chap14.

생명공학과 산업: 미생물의 역할

학습목표

14.1 세균 세포가 특정한 물질을 생산하기 위해 유전적으로 어떻게 조작되는지 설명할 수 있다.

14.2 여러 생명공학 효소들을 확인하고, 인간의 의학적 상태와 장애를 완화하기 위한 용도를 설명할
수 있다.

14.3 감염성 병원체를 동정하기 위한 진단 검사에서 DNA 탐침을 사용하는 방법을 설명

14.4 미생물이 생산하는 일차 대사물과 이차 대사물을 구분할 수 있다.

14.5 항생제, 비타민, 효소, 바이오 연료의 생산에 있어 미생물의 산업적 역할에 대해 논의 “

서론

거미의 비단 응접실

거미줄: 거미가 새끼를 보호하기 위한 둥지를 만들기 위해 뽑는 단백질 섬유, 가장 강력한 천연

섬유로 알려져 있음

-강철보다 강하고 튼튼해서 산업 제품이나 생활용품에 활용될 수 있는 높은 잠재력

-매우 얇고 강력해서 수술용 봉합사를 만드는 데 활용

-방탄조끼를 만드는 합성 섬유보다 더 큰 인장 강도를 갖는 의류 제작에 사용

*인장강도: 재료의 섬유를 당겨서 절단하는 데 필요한 최대한의 응력

많은 양의 거미줄을 생산하려면?

->거미줄 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 제작한 후, 유전자 조작을 통해 세균에 삽입하고 키워
천연 거미줄과 동일한 생합성 거미줄을 생산하는 방법을 이용

Microbial technology(미생물 생명공학): 미생물의 유전체를 변형하여 형질전환된 생명체로

자연적으로는 존재하지 않는 물질을 생성

Industrial microbiology(산업 미생물학): 이런 제품의 생산을 상업적으로 필요한 수준까지 대량화

14.1 미생물과 생명공학: 가능성을 보다

유전자 조작된 세균 세포

유전자 조작(genetic engineering): 생명체의 유전체에 있는 DNA 를 바꾸는 과정

생명공학적 생산물이 인간의 장애를 완화하는 데 도움을 준 예

-재조합인간성장호르몬(recombinant human growth hormone,

rhGH)

hGH 유전자를 분리하여 세균 플라스미드에 삽입한 후, 이를

대장균 세포에 넣어줌. 이 세균이 생산한 성장호르몬을 분리/
정제하여 작은 키를 치료하는데 사용
14.2 미생물 생명공학 제품들: 의료 치료제와 백신

- 치료제(Therapeutics)

제 1 형 당뇨병(Type 1 diabetes): 췌장에서 인슐린이 거의 또는 전혀 생성되지 않는 만성 질환, 높은

혈당 수치->recombinant insulin

혈우병 A(Hemophilia A): 필수 혈액 응고 단백질인 응고인자 VIII 를 생산하지 못해 혈액이

정상적으로 응고되지 않는 질병, 흔한 유전성 혈액 질환 ->recombinant clotting factor VIII (rFVIII)

허혈성 뇌졸증(Ischemic stroke): 혈관을 막는 혈전이 뇌로 이어지는 혈류를 차단함. ->recombinant

tissue plasminogen activator (rtPA); 단백질 소화효소로 작용하여 혈전을 분해

인터페론(Interferons): 바이러스 감염에 자극받으면 생성되는 여러 종류의 신호 단백질.

->interferon-alpha 제제는 바이러스성 질환이나 암에 유용함.

낭포성 섬유증(Cystic fibrosis): 끈적끈적한 점액에 의한 호흡기 질환, Pseudomonas aeruginosa 등의

병원균이 치명적으로 작용함 -> DNA 를 선택적으로 절단하는 recombinant human
deoxyribonuclease I (rhDNase, pulmozyme)를 사용하면 점도가 낮아지고 폐 기능이 향상됨

-백신(Vaccines)

: 특정 감염성 또는 악성 질병에 능동적 획득 면역을 제공하는 생물학적 제제

: 미생물 및 바이러스 물질로 생산 (일반적으로 약독화, 불활성화 또는 죽은 유기체 또는 이들에서

파생된 정제된 제품 포함)

: B 형 간염(Hepatitis B), 뇌수막염(meningitis), 독감(influenza), 자궁 경부암(cervical cancer vaccines)

과 같은 질병을 예방하는 데 도움을 줌

미생물 생명공학을 통한 새로운 제품의 개발; 외래 유전자를 세균 세포에 넣어서 화학적으로 유용한
제품을 얻음.
14.3 미생물 생명공학 제품들: 진단 도구와 검사

주로 미생물 동정을 위해 DNA 시료를 분석하는 방법을 활용함.

진단 도구

-Polymerase chain reaction (PCR) 중합효소 연쇄반응

: 수십억 개의 동일한 DNA 서열을 복제하여 생성하는 방법

준비물: 열안정성 DNA 중합효소(polymerase…), dNTP(A,T,G,C), 프라이머, 조효소, template DNA 등

*주로 Taq 이라고 불리는 내열성 중합효소를 사용함

증폭과정

0. 병원균에서 DNA 시료를 분리한 후 PCR mixture 를 만들고 PCR 진행

1. (denaturation) 고온에서 이중나선이 풀려 단일가닥을 형성

2. (annealing) 단일가닥에 프라이머 결합

3. (extension) 프라이머 DNA 에 뉴클레오티드를 하나씩 첨가하는 방식으로 단일가닥에 상보적인

새로운 DNA 가닥 합성

4. 혼합액을 다시 반복하여 단일가닥 DNA 와 새로 합성된 DNA 가 결합하여 이중가닥 DNA 를

형성하게 됨. (->이때 DNA 분자 수가 처음의 2 배가 됨.)
이 과정이 반복되어 최적의 조건에서 하나의 DNA 염기 서열은 엄청나게 증폭될 수 있음.

-DNA 탐침

병원체에 대한 탐침을 만들기 위해서

-병원체 고유한 DNA 서열을 생성한 다음 PCR 수행

->DNA 탐침으로 사용될 수십억 개의 동일한 단편 생성

-이 단편을 단일가닥으로 분리한 후 표적 단편을

식별하기 위해 방사성 또는 형광물질을 DNA 탐침에
부착함

->활용) 탐침을 이용하여 어느 환자가 바이러스에

감염되었는지 등을 검사함.
진단 검사(Diagnostic tests)

-질병 진단(Disease diagnosis)

Ex) HIV 탐침을 이용하여 어느 환자가 AIDS 바이러스에

감염되었는가를 검사

환자 조직으로부터 DNA 를 분리하고 단일가닥

조각으로 자른 후 고체 표면(지지대)에 부착

HIV 프로바이러스 절편에 결합할 수 있는 DNA 탐침을

환자 시료와 mix

HIV 프로바이러스가 존재하는 경우(AIDS 바이러스에

감염된 경우) DNA 탐침은 상보적인 염기쌍을 갖는
목적 DNA 단편과 특이적으로 결합함*(오른쪽)

형광 또는 방사성 표지가 결합이 발생했다는 시각적 신호를 제공함

“PCR 및 DNA 탐침은 감염이 의심되는 병원체를 검출할 수 있게 해줌”

-전염병 진단(Epidemic diagnosis)

using antibodies to isolate the cause of an epidemic

using DNA probes

14.4 미생물과 산업: 함께 일하기

산업미생물(industrial microbe)

Primary metabolites 일차 대사산물

-미생물의 정상적인 성장과 번식에

직접적으로 관여

-주로 대수증식기에 생산됨

-피루브산, 미생물 발효의 최종산물 등

Secondary metabolites 이차 대사산물

-대사의 부산물, 성장과 번식에 필수적이진

않지만 산업 미생물학적 관점에서 매우
유용함.

-일반적으로 미생물의 대수증식기의 마지막 시점이나 정체기에서 생성됨.

-대부분의 항생제, 일부 비타민, 아미노산, 효소 등

대사산물의 생산과 미생물의 대량 배양

Industrial fermentation 산업적 발효

: 대량의 대사산물을 산업적 규모로 생산하기 위해 미생물을 대량 배양하는 데 필요한 모든 절차

: 발효조(fermentor) 혹은 생물반응기(bioreactor)라고 불리는 대형 탱크가 주로 사용됨

: 온도, pH, 산소, 농도, 영양수준 등의 환경 조건이 컴퓨터로 조절됨

-최대량의 대사산물이 미생물에서 생산되면, 대형 발효조의 배양액은 여과된 후 추출과 정제를

거쳐서 제품의 순도를 측정한 뒤 포장되어 시중 판매됨

14.5 미생물과 산업: 제품들

항생제(antibiotics)

세균성 병원균을 죽이는 데 사용되는 세균 및

곰팡이의 화학적 부산물

5,000 종 이상이 밝혀졌지만, 많은 경우 독성

부작용이 있어 약 100 종만이 의료용으로
유용하게 쓰임

새로운 항생제 개발에 드는 시간과 비용은

엄청남; 발견에서부터 FDA 의 승인을 거쳐
상품화되기까지 10 년 이상의 시간과 무려 10
억 달러의 예산이 필요함.

모든 항생제의 65% 이상이 미생물에 의해

생성됨.

건강보조제(nutraceuticals)

-비타민

: 연간 산업적 생산량은 항생제에 이어 두번째로 많다.

: 대부분 화학적 공정을 통해서 생산되지만, 일부 비타민의 경우 미생물을 이용한 생산이 훨씬

효율적임 ex. Riboflavin (vit. B2), Cobalamin (vit. B12)

Riboflavin (vit. B2): 사상곰팡이 Ashbya gossypii 의 부산물. 밀가루, 빵, 시리얼 등에 첨가됨

Cobalamin (vit. B12): Propionibacterium, Pseudomonas and Streptomyces 등의 세균이 만들어 냄

-아미노산

Glutamic acid 글루탐산

: 상업적으로 가장 중요, 매년 수십만 톤의 글루탐산을 생산하는데 판매액이 수십억…

: produced by Corynebacterium glutamicum

: MSG(monosodium glutamate)로 알려져 있으며, 많은 요리에서 조미료로 사용됨.

Lysine 리신

: produced by Corynebacterium glutamicum

: 주로 빵을 만들 때 식품첨가물로 사용됨
: 인체에서 합성되지 않는 필수 아미노산으로 수요가 높으며 미국의 주요 수출 품목 중 하나

Aspartic acid 아스파트산 and phenylalanine 페닐알라닌

: produced by Propionibacterium, Pseudomonas, and Streptomyces species

: 음료 산업에서 인공감미료인 아스파탐 (aspartame)을 만드는데 사용

산업용 효소

Amylase 아밀레이스(전분분해효소)
: produced by Bacillus subtilis(고초균) and Aspergillus niger(흑국균)

: 전분을 당으로 분해하여 제빵, 맥주 생산, 얼룩제거 등에 이용됨 + 고과당 옥수수 시럽

Proteases 단백질 분해효소

: produced by Bacillus
: 단백질을 펩타이드로 분해하기 때문에 단백질에 의한 오염 제거에 효과적

: 제빵산업에서 클루텐 단백질을 분해하는 역할을 하여 영양가를 높이는 데 사용

: 육질을 부드럽게 해주는 연육제로도 사용됨.

Rennin 레닌 (chymosin)

: produced by Aspergillus niger var awamori, and Kluyveromyces lactis

: 치즈 제조의 초기 단계에 우유 단백질을 응유하는 데 사용됨.

(protein-digesting enzyme caseinogen into insoluble casein)

: 과거에 송아지의 위 내막으로부터 얻어졌지만, 현재는 생물반응기에서 자란 곰팡이에 의해 생산

Extremozymes 극한기능효소

: Hyperthermophiles(극호열균)은 고온에서 생존하기 위해 열에 안정한 효소를 가짐

: 다양한 원행생물들이 생산하는 극한기능효소는 산, 염기, 고염도 등의 환경에 내성을 부여함.

ex) Taq DNA polymerase for PCR

Plastic-eating microbes: 플라스틱을 먹는 박테리아 -> 해양 쓰레기 문제 해결 방안

plastic polyethylene tetraphthalate (PET), polyethylene furanoate (PEF)

Galactosidase 갈락토스 분해효소

; produced by Aspergillus niger 흑국균

: 야채의 방향성 화합물을 분해

: 소화제나 가스 제거제 역할도 함

유기산
Citric acid 구연산

; produced by Aspergillus niger

: 청량음료, 사탕, 냉동과일, 포도주 등 다양한 제품에 사용

Lactic acid 젖산

; produced by Lactobacillus species

: 치즈 생산 과정에서 나오는 우유의 유청을 이용하여 젖산을 생산

: 식품에서 향료나 방부제로 사용되며, 직물의 마감 단계나, 가죽 가공, 바이오플라스틱 등에 사용

바이오연료(biofuels)

: 식물 탄수화물로 이루어져 있고, 화석 연료와 유사한 방식으로 방출되는 에너지를 갖는 재생 가능한

생물학적 연료

Ethyl alcohol (ethanol 에탄올)

: 가장 많이 이용되는 바이오연료

: 휘발유와 에탄올이 섞인 gasohol(gasoline+alcohol); 연소할 때 유독물질 배출이 낮은 청정연료

: Gasohol (E-85)은 산화질소 가스 배출을 90% 정도나 감소시켜 의무적으로 사용하도록 규제

“Algaculture” 조류배양

: 원유를 생산하기 위해 조류를 배양함

: 대량 생산이 쉽지 않다는 문제점

switchgrass

: 식물의 세포벽을 구성하는 질긴 물질

: 바이오 연료로 전환하기 위한 더 많은 셀룰로오스를 포함

: 이 섬유소를 바이오연료로 전환할 수 있다면, 훨씬 효율적인 바이오연료가 될 것임.

신기술의 공학적 적용

대사회로 공학(pathway engineeriing)

: 미생물의 대사 능력을 변경하거나 개선하려는 시도 ex) 청바지 산업에 중요한 청색 염료

-과거) 식물의 발효로부터 얻음 / 현재) 석탄이나 석유로부터 산업적으로 만듦

; 이 과정에서 잠재적 독성 부산물이 생성되므로 친환경적인 생산을 위해서 인디고 염료를

유전적으로 조작된 대장균으로부터 만들고자 노력

미생물의 유전자 조작 Genetic Manipulation of Microorganisms

; 새롭고 바람직한 특성을 가진 미생물 생산에 사용

; 재조합 DNA 기술, 유전체학 및 시스템 생물학과 결합된 유전 교환의 고전적인 방법

– Mutagenesis 돌연변이 유발

– Protoplast fusion 원형질체 융합

– Heterologous Gene Expression 이종 유전자 발현

– Directed Evolution 유도된 진화

Site-directed mutagenesis, CRISPR/Cas technology,

Metabolic pathway engineering, High-throughput screening (HTS)…

– Bioprospecting 생물자원탐사 and Metagenomics