Тема №1. Метаболізм пуринових нуклеотидів.

Порушення обміну пуринових нуклеотидів та

лікарські засоби, які нормалізують пуриновий обмін.
Мета заняття.
 вивчити метаболічні перетворення пуринових нуклеотидів;
 знати механізм дії фармацевтичних препаратів,які використовуються для корекції порушень
обміну пуринових нуклеотидів.
 оволодіти методами визначення кількості сечової кислоти у біологічних рідинах, вміти
інтерпретувати отримані дані.
Теоретичні питання
1. Біосинтез пуринових нуклеотидів: схема реакцій синтезу ІМФ; утворення АМФ і ГМФ та його
регуляція.
2. Катаболізм пуринових нуклеотидів.
3. Спадкові порушення метаболізму пуринових нуклеотидів. Подагра. Синдром Леша-Ніхана.
4. Використання лікарських засобів для корекції порушень обміну пуринових нуклеотидів.

Практична робота
Дослід 1. Визначення концентрації сечової кислоти в біологічних рідинах ферментативним
методом.
Принцип методу. Сечова кислота під дією ферменту урикази окиснюється до алантоїну з
утворенням гідроген пероксиду. Гідроген пероксидю реагує з хромогеном (4-аміноантипирин з N-
етил-N-(2-гідрокси-3-сульфопропил)-m-толуїдином [TOOS]) з утворенням синьо-фіолетового
комплексу. Реакцію каталізує пероксидаза.
Уриказа
Сечова кислота + Н2О + О2 ----------------> Алантоїн + СО2 + Н2О2
Пероксидаза
2Н2О2 + ТООS + 4-Аміноантипирин ------------------------> Індамін + 3Н2О
Інтенсивність забарвлення розчину при довжині хвилі 550 нм прямо пропорційна концентрації
сечової кислоти в ньому. Лінійність методу: 65,7-1190 мкмоль/л.
Хід роботи: Беруть три пробірки і вносять у них реактиви згідно таблиці:

Контрольна Стандартна Дослідна проба, мл

Реактиви
проба, мл проба, мл
Сеча (розведена дистильованою 0,1
водою у співвідношенні 1:10)
Стандартний розчин (розчин - 0,1 -
сечової кислоти 357 мкмоль/л)
Вода дистильована 0,1 - -
Робочий розчин (хромоген- 2 2 2
фосфатний буфер, уриказа,
пероксидаза, 4-Аміноантипирин)

Перемішати вміст кожної пробірки. Інкубувати 10 хвилин при кімнатній температурі. Виміряти
оптичну щільність дослідної і стандартної проб проти контрольної проби при довжині хвилі 550 нм в
кюветі товщиною 5 мм.
Розрахунок вмісту сечової кислоти в сечі за стандартом концентрації сечової кислоти проводять за
формулою:

,
де Едос – оптична щільність дослідної проби;
Ест – оптична щільність стандартної проби;
Сст – концентрація сечової кислоти в стандартному розчині;
11 – коефіцієнт розведення.
 Якщо концентрація сечової кислоти перевищує 1190 мкмоль/л (точка поза зоною лінійності
калібрувального графіка), дослідний зразок сечі слід розвести 1:1 фізіологічним розчином і
повторити вимірювання, а отриманий результат розрахунку помножити на 2.
Заповнити таблицю:
№ зразка Екстинція Вміст сечової кислоти
Контрольна проба
Стандартна проба
Дослідна проба

Висновок:

Значення для фармації та клініки. Утворена в результаті розпаду пуринових основ сечова
кислота виділяється нирками. У нормі в людини з сечею виділяється 1,60 – 3,54 ммоль/добу (270 –
600 мг/добу) сечової кислоти. Нормальний вміст сечової кислоти в сироватці крові становить для
чоловіків – 240 – 530 мкмоль/л (0,05 – 0,06 г/л), для жінок приблизно на 25 % менше – 185 – 440
мкмоль/л (0,04 – 0,05 г/л). Гіперурікемія – зростання концентрації сечової кислоти в крові,
гіперурикурія (гіперуратурія) – збільшення вмісту сечової кислоти в сечі. Гіперурикемія
супроводжує подагру – захворювання, що виникає за умов преципітації уратів у тканинах, першою
чергою, у суглобах. Сечова кислота та її солі надзвичайно погано розчиняються у воді, їх
концентрація в рідинах організму за умов норми наближена до межірозчинності. Для лікування
подагри використовують препарати, що гальмують утворення сечової кислоти (алопуринол) або
стимулюють виведення її нирками (антуран, цинхофен). У хворих на подагру концентрація сечової
кислоти у крові майже завжди перевищує 0,075 – 0,080 г/л, а під час утворення подагричних
ущільнень вміст її рідко буває нижчим за 0,08 – 0,09 г/л.
Література
Основна:

1. Біологічна і біоорганічна хімія: у 2 книгах.: підручник — Книга 2. Біологічна хімія: Підручник

для мед. ВНЗ ІV р. а.. – 2-е вид., випр. Затверджено МОН / За ред. Ю.І. Губського, І.В.
Ніженковської. — К.: ВСВ «Медицина», , 2017. – 544с.
2. Біохімія: підручник / за загальною редакцією проф. А. Л. Загайка, проф. К. В. Александрової –
Х. : Вид-во «Форт», 2014. – 728 с.
3. Yu.Gubsky Biological chemistry: textbook/edited by Yu.Gubsky. – Vinnytsia: Nova Knyga, 2017 –
488 p.
Додаткова:

1. Біологічна хімія: підручник / О. Я. Скляров, Н. В. Фартушок, Т. І. Бондарчук. – Тернопіль:

ТДМУ, 2014. – 702 с.
2. Біологічна і біоорганічна хімія : базовий підручник : у 2 кн. / кол. авт.; за ред. чл.-кор. НАМН
України, проф. Б.С.Зіменковського, проф. І.В. Ніженковської. — Кн. 1 : Біоорганічна хімія /
[Б.С. Зіменковський, В.А. Музиченко, І.В. Ніженковська, Г.О. Сирова ]. — К. : ВСВ
«Медицина», 2014.-272 с.
3. М. М. Корда Біологічна хімія   Лабораторний практикум  - Тернопіль : ТДМУ, 2015. - 216 с.
4. Lehninger Principles of Biochemistry 6th ed - David L. Nelson, Michael M. Cox -W H Freeman and
Company – 2013. – 1010 p.
5. Биохимия : учебник / под ред. чл.-корр. Е. С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп. - М.: ГЭОТАР-
Медиа, 2014. - 768 с.
6. Биологическая химия с упражнениями и задачами: учебник / под ред. С.Е. Северина. -
2-е изд., испр. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 624 с.
Завдання для самоконтролю
Завдання 1. Жінка 40 років звернулася до лікаря зі скаргами на біль у дрібних суглобах ніг і рук.
Суглоби збільшені, мають вигляд потовщених вузлів. У сироватці крові – підвищений вміст уратів.
Причиною є порушення обміну:
А. Амінокислот.
В. Пуринів.
С. Вуглеводів.
D. Ліпідів.
Е. Піримідинів.
Завдання 2. Хворому на подагру лікар призначив алопуринол. Яка властивість алопуринолу
забезпечує терапевтичний ефект у цьому випадку.
А. Прискорення катаболізму піримідинових нуклеотидів.
В. Збільшення швидкості виведення азотовмісних речовин.
С. Конкурентне інгібування ксантиноксидази.
D. Уповільнення реутилізації піримідинових нуклеотидів.
Е. Прискорення синтезу нуклеїнових кислот.
Завдання 3. До складурибонуклеозидів входять:
A.лише азотисті основи
B.азотисті основи та дезоксирибоза
C.азотисті основи та рибоза
D.азотисті основи,рибоза,фосфат
E.азотисті основи та глюкоза
Завдання 4. Чоловік 55 років, що страждає на болі в нирках, надійшов в лікарню. При
ультразвуковому обстеженні пацієнта виявлено ниркові камені. Наявність якої речовини в сечі є
найвірогіднішою причиною утворення каменів в даного пацієнта?
A. Сечової кислоти
B. Білірубіну
C. Білівердину
D.Уробіліну
E. Креатиніну
Правильність рішення перевірте, порівнявши їх з еталонами відповідей.
Еталони відповідей до рішення завдань для самоперевірки й самоконтролю вихідного рівня:
Завдання 1 – В, Завдання 2 –С, Завдання 3 - D. Завдання 4 - А.
Завдання 5. Заповнити таблицю
№ Пуринові нуклеотиди
1. Структура
2. Джерела для синтезу
3. Кінцевий продукт
обміну
4. Порушення обміну
5. Фармпрепарати для
корекції порушення
обміну