THE TCA CYCLE

AND OXIDATIVE
PHOSPHORYLATION
II. Sinh tổng hợp Acetyl CoA
A. Điểm đầu vào chính của chu trình TCA là thông qua việc tạo ra acetyl CoA
bằng quá trình khử carboxyl oxy hóa pyruvate.
1. Pyruvate có nguồn gốc từ quá trình đường phân hoặc từ quá trình dị
hóa một số axit amin nhất định được vận chuyển từ tế bào chất vào chất nền ty thể.
2. Đơn vị vận chuyển pyruvate chuyên dụng chịu trách nhiệm thực hiện
bước này.
B. Phức hợp pyruvate dehydrogenase (PDH), bao gồm nhiều bản sao của ba
enzyme riêng biệt, xúc tác cho quá trình tổng hợp acetyl CoA từ pyruvate(Figure
7–1).
1. PDH loại bỏ CO2 và chuyển nhóm acetyl còn lại sang coenzym thiamine
pyrophosphate liên kết với enzyme,
2. Dihydrolipoyl transacetylase chuyển acetyl CoA sang coenzym axit lipoic của
nó bằng cách khử axit lipoic.
3. Dihydrolipoyl dehydrogenase chuyển electron từ axit lipoic sang NAD+
để tạo thành NADH và tái tạo dạng axit lipoic bị oxy hóa.
4. The overall reaction catalyzed by the PDH complex is shown below.

Pyruvate + NAD+ + CoA → Acetyl CoA + NADH + H+ + CO2

 C. Sự điều hòa PDH xảy ra thông qua quá trình phosphoryl hóa enzyme và bằng
sự điều hòa dị lập thể, cho phép đáp ứng nhanh chóng với nhu cầu năng lượng
thay đổi của tế bào hoặc cơ thể.
1. PDH kinase inactivates PDH by phosphorylation of the enzyme.
a. PDH kinase is activated by acetyl CoA, ATP, and NADH, tất cả đều là dấu
hiệu cho thấy mức năng lượng tế bào cao, do đó thúc đẩy sự ức chế PDH.
b. PDH kinase bị ức chế bởi CoA, pyruvate và NAD+, tất cả đều được tìm
thấy khi mức ATP của tế bào thấp.
2. PDH phosphatase removes the phosphate from PDH, returning the enzyme
to its active form.
3. Dạng PDH không được phosphoryl hóa cũng có thể bị ức chế trực tiếp bởi
NADH và acetyl CoA.
III. Steps of the TCA cycle
A. Acetyl CoA đi vào chu trình TCA bằng cách ngưng tụ với oxaloacetate để
tạo thành citrate (Hình 7–2).
1. Phản ứng này được xúc tác bởi citrate synthase.
2. Citrate sắp xếp lại thành isocitrate trong phản ứng được xúc tác bởi
aconitase.
B. Isocitrate dehydrogenase chuyển isocitrate thành -ketoglutarate.
1. Đây là phản ứng kép kết hợp quá trình khử carboxyl để giải phóng
CO2 và quá trình oxy hóa, đồng thời thu giữ các electron trong NADH.
2. Isocitrate dehydrogenase là enzyme điều hòa chính của chu trình
TCA.
C. Sự chuyển đổi α-ketoglutarate thành succinyl CoA, CO2 và NADH được
xúc tác bởi phức hợp -ketoglutarate dehydrogenase.
1. Phản ứng này một lần nữa thể hiện quá trình oxy hóa và khử
carboxyl kết hợp.
2. Tương tự như phức hợp PDH, phức hợp α-ketoglutarate
dehydrogenase được tạo thành từ ba hoạt động enzyme có nhiều hoạt động và
yêu cầu coenzym tương tự nhau.
D. Succinyl CoA bị thủy phân thành succinate và CoA trong phản ứng được xúc tác bởi
succinyl CoA synthase.
1. Phản ứng này liên quan đến việc kết hợp đồng thời GDP và Pi để tạo thành GTP.
2. Đây là một ví dụ khác của quá trình phosphoryl hóa ở mức cơ chất.
E. Succinate được chuyển thành fumarate bằng cách chuyển electron sang FAD để tạo
thành FADH2, được xúc tác bởi succinate dehydrogense.
F. Fumarate trải qua quá trình hydrat hóa thành malate, chất này được chuyển thành
oxaloacetate, hoàn thành chu trình.
1. Một NADH khác được hình thành trong quá trình tổng hợp oxaloacetate từ malate.
2. Oxaloacetate sau đó có thể phản ứng với một phân tử acetyl CoA khác để bắt đầu
lại chu kỳ.
G. Quá trình oxy hóa pyruvate tạo ra CO2, electron và GTP.
1. Quá trình oxy hóa hoàn toàn một phân tử pyruvate có thể được mô tả bằng phương
trình sau:
Pyruvate + 4 NAD+ + FAD + GDP + Pi → 3 CO2 + 4 NADH + 4 H+ + FADH2 + GTP
2. Một trong các nguyên tử cacbon của pyruvate được giải phóng dưới dạng CO2
trong quá trình hình thành acetyl CoA.
3. Trong mỗi lượt của chu trình TCA, oxaloacetate được tái sinh và các chất chuyển hóa của
acetyl CoA được giải phóng.
a. Hai nguyên tử cacbon còn lại của pyruvate được giải phóng dưới dạng
CO2.
b. Năm cặp electron được tách ra để đi vào chuỗi vận chuyển điện tử; bốn
cặp được ghi vào NADH và một cặp được ghi vào FADH2.
4. Năng lượng cũng được thu giữ thông qua quá trình phosphoryl hóa ở mức cơ chất
IV. Regulation of the TCA Cycle
A. Availability of acetyl CoA from pyruvate is controlled by PDH activity, which
is regulated (Quy định) by the concentration of NADH and the ADP/ATP ratio.
B. The rate-limiting step of the TCA cycle is the synthesis of α-ketoglutarate from
citrate, catalyzed by isocitrate dehydrogenase (Figure 7–2).
1. Isocitrate dehydrogenase is allosterically inhibited by NADH, an indicator of
the availability of high levels of energy.
2. The enzyme is activated by ADP and Ca2+, which signal a need for energy in
the cell.
C. Conversion of α-ketoglutarate to succinyl CoA, catalyzed by α-ketoglutarate
dehydrogenase, is inhibited by NADH and ATP.
V. Role of the TCA Cycle in Metabolic Reactions
Acetyl CoA and the TCA cycle intermediates are involved in many cellular
reactions (Figure 7–3).
1. Acetyl CoA is the precursor for fatty acid and sterol biosynthesis.
2. The interconversion of α-ketoglutarate and glutamate are important for
nitrogen metabolism.
3. The catalytic degradation of amino acids and pyrimidines yields pyruvate and
several TCA cycle intermediates, which can then be metabolized in this way
to yield energy.
4. Pyruvate and TCA cycle intermediates serve as precursors for the biosynthesis
of amino acids (Chapter 9).
VI. Synthesis of Oxaloacetate from Pyruvate
A. The ability to synthesize new oxaloacetate from pyruvate is essential to
maintain activity of the TCA cycle for cell growth and for gluconeogenesis.
1. Pyruvate carboxylase catalyzes the synthesis of oxaloacetate from pyruvate
and CO2.
2. This reaction occurs within the mitochondria.
B. Oxaloacetate synthesis is also needed when mitochondria are formed during
cell growth and division.
C. Oxaloacetate can also be converted to malate and transported to the cytoplasm
for gluconeogenesis under fasting conditions (see Chapter 6).
VII. The Electron Transport Chain
The electrons released in glycolysis and transported into the mitochondria by
shuttle mechanisms and those derived from the TCA cycle are transferred to
oxygen and combined with protons to form H2O.
1. The electron transport chain is located in the inner mitochondrial
membrane (Figure 7–4).
a. The electron transport chain is organized into four complexes, each of
which is composed of several integral membrane proteins and coenzymes
capable of reversible oxidation-reduction.
b. Each complex can accept electrons and then transfer them to other
complexes through mediation of mobile carriers, ubiquinone (coenzyme Q)
and cytochrome c.
c. Electrons carried by NADH are transferred to complex I.
d. Succinyl dehydrogenase of the TCA cycle is complex II with its FAD
coenzyme, residing on the inner surface of the inner mitochondrial membrane.
2. Electrons from both complex I and complex II are transferred to
ubiquinone, a lipophilic compound residing in the membrane.
3. Ubiquinone delivers electrons to complex III, which transfers them to
complex IV via cytochrome c.
4. Complex IV with its important cytochrome a + a3 catalyzes the formation
of water from the electrons, protons, and oxygen.
VIII. Energy Capture During Electron Transport
A. As electrons pass through complexes I, III, and IV (but not complex II),
protons are transported across the inner mitochondrial membrane from the matrix
to the intermembrane space, creating a pH gradient that represents a form of
stored energy.
B. The pH gradient is used to drive ATP synthesis by the movement of protons
back to the matrix through a transmembrane protein complex, or ATP synthase.
1. This mechanism was first described as the chemiosmotic theory of ATP
generation, or the Mitchell hypothesis.
2. As protons pass through a channel in the ATP synthase complex, ADP and Pi
are joined to form ATP.
C. ATP synthesized in the mitochondria is translocated to the cytoplasm by a
cotransporter that simultaneously brings ADP into the mitochondria.
IX. Energy Yield of Oxidative Phosphorylation
A. The ATP yield from glucose metabolism via oxidative phosphorylation is
approximately 34–36 ATP molecules per glucose molecule (Table 7–1).
B. The calculated ATP yield is somewhat variable because glycolytic electrons
transferred by the glycerol phosphate shuttle bypass complex I of the electron
transport chain.
X. Inhibitors of ATP Generation
A. Transport inhibitors bind to one of the electron transport complexes and
block the transfer of electrons to oxygen, thus interfering with the ability to create
a proton gradient (Table 7–2).
B. The ATP synthase inhibitor oligomycin binds directly to the enzyme
complex and plugs up the H+ channel, which blocks ATP formation.
C. Uncoupling agents provide an alternate pathway to transfer protons back
into the mitochondrial matrix, which dissipates the proton gradient and bypasses
ATP formation by the ATPase.
1. Thermogenin is a natural uncoupler found in the mitochondria of brown
fat in hibernating animals and infants.
a. Thermogenin is a membrane protein that permits the organism to keep
warm through metabolism without having to utilize ATP for movement.
b. Under such conditions, up to 90% of ATP derived from fatty acid
oxidation in these tissues is expended as heat.
2. Chemical agents (such as 2,4-dinitrophenol) that are able to bind a proton
and be soluble in the lipid bilayer can also act as uncoupling agents.