ТЕМА 4.

Микробна изменчивост. Мутация. Мутагенни фактори - химични и физични,

механизъм на действие, практическо значение и приложение. Генетичен обмен
между бактериите: трансформация, трансдукция, конюгация - механизми. Значение
на бактериалната и фагова генетика. Генно инженерство. Съвременни генетични
методи в клиничната микробиология. ДНК - сонди, PCR - полимеразна верижна
реакция.
Хим.структура на бактер.ДНК е подложена на редица промени с резултат на мутации
или обмен на ген.материал между две клетки.Мутации се нар.всички промени в
базовата последователност на ДНК .Чрез тях бактериите придобиват нови с-
ва,например лекарствена резистентност към АБ и т.н.Мутациите са относително рядък
феномен,но независимо от това са важен фактор за еволюцията.
Наследственост- предаване на свойствата на бактериите в поколението. Осъществява
се чрез точно разделяне на денома на вируса,фага,бактерия при репликацията му.
Изменчивост-промяна на свойствата на МО-големина,форма,подвижност.Получените
изменения могат да се унаследят или предадат в поколението.
Има 3 форми:фенотипна,мутационна и рекомбинационна.
Модификационната-не се предава в поколението. Геномът на МО не се променя,само
се активира или потискат гени соглед адаптация към средата.При връщане към
първоначалната среда се възстановява изходната форма.Може да е засегната
големината,формата. Има значение за видообразуването и еволюцията.
Мутационна-основен мех. на микробна изменчивост с решаващо значение за
видообразуването. Тя е внезапно разрушаване или изменение на част от генома като
изчезва или се появява нов признак.Биват спонтанни(въздействието на метаболити на
самия бактерии);индуцирани-мутагенни фактори-ув светлина,химични,лъчения. Мех. е
рзличен,но се променят последователността на азотните бази.
МУТАГЕНИ- Азотната к-на, превръща аденина в хипоксантин, който от своя страна се свързва с
цитозин, вместо с тимин. По-нататък цитозина се свързва с гуанин. Така двойката аденин-
тимин се превръща в цитозин-гуанин.Подобно е действието и на т.нар. базови аналози– 5-

бромурацилът. Алкилиращите вещества хидролизират базите и ги разрушават, което води до

нарушаване на тяхнатa последователност и подреждане.Акридиновите бои могат да
вмъкнат или да отнемат една база от веригата на ДНК и така нарушават реда в нейната
последователност.Различните видове радиации водят до деполимеризация на базите.
Видове мутации и мутанти- Когато при мутацията се изменя сравнително голяма част от
генома микроорганизмът умира. Такива мутации се наричат летални. Такива са по-голямата
част от мутациите при бактериите засягащи цял един ген;При т.нар. точкови мутации, когато се
зaсяга само двойка бази полученият мутант може да остане жив и всъщност такъв мутант има
значение за еволюцията;Когато липсва определена част от генома се говори за делеция, а при

вмъкване на допълнителна част от него се говори за инсерция. Когато една пуринова база се
замени с друга пуринова, а една пиримидинова с друга пиримидинова се говори за транзиция,
а когато една пуринова база се замени с пиримидинова – за трансверзия. Понякога станалите
мутации могат да се възстановят (обратни мутации).

Мутациите най-често засягат способността да се синтезират аминокиселини, ензими,

променят чувствителността към лекарствени средства или патогенността на съответния
микроорганизъм.
Рекомбинационната изменчивост се изразява в комбиниране на наследствен материал от два
бактерия (донор и реципиент), които се различават по своя геном. Тя се реализира чрез:

 Трансформация- Трансформацията представлява рекомбинационен процес, при който

един жив бактерий включва в своя геном при обмяната на веществата частица чужда
ДНК от хромозома или плазмид. Наблюдавани от Грифит-инж на мишки смес
вирулентни и живи невирулентни пневмококи и изолира живи
вирулентни.Може и при други бактерии,става и при естествени условия
 Трансдукция- Трансдукцията е рекомбинационна форма на изменчивост на
бактериите, при която генетичен материал от един бактерий (донор) се пренася в друг
(реципиент), с помощта на бактериофаг.За да се осъществи трансдукция фагът трябва
да премине в състояние на профаг /умерен фаг/, т.е. да се намножава свързано с

генома на бактерия, без да го разрушава. Под действието на външни фактори -

промяна в tC, йонизиращо облъчване и др., умереният фаг може да се активира, да
разруши бактерия и напускайки го, някои от „новите фаги“ случайно могат да отнесат
със себе си частица от генома на бактерия в друг бактерий в хода на следващо
заразяване.Ако във втория хазаин фагът продължи да се развива като умерен фаг, с
този материал се осъществява рекомбинация с генома на бактерия – реципиент.

 Конюгация- Конюгацията е рекомбинационен процес, при който се извършва обмен на

генетичен материал между две живи бактериални клетки. Това става чрез свързване с
помощта на секс-пили, през които се предава генетичен материал от единия бактерий в
другия.Този процес се разглежда като полов процес при бактериите и се осъществява
чрез конюгативен плазмид. Конюгацията е осъществена експериментално за първи път
при щам E. coli.

Донора осъществява контакт с реципиента посредством sex-пили;F – фактора инициира

трансфер с цел да копира себе си;Реципиента се конвертира в нова донорна клетка.

Насоченото изучаване на този щам показало, че има различия между отделните индивиди.
Някои от тях съдържат т.нар. F-плазмид /F фактор = плодовитост, секс-фактор/, а други нямат
такъв фактор.При конюгация, този плазмид се предава от едните индивиди на другите. Така се
установява, че F + са донори, а F - реципиенти.Оказва се, че при конюгацията някои F+
индивиди могат да предават и генетичен материал, който детерминира други важни свойства –
синтез на аминокиселини, ензими, резистентност към АМС и пр., при това с много по-голяма

честота. Те са наречени Hfr, т.е. индивиди с висока честота на рекомбинация.Целият процес на

конюгацията трае около 2 часа. Той може да бъде прекъснат в различни интервали, при което
се предава различен обем генетичен материал. Чрез конюгация на E. coli К12 е направена
генетична карта.

Генно инженерство. Генното инженерство представлява едно от най-крупните

постижения на биологията през последното десетилетие.То позволява да се рекомбинира
генетичен материал от далечни видове, а това дава възможност да се променят основни
биологични закономерности и да се създават „нови“ видове организми.

Генното инженерство разкрива необозрими перспективи със сложни и трудно

предвидими научни и социални последици.

Малко за ПСР!

PSR- полимеразо верижна реакция – удвояване на ДНК

Центруфугира се- разделяне на ДНК,загряване до 95градуса,идеята е да се разделят

ковалентните връзки на праймерите в ДНК м-лата .След това от разделенията на две,ДНК м-
лата започва да се синтезира нова молекула ДНК ,която е абсолютно същата,но на обратно на
едната верига и на др.верига.Процесът се повтаря от 70 до 90 пъти в зависимост колко ДНК м-
ли ни трябват .Отново имаме процес на сдвояване на тези молекули и след това
умножаване ,правим много молекули ДНК на дадения бактерии.

Multiplex PSR- за диагностика с много праимери

Real time PSR- правят р-ция само с една молекула и един праймер