CÔNG NGHỆ DNA TÁI TỔ HỢP

Những câu hỏi then chốt

 Chúng ta có thể dùng những vector nào để biến đổi DNA nhân bản?
 Làm sao chúng ta có thể lập bản đồ những điểm hạn chế trong một mảnh DNA nhân bản?
 Làm thế nào chúng ta có thể chuyển mã mRNA hoặc protein được mã hoá bởi một gen
nhân bản trong một tế bào chủ?
 Làm sao chúng ta có thể tìm thấy một gen cụ thể trong thư viện ADN nhân bản?
 Làm thế nào để so sánh các trình tự ADN của bộ gen?
 Làm sao chúng ta có thể xác định một gen là, hoặc không, được phiên mã trong một mẫu
cụ thể?
 Làm thế nào chúng ta có thể xác định được đổ phổ biến của một ARN cụ thể trong một
mẫu?
 Làm thế nào chúng ta có thể sử dụng các kĩ thuật phân tử để gây đột biến cụ thể một gen
nhân bản?
 Làm sao chúng ta xác định được các protein tương tác với nhau?
 Những loại đa hình DNA nào có trong bộ gen?
 Làm thế nào để các đa hình DNA có thể được sử dụng trong phân tích di truyền và trong
chuẩn đoán bệnh?
 Dấu vân tay DNA (in DNA) là gì và có thể được sử dụng như thế nào?
 Liệu pháp gen hoạt động như thế nào?
 Những kĩ thuật này được dùng để sao chép, khuếch đại và thao tác DNA được áp dụng
thuơng mại trong ngành công nghệ sinh học như thế nào?
 Làm thế nào để thực vật có thể được tạo ra về mặt di truyền?

i Activity
- Công nghệ DNA tái tổ hợp đã trở nên phổ biến trong xã hội của chúng ta đến nỗi vào bất cứ
ngày nào, có khả năng là bạn sẽ nghe hoặc đọc một bài báo về một ứng dụng mới. Thông
thường, có những câu chuyện về việc sử dụng DNA tái tổ hợp trong y học và nông nghiệp.
Tuy nhiên, công nghệ sinh học cũng đã cách mạng hoá những lĩnh vực như nhân chủng học,
bảo tồn, công nghiệp và pháp y. Trong chương này, bạn sẽ tìm hiểu về một số công dụng cụ
thể của công nghệ DNA tái tổ hợp. Sau khi bạn đã đọc và nghiên cứu chương, bạn có thể áp
dụng những gì bạn đã học bằng cách thử iActivity, trong đó bạn sẽ làm việc với DNA không
phải con người để gíup giải quyết một vụ giết người.

- Lĩnh vực di truyền phân tử thay đổi hoàn toàn vào những năm 1970 khi các quy trình được
phát triển cho phép các nhà nghiên cứu tạo ra các phân tử DNA tái tổ hợp và sao chép (tạo ra
nhiều bản sao của) các phân tử đó. Nhân bản tạo ra một lượng lớn DNA thuần tuý, sau đó có
thể được điều khiển theo nhiều cách khác nhau, bao gồm lập bản đồ, giải trình tự, đột biến và
biến đổi tế bào. Bạn đã tìm hiểu về việc sử dụng công nghệ ADN tái tổ hợp để nghiên cứu bộ
gen. Sử dụng công nghệ ADN tái tổ hợp để thao tác các gen để phân tích di truyền hoặc để
phát triển các sản phẩm hoặc các ứng dụng khác được gọi là kỹ thuật di truyền, và đó là trọng
tâm của chương này.
Vector biểu hiện
- Một vector biểu hiện là một vector nhân bản có chứa các trình tự điều hoà cần thiết để cho
pháp phiên mã và dịch mã một gen hoặc nhiều gen đã được nhân bản. Các vector biểu hiện
được sử dụng để tạo ra protein được mã hoá bởi một gen nhân bản trong vật chủ được biến
đổi. Ví dụ, việc sản xuất các protein hoạt tính liên quan đến dược phẩm trong ngành công
nghệ sinh học được thực hiện bằng cách sử dụng các vector biểu hiện và một vật chủ thích
hợp.
- Các đặc điểm của vector biểu hiện. Vector biểu hiện là các dẫn xuất của vector nhân bản
plasmid được sử dụng trong cùng một vật chủ. Hình 1 cho thấy một ví dụ về một vector biểu
hiện hữu ích để biểu hiện một gen nhân thực trong E.coli. Trong trường hợp này, các phần bổ
sung cho các tính năng của các vector nhân bản E.coli là: (1) một vùng khởi động ngược
dòng của vị trí nhân bản nhiều lần; (2) một yếu tố kết thúc phiên mã ở hạ nguồn của nhiều vị
trí nhân bản; và (3) trình tự DNA mã hoá trình tự Shine-Dalgarno để bắt đầu dịch mã nằm
giữa promoter và vị trí nhân bản nhiều lần. Các vùng khởi động và yếu tố kết thúc phiên mã
là đặc trưng cho bộ máy phiên mã E.coli. Trong lần phiên mã một mARN, trình tự Shine-
Dalgarno định vị một ribosome để bắt đầu dịch mã tại codon bắt đầu AUG.
- Để tạo ra một protein nhân thực trong E.coli bằng cách sử dụng một vector biểu hiện như
vậy, một cDNA có nguồn gốc từ mARN của gen mã hóa protein được chèn vào vector biểu
hiện. Một cDNA được sử dụng vì bản thân gen có khả năng có các intron, không thể bị loại
bỏ khỏi các bản sao ở E.coli. cDNA được tạo ra từ các bản phiên mã của gen. Tóm lại, đoạn
mồi và enzyme phiên mã ngược được sử dụng để tạo ra một bản sao DNA mạch kép của
mARN. Một chiến lược để chèn cDNA vào một vector để nhân bản là thêm các vị trí hạn chế
vào mỗi đầu. Ví dụ, các mối nối với vị trí BamHI được thêm vào, cho phép cDNA được đưa
vào vị trí hạn chế BamHI trong vị trí nhân bản nhiều lần (xem hình 1).
- Sau khi plasmid tái tổ hợp được chuyển thành E.coli, cDNA được biểu hiện dưới sự kiểm
soát của vùng khởi động trên vector biểu hiện. Trình tự Shine-Dalgarno được thêm vào đầu
5' của mRNA, dẫn đến một bản sao có thể được dịch mã ở E.coli. Đó là, các mRNA sinh vật
nhân thực thiếu một trình tự Shine-Dgarno và, không thêm một trình tự vào, mRNA sẽ không
thể được dịch mã.