‬‬

‫برخی از متابولیت های ثانویه مانند آلکالوئیدها ممکن است در سلول تولید شوند‬
‫کشت در مقادیر بسیار کم و تکنیک‌های رادیو ایمونواسی‬
‫ممکن است برای تحلیل آنها مورد نیاز باشد (زنک و همکاران‪ .)1997 ،‬یک سری عالی از‬
‫نه جلد منتشر شده است که شرایط آزمایشی را شرح می دهد‬
‫سنتز فرآورده ثانویه در کشت سلولی و روشهای فیتوشیمی‬
‫‪،‬تجزیه و تحلیل کالری برای اکثر گیاهانی که در کشت سلولی استفاده شده اند (باجاج‬
‫‪1996).‬‬

‫ژنتیک گیاهی ‪1.6.6‬‬

‫در گذشته‪ ،‬فیتوشیمی به ژنتیک باالتر گیاهان کمک کرده است‬

‫ارائه ابزاری برای شناسایی آنتوسیانین‪ ،‬فالون و کاروتنوئید‬
‫رنگدانه های موجود در ژنوتیپ های رنگی مختلف گیاهان باغی‪ .‬را‬
‫نتایج نشان داده است که اثرات بیوشیمیایی این ژن ها دارای الف‬
‫‪.‬ساده است و مسیر احتمالی سنتز رنگدانه را نشان می دهد‬
‫در این موجودات (آلستون‪ .)1964 ،‬وراثت در گیاهان دیگران ‪sis‬‬
‫ویژگی های شیمیایی (آلکالوئیدها‪ ،‬ترپن ها‪ ،‬و غیره) نیز با موفقیت انجام شده است‬
‫‪.‬توسط تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی ترسیم شده است‬

‫سهم جدیدتر فیتوشیمی در ژنتیک در‬

‫شناسایی گیاهان هیبرید و در روشن سازی با روش های شیمیایی‬
‫منشاء والدین آنها فیتوشیمی نیز به رسمیت شناخته شده است‬
‫به عنوان یک ابزار مفید‪ ،‬همراه با سیتولوژی‪ ،‬برای استفاده در تجزیه و تحلیل‬

‫‪،‬تنوع ژنتیکی در جمعیت های گیاهی (ر‪.‬ک‪ .‬هاربورن و ترنر‬

‫‪1984).‬‬

‫سیستماتیک گیاهی ‪1.6.7‬‬

‫یکی از سریع ترین زمینه های در حال توسعه در فیتوشیمی در‬

‫‪،‬زمان حال رشته ترکیبی بین شیمی و طبقه بندی است‬
‫به عنوان سیستماتیک بیوشیمیایی یا کموتاکسونومی شناخته می شود‪ .‬اصوالً همینطور است‬
‫به طور عمده مربوط به بررسی شیمیایی گروه های محدود شده گیاهان است‬
‫روش تجزیه و تحلیل گیاه ‪36‬‬

‫برای اجزای ثانویه بلکه برای درشت مولکول ها و کاربرد‬

‫‪،‬داده های به دست آمده برای طبقه بندی گیاهان (هاربورن و ترنر‬
‫‪1984).‬‬

‫شاید مفیدترین دسته از ترکیبات برای چنین مطالعه ای باشند‬

‫فالونوئیدها بررسی بسیاری از کالس های دیگر از ترکیبات (به ویژه آلکا‬
‫لویدها‪ ،‬اسیدهای آمینه غیر پروتئینی‪ ،‬ترپن ها و ترکیبات گوگردی) دارند‬
‫‪.‬همچنین اطالعات بالقوه مفید جدیدی برای اهداف طبقه بندی به همراه داشت‬
‫روش های دقیق‪ ،‬هم در غربالگری اولیه گیاهان ضروری است‬
‫‪.‬و در تجزیه و تحلیل دقیق تر اجزای جداگانه‬

‫تجزیه و تحلیل شیمیایی از توالی اسید آمینه پروتئین های گیاهی است‬
‫همچنین مشکالت سیستماتیک را در سطوح باالتر مورد بررسی قرار داد‬
‫‪،‬به دست آمده است ‪ c‬طبقه بندی نتایج با سیتوکروم‬
‫پالستوسیانین و فردوکسین؛ توالی اسیدهای نوکلئیک گیاهی دارد‬
‫‪ (Soltis et al., 1992).‬همچنین داده های مورد عالقه طبقه بندی را به دست آورد‬

‫تحقیقات گیاهان دارویی ‪1.6.8‬‬

‫‪.‬پادشاهی گیاهی نشان دهنده مخزن عظیمی از مواد بیولوژیکی است‬

‫و تاکنون تنها بخش کوچکی از گیاهان دارویی دارند ‪ tive‬مولکول های‬
‫فعالیت مورد سنجش قرار گرفته است‪ .‬نزدیک به ‪ 50‬درصد از داروهایی که در پزشکی استفاده می شود‪ ،‬از‬
‫منشا گیاهی بنابراین تحقیقات فعلی زیادی به این موضوع اختصاص داده شده است‬
‫بررسی فیتوشیمیایی گیاهان عالی که اتنوبوتانیکال دارند‬
‫اطالعات مرتبط با آنها سپس فیتوکمیکال ها جدا می شوند‬
‫برای انواع مختلف فعالیت های بیولوژیکی غربالگری می شود‪ .‬سمیت سلولی از طریق‬
‫‪.‬آزمایش میگوی آب نمک به منظور آشکارسازی ترکیبات ضد سرطانی جدید مورد مطالعه قرار گرفته است‬
‫‪.‬کشف شد ‪ Taxus brevifolia،‬تاکسول‪ ،‬داروی بیمارستانی جدید از پوست‬
‫به این ترتیب انجام شد‪ .‬روش دیگر‪ ،‬ابتدا می توان عصاره های خام گیاهی را مورد سنجش قرار داد‬
‫‪.‬برای فعالیت‌های خاص و فراکسیون‌های فعال‪ ،‬سپس گیاه گیاهی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت‬
‫شیمیایی در حال حاضر انواع زیست سنجی برای فیتوشیمیدان موجود است‬
‫‪ (Hostettmann، 1991).‬برای استفاده در چنین کارهایی‬

‫مراجع عمومی‬

‫‪) (1982) Phytoalexins, Blackie, Glasgow.‬ویرایش‌ها( ‪، ].W.‬و منسفیلد ‪، JA‬بیلی‬

‫‪.‬گیاهان دارویی و معطر‪ ،‬جلد ‪ ،9‬اسپرینگر‪ ،‬برلین )‪) (1996‬ویرایش( ‪، YPS‬باجاج‬

‫‪.‬بابیت‪.] ،‬ام‪ )1963( .‬کروماتوگرافی الیه نازک‪ ،‬انتشارات راینهولد‪ .‬شرکت‪ ،‬نیویورک‬

‫‪،‬باکینگهام‪ ،‬جی (ویرایش) (‪ )1994‬دیکشنری محصوالت طبیعی‪ ،‬چپمن و هال‬

‫‪.‬لندن‬

‫کاربرد بیوشیمیایی گاز کروماتوگرافی )‪ Storrs، EE (1962‬و ‪Burchfield، HP‬‬

‫‪.‬فی‪ ،‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫‪rd‬عملی‪ IR 3 ،‬مقدمه ای بر طیف سنجی )‪، RA (1969‬و جونز ‪، AD‬کراس‬

‫‪.‬لندن ‪edn، Butterworths،‬‬

‫راهنمای شیمیایی و گیاهی برای محصوالت گلسنگ‪ ،‬شمال )‪Culberson، CF (1969‬‬

‫‪.‬دانشگاه کارولینا مطبوعات‪ ،‬چپل هیل‪ ،‬ایاالت متحده آمریکا‬

‫برای تحقیقات شیمی‪ ،‬پرگامون ‪ NMR‬تکنیک های مدرن )‪Derome، AE (1986‬‬

‫‪.‬مطبوعات‪ ،‬آکسفورد‬
‫مراجع عمومی ‪37‬‬

‫در ‪Dey, PM and Harborne, ].B. (eds) (1989-1997) Methods in Plant Biochemistry، 10‬‬
‫‪.‬جلدها‪ ،‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن‬

‫‪Durbin, RD (ed.) (1981) Toxins in Plant Disease, Academic Press, New York.‬‬

‫‪،‬طیف‌سنجی جذب الکترونیکی‪ ،‬ویرایش دوم )‪Gillam، AE and Stern، ES (1957‬‬

‫ادوارد آرمولد‪ ،‬لندن‬

‫مقدمه ای بر مایع با کارایی باال )‪ Sewell، PA (1982‬همیلتون‪ ،‬آر جی‪ .‬و‬

‫‪.‬کروماتوگرافی‪ ،‬ویرایش دوم‪ ،‬چاپمن و هال‪ ،‬لندن‬

‫‪،‬هاربورن‪ ،‬جی بی (‪ )1967‬بیوشیمی مقایسه ای فالونوئیدها‪ ،‬انتشارات آکادمیک‬

‫‪.‬لندن‬

‫هاربورن‪ ،‬جی بی (‪ )1993‬مقدمه ای بر بیوشیمی اکولوژیکی‪ ،‬ویرایش چهارم‪ ،‬دانشگاهی‬

‫‪.‬مطبوعات‪ ،‬لندن‬

‫‪Harborne، JB and Turner، BL (1984) Plant Chemosystematics، Academic Press،‬‬

‫‪.‬لندن‬

‫‪،‬مقدمه ای بر طیف سنجی آلی )‪، TDW (1996‬و کالریج ‪، LM‬هاروود‬

‫‪.‬انتشارات دانشگاه‪ ،‬آکسفورد‬

‫کروماتوگرافی‪ :‬مبانی و کاربردهای کروماتوگرافی )‪Heftmann, F. (1992‬‬

‫‪.‬تکنیک های گرافیک و الکتروفورتیک‪ ،‬ویرایش پنجم‪ ،‬الزویر‪ ،‬آمستردام‬

‫‪Hillman, JR (ed.) (1978) Isolation of Plant Growth Substances, Cambridge‬‬

‫‪.‬انتشارات دانشگاه‪ ،‬کمبریج‬

‫‪.،‬فیتوشیمی ‪. Prog.‬روشهای مدرن برای تجزیه و تحلیل هورمون گیاهی )‪Horgan, R. (1981‬‬
‫‪7، 137-70.‬‬

‫مقدماتی )‪Hostettmann, K. Hostettmann, M. and Marston, A. (1986‬‬

‫‪.‬تکنیک های کروماتوگرافی‪ ،‬اسپرینگر‪ ،‬برلین‬

‫‪،‬در شیمی آلی ‪ NMR‬جکمن‪ ،‬ال ام‪ )1959( .‬کاربردهای طیف سنجی‬
‫‪.‬چاپ پرگامون‪ ،‬آکسفورد‬

‫‪،‬در بیوشیمی‪ :‬اصول و کاربردها‪ .‬مطبوعات دانشگاهی ‪، TL (1975) NMR‬جیمز‬

‫‪.‬نیویورک‬

‫‪.‬کرچنر‪ ،‬جی جی (‪ )1978‬کروماتوگرافی الیه نازک‪ ،‬ویرایش دوم‪ ،‬جان وایلی‪ ،‬نیویورک‬

‫‪Lederer, E. and Lederer, M. (1957) Paper Chromatography, 2nd edn, Elsevier,‬‬

‫آمستردام‬

‫‪ der Botanik، Springer Verlag،‬کاغذ کروماتوگرافی در )‪، HF (1959‬لینکنز‬

‫‪.‬برلین‬

‫لینکنز‪ ،‬اچ اف و جکسون‪ ،‬جی اف (‪ )-1985‬روشهای مدرن تجزیه و تحلیل گیاهی‪ ،‬جدید‬
‫‪.‬سری‪ ،‬اسپرینگر‪ ،‬برلین‬

‫‪.‬طیف‌سنجی بیوشیمیایی‪ ،‬آدام هیلگر‪ ،‬لندن )‪، RA (1975‬مورتون‬

‫‪.‬تجزیه و تحلیل کمی هورمونهای گیاهی )‪Reeve, DR and Crozier, A. (1980‬‬

‫‪.‬فیزیول‪ .‬سری جدید‪ Pl. 80-203 ،9 ،‬دایره‬
‫‪ Methods in Zone Electrophoresis, edn 2, BDH Chemicals Ltd.,‬سارجنت‪.] ،‬ر‪)1969( .‬‬
‫پول‪ ،‬انگلستان‬

‫مقدمه ای بر روش های طیف سنجی برای شناسایی )‪Scheinmann, F. (ed.) (1970‬‬
‫‪.‬کاتیون ترکیبات آلی (جلد اول)‪ ،‬چاپ پرگامون‪ ،‬آکسفورد‬

‫مقدمه ای بر روش های طیف سنجی برای شناسایی )‪Scheinmann, F. (ed.) (1970‬‬
‫‪.‬کاتیون ترکیبات آلی (جلد دوم)‪ ،‬چاپ پرگامون‪ ،‬آکسفورد‬

‫‪،‬اسکات‪ ،‬آل (‪ .)1964‬تفسیر طیف فرابنفش محصوالت طبیعی‬

‫‪.‬چاپ پرگامون‪ ،‬آکسفورد‬

‫‪.‬شرما‪ ،‬جی و تسوایگ‪ ،‬جی (‪ )1971‬کروماتوگرافی کاغذی‪ ،‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫‪.‬سیمپسون‪ ،‬سی (‪ .)1970‬کروماتوگرافی گازی‪ ،‬کوگان پیج‪ ،‬لندن‬

‫‪، LW. and Buckingham, J. (1989) Dictionary of Alkaloids, Chapman and‬ساوتون‬

‫‪.‬هال‪ ،‬لندن‬

‫‪،‬استال‪( £ ،‬ویرایش) (‪ )1969‬کروماتوگرافی الیه نازک‪ ،‬ویرایش دوم‪ ،‬جورج آلن و آنوین‬

‫اوندون‬

‫‪،‬تمرین کروماتوگرافی الیه نازک )‪، MF (1978‬و دابینز ‪، JC‬تاچ استون‬

‫‪.‬جان وایلی‪ ،‬چیچستر‬

‫روش تجزیه گیاه ‪38‬‬

‫‪.‬لندن ‪، Cleaver Hume Press،‬کروماتوگرافی الیه نازک )‪Truter، EV (1963‬‬

‫‪.‬متابولیت های قارچی‪ ،‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن )‪، WB (1971‬ترنر‬

‫‪Turner, WB and Aldridge, DC (1983) Fungal Metabolites II, Academic Press,‬‬

‫‪.‬لندن‬

‫‪Wagner, H. and Bladt, S. (1996) Plant Drug Analysis, 2nd edn, Springer, Berlin.‬‬

‫‪, Wiley‬کاربردهای بیوشیمیایی طیف سنجی جرمی )‪Waller, GR (ed.) (1972‬‬

‫اینترساینس‪ ،‬نیویورک‬

‫‪،‬کاربردهای بیوشیمیایی طیف‌سنجی جرمی )‪، OC (1980‬و درمر ‪، GR‬والر‬

‫‪.‬مکمل اول‪ ،‬جان وایلی‪ ،‬چیچستر‬

‫‪،‬روشهای طیف سنجی در شیمی آلی )‪Williams, DH and Fleming, I. (1966‬‬

‫‪.‬مک گراو هیل‪ ،‬لندن‬

‫منابع تکمیلی‬

‫‪ Biochemistry of Phenolic Compounds (ed. JB Harborne)،‬در )‪Alston، RE (1964‬‬

‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن‪ ،‬صص ‪204-171‬‬

‫‪. Acta, 4, 427.‬بیوفیز ‪Bate-Smith، EC and Westall, RG (1956) Biochim.‬‬

‫در مقدمه ای بر روش های طیف سنجی برای شناسایی )‪Eglinton، G. (1970‬‬
‫‪Organic Compounds (Vol. I) (ed. F. Scheinmann), Pergamon Press, Oxford, pp.‬‬
‫‪123-144.‬‬

‫‪Grayer, R. and Harborne, JB (1994) Phytochemistry, 37, 19.‬‬

‫‪Harborne, JB (1969) Phytochemistry 8, 419.‬‬

‫)‪Harborne, JB, Lebreton, P., Combier, H., Mabry, TJ and Hammam, Z. (1971‬‬
‫‪.‬فیتوشیمی‪883 ،10 ،‬‬

‫‪. and Bell, MG (1967) Nature (Land.) 213, 1241.‬هارلی‪ ،‬آر‪.‬ام‬

‫‪.‬و طیف جذبی مرئی (جلد ‪Hershenson، HM (1956) UV )54-1930 ،1‬‬

‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫طیف جذبی فروسرخ (جلد اول‪ .)57-1945 ،‬علمی )‪، HM (1959‬هرشنسون‬

‫‪.‬مطبوعات‪ ،‬نیویورک‬

‫‪.‬و طیف جذبی مرئی (جلد دوم‪، HM (1961) UV )1955-9 ،‬هرشنسون‬

‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫‪ Il، 1958-62).‬جلد( طیف جذبی فروسرخ )‪Hershenson، HM (1964‬‬

‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫‪.‬و طیف جذبی مرئی (جلد ‪Hershenson، HM (1966) UV )3-1960 ،111‬‬

‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬نیویورک‬

‫سنجش برای ‪Hostettmann, K. (ed.) (1991) Methods in Plant Biochemistry, Vol. 6،‬‬
‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن ‪Bioactivity،‬‬

‫‪،‬جونز‪ ،‬آر‪ )1980( .‬در مقدمه ای بر طیف سنجی برای بیوشیمیست ها (ویرایشگر اس بی براون)‬
‫‪.‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن‬

‫‪Knights, BA (1995) Phytochemistry 4, 857.‬‬

‫‪.‬النگ‪ ،‬ال‪ )1959( .‬طیف جذبی‪ ،‬انتشارات آکادمی علوم‪ ،‬بوداپست‬

‫‪ T.‬و ‪ JB Harborne‬در دیدگاه‌های فیتوشیمی (ویرایش‌های )‪Mabry، TJ (1969‬‬

‫‪.‬سوین)‪ ،‬انتشارات آکادمیک‪ ،‬لندن‪ ،‬صص ‪46-1‬‬

‫‪ |. Chem Ecol., 21, 1235.‬اوریان‪ ،‬سی ام‪)1995( .‬‬

‫‪.‬فارم‪ .‬فرانک‪Paris, R., Durand, M. and Bounet, JL (1960) Ann. 769 ،18 ،‬‬

‫)‪ CL Wilson‬ویرایشگر( در شیمی تحلیلی جامع )‪Peereboom، JWC (1971‬‬

‫‪.‬الزویر‪ ،‬آمستردام‪ ،‬ص ‪ IIC)، 129-1‬جلد( )‪ DW Wilson‬و‬

‫‪.‬فیلیپسون‪ ،‬جی دی (‪ )1982‬فیتوشیمی‪56-2441 ،21 ،‬‬

‫‪Poindexter, EH and Carpenter, RD (1962) Phytochemistry, 1, 215.‬‬

‫‪،‬علم آللوپاتی‪ ،‬جان وایلی )‪) (1986‬ویرایش‌ها( ‪، CS‬و تانگ ‪، AR‬پاتنام‬

‫چیچستر‬

‫‪ Heinz، DE (1971) Phytochemistry، 10، 1245.‬سندفورد‪ ،‬کی جی‪ .‬و‬

‫آ‬

‫منابع تکمیلی ‪39‬‬

‫‪ |. Sci., 9, 833.‬نیوزیلند )‪ Letham، DS (1966‬و ‪، ].S.‬شانون‬

‫‪،‬سیستماتیک مولکولی گیاهان )‪، JJ (1992‬و دویل ‪Soltis، PS، Soltis، DE‬‬
‫‪.‬چپمن و هال‪ ،‬نیویورک‬

‫در تنوع گیاهی ‪ -‬منبعی از جدید )‪ Pazole، CJ (1997‬و ‪Stafford، AM‬‬

‫‪ S. Wrigley، M. Hayes، R. Thomas and E. Chrystal)،‬ویرایشگر( محصوالت صنعتی‬
‫‪.‬انجمن سلطنتی شیمی‪ ،‬لچورث‪ ،‬هرتس‬

‫‪.‬تجزیه و تحلیل فیتوشیمیایی ‪، FA (1995) 177 ،6‬توماس‪-‬باربران‬

‫‪Van Sumere, CF (1969) Revue des Fermentations et des Industries Alimentaires‬‬

‫‪)، 139-91 ،24.‬بروکسل(‬

‫و دنز‪ ،‬بی‪Zenk، MH، El-Shagi، H.، Arens، H.، Stockigt، J.، Weiler، EW. )1977( .‬‬
‫‪.‬کشت بافت گیاهی و کاربرد بیوتکنولوژیکی آن‪ ،‬اسپرینگر‪ ،‬برلین‬
‫‪2‬‬

‫ترکیبات فنلی‬

‫‪2.1‬‬ ‫‪40‬‬ ‫مقدمه‬

‫‪2.2‬‬ ‫‪42‬‬ ‫فنل ها و اسیدهای فنولیک‬
‫‪2.3‬‬ ‫‪49‬‬ ‫فنیل پروپانوئیدها‬
‫‪2.4‬‬ ‫‪60‬‬ ‫رنگدانه های فالونوئیدی‬
‫‪2.5‬‬ ‫‪66‬‬ ‫آنتوسیانین‬
‫‪2.6‬‬ ‫‪74‬‬ ‫فالونول ها و فالون ها‬
‫‪2.7‬‬ ‫‪83‬‬ ‫فالونوئیدهای جزئی‪ ،‬گزانتون ها و استیلبن ها‬
‫‪2.8‬‬ ‫‪90‬‬ ‫تانن‬
‫‪2.9‬‬ ‫‪96‬‬ ‫پیگمنت کینون‬

‫مقدمه ‪2.1‬‬

‫اصطالح ترکیب فنلی طیف وسیعی از مواد گیاهی را در بر می گیرد‬

‫که به طور مشترک دارای یک حلقه معطر حاوی یک یا چند هیدروکسیل هستند‬
‫جایگزین ها مواد فنلی معموالً محلول در آب هستند‪ ،‬زیرا آنها‬
‫اغلب در ترکیب با قند به عنوان گلیکوزید رخ می دهد و آنها هستند‬
‫معموالً در واکوئل سلولی قرار دارد‪ .‬از جمله ترکیبات فنلی طبیعی‬
‫پوند‪ ،‬که چندین هزار ساختار آن شناخته شده است‪ ،‬فالونوئیدها‬
‫بزرگترین گروه اما فنل های تک حلقه ای ساده‪ ،‬فنیل پروپانوئیدها را تشکیل می دهند‬
‫و کینون های فنولیک همگی در تعداد قابل توجهی وجود دارند‪ .‬چندین مورد مهم‬
‫گروه های رنگی از مواد پلیمری در گیاهان ‪ -‬لیگنین ها‪ ،‬مالنین ها و‬
‫تانن ها ‪ -‬پلی فنلی هستند (شکل ‪ 2.1‬را ببینید) و واحدهای فنلی گاه به گاه‬
‫‪.‬در پروتئین ها‪ ،‬آلکالوئیدها و در بین ترپنوئیدها وجود دارد‬

‫در حالی که عملکرد برخی از طبقات ترکیبات فنلی خوب است‬

‫ایجاد شده (مثالً لیگنین ها به عنوان ماده ساختاری دیواره سلولی؛‬
‫آنتوسیانین ها به عنوان رنگدانه های گل)‪ ،‬هدف از کالس های دیگر هنوز یک است‬
‫موضوع حدس و گمان به عنوان مثال‪ ،‬فالونول ها به نظر مهم هستند‬
‫و آنها )‪ (Galston, 1969‬تنظیم کنترل رشد در گیاه نخود‬
‫نشان داده اند )‪ (Isman and Duffey, 1981‬اثرات نامطلوب بر تغذیه حشرات‬
‫‪،‬که ممکن است عوامل مقاومت طبیعی باشند‪ .‬هیچ یک از این توابع‬
‫‪.‬با این حال‪ ،‬هنوز به طور محکم ایجاد شده است‬