胚胎植入前遗传学诊断 /筛查

技术专家共识解读
摘要

胚胎植入前遗传学诊断/
筛查技术专家共识

参考文献：《胚胎植入前遗传学诊断/筛查专家共识》编写组.胚胎植入前遗传学诊断/筛查技术专家共识[J].中华医学遗传学杂志，2018，35（2）：151-155.
DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2018.02.001
 目录

PGD/PGS的临床流程与质控

胚胎实验室的显微操作与质控

遗传实验室的遗传检测与质控
 目录

PGD/PGS的临床流程与质控

胚胎实验室的显微操作与质控

遗传实验室的遗传检测与质控
PGD/PGS的临床流程与质控

内容1 内容4
适应症和禁忌症 流程 随访与临床质控

质控

内容2 内容3
遗传咨询和知情同意 胚胎移植
01 适应症和禁忌症--PGD

染色体异常 Key Point

夫妻任一方或双方携带染色体结构异常，包括相互易
位、罗氏易位、倒位、复杂易位、致病性微缺失或微重复
那些患者会被要求做第三代试管婴儿PGD？
单基因遗传病 ① 染色体异常（结构异常/微缺失/微重复）
具有生育常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X
② 单基因遗传病（诊断明确）
连锁隐性遗传、X 连锁显性遗传、Y 连锁遗传等遗传病子
PGD的 代高风险的夫妇,且家族中的致病基因突变诊断明确或致 ③ 具有遗传易感性的严重疾病（遗传性肿瘤等）
适应症 病基因连锁标记明确 ④ HLA配型（血液系统疾病）
具有遗传易感性的严重疾病
夫妇任一方或双方携带有严重疾病的遗传易感基因的
致病突变，如遗传性乳腺癌的BRCA1、BRCA2致病突变 注：
1. 微缺失/微重复—致病性
人类白细胞抗原配型HLA 2. 倒位：臂间/臂内倒位均算，
但9号染色体臂间倒位不算，
曾生育过需要进行骨髓移植治疗的严重血液系统疾病 inv（9)(p12q13)
患儿的夫妇，可以通过PGD选择生育一个和先前患儿HLA
配型相同的同胞，通过从新生儿脐带血中采集造血干细胞
进行移植，救治患病同胞
01 适应症和禁忌症--PGS
Key Point
 女方高龄
（advanced maternal age，AMA） 那些患者会被要求做第三代试管婴儿PGS？
女方年龄38岁及以上； ① 高龄（≥38岁）
② 不明原因反复自然流产（ ≥2次）
 不明原因反复自然流产 ③ 不明原因反复种植失败
（recurrent miscarriage，RM） a. 移植≥3次
反复自然流产2次及以上； b. 移植高评分卵裂期胚胎4～6个
c. 移植高评分囊胚数≥ 3个均失败
④ 严重畸精子症
 不明原因反复种植失败
（recurrent implantation failure，RIF）
移植3次及以上或移植高评分卵裂期胚胎数4-6个或高评分囊胚数3个及以上均失败；

 严重畸精子症
01 适应症和禁忌症--PGD

Key Point
‫ ﻬ‬目前基因诊断或基因定位不明的遗传性疾病；
‫ ﻬ‬非疾病性状的选择,如性别、容貌、身高、肤色等；  那些情况不适合做PGD？
‫ ﻬ‬其他不适宜实施PGD的情况； • 基因诊断/定位不明的疾病；
‫ ﻬ‬特殊情况： • 非疾病性状的选择；
① 性染色体数目异常，如47，XYY、47，XXX等，产生性染 • 其他
色体异常后代的几率较低，不建议实施PGD；而47， ① 47，XYY/47,XXX，不建议；
XXY生育后代染色体异常风险增加，可酌情考虑是否实 ② 47，XXY，酌情考虑；
施PGD； ③ 常染色体多态，不建议
② 对于常见的染色体多态，如1qh+、9qh+、
inv(9)(p12q13) 、Yqh+等，不建议PGD。
02 遗传咨询和知情同意

KEY POINT
患者+家系成员：原始临床资料+遗
传检测结果，绘制系谱图
病史采集 夫妇双方：疾病史，生育史，专科
家系分析 检查和健康评估结果
HLA配型者：目前病情和诊治情
况，判断是否允许等待

家系调查
风险评估 遗传检测结果 评估再生育风险
遗传发病规律

告知可能的干预措施
知情选择 不同干预方案的优缺点
PGD/PGS过程中的风险
03 胚胎移植

Key Point
• 行PGD/PGS检测后的胚胎，建议行单胚移植。 如何进行移植胚胎的选择和优
• 当本周期无完全正常的可移植胚胎时，患者经遗传咨 化？

询和知情同意后，可自愿选择移植非整倍体嵌合体异 ① 建议单胚胎移植
② 移植嵌合胚胎（无完全正常可移
常胚胎。 植胚胎，且患者经遗传咨询与知
情同意）
• 在对单基因疾病实施PGD时，携带致病基因突变但可 ③ 备选移植胚胎（携带致病基因突
能不发病的胚胎可作为备选移植胚胎。 变但可能不发病）
④ 新鲜周期或复苏周期移植
• 可选择新鲜周期移植或者复苏周期移植
04 随访与临床质控

临床质控
随
访  夫妇在进入PGD/PGS治疗周期前。需接收至少一次遗传咨询，
并保存完整的资讯记录、知情同意书和病案记录。
 确定接受PGD/PGS周期治疗的夫妇的临床指征合理且充分。
PGD胚胎移植后获得
持续妊娠者，需进行侵入  PGD获得持续妊娠者，产前诊断结果与胚胎检测结果符合率
性产前诊断。现阶段不建
议采用无创产前筛查的方 >98%。
法，并应随访妊娠的结局
以及新生儿的情况。  对PGD/PGS的临床结局分析，建议使用活产率、每起始周
期的统计方法。
 目录

PGS/PGD的临床流程与质控

胚胎实验室的显微操作与质控

遗传实验室的遗传检测与质控
胚胎实验室的显微操作与质控

受精方式的选择 胚胎活检 活检样本多的预处理

01 03 05

02 04 06

活检的时机 活检胚胎的冷冻 胚胎活检实验室的质量控制

01 受精方式的选择

‫ ﻬ‬卵胞浆内单精子注射
ICSI
PGD/PGS周期建议采用ICSI授精方式，以最大限度地减
少母源颗粒细胞和父原精子对下游遗传学检测准确性的干
扰，特别是下游检测拟采用核酸扩增技术者。
KEY POINT PGD/PGS—ICSI

FISH—IVF/ICSI

‫ ﻬ‬常规体外受精
IVF 使用荧光原位杂交（FISH）方法进行胚胎遗传学检测
时，也可采用IVF授精后形成的囊胚；但应警惕精子和其他
细胞核的污染。
02 活检的时机

KEY POINT

极体活检：分析母源遗传信息
卵裂期活检：≤2，可实行新鲜周期移植

囊胚充分扩张
评分4BB以上
囊胚活检 活检细胞5~10个
活检后立即冻存
采取复苏移植
03 胚胎活检

KEY POINT

透明带打孔：激光法常用

卵裂期：1~2个，
活检细胞数目 （取2个，细胞≥6）
囊胚：5~10个

二次活检：首次活检诊断不明时可考虑

活检细胞选取 卵裂球：有核且单核
囊胚：远离内细胞团
04 活检胚胎的冷冻

KEY POINT
冷冻技术：玻璃化冷冻技术

Ps：
a. 玻璃化冷冻技术，在冷冻前医生会抽离卵子/胚胎的水
分，然后快速冷冻卵子/胚胎，此冷冻方法可以防止在
冷冻过程中冰晶的形成；此方法的冻融复活率高于
90%；
b. 传统冷冻卵子/胚胎方法是慢速冷冻方法。此方法是将
卵子和胚胎温度慢慢降低，在此过程中，卵子会形成可
能破坏组织结构的结晶。传统慢速冷冻方法的冻融存活
率低于55%。
05 样本活检的预处理

KEY POINT

• WAG：细胞洗涤后放入含有2.5ul
磷酸盐缓冲液的PCR管中，同时设
空白对照
• FISH：做好固定液的隔离防护措施
06 胚胎活检实验的质量控制

KEY POINT
 活检环境
a) 百级层流，37℃恒温，无菌矿
物油下的无菌培养液滴中进行；
b) 确保每个微滴中仅包含一个胚
胎，活检针和活检材料转移吸
管须无活检细胞成分的残留
 活检人员
a) 熟练的ICSI操作经验
b) 严格的无菌原则
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PGS/PGD的临床流程与质控

胚胎实验室的显微操作与质控

遗传实验室的遗传检测与质控
遗传实验室的遗传检测与质控

基因水
平

遗传
检测
染色体
水平
01 基因水平的检测

KEY POINT
适用范围 策略及要求
1. PGD项目：突变位点的直接分析+遗传多态位点连锁分析
明确单基因遗传病高风险
2. SNP位点选择：突变位点上下游1MB范围≥2多态位点
双方或之一携带
3. HLA配型：需覆盖HLA-A、HLA-B、HLA-DRA和HLA-
HLA配型
DQB1的上、下游，每个区域≥5多态位点
01 基因水平的检测—检测方法

KEY POINT

 巢式PCR
• 第一轮多重PCR应扩增多个
目标为点
 全基因组扩增（WGA）
• 荧光PCR
• Sanger测序
• SNP array
• NGS
• 联合检测
01 基因水平的检测—PGD检测前的验证

1. 施行PGD前：对已知致病突变进行验证
KEY POINT 2. 突变位点上下游连锁分析，建立单体型图
3. 单细胞水平验证PGD方案有效
a) PGD前，评估目标检测位点扩增有效性及ADO率
b) 验证样本：淋巴细胞/颗粒细胞/口腔粘膜细胞/胚胎细胞等
c) 样本类型及数量：卵裂球细胞1个；囊胚4~10个细胞
d) 扩增法及样本数：直接PCR50分验证样本；WGA ≥10份
e) 扩增效率>90%，ADO率<10%
02 染色体水平的检测
KEY POINT

那些人需要做胚胎染色体的检测？染色体
筛查的原则是什么？
1. 双方或一方携带染色体异常
2. 医疗目的的性别选择
3. 胚胎植入前的非整倍体筛查
原则：
1. PGD可检测异常染色体及其他染色体数
目异常
2. 性别选择用于诊断不明的性连锁遗传病
3. Y连锁单基因病，可进行性别选择
4. 根据检测采用的技术，PGD可提供携带
者检测
5. 胚胎非整倍体筛查，建议采用CCS，不
建议采用FISH技术.
02 染色体水平的检测—检测方法

KEY POINT

 核酸扩增法
• 巢式PCR
• WGA+Array CGH/SNP array/NGS
 FISH检测
• 探针组合能识别所有可能的易位相关的
染色体不平衡胚胎。
• 染色体易位片段较小/超出高通量遗传学
检测技术的有效分辨率时，优选FISH
02 染色体水平的检测—临床实施PGD/PGS前方案有效性验证

KEY POINT

有效性验证
• Array CGH/SNP array/NGS等技术首次临
床应用前，需验证平台有效性和稳定性，
无需进行临床预实验。
• FISH染色体拷贝数分析：患者夫妇外周血
中期颜色体核型+间期探针的荧光强度及
特异性
质量控制及检测报告

针对PGD实验室的一般质控建议：
• 采用核酸扩增法进行PGD/PGS检测的实验室需严格遵照《临床基 KEY POINT
因扩增实验室工作规范》的一般原则；
1. 遵守《临床基因扩增实验室工作
• 胚胎活检的细胞及其在整个检测流程中需具有清晰且唯一的编
规范》
号,与胚胎一一对应；
2. 胚胎活检细胞清晰且唯一编号
• 采用核酸扩增法进行PGD/PGS检测时,首次扩增步骤需要设置细
3. PGD/PGS检测时设空白对照
胞洗涤液空白对照以及扩增试剂空白对照以评估可能的污染及来
4. 各检测技术建立SOP文件并执行
源；
5. 商品化试剂盒检测技术，建立本
• 各种检测技术需均建立SOP文件并遵照执行,并及时评估更新。
地实验室适用的SOP流程及质控
• 对于采用商品化试剂盒检测技术如array CGH、SNP array、NGS
方法
等，需建立适用于本地实验室的SOP程序和质控方法；
6. 所有实验过程双人核对
• 所有实验操作过程中需要严格的双人核对,实时记录并签字
7. 结果数据两人独立判读+三人审核
• 检测结果数据需要两人独立分析判读,最后由第三人审核判断。
8. 定期室内/室间对比质控
未达成一致意见的胚胎应判读为诊断不明。PGD中诊断不明的胚
胎不建议移植。
• 应定期开展室内比对和室间比对质控,并做好记录。
检测报告

PGD/PGS报告需包括患者夫妇的姓名、年龄、检测指征、胚胎编
号、胚胎活检阶段、活检日期、检测方法和项目、检测结果、检测者、
审核者、报告日期及备注说明。除医疗目的性别鉴定外,报告不准提示
胚胎的性别。
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