分类 号 ：

Ｒ７８１  单位代码 ： １ ０４ ２ ２
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密 级 公 开 学 号
： ： ２０ １ ３ ２ ０４ ９ ７
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儀 Ｈ，
Ｓ Ｈ Ａ Ｎ Ｄ Ｏ Ｎ ＧＵ Ｎ Ｉ
、
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ｔ
ＶＥＲ Ｓ ＩＴＹ
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博±学位论文


Ｄ ｉ ｓ ｓ ｅ ｒｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆｂ ｒ  Ｄ ｏ ｃ ｔ ｏ ｒ ａ ｌ  Ｄ ｅ ｇ ｒ ｅ ｅ
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论文题 目 ； Ｉ Ｌ ６ －
巧 ＳＩ Ｌ －
６Ｒ 对不 同 浓度 ＲＡＮＫ Ｌ  ｉ秀 导 的 破 臂



细施分化和 活性 的 差异牲调 节及其机制 研 究



Ｅ ｆｅ ｃ ｔ  ｏ ｆ Ｉ Ｌ 
－
６  舶 ｄ  ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅ  Ｉ Ｌ ６  Ｎ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ  ０ 打  Ｏ Ｓ 化 ｏ ｃ ａｓｔ  ｄ ｉ
－
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作 者 姓 名 冯 伟
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培 养 单 位 口 腹 医 学 院

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专 业 名 称  口 腔 基础 医 学

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指 导 教 师 李 巧 后 教 授

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合 作 导 师 
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

２０１ ７ 年 ５ 月 １ ０ 

日
分类 号 ：
Ｒ７ ８ １
 单位代码 ： １ ０４２２
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密 级 公 开  学 号
： ： ２０ １ ３ ２ ０４９ ７



龜 人
Ｓ ＨＡＮ Ｄ
纽
Ｏ Ｎ ＧＵ Ｎ Ｉ Ｖ 邸 Ｓ Ｉ Ｔ Ｙ
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乏

博±学位论文

 Ｄ ｉ ｓｓ ｅ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ 打  ｆｏ ｒ  Ｄｏｃ ｔ： ｏ ｒ ａ ｌＤ ｅ ｇ ｒ ｅ ｅ



论文题 目 ； Ｉ Ｌ
－

６ 和 ｓ Ｉ Ｌ
－

６Ｒ 对 不 同 巧度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 巧导 的 破骨 细


胞 分 化 和 活 性 的 差 异 性 调 节 及 其机 制 研 究


Ｅ ｆｆｅ ｃ ｔ  ｏｆ  Ｉ Ｌ －

６ａ ｎ ｄ ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅＩ Ｌ －

６  ｒｅ ｃ ｅ
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ｄ ｉ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ  ｏ ｆ  ｍ ｉ ｃ ｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｒｅ ｃ ｕ ｒ ｓ ｏ ｒ ｓ
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 ｐ

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ｙｖ
ａｒ
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
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作 者 姓 名 巧 

伟

培 养 单 位 口 腔 医 学 院




专 业 名 称 口 腔 基 础 医 学



指 导 教 师 李 敏 启 教 授



合 作 导 师 



２０ １ ７
年 ５
月 １ ０


日
 原 创 性 声 明



本人郑 重声 明 ：
所呈 交 的 学位 论文 ， 是本人在 导 师 的 指导 下 ， 

独

立进行研究所取得 的 成果 。
除文 中 己 经注 明 引 用 的 巧 容外 ，
本论文 不



包 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 科研 成 果 对 本 文 的 研

 。

究作 出 重要贡献 的 个人和 集体 ，
均 己在文 中 明 确 方式标 明 。
本声 明



的 法律责任 由 本人承担 

。

论文 作 者签名 ： 聲 隹 日 期 

：

关 于学位 论文使用授权 的 声 明



本人完 全 了 解 山 东 大 学有关保 留 、 使用 学位论文 的 规定 ， 同 意学


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校保 留 或 向 国 家有关部 口 或机构送交论文 的 复 印 件和 电子版 允许 论

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文被查 阅 和 借 阅 本人授权 山 东 大 学 可 Ｗ 将本学位论文 的 全部或部 分

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内 容 编 入有 关数据 库进行检索 ， 可 Ｗ 采用 影 印 、 缩 印 或其他复制手段

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保存 论文和 汇 编 本学位 论文 
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。

（ 保密 论文在解密后应遵 守 此规定 

）

论文作 者签名 ： 导 师豁名 ：

期 ：


山
 山 东 大学 博± 学位论 文
 



目录



中 文摘 要  

１

英文摘 要  

５

符号说 明  １ 

０

前胃   １ 

２

第 部 分 体 外破骨细 胞 诱 导 模型 的 建 立
一

 １ 

５

Ｍ 料 与 方法  １ 

６

结 果  ２０



Ｈ ｉｆ
ｅ  ２５



第 二部分 正 －

６／ｓ 正 －

６ Ｒ 对不 同浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 分 化和 活 性 的 差 异 性



调节  ２９



材料 与 方 ＾ ＊  ３ 

１

结 果   ３７



Ｈ  ４７



第Ｈ部分 正 －
６／ｓ正 ６民 －

对 不 同 浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 分化和 活 性 的 差异 性



调 节 的 机制 研究  ５ 

１

材 料 与 方法  
  

巧

结 果  ５５



讨 论
＂

   ６１



全文 结 论  ６５



参考文献  ６６



致谢  ７４



攻读 博 ± 期 间 发 表 论 文情 况  ７５



攻 读 博 ± 期 间 发表 的 代 表 性 论 文    ７７


 山 东 大 学 博击 学 位论 文
 



Ｃ Ｏ Ｎ Ｔ Ｅ ＮＴ Ｓ



Ｃ ｈ ｎ ｅ ｓ ｅ Ａ ｂ ｓ ｔｒａ ｃｔ
ｉ   ？ ？ ？ ？ ？     

１

Ｅ ｎｇ ｌ ｉ ｓｈ  Ａｂｓ ｔ ｒ ａｃｔ  

５

Ａ ｂ ｂ ｒｅ ｖ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ    
 １ 

０

Ｐ ｒ ｅ ｆａ ｃ ｅ    １ 

２

Ｐ ａｒｔ  Ｉ Ｔ ｈｅ  ｅ ｓ ｔ ａｂ ｌ ｉ ｓ ｈｍ ｅ ｎ ｔ  ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ  ｉ ｎ  ｖ ｉ ｔｒｏ
  １ 

５

Ｍ ａｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｓ  ａｎ ｄ  ｍ ｅ ｔｈ ｏ ｄ ｓ  １ 

６

Ｒ ｅ ｓｕ ｌ ｔｓ      ２０



Ｄ ｉ ｓ ｃ ｕ ｓ ｓ ｉ ｏｎ    ２５



ｔ  ｎ  Ｃ ｏ ｍ ｂ ｎ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  正 ６  ａｎ ｄ  ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｄ
Ｐａｒ ｉ ｉ
－ －

ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉ ａｌ ｌ
ｙ ｅ ｇ ｕ ａｔ
ｉｒ ｅ  ｖ ａｒｙ ｉ 打 ｇ  ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ  ｏ ｆ
ｌ 
 ｌ

Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｌ ｉ ｓ  ２９



Ｍａ ｔｅ ｒｉ ａ ｌ ｓ  ａｎ ｄ  ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ    ３ 

１

Ｒｅ ｓｕ ｌ ｔｓ  ３７



Ｄ ｉ ｓｃｕｓ ｓｉｏ ｎ  ４７



ｔ  姐  Ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ｃｈ ａｎ
Ｐ ａｒ  ｉ ｓ ａｍ ｓ  ｂ
ｙ ｗｈ ｉ ｃ ｈ  ｔ ｈ ｅ  ｃ ｏｍ ｂ ｉ ｎ ａｔ ｉ ｏ 打  ｏ ｆ

 Ｉ Ｌ ６  ａ 打ｄ  ｓ Ｉ Ｌ ６ 民 ｄ
－ －

 ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉａｌ ｌ


ｙ

化 ｇ ｕ ａ ｔｅ ｖ ａ ｒ ｙ ｎ ｇ
ｌ  ｉ

ｌ ｅｖｅ ｌ ｓｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ 打 ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｏ ｇｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ
  ５ 

１

Ｍａｔｅ ｒ ｉ ａｌ ｓ  ａｎｄ  ｍ ｅ ｔｈ ｏ ｄ ｓ      ５２



Ｒｅｓｕ ｌｔ ｓ  ５５



Ｄ ｉ ｓ ｃ ｕｓ ｓ ｉ ｏｎ  ６ 

１

Ｃ ｏ ｎｃ ｕ ｓ ｌ ｉ ｏｎ        ６５



Ｒｅ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ        ６６



Ａ ｃ ｋｎ ｏ ｗ ｌ ｅｄ
ｇｅ ｍ ｅ ｎ ｔ  ７４



Ｐ ｕｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅｄ  ｒ ｅ ｓ ｅ ａｒ ｃ ｈ
 ｐ ａｐ ｅ ｒ ｓ    ７５



Ｒ ｅｐｒｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ  ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ  ｐ ａ
ｐｅ
ｒｓ  ７７


 山 东 大学博±学位论文
 



１ １＿
－

６ 和 Ｓ Ｉ ｌ＿
－

６Ｒ 对 不 同 浓度 Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ 诱导 的 破昏 细 胞 分化和 活 性



的 差 异 性 调 节 及 其 化 制 研究



博±研究生 ：
冯伟



专 业 ：
口 腔基础 医 学



导 师 ： 李 敏后 教授



中 文摘 要


背巧和 目 的 

：

牙 周 炎是 口 腔 临 床 中 的 常见 病 和 多 发病 是 导 致 中 老年人牙 齿缺 失 的 主要 原

 ，

因 。 菌斑生 物 膜是牙 周 炎 发展 的 启 动 因 素 ， 牙 周 致病 菌及 其代 谢产 物 在 局 部 牙 周



组织积 聚 ， 募集大量免疫细胞 ，
引 发 炎症和 牙 周 支 持组织 （ 牙周 初带 、 牙骨质 和



牙 槽骨 ） 破坏 ， 造成 牙 周 袋 形 成 和 牙 槽 骨 吸 收 ， 最终导 致牙 齿松 动 和 脱落 。
在牙



周 病 的 发 展 过 程 中 显 著 而 持 续 的 炎 症微 环 境 对 牙 槽 骨 的 侵蚀破 坏 起 着 重 要 作 用
， 

。

由 牙 周 致病 菌 刺 激 募 集 而 来 的 单 核 巨 巡 细 胞 和 淋 己 细 胞 产 生 的 正 － －
６ 、 ＴＮＦ －

ａ、 正 

－

１ 等 炎 症 因 子 能 够 直 接 或 间 接 地招 募 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 并 促 使 其 分 化 为 成 熟 的



破骨 细 胞 ，
引 起 牙 槽 骨 吸 收 破坏 

。

正 －

６ 是 由 活化 的 Ｔ 细 胞和 成 纤 维 细 胞 产 生 的 淋 己 因 子 ， 在体 内 和 体 外 都 具



有 很 强 的 促 进破 骨 细 胞 分 化 的 作 用 。
临 床调 查 发现 ，
牙周 炎 患 者局 部 牙周 组织及



銀沟 液 中 正 －

６ 水 平 明 显 高 于 健 康 人 群 经 过牙 周 基 础 序 列 治 疗 后 ， ／ 正 －
６ 水平 显 著



降低 ， 提示 比 －

６ 与 牙 周 组 织 炎 症 和 牙 槽 骨 吸 收密 切 相 关 。 Ｗ往研巧认为 正 －

６ 

促

进 骨 吸 收 的 作 用 是 通 过 成 骨 细 跑 间 充 质 细 胞介 导 的 ／ ，
即 正 －

６ 促使 Ｗ 上 两 类 细 胞



分泌破骨 诱 导 因 子 Ｒ ＡＮＫ Ｌ ， 进而 诱 导 破骨细 胞 前体细 胞 的 分化 成 熟 ， 而 正 －

６ 

对

破骨细 胞 前体细 胞 分化本 身 无影 响 。 然而近年来有研巧表 明 ｍ －

６ 也 能 够 通 过破



骨细胞前体细 胞表面 的 Ｉ Ｌ －

６Ｒ 直接调 节 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 分 化 并 且 这 个

 ，

作 用 不 是 促 进而 是抑 制 。 对于 上研 究 的矛盾 结 果 ， 目 前 学术界还 没有 合 理 的 解



释 

。

Ｓ 正 －

６Ｒ 是 正 －

６Ｒ 的 可 溶 性形 式 ，
与 膜结合 型 正 －

６Ｒ 类似 ， 也 能够 与 正 －

６ 

结

合诱导 ｇｐ
－

１ ３０ 的 二 聚 化 从而激活 正 －

６ 信 号转导 ， 是经 典 正 －

６ －

正 －

６民 系统的有





１
 山 东 大学博±学位论文
 



力补充 。 研 究 发现 在 很 多 情 况 下 ， 只 有在 Ｓ 正 －

６Ｒ 存在 的 情 况 下 正 －

６ 才 能充 分发



挥其生理学 作用 。 比 如 在没 有 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 的 情 况 下 ， Ｉ Ｌ －

６ 与 正 Ｓ
－

６Ｒ 联用 能够 诱 导



少 量 纯 化 破 骨 细 胞 前体 细 胞 的 破骨 向 分 化 ， 而单独 使用 比 －

６ 则 不 能 产 生 类似 作



用 。 因 化 我们 推测 正 化 是 正 Ｓ
－ －

６ 信 号 转 导 的 必 要补 充 ， 在研巧 正 －

６ 与 破骨细



胞分化关 系 的 时 候 有必 要将 ｓＩ Ｌ －

６ 民 的作用 考虑 其 中 

。

综上 ， 为 了 探究 正 －

６ 调节 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的破骨细胞分化 的确切机制 ，
我们



分 别 建 立 了 两 种 破 骨 细 胞 前 体细 胞 （ 小 鼠 骨 髓单核细胞 Ｂ ＭＭ ｓ 和 小 鼠单核细胞



系 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 ） 的 体 外 诱 导 分化模 型 ， Ｗ 足量 正 －

６／Ｓ 正 －

６ 干预不 同 浓度



Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞分化 观察 正 ，

－

吟ｓ Ｉ Ｌ －

６ 对体 外 破 骨 细 胞 诱 导 分 化 的 影 响 

。

同 时 沿 Ｒ ＡＮＫ 信 号 转 导 路 径 ， 检测 Ｒ ＡＮ Ｋ 下 游 与 破骨 细 胞 分 化 相 关 的 信 号通路



的 激活情况 ， 初 步 探讨 正 －

６ ／Ｓ 正 －

６ 对 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 介 导 的 破 骨 细 胞 分 化 的 调 控机制 

，

Ｗ 期 更 深 入地 理解炎 症性骨 吸 收 的 病 理 发生 Ｗ 及 炎 症 因 子对破骨 细 胞分 化 的 调




节 为 临 床研 发新 的 更有效 的 牙周 炎 治疗方法开辟 条新 的 思路
一

， 

。

材 解辦 

：

１ ．
体外破骨细 胞诱导 分化模型 的 建立 

。

分 离 培 养 小 鼠 骨 髓 单核 细 胞 Ｂ ＭＭ ｓ ， 购 买 小 鼠 单核 细 胞系 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞



并 传代 培养 ， 细 胞生 长 状 态 良 好 后 在 培养 基 中 加 入 ３ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ  Ｍ Ｃ ＳＦ
－

和 梯度浓度



Ｒ ＡＮＫ Ｌ 进 行 破骨 细 胞 诱 导 培养 ， 隔 天更换培养 基 。 诱导培养 ４ 天后 行 ＴＲ Ａ Ｐ 


染

色观 察多 核破骨样细胞 的生成情况 。 为 检测 破 骨 细 胞 骨 吸 收 能 为 ， 将 细 胞 接种 于



破骨细 胞 功 能 检测 板 中 ， 破骨 诱 导培养 ７ 天 后 观 察 并 统 计 破骨 细 胞 吸 收 陷 窝 面



积 

。

２ ． 正 －
６／ Ｓ 正 －
６民 对 不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 破骨 细 胞分 化和 活 性影 响 的 研 宛 

。

在不加 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的 情况下 ， 不 同 浓度 正 －

６ 、 Ｓ 正 －

６ Ｒ 或 正 －
６＋ Ｓ 正 ６ Ｒ －

处理



Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 ， ４ 天后 Ｔ ＲＡＰ 染 色 观 察 破 骨 样 细 胞 的 生成 情 况 。 在加 入梯 度 浓度



Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的情况 下 ， Ｗ 不 同浓度 正 －

６ 、 Ｓ 正 －

６Ｒ 或 Ｉ Ｌ ６＋Ｓ 正 － －

６艮 处理 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 

，

４ 天后 ＴＲ Ａ Ｐ 染 色 观 察破 骨 样 细 胞 的 生 成 情 况 。 破骨 细 胞 功 能 实 验 检 测 破 骨 细 胞



的 骨 吸收 能力 实 时 定量 ： ＰＣＲ 检 测 破骨细 胞标 志 性基 因 ＴＲ Ａ Ｐ 、 ＣＫ 、 Ｃ ＴＲ 、 ＭＭ Ｐ 

－

９  ｍ Ｒ ＮＡ 的 表达 ；
Ｗｅ ｓｔｅｒ
ｎ  ｂ ｌ ｏｔ 检 测 破骨 细 胞 生 成 相 关 转 录 因 子 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 及 ｃ
－

ｆｏ ｓ



的表达 

。



２
 山 东 大 学 博 ± 学位 论 文
 



３ ． 正 －

６／ｓ ｍ －

６Ｒ 对不 同 浓 度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破晉 细 胞分化 和 活 性 的 差异 性调 节 的



机制 研 巧 

。

Ｗ 足量 正 －

６／ Ｓ 正 化 －

分别 干预 １ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ 和 ５ ０ｎ
ｇ ／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｂ ＭＭ ｓ 

破

骨细胞分化体系 巧 ， ０ 、 ２ 、 ４ 天 收集细 胞 ， Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎ ｂｌｏｔ


检测 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 蛋 白 的 表达 

；

Ｗ １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ 正 －

６ ／Ｓ 正 －

６ Ｒ 预处理 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 ， 然 后 分 别 Ｗ １ ０  ｎ ｇ／ｍ ｌ 和 ５ ０ｎ

ｇ ｍ ｌ
／

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 进行 诱 导 在 ， ０ 、 ５ 、 １ ５ 、 ３０ 分 钟 时 收集 细 胞 用 免 疫 共 沉 淀 法 检 测 ， 

Ｒ Ａ ＮＫ

与 ＴＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 的 结 合情 况 ； Ｗ １ ０ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ 正 －
６／Ｓ 正 －

化 预处理 Ｂ ＭＭ ｓ 细施 ， 然后



分别 Ｗ ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 和 ５０ ｎ
ｇ ／ｍ ｌ Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 进行诱 导 ， 在 ０ 、 １ ５ 、 ３０ 、 ６０ 分 钟 时 收集 细



胞 ， Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎ  ｂ ｌ ｏｔ  检测  ｐ ｐ ３８
－ －

、
ｐ ； ３ ８ ；
 ｐ ＥＲＫ
－

、 Ｅ ＲＫ ；
ｐ
－

ＪＮ Ｋ ＞  ＪＮ Ｋ ；
ｐ Ａｋ
－

ｔ 、 Ａｋ ｔ 

；

Ｐ
－

ＮＦ －

ｋＢ 、 ＮＦ －

ｋＢ 的 蛋 白 表达水平 

。

结果 

：

１ ．
体 外 破 骨 细 胞诱 导 分 化 模 型 的 建 立 

。

Ｂ ＭＭ ｓ 和 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 都 能在 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 的诱导下分化为 ＴＲＡＰ 染色阳 性




的 多 核 巨 细 胞且具 有 在 破骨 细 胞功 能 检测 板上形 成 吸 收 陷 窝 的 能 力 。 Ｂ ＭＭ ｓ 

和

Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞分化形成 的 破骨细 胞在 形态 、 大 小 和 骨吸收能 力 方面有差别 。 


由

上 两 种 细 胞 诱 导 形 成 的 破 骨 细 胞 数 量 大 小 和 骨 吸 收 能 为 与 所使 用 、 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 

的

浓度 呈剂 量相 关性 ， ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ 为 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 破 骨 细 胞 分 化 的 饱 和 浓度 

。

２ ． 正 －

６／Ｓ 正 －

６Ｒ 对不 同 浓 度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 分 化 和 活 性影 响 的祝 巧 

。

单独 应 用 正 －

６ 或 ５ 正 －

６ 民 都不能诱导 ＴＲＡＰ 染 色 阳 性 的 破 骨样 细 胞 生 成 ， 正 

－

６ 与 正 Ｓ
－

６ Ｒ 联 用 能 够 诱 导 少 量 的 体 积 较 小 的 破曾 样 细 施 生 成 、 。 Ｓ 正 －

６Ｒ 对 Ｒ ＡＮＫ Ｌ



诱 导 的 破骨 细胞形成无影 响 ：
正 －

６ 抑 制 高浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 形 成 ；
止 

－

６／Ｓ 正 －
６Ｒ 能 够促进化 浓度 （ ｌ Ｏ ｎ ｇ／ ｍ ｌ ） ＲＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞生成而抑制 高浓度



 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞生成 进 步 实验 证 明 正 正 Ｒ 对不 同


一

（ ５ ０ ｎ ／ｍ ｌ ） 。
－
６／Ｓ －

６
ｇ

浓度 的 ＲＡＮＫＬ 诱 导 的 破骨细 胞分 化 的 差 异 性 调 节还体现 在骨 吸 收活 性 破骨 细


 、

跑分化标志基 因 （ Ｃ ＴＲ 、 ＣＫ 、 ＭＭ Ｐ －

９ 和 Ｔ ＲＡ Ｐ ） 和 关键转录 因 子 （ Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 Ｃ


－

表达上 与 ＴＲＡ Ｐ 染色结 果 致

一

ｆｏ ｓ ） ， 

。

３ ．  Ｌ Ｉ
－

６／Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ －

对不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细胞 分化和 活性 的 差异 性 调 节 的




机制 研 究 

。

Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ  ｂｌｏｔ 结果显示 正 －

６／Ｓ 正 ６民 －

不 改变 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 刺 激 下 破骨 细 胞 前 体 细 胞





３
 山 东 大 学 博± 学位论 文
 



ＴＲＡＦ ６ 蛋 白 的 表达 ； 免疫共沉淀结 果 显 示高 低浓度 ／ Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 ＲＡＮＫ 


－

Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 结 合 也不 受 正 －

６ ／８ 正 －

６民 预处理 的 影 响 信 号通路研 究 表 明 。 Ｉ Ｌ －

６ ＭＬ －

６ 民 

分

别 促 进 抑 制 了 低 高浓度／ ／ Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 ＮＦ －

ｋＢ 、 Ｅ ＲＫ 和 Ｊ ＮＫ 信 号 通路 的 激 活 

，

但 是对 Ｐ
－

３８ 、 Ａ ｋｔ 信 号 通路无 明 显 影 响 

。

结论 

：

１ ．
分离培养 小 鼠 骨 髓 单核细胞 Ｂ ＭＭ ｓ 和 小 鼠单核细胞 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞系 ， 

用

Ｍ Ｃ ＳＦ
－

和不 同浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 进行 破 骨 分 化 诱 导 并 进 行 了 初 步 的 破 骨 细 胞 形

 ，

态及功 能鉴定 ， 成 功 建 立 了 体 外 破 骨 细 跑 诱 导 分 化模 型 

。

２ ． 正 －

６／Ｓ 正 ６艮 －

促进 了 低 浓 度 （ １ ０ ｎ ／ｍ ｌ

ｇ ） ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞分 化 ，
而对 商



浓度 （ ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ
ｌ ）  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的 破骨细 胞分化表现为抑 制 作 用 

。

３ ． ｍ －

６／ｓ 正 －

６ 民 对 不 同 浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 破骨细 胞 分化 的 差异 性调 节 发生在



ＴＲＡＦ ６ 的 下游 ， 可 能 是通过 正 －

６ －
正 －

６ 民 ｇｐ－

ｌ ３０ 信号转导调节 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 介导的




ＮＦ －

ｋＢ 、 ＥＲＫ 和 Ｊ ＮＫ 信 号通路 的 激活实 现 的 


。

关键词 ： 圧 －

６ ； Ｓ 正 －

化 ； 破骨细跑 ；
Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ  ＭＡ Ｐ Ｋ  Ｎ Ｆ ； ；
－

ｋＢ





４
 山 东 大 学博壬 学位论文
 



Ｅ ｆｆｅ ｃ ｔ  ｏｆ  Ｉ Ｌｒ ６ ａ ｎ ｄ  ｓ ｏ 山ｂ ｌ ｅ Ｉ Ｌ －
６  ｒｅ ｃ ｅ
ｐ化
ｒｏ ｎ ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ



ｄ ｉ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ａ ｃ ｔ ｉｖ ｉ ｔ ｙ  ｏ ｆ ｍ ｉ ｃ ｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｒ ｓ ｏ ｒ ｓ  ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ

 

ｂ ｙ  ｖ ａ ｒｙ ｉ ｎ
ｇ
ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫＬ



Ｐ ｏ ｓ ｔ ｇ ｒ ａ ｄ ｕ ａｔ ｅ ： Ｗｅ ｉ ｆｅ ｎ ｇ



Ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ａ ｌ ｉｔｙ ；  Ｂ ａｓ ｉ ｃ ｓ ｃ ｉ ｅｎ ｃ ｅ ｏ ｆ  ｓ ｔ ｏ ｍ ａｔ ｏ ｌ ｏ
ｇｙ



Ｔｕｔｏ ｒ ；  Ｐ ｒｏ ｆ Ｍ ．  ｉ ｎ
ｑ ｉ  Ｌ ｉ

Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ

Ｉ ｎ ｔ ｒｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ 

：

Ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎｔ
ｉ ｉ ｔｉ ｓｉ ｓｏ ｎｅ ｏｆ  ｔ ｈ ｅｍ ｏ ｓｔｃｏ ｍｍ ｏ 打ｄ ｉ ｓｅａｓ 的  ｉ ｎ  ｄ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ  ｃ ｌ ｎ ｉ ｃ  ａ ｎ ｄ  ｔ ｈ ｅ  ｍ ａｊ ｏ ｒ
ｉ 


ｃ ａｕ ｓ ｅ  ｏ ｆ ａ 
ｇｅ
－

ｒｅ ｌ ａｔ ｅ ｄ  ｏ ｏ ｔ ｈ  ｌ ｏ ｓ ｓ
ｔ： ．  Ｄ ｅｎ ｔ ａ ｌ
 ｐ ｌ ａｑ ｕ ｅ  ｈ ａ ｓ  ｂ ｅ ｅ ｎ  ｗ ｅ
。 ｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ 化  ｂ ｅ  ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｍａ ｒ 

ｙ
 
ｉ

ｐ ａｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｏｒ
ｆ  ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ 打ｔ ａ ｌ  ｎｆ
ｉ ｌ ａ ｍｍ ａｔ ｉ ｏ 打 ｉ ． Ｍｕ ｌ ｔｉ ｌ ｈ
ｐ ｅ ｐ ａｔ ｏ ｇ ｅ 打 ｃ  ｂ ａ ｃ ｅ

ｉ ｔ ｉ 过 ａｎ ｄ
ｒ   化ｅ ｉ 

ｒ

ｅｘ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ  ａｇ ｇ ｒｅ
ｇ ａｔ ｅ  ｉ ｎ  ｏ ｃ ａ ｌ  ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ａ ｌ  ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ  ａ ｎ ｄ  ｔ ｒ ｉ ｇ ｇ ｅ ｒ  ｍ ｍ ｕｎ ｏ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ  ａ ｎ ｄ


ｌ ｉ ｉ

ｉ ｎｆｉ ｌ ｔｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｉ ｎ ｆ
ｌ ａｍｍ ａｔｉ ｏ 打  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，
ｉｒ ｅ ｓ ｕ ｌｔ ｉ ｎ
ｇ  ｉｎ
ｄ ｅ ｓｔｍ ｃｔ ｉ ｏ 打  ｏ ｆ  ｐ ｅ ｒ
ｉ ｏ ｄｏｎｔ ａ ｌ  ｓ ｕｐ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｖ ｅ



ｔｉ ｓ ｓ ｕ ｅ  （ ｉ ｎ ｃ ｌ ｕｄ ｉ ｎ ｇ  ｐ ａ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ｉ ｕ ｍ ，  ｃ ｅ ｍ ｅ ｎｔ ｕ ｍ  ａ ｎｄ  ａ ｌ ｖ ｅ ｏ ｌ ａｒ  ｂ ｏ ｎ ｅ ）  ｆｅ ａ ｘ ｔ ｉ ｒｅ ｄ  ｂ ｙ  ｄ ｅ ｅｐ



ｐ
ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ａ ｌ
 ｐｏ ｃ
ｋｅ ｔ ，
ｓｅ ｖ ｅ Ｋ  ａ ｌｖ ｅ ｏ ａｒ  ｂ ｏ ｎ ｅ  Ｋ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｉ ｏ ｎ  ａｎ ｄ  ｅ ｖ ｅｎ  〇 〇 化  ｌ ｏ ｏ ｓ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ  ｏ ｒ  ｌ ｏ ｗ
ｌ １： 

．

Ｄ ｕｒ ｎｇ 化ｅ ｐ ｅｒ ｓ ｉ ｓ ｔｅ ｎｔ  ａ ｎ ｄ  ｓ ｇｎ ｆ
ｉ ｃ ａ ｎｔ  ｉ ｎ ｆ
ｌ ａ ｍ ｍ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｉ ｓ  ｃ ｒ ｉ ｔ ｃ ａ ｌ
ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ  ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｄ ｏｎｔｉ ｔ ｉ ｓ
ｉ ｅ ｉ ，
ｉ ｉ ｉ
  

ｏ ｒ ａ
ｆ ｌ ｖ ｅ ｏ ａ ｒ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｄ ｅ ｓｔｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ  Ａ  ｌ ａ ｒｇｅ  ｒ ｍ ｔ ｎ ｂ ｅ ｒ  ｏ ｆ  ｍ ｏ ｎ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ  ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ  ａ ｎ ｄ
ｌ ． 


ｌ
ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｃ ｙｔ ｅ ｓ  ｒｅ ｃｒｕ ｉ ｔｅ ｄ  ｂ
ｙ ｂ ａ ｃｔ ｅ ｒ ａ ｌ  ｓ ｔ ｉ ｍ ｕ ａｔ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ  ｉ ｎ ｆ

ｉ ｌ ａｍ ｍ ａｔｏ ｒ ｙ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ  ｉ ｎ ｃ ｕ ｄ ｎ ｇ
ｌ ｉ

  
ｌ ｉ

圧 －

６ ，
ＴＮＦ ａ －

，
Ｉ Ｌ －

１  ｅ ｔ ｃ ｗ ｈ ． ｉ ｃ ｈ  ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｅ  ｔ ｈ ｅ  ｃ ｏ ｍ ｍ ｉ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ  ｏ ｆ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ
ｐ
ｒｅ ｃ ｕ ｓ ｏ ｒｓ



ｔｏ ｗ ａ ｒ ｄ ｓ  ｍ ａｔ ｕ ｒｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ ，
ｌ ｅ ａｄｉ ｎ
ｇ 
１： ｏ  ｐ ａｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｃ ａ ｌ  ａ ｌ ｖ ｅ ｏ ｌ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐｔ ｉ ｏ ｎ
ｉ  

．

Ｉ Ｌ －

６ｉ ｓａｌ
ｙ ｍ ｐ ｈ ｏ ｋ ｉ ｎ ｅ  ｓ ｅ ｃ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ  ｂ ｙ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ 
 Ｔ  ｌ
ｙｍｐ
ｈ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ  ａｎ ｄ ｆ ｂ ｒ ｏ ｂ ａ ｓｔ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｈ ａ ｓ
 ｉ 
 ｌ  

ｓ ｔｒｏ ｎ
ｇ ｐ ｒｏ
－

ｒｅ ｓ ｏ ｒ
ｐｔｉｏｎａ
ｃ ｔ ｉ ｖ ｉｔ
ｙ Ｃ ． ｌ ｉ 打 ｃ ａ ｌ  ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ  ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａｔ  ｔ ｈ ｅ  呈 ｅ ｖ ｅ ｌ  ｏ ｆ  Ｉ Ｌ ６  打
ｉ 
 －

ｎ ｇ ｉ ｖ ａ ｌ  ｃ ｒｅ ｖ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎｔｉ ｔ ｉ ｓ  ｗａ ｓ
ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ａ ｌ  ｓ ｓｕ ｅａｎｄ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ  ｆ ｌ ｕ ｉ ｄ  ｆｒ ｏ ｍ ｈ
ｉ ｔ ｉ
ｇ
ｉ ｉ
ｐ
ｅｏ
ｐ ｌｅｗ ｉｔ
ｐ



ｍ ｕ ｃ ｈ  ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ  ｔｈ ａ ｎ  ｔ ｈ ａｔ  ｏ ｆ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｙ  ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ  ａｎｄ  ｔ ｈ ｉ ｓ  ｎ ｃ ｒｅ ａ ｓ ｅ  ｎ  Ｉ Ｌ ６ 
 ｉ ｉ
－

ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ  ｗ ａ ｓ  ｒｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ



ｔ ｅ ｒ  ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ ｌ  ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ  ｔ ｒ ｅ ａｔ ｍ ｅ ｎ ｔ
ａｆ ，
ｗｈ ｉ ｃｈ  ｉ ｎ 出 ｃ ａｔ ｅ ｄ  ｔｈ ａｔ  Ｉ Ｌ ６  ｌ ｅｖ ｅ ｌ  ｉ ｎ  ｏ ｃ ａ －

ｌ 

ｌ

ｐ ｅ ｒ ｏ ｄｏｎｔａ ｌ ｔ ｓ ｓｕｅｉ ｓ ｏｓ ｔｉ ｖ ｅ ｙ  ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ａｔ ｅ ｄ  ｗ ｔ ｈ  ｎｆ
ｌ ａ ｍｍ ａｔ ｏ ｒ ｙ  ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ 打 ｓ ｅ  ａ ｎ ｄ  ａ ｖ ｅ ｏ ａ ｒ


ｐ
ｉ ｉ ｉ ｌ ｌ ｉ ｉ ｌ ｌ



５
 山 东 大 学 博 女 学位论文
 



ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｏ ｎ ｉ ＊  Ｓ ｃ ｈ ｏ ｌ ａｒ ｓ
 ｐ ｒｅ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ ｈ ｏ ｌ ｄ 
 ｔ ｈｅ  ｏ ｐ ｎ ｏ ｎ ｉ ｉ  ｔ ｈ ａｔ  ｔ ｈ ｅ  ｓ ｔ ｉ ｍ ｕ ａｔ ｏ ｒ
ｙ ｅ
ｆ ｆｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｌ   Ｉ Ｌ 

－

６  ｏ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ  ｉ ｓ  ｉ ｎｄ ｉ ｒ
ｌ ｅ ｃｔ ｙ  ａ ｃ ｈ ｉ ｅ ｖ ｅ ｄ  ｂ ｙ  ａｃ ｔ ｉ ｎ ｇ  ｏ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ／ ｓ ｔ ｒ ｏ ｍ ａ ｌ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｓ  ｔｏ



ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ 打 ，
ｔ ｈ ｅ  ｍ ｏ 巧 ｃｒ ｉ ｔ ｃ ａ  ｉ ｌ ｓｔｉ ｍ ｕ ａｔ ｏ ｒ ｌ  ｆ ｂ ｒ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａｔ ｉ ｏ ｎ
ｌ  ｉ 

．

Ｈ ｏ ｗｅ ｖ ｅｒ ，
ｉｒ ｅ ｃ ｅ ｎｔ  ｓｔｕ ｄ ｉ ｅ ｓ  ｒｅ ｖ ｅ ａｌ ｅ ｄ  ｔ ｈ ａｔ  Ｉ Ｌ ６ －

 ｃ ａｎ  ａ ｌ ｓ ｏ  ｍ ｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｄ ｉ ｆｅ ｒｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ 

ｎ

ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇｈ ｂ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ  ｗ ｉ ｔ ｈ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｅ ｘｐ ｒｅ ｓ ｓ ｅ ｄ  ｏ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｓ ｏ ｒ ｓ  ａ ｎ ｄ  ｔ ｈ ｉ ｓ  ｅ ｆｅ ｃ ｔ 
ｉ
－
ｉ 

ｓ

ｉ ｎ ｈ 化 ｉ ｔｏ ｒｙ 
ｒ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ  ｓ ｔ ｉ ｍｕ ｌ ａ ｔ ｏ ｒ

ｙ Ｔｈ ．  ｉ ｓ  Ｃ Ｏ 打ｔ ｒ ｏ ｖ ｅ ｒ ｓ
ｙ ｉ ｓ  ｏ ｂ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ  ａｎ ｄ  ｃ ａ ｎ  ｎｏ ｔ  ｂ ｅ  ｅｘ
ｐ ｌ ａｉ ｎｅ ｄ



ｙｅ ｔ 

．

ｓＩ Ｌ －

６ 民  ｉ ｓ  ｔ ｈ ｅ  ｓ ｏ ｌ ｕ ａ ｂ ｌ ｅ  ｆｏ ｒ ｍ  ｏ ｆ  Ｉ Ｌ －

６Ｒ ．  Ｌ ｋ ｅ  ｍ ｅｍ ｂｒａｎ ｅ ｂ ｏ ｕ ｎ ｄ  正 ６ 民
ｉ
－ －

，
ｓＩ Ｌ －

６ 民  ｃ ａｎ



ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ  Ｉ Ｌ ３ ０  ｔｈ ｒ ｏ ｕ
６ｓ ｉ
ｇｎａ ａｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ 打  ｂ ｙ ｎｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ  ｄ ｍ ｅ ｒ ｚ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ ｇｐ ｇ ｈ  ｂ ｎｄ ｎ ｇ
－ －

 ｔｒ １ ｉ


ｌ ｉ ｉ ｉ ｉ
 

ｗ ｉ ｔｈ Ｉ Ｌ ６ －

．  Ｔｈｕｓ ，
ｓＩ Ｌ －

６ Ｒ  ｐ ｌ ａｙ ｓ  ａ  ｃ
ｏｍ
ｐ ｅ ｍ ｅ ｎｔ ａ ｒ ｙ  ｒ ｏ ｌ ｅ  化  ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ  Ｉ Ｌ ６
ｌ
－ －

Ｉ Ｌ －

６ 民  ｓ ｙｓｔ ｅｍ ？ 

化

ｈ ａ ｓ  ｂ ｅ ｅ ｎ  ｒ ｅｐ ｏ ｒ ｔ ｅ ｄ  ｔ ｈ ａｔ  ｏ ｎ ｙ  ｎ  ｔ ｈ ｅ  ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｅ  ｏ ｆ  ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｃ ａ ｎ  Ｉ Ｌ ６  ｆ
ｉ ｌ ｉ
－ －

ｉ ｌ ｌ
ｙ  ｆｕｎ ｃ ｔ ｏ ｎ ｉ ． Ｆｏｒ



ｉ ｎ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ  ｉ ｎ  ｔ ｈ ｅ  ａ ｂ ｓ ｅ ｎ ｃ ｅ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ
， ，
化 ｅｃｏ ｍｂ ｉ ｎ ｅ ｄ  ｕ 化  ｏ ｆ  正 ６  ａ ｎｄ  ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｓ ｌ ｇ ｈ ｔ ｙ


－ －

ｉ ｌ

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｒ ｓ ｏ ｒ  ｂｕ ｔ  Ｉ Ｌ ６  ａ ｌ ｏ ｎ ｅ  ｄ ｄ  ｎ ｏ ｔ
ｌ ｉ ｌ
，
－

ｉ 

．

Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｆｏ ｒ ｅ ｗ ｅ ｐ ｏ ｓ ｔ ｕ ａｔ ｅ ｄ  ｔ ｈ ａｔ  ｓ Ｉ Ｌ ６ 艮  ｓ  ｒｅ ｒ ｅ ｄ ｆ ｂ ｒ  ｔ ｈ ｅ ｆ
ｉ  ａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  Ｉ Ｌ ６
ｑｕ
，
ｌ
－
ｉ ｉ ｉｌｌ ｉ 
 ｉ
－

ｔ ｒａ ｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ 打  ａ ｎ ｄ  ｉ ｔ  ｍ ｕ 巧  ｂ ｅ  ｉ ｎ ｃ ｕ ｄ ｅ ｄ  ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ  ｒ
ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｅ ｓ  ｉ 打  ｒ ｅ ｌ ａ ｔｅ ｄ  ｔ ｏ  Ｉ Ｌ ６  ａ ｎ ｄ

 ｌ
－

ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔｏ ｇｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ
ｌ 

，

虹ｃ ｏｎｃ ｌ ｕ ｓ ｏｎ ｉ
，
ｔ ｏ  ｎｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａｔ ｅ  ｔ ｈ ｅ  ｅ ｘ ａ ｃ ｔ  ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ  ｕｎ ｄ ｅ ｒ
ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ  ｔ ｈ ｅ  Ｋ ｇ ｕ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ

 ｌ

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ －

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔｏ ｇ ｅｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ  ｂ ｙ  ＩＬ ６ －

，  ｗ ｅ  ｅ ｓ ｔ ａｂ ｌ ｉ ｓｈ ｅ ｄ  ｉｎ  ｖ ｉ ｔｒｏ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａｓｔ



ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ 打 ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ 打  ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ  ｕ ｓ 打 ｇ  ｔ ｗ ｏ  ｌ 打 ｃ ａ ｇｅ ｓ  ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａｓｔ ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｓ ｏ ｒ ｓ
ｉ ｉ 

：  ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ  ｂ ｏ 打 ｅ  ｍ ａ ｒ ｒｏ ｗ



ｍ ｏ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔｅ ｓ  ａ ｎ ｄ  Ｒ Ａ Ｗ ２ ６ ４ ７  ｃ ｅ ． ｌ ｌ ｓ 
． Ｆｕ ｌ ｌ ｄ ｏ ｓ ｅｏ ｆ  忙 －

６ ／ｓ 正 ６ Ｒ ｗ ａｓ  ｕ ｓ ｅ ｄ－

 １： ｏ  ｎ ｔ ｅ ｒ ｆｅ ｒ ｅ  ｓ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ
ｉ 


ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ ｎｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ ．  Ｔ Ｒ ＡＰ  ｓ ｔ ａ ｎ ｎ ｇ  ａ ｎｄ  Ｐ ｉ ｉ ｉ 

ｔ

Ｌ ６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｏ ｎ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｏ ｎ
ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ
ｐ ｅ ｒ ｆｏ ｒ ｍ ｅ ｄ  ｔ ｏ  ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａｔ ｅ  ｔ ｈ ｅ  ｅ ｆ ｆｅ ｃ ｔ  ｏ ｆ 

－ －

Ｉ ｉ


ａ打ｄ  Ｋ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｃ ｍ ａｂ  ｌ ｉ ｌ ｉ ｔ
ｙ ｏ ｆ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍ ａｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ

 ｉ   ｌ ．  Ａｔ  ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ａｎ ｔ ｉ ｍ ｅ

， 
ｗｅ ａ  ｌ ｓ ｏ  ａｎ ａ ｌ
ｙｚ ｅ ｄ



ｔ ｈ ｅ  ｃ ｈ ａｎ ｇ ｅ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ －

ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ  ｉ ｎ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ  ｓ ｉ
ｇｎ ａ
ｌｉ ｎ ｇ  ｃ ａ ｓ ｃ ａ ｄ ｅ ｓ  ｎ  ｒ ｅ ｓｐ ｏ ｎ ｓ ｅ  ｔ ｏ  ＩＬ ｉ


－

６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎｔ  化  ｕ ｎ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ 
－

化ｅ  ｐ ｏ ｔｅ ｎ ｔ ａ ｉ ｌ  ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ  ｂ ｙ  ｗｈ ｉ ｃ ｈ  正 ６  ｐ ａ ｒ
ｔ ｉ ｃ ｉ ｐ ａｔ ｅ ｓ  ｎ

 －
ｉ

ｇ ｕ ｌ ａｔ ｏ ｎ ｏ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｔ ｏ ｎ
ｒｅ ｉ ｆ  ｉ
 ｉ 

．

Ｍａ ｔ ｅ ｒ ｉ 泣 Ｉ ｓ  ａ ｎ ｄ  ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：

１ ．  Ｔｈ ｅ  ｅ ｓｔ ａｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍ ｅ ｎｔ  ｏ ｆ  ｉ ｎ  ｖ ｉ ｔｒｏ  ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ  ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｃ  ｉ ｎｄｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｌ ｉ 

．

Ｐ ｒ ｍ ａ ｒ ｙ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒｒ ｏ ｗ  ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ 
ｉ ｉ ｓ ｏ ｌ ａｔｅ ｄ  ｒｏｍ
ｆ ｔ ｈ ｅ  ｗ ｈ ｏ ｌ ｅ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒ ｒｏ ｗ  ｏ ｆ





６
 山 东 大 学博 ±学位论文
 



ｆｏ ｕ ｒ  １ ０  ｓ ｉ ｘ ｗ ｅ ｅ ｋ ｏ ｄ  Ｃ ５ ７ Ｂ Ｌ ／ ６  ｍ ｉ ｃ ｅ
：
－ －

ｌ ．  Ｍｕｒ
ｉ ｎ ｅ  Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７  ｍ ｏ 打 ｏ ｃ ｙ ｔ ｉ ｃ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ｗｅ ｒ ｅ



ｐ ｕｒ ｃ
ｈ ａ ｓ ｅ ｄ  ｆｏ ｒ ｍ  ｔ ｈ ｅ  Ｓ ｈ ａ ｎ ｇｈ ａ ｉ Ｃｅ ｌｌ Ｃ ｅ ｎｔｅ ｒ （
Ｓ ｈ ａ ｎ ｇｈ ａ ｉ ， 
Ｃ ｈ ｎ ａ） ｉ ．  Ｔ ｈｅ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ｗ ｅ ｒｅ  ｓ ｅ ｅ ｄｅ ｄ  ｉ ｎ



５ ４
ｘ Ａ ｖｅ
６ ｗｅ
ｐ ａ ｅ口
〇 ｃ ｅ ｓ ／ｗ ｅ ｌ ｌ ｏ ｒ  ２ ４ ｗ ｅ Ｈ  ｐ ａ ｔｅ ｓ  口 ＞＜
〇 ｃ ｅ ｌ ａ ｎ ｄ  ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ  ｆｏ ｒ  ６


－ －

ｌ ｌ ｔｌ ｉ ｌ ｌ ｌ １ ｌ ｓ ｌ ｌ
 ） ）

ｄ ａｙ ｓ  ｎ  ａ ｉ
－
Ｍ Ｅ Ｍ  ｓ ｕｐ ｐ ｌ ｅ ｍ ｅｎｔｅ ｄ  ｗ ｉ ｔ ｈ  １ ０ ％ Ｆ Ｂ Ｓ  ３ ０ ｎｇ ，
／ ｍ ｌＭ －

Ｃ Ｓ Ｆ  ａｎ ｄ  ｓ ｅ ｒ ｉ ｅｓ



ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  ＲＡ ＮＫ Ｌ  Ｔ ｈ ｅ  ｃ ｕ ． ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ  ｍ ｅ ｄ ｉ ｕ ｍ  ｗ ａ ｓ  ｃ ｈ ａ ｎ ｇｅ ｄ  ｔ ｏ  ｆ
ｒ ｅ ｓ ｈ  ｍ ｅ ｄ ｕｍ  ｅｖ ｅ ｒｙ

 ｉ

ｏ ｔｉ ｅ ｒ  ｄａ ｙ  Ａ ｆ
ｔ ｅ ｒ  ４ｄ ａ ｙ ｓ  ｏ ｆ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｅ Ｔ Ｒ Ａ Ｐ  ｓ ｔ ａ 打 ｎ ｇ  ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ 
＊

． ｉ
，
ｉ ｉ ！： 〇  ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａｔ ｅ



ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ 打  ａ ｎ ｄ ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ ｎｕ ｃ ｅ ａｔ ｅ ｄ ＴＲＡ Ｐ ｐｏ ｓ ｖ ｅ ｃｅ ｓ  ｗ ｉ ｔ ｈ  ａｔ  ｌ ｅ ａ ｓ ｔ  ３  ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ
－

  ｌ  ｉ ｔｉ  ｌ ｌ 


ｗ ｅ ｒ ｅ  ｓ ｃ ｏ ｒｅ ｄ ａｓ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｓ   ｌ ．  Ｐ ｉ ｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａｙ ｗ ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆｏ ｒ ｍ ｅ ｄ

 
ｔ ； ｏ  ｄ ｅ ｔ ｅｒ ｍ ｉ ｎ ｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ



ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ  ｏ ｆ  ｉ ｎｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｆｏ ｌ ｌ ｏ ｗ ｉ 打 ７  ｄ ａ ｙ ｓ  ｏ ｆ  ｎ ｄｕ ｃ ｔ ｏ 打 ｉ
 Ｔｈ ｅｐ ｃ Ｋ ｅ ｔ ｉｔ ａｇ ｅ  ｏ ｆ ｔ ｈｅ


ｇ
ｉ ？ 

ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｄ  ａ ｒ ｅ ａ ｓ  ａ ｎ ｄ  ｔ ｈ ｅ  ｎｕ ｍ ｂ ｅ ｒ  ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｎ
ｐｔ ｏｎ ｐ ｔｓｉ ｔｈｒ ｅ ｅ  ｒａ ｎ ｄ ｏ ｍ  ｒｅ ｓ ｏ ｒｐｔ ｉ ｏ ｎ  ｓ ｉ ｔ ｅ ｓ  ｗｅ ｒｅ


 ｉ ｉ 


ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｕｎ ｄ ｅ ｒ ｍ   ｉ ｃ ｒｏ ｓ ｃ ｏ
ｐ ｉ ｃ  ｅ ｘ ａ ｍ ｉ ｎ ａｔ ｉ ｏ 打  ｕ ｓ ｉ ｎ
ｇ ｍ ａｇｅ
Ｉ Ｐ ｒｏ  Ｐ ｕ ｓ  ６ ２  ｓ ｏ ｆ
ｔ ｗａ ｒ ｅ－

ｌ ． 

．

２ ． Ｔｈｅ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｏｆ  Ｉ Ｌ ６／ ｓ ＩＬ
－ －

６ 艮 ｏ 打 ｓ ｅｒ
ｉ ｅ ｓ  Ｃ Ｏ 打 ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ ｉ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｄ ａ ｓ ｔ



ｌｆ
ｄｉｆ ｅ ｒ ｅ 打 ｔ ａｔ ｏ ｎ  ａ ｎｄ  Ｋ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｉ ｖ ｅ  ａ ｃ ｔ ｖ ｉ ｔ ｙ
ｉ ｉ ｉ 

．

Ｂ Ｍ Ｍ ｓ  ａｎ ｄ Ｒ ＡＷ ２ ６４  ． ７  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ  ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒｅ ｄ  ｗ ｉ ｔ ｈ  ｓ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ  ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ  ｏ ｆ  Ｉ Ｌ －

６ ， ｓ
正 －

６ 民 ｏｒ 正 

－

６ ／ｓ ＩＬ －

６ 反 ｉ ｎ 化ｅ  ａｂ ｓ ｅ ｎ ｃ ｅ  ｏ ｒ
 ｐ ｒｅ ｓ ｅ打 ｃ ｅ  ｏ ｆ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  ａ ｎ ｄ  ｓ ｕ ｂｊ ｅ ｄ ｅ ｄ  ｔ： ｏ  ＴＲ Ａ Ｐ  ｓ ｔａ ｉｎ ｉ ｎ
ｇ ａｆ
ｔｅ ｒ ４





ｄ ａｙ ｓ Ｍｕ ｔ
ｉ 打ｕｃ ｅ ａｔ ｅ ｄ  Ｔ ＲＡＰ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ｗ 她  ｍ ｏ ｒ ｅ  ｔ ｈ ａ ｎ  ３  ｎｕ ｃ ｅ ｉ  ｗ ｅ ｒ ｅ  ｉ ｄ ｅ 打ｔ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ  ａ ｓ
－

．  ｌ ｌ ｌ 


ｏ ｓｔｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ  ａ ｎ 过  ｓ ｃ ｏ ｒ ｅ ｄ  Ｐ ｉ ｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｓ ｓ ａｙ  ｗ ａ ｓ  ｃ ｏ ｎ ｄ ｕ ｃｔ ｅ ｄ  ｔ ｏ  ｄ ｅｔ ｅｒ ｍ ｉ ｎ ｅ  ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ ｉ ｃ
． 


ａ ｃｔ ｉｖ ｉ ｔ ｙ  ｏ ｆ  ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａｓｔ ．
 Ｑ ｕ ａ 打ｔ ｉｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ  ｒ ｅ ａ ｌ  ｔ ｉ ｍ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ  ｗ ａｓ  ｕｓ ｅ ｄ  化  ａｎ ａ ｌ
ｙ ｚ ｅ ｍ Ｒ ＮＡ



ｅｘ
ｐｒｅ ｓ ｓ ｏｎ ｉ ｌ ｅｖｅ ｌ ｓ  ｏ ｆ  ＴＲＡＰ  Ｃ Ｋ ， ，  Ｃ Ｔ Ｒ  ａｎ ｄ  Ｍ Ｍ Ｐ －

９ ．  Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｎ  ｅ ｘｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ 
ｉ ｉ ｌ ｅｖｅｌ ｓｏ ｆ  ｔ ｗｏ



ｃ ｒ ｉ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ  ｔ ｒａｎ ｓ ｃ ｒ ｉ
ｐ ｔ ｏ ｎ ａ ｌ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ
ｉ  ｈ ｉ ｇ ｈ ｙ  ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ａｔ ｅ ｄ  ｗ ｉ ｔｈ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｄ ｉ ｆｅ ｒｅ ｎｔ ａｔ ｉ ｏ ｎ
ｌ 
 ｉ ｉ

ｉ ｎｃ ｌ ｕ ｄ ｎ ｇ ｉ

Ｎ ＦＡＴｃ ｌ ａｎ ｄ  ｃ ｆｏ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ  ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄ  ｂ ｙ 
－
Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎ  ｂ ｏｔ ｌ 

．

３ ．  Ｔ ｈ ｅ  ｐ ｏｔ ｅ ｎ ｔｉ ａ ｌ  ｍ ｅ ｃ ｈ ａ打 ｉ ｓ ｍ ｓ  ｂ ｙ  ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ  Ｉ Ｌ －

６／ｓ ＩＬ ６ 民ｄｉ
－

ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｌ ｌ
ｙ  ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａｔ ｅ  ｖ ａ ｒ ｙ ｉ ｎ ｇ



ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －
ｉ ｎｄｕ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓｔｅｏ ｃ ａｓ ｔ ｄ ｌ  ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏｎ 

．

Ｂ ＭＭ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ  ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａｔ ｅ ｄ  ｗ 她  １ ０ ０  ｎ ｇ ／ ｍ 広 ＾ ６Ｒ 化  ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ
■

ｌ 
－

６／ ｓ
－

ｐｒ ｏ ｉ ｉ ｌ ａ ｓ ｔ ｃ  ｎｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏｎ
ｉ 
 ｉ

ｗ ｉ ｔ ｈ  １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  ｏ ｒ  ５ ０  ｎ ｇ ／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ ．  Ｃｅ ｌ ｌ ｌ
ｙ ｓ ａｔ ｅ ｓ  ｗ ｅ ｒ ｅ  ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ  ａｔ  ｄ ａ ｙ ２  ａ ｎ ｄ  ４  ａ ｎ ｄ




ｓｕ ｂ
ｊ
ｅ ｃｔ ｅ ｄ  ｔ ｏ  ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ
ｎ  ｂ ｌ ｏ ｔ  ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ  ａ打ｔ ｉ －
Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６  ａ 打 ｔｉ ｂ ｏ ｄ ｙ ．  Ｃｏ －

ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｐ ｉ ｔ ａｔ ｉ ｏ 打 过 巧 ａｙ



ｗ ａ ｓ  ｕ ｓ ｅ ｄ  ０  ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ  化 ｅ  ｅ 衔 ｃ ｔ  ｏ ｆ  １ ０ ０  ｎ ｇ ／ ｍ  正 ６ ／ ｓ 正 ６ Ｒ  ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎｔ  ｏ ｎ  Ｒ ＡＮ Ｋ
１： ｌ
－ － 

－

Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６  打ｔｅ ｒ ａ ｃ ｔ ｋ ｍ ｉ  ａｆ
ｔｅ ｒ  ０ ， ５ ，  １ ５  ａ打ｄ  ３ ０  ｍ ｉ 打 ｓ  ｏ ｆ  民 Ａ ＮＫＬ ｉ 凸ｃ ｕ ｂ ａｔ ｉ ｏ ｎ ．  Ａｆ
ｔｅ ｒ  ０ ， １ ５ ， 
３０



ａ 打ｄ  ６ ０  ｍ ｉ ｎ ｓ  ｏ ｆ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ  ａ ｓ  ａ ｂ ｏ ｖ ｅ  ｍ ｅ 打ｔ ｉ ｏ 打 ｅ ｄ

，
ｃｅ ｌ ｌｌ
ｙ ｓ ａｔ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｔ ａ 打 ｅ ｄ   ｉ  ａｎ ｄ  ｓ ｕｂ ｅ ｃｔ ｅ ｄ
ｊ
 

化



７
 山 东 大 学 博 ± 学位 论文
 



ｗｅ ｓｔｅｒ
ｎ  ｂ ｌ ｏ ｔ  ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ  ｕ ｓ ｎ ｇ  ａ ｎｔ ｉ ｐ ３ ｉ
－ －

８ ， 
ａｎ ｔ； ｉ
－

ｐ ｐ３
－
８ ；  ａｎｔ ｉ
－

ｐ
－

ＥＲＫ ，
ａｎ ｔ ｉ －
ＥＲＫ ； ａ ｎｔｉ ｐ － －

Ｊ ＮＫ 

，

ａｎｔ ｉ －

Ｊ ＮＫ ； 
ａｎ ｔ ｉ －

ｐ
－

Ａ ｋｔ ，
ａ ｎｔ ｉ
－

Ａ ｋｔ ； 
ａ ｎ ｔｉ
－

ｐ
－

ＮＦ 戍 －

，
ａ 打ｔ ｉ －

ＮＦ －

ｉ ｃ Ｂ  ａｎｔ
ｉｂｏ ｄ ｉ ｅｓ 

．

Ｒｅ ｓ ｉ ｄｔｓ 

：

１？  Ｔｈｅ  ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍ ｅ ｎｔ ｏ ｆ   ｉ ｎ  ｖ ｉ ｔｒｏ ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ  ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ

  

．

Ｂ ｏ ｔｈ  Ｂ ＭＭ ｓ  ａ ｎ ｄ  Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ ｃｅ ｌｌ ｓ  ｃ ａｎ  ｄ ｆ
ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｅ  ｎｔ ｏ  Ｔ Ｒ Ａ Ｐ
ｉ
ｐｏ ｓ
ｉ
－
ｉ ｔｉ ｖｅ



ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａｔｅ ｄ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ｗ ｉ ｔ ｈ  ｔ ｈ ｅ  ａｂ ｉ ｌ ｉ ｔ
ｙ ｏ ｆ ｂ ｏ ｎｅ  ｒｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔｉ ｏ ｎ
 ．  Ｔ ｈ ｅｒｅ ｗ ｅ ｒ ｅ  ｍ ａｎｙ  ｄ  ｉｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ



ｒ ｏ ｍ  Ｂ ＭＭ ｓ  ａ ｎｄ  Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ７  ｃ ｅ
ｉｖ ｅ ｄ  ｆ
ｂ ｅ ｔｗ ｅ ｅ ｎ  ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔｓ  ｄ ｅｒ ． 化 ｉ ｎｃｅｌ ｌ  ｎ ｕ ｍ ｂ ｅ ｒ， ｓ ｉ ｚ ｅ ，

ｍ ｏ ｒｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ  ａ ｓ  ｗｅ ｌ ｌ ａｓ 化 ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｏ ｎ  ａＷ ｉ Ｉ ｉｔ
ｙ ．  Ｂ ｏ ｔｈ  ｔｈ ｅ  ｎ ｕ ｍ ｂ ｅ ｒ ，  ｓ ｉ ｚ ｅ  ａ ｎｄ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ
ｉ ｖ ｅ  ａｂ ｉ ｌ ｉ ｔ


ｙ

ｏ ｆ ｔｈ ｅ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｌ
－

ｌｉ ｋｅ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉｎｃｒ
ｅ ａｓ ｅ ｄ  ｗ ｉ ｔｈ ｉ ｎ ｃ ｒｅ ａ ｓ ｅ ｄ Ｃ Ｏ 打 ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ 打 ｏ ｆ Ｒ ＡＮＫ Ｌ
   ． ５ ０ 打 ｇ ／ｍ ｌ


ｗ ａ ｓ  ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｄ ｅ ｒ ｅ ｄ  ａ ｓ  ｔ ｈ ｅ  ｓ ａｔ ｕ ｒ ａｔ ｏ ｎ ｉ  ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ ｉ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａｓ ｔ ｌ ｉ ｃ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｔｉ ｏ ｎ 

，

２ ．  Ｔｈｅ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｏｆ  Ｉ Ｌ －

６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６ 民  ｏ ｎ  ｓ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ  ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ 打 ｓ  ｏ ｆ
－

 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ －

ｉ 打ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｄ ａ 巧



ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｒｅ ｓ ｏ ｒ ｔｉ ｖ ｅ  ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ
ｙ
ｉ  
ｐ


．

Ｎｅ ｉｔ ｈｅｒ  Ｉ Ｌ ６ ｎｏ ｒ－

  ｓＩ Ｌ －

６ Ｒ ａ ｌ ｏ 打 ｅ  ｓ ｔ ｉ ｍｕ ｌ ａｔ ｅ ｄ
  ＴＲＡＰ ｐ ｏ ｓ －

ｉ ｔｉ ｖ 色 ｍ ｕ ｌ ｔ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａｔｅ ｄ ｏ ｓ ｔ
 ｅ ｏ ｃ ａｓ ｔ ｓ
ｉ  ｌ 

．

Ｈ ｏｗｅ ｖ ｅ ｒ ： 
ｗ ｈ ｅ ｎ  Ｉ Ｌ ６  ａ ｎ ｄ  ｓ Ｉ Ｌ ６ 民 ｗ ｅ ｒ ｅ  ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｙ ａｐｐ ｌ
－ －

 ｌ

ｉ ｅ ｄ  ｔｏ  ｔ ｈ ｅ  Ｂ ＭＭ  ｃ ｕ ｌ ｔ ｕｒｅ ｓ ， 

ａ

ｓｍ ａ ｌ ｌ ｂｕ ｔ  ｓｉ
ｇｎ
ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ  ｉ 打 ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ  ｉ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔｉ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ
   ａｔ Ｃ Ｏ 打 ｃ ｅ ｎ ｔ ｒａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ
 


１ ００ 打 
ｇ ／ｍ ｌ Ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅ
．   ｔｏ  ｓ Ｉ Ｌ －
６ Ｒ 出ｄ   ｎ ｏ ｔ ａ ｆｅ ｃ ｔ
  化ｅ  ｎｕ ｍ ｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ
 
ｌ
－

ｌｉ ｋｅ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  置 １１ 扣〇 ６ （ 

１

ｂｙｄｉ ｆｅ ｒｅｎ ｔＣ Ｏ 打 ｃ ｅ 打ｔ ｒ ａ ｔ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ ｉ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｈ ．  ｉ

ｇｈ  ｄ ｏ ｓ ｅ  ｏ ｆ  比 －

６  （＞ １ ０  打 ｇ ／ｍ ｌ ）  ｓ ｕ
ｐｆ Ｔ
Ｃ Ｓ ｓｅ ｄ ５ ０



ｎ ｇ／ ｍ ｌ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ －

ｉ ｎｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｏ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ｂ ｕ ｔ ｈ ａ ｄ  ｌ ｉ ｔ ｅ  ｅ
ｇ ｌ   ｌ ｆｅ ｃ ｔ  ｏ ｎ  里 ｏ ｗ ｅ ｒ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａｔ
ｉ ｏ ｎｓ

 

ｏｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ 打 ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｉ ｏ ｎ  （ ￡  ２ ０  打 ｇ ／ ｍ ｌ ｌ
）
．  Ｗ ｈｅ ｎ Ｌ ｌ
－

６  ａｎ ｄ  ５ 正 －
６ 民  ｗ ｅｒｅ



ｕ ｓ ｅ ｄ  ｉ ｎ  ｃ ｏ ｍ ｂ ｉ 打 ａｔ ｉ ｏ ｎ  １ ０  ｎ ｇ ／ ｍ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ，
里
－

ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｉ ｏ 打  ｗ ａ ｓ  ｓ ｔ ｒ ｏ ｎ ｇ ｌ ｙ



ｆａｖ ｏ ｒ ｅ ｄ  ｗｈ ｉ ｌ ｅ  ｔｈ ａｔ  ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｂ ｙ

５ ０ｎ ｌ ｉ ｃ ａ ｎ ｔｌ ｙ  ｎ Ｗ ｂ ｉ ｔ ｅ ｄ
ｇ ／ｍ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ  ｗ ａ ｓ  ｓ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｉ ．  Ｂ ｏｎｅ



ｒｅ ｓ ｏ ｒ
ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｐ ｉｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｓ ｓ ａｙ  ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｃ  ｍ ａｒｋ ｅ ｒ  ｇｅ ｎ ｅ ｓ  （ Ｃ ＴＲ  Ｃ Ｋ
，
ｉ
， 

，

ＴＲＡＰ  ａｎｄ  ＭＭ Ｐ －

９ ）  ａｎ ｄ  ｔ ｒａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ｏ ｎ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ｉ 
 （
Ｎ ＦＡＴｃ ｌ ａ ｎ ｄ ｃ ｆｏ ｓ ）  ｃ ｏ ｎ ｆ
ｉｒｍ ｅ ｄ ｄ ｉ

－

 ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ

巧 ｇ ｕ ｌ ａｔ ｉ ｏ 打 ｏ ｆ   ＲＡＮ ＫＬ －

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｏ ｇ ｅ打 ｅ ｓ ｉ ｓ  ｂ ｙ  Ｉ Ｌ ６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ

－ －



．

３ ．  Ｔ ｈ ｅ  ｐ ｏ ｔｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ  ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｓ  ｂ ｙ  ｗｈ ｉ ｃ ｈ  Ｉ Ｌ －

６ ／ｓ Ｉ Ｌ ６ －

化 出 ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｌ ｙ  ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａｔ ｅ  ｖ ａ ｒ ｙ ｉ ｎ ｇ



ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ －

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ａｔ ｏ ｎ
  ｉ ｉ 

．

６／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｎ ｅ ｉ ｔｈｅｒ  ｃ ｈ ａｎｇ ｅ ｄ  ｅｘ
ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ  ｐ ｒｏ ｆ ｉ ｌ ｅ  ｏ ｆ  Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６  ｎ ｏ ｒ  ａ ｆｅ ｃ ｔ ｅ ｄ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ
Ｉ Ｌ － － 

－

Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６  ｎ ｔ ｅ ｒ ａｃ ｔ ｉ ｉ ｏｎ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｂｙ  Ｒ ＡＮ ＫＬ  ｓ ｔ ｉ ｍ ｕ ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ ．  Ｉ ｎ ｔ ｒａ ｃ ｅ ｌ ｕ ａ ｒ  ｓ ｇ ｎ ａ ｌ ｌ ｉ ｌ ｉ ｎｇ



ｔｒａ ｎ ｓ ｄｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ   ｒｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｅ ｄ  Ｉ Ｌ ６／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ
－ －

 ｓ
ｐｅ ｃ ｉ ｆｉ ｃ ａ ｌ ｌ
ｙ ｕｐ ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎｄ ｄ ｏ ｗｎ ｒ ｅ ｇ ｕ

  ｌ ａｔｅ ｄ





８
 山 东 大 学博 ±学位论文
 



ｔ ｈ ｅ  ｐ ｈ ｏ ｓｐ ｈ ｏ ｒｙ ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ＮＦ －
ｋ Ｂ  ＥＲ Ｋ  ａ ｎ ｄ  Ｊ Ｎ Ｋ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ  ｂ ｙ  ｏ ｗ  ａｎ ｄ  ｈ ｇｈ  ｅ ｖ ｅ ｌ  ｏ ｆ
，

 ｌ
－

ｉ ｌ

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ ， ｒ
ｅｓ
ｐｅ ｃ
ｔｉ ｖ ｅｌｙ 

．

Ｃｏｎｃ ｌ ｕ ｓ ｉｏ ｎ ｓ 

：

１ ． Ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ  Ｂ Ｍ Ｍ ｓ  ａ ｎ ｄ  Ｒ Ａ Ｗ ２ Ｇ ４ ． ７  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ａｒ ｅ  ａ
ｐ ｐ ｒ ｏ ｐ ｒ ａｔ ｅ  ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ  ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｓ ｏ ｒ ｓ  ｏ
ｔｉ ｔ ｒ ｆ ｒ
 ｌ

Ｗ ｍ  Ｖ 曲Ｙ ？  ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ  ｏ ｆ ｏ ｓｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｄ ｆｅ
＊

ｅｓｔａ ｉ ｓ ｈｍ ｅ ｎ ｔ  ｏ ｆ   ｌ ｉ ｉ ｅ 打 ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ 打 

．

２ ．  ＩＬ －

６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ 打ｔ ｙ  ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ  ａ ｎ ｄ  ｓ ｕｐｐ ｒ ｅ ｓ ｓ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｉ
－
ｌ  ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ



ｂｙ 
ｌ ｏｗ －

 ｙＯ  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ）  ａ ｎ ｄ  ｈ ｇ ｈ ｉ
－

ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ  （ ５ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ
）
ｏｆ  ＲＡ ＮＫ Ｌ ， 
ｒｅｓ
ｐ ｅ ｃｔ ｉ ｖｅ ｙ ｌ 

．

３ ．  ＬＩ
－

６ ／ｓ Ｉ Ｌ －
６艮  ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉ ａｌｌ ｉ ｎ ｇ  ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｒ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｏ ｆ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ
ｙ  ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ ｅ  ｖ ａ ｒ ｌ
－

ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｄ



ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ 巧 ｄ ｌ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏｎｖ ａｓ ｉ
ｐｅｃ ｆ
ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ  ｕｐ ｒｅ ｇ ｕ ｌ ａｔ 打 ｇ  ａ ｎ ｄ  ｄ ｏ ｗｎ ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ 打 ｇ  ｔｈ ｅ
ｉ ｉ 
 ｌ ｉ

ｐ ｈ ｏ ｓｐ
ｈｏｒ
ｙ
ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ＮＦ －

ｋ Ｂ  Ｅ Ｒ Ｋ  ａ ｎ ｄ  Ｊ ＮＫ  ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｂ ｙ  ｌ ｏ ｗ  ａ ｎ ｄ  ｈ ｇ ｈ 
，
－

ｉ ｌ ｅｖｅ ｌｏ ｆ



Ｒ ＡＮＫ Ｌ ， 
ｒｅ ｓ
ｐ ｅ ｃｔｉｖ ｅ ｙ ｌ 

．

Ｋ ｅｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ： Ｉ Ｌ －

６ ， ｓ
Ｉ Ｌ －

６Ｒ ，  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ ， 
ＲＡＮ Ｋ Ｌ ， 
ＭＡ Ｐ Ｋ Ｎ Ｆ ， 
－

ｋＢ





９
 山 东 大学樽± 学位论文
 



符号说 明
   



缩 略 词  英 文 全 称  中 文 全称



Ｂ ＭＭ ｓ  Ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒ ｒｏ ｗ ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｓ   骨髓单核 细 胞



Ｅ Ｄ ＴＡ  Ｅｔｈ ｙ ｌ ｅ ｎ ｅ  ｄ ｉ ａｍ ｉ ｎ ｅ  ｔ ｅｔ ｒａ ａｃ ｅｔ ｉ ｃ  ａｃ ｉ ｄ  乙 二胺 四 乙 酸二钢



Ｆ Ｂ Ｓ  Ｆ ｅｔａ ｌ ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ  ｓ ｅ ｒｕ ｍ  胎 牛 血清



Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ Ｄ ｕ 化 ｅ ｃ ｃ ｏ Ｍｏ 出 ｆ ｅ ｄ Ｅ ａｇ Ｍｅ ｄ 改 良 培养基


，

ｓ ｌ  ｌ ｅ ｉ ａ  Ｅ ａｇ ｌ ｅ

ＤＭ Ｓ Ｏ Ｄ ｉ ｍ ａ ｔ ｈｙ ｌ ｓ ｕ ｌ ｆｏ ｘ ｉ ｄ ｅ  二 甲 基亚讽



ｑ ＲＴ Ｐ Ｃ 民
－

 Ｑ ｕ ａｎ ｔ ｉ ｔ ａｔ ｉ ｖ ｅ  ｒｅ ａ ｌ
－

ｔｉ ｍ ｅ  ｐ ｏ ｌ ｙｍ ｅ ｒａ ｓ ｅ  ｃ ｈ ａ ｉ ｎ 实 时 定 量 聚 合 酶链 反 应



ｒｅ ａｃ ｔ ｉ ｏ ｎ



ｍ Ｒ ＮＡ ｍ ｅ ｓ ｓ ｅ ｎ ｇ ｅ ｒ Ｒ Ｎ Ａ   信使  Ｒ ＮＡ



ｃ Ｄ ＮＡ  Ｃ ｏ ｍｐ ｌ ｅ ｍ ｅ ｎｔ ａ ｒ
ｙ 
Ｄ ＮＡ  互补  ＤＮＡ



Ｄ ＥＰＣ Ｄ ｉ ｅ ｔｈ
ｙ ｌ
 ｐ ｙｒｏ
ｃ ａ ｒｂ ｏ ｎ ａ ｔ ｅ 二 乙 基焦 碳酸 盐



Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  Ｒ ｅ ｃ ｅｐ ｔ ｏ ｒ  ａ ｃ ｔｉ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ  ｎ ｕ ｃ ｅ ａ ｒ  ｆａ ｃ ｏ ｒ ｋ ａ ｐｐ ａ  Ｂ ｌ ｔ：
－

核 因 子  ｋａｐｐ ａ Ｂ  受 体 激 活 物 配



ｌ ｉ
ｇ ａｎ ｄ  体



Ｃｏ －

Ｉ Ｐ Ｃ ｏ －
ｉ ｍ ｍ ｕｎ ｏ ｐ ｒ ｅ ｃ ｐ ｉ ｉ ｔ ａｔ ｉ ｏ ｎ  免疫共沉搪



Ｒ ＡＮＫ Ｒ ｅ ｃ ｅｐ ｔ ｏｒ  ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ ｎｕ ｃ ｌ ｅ ａｒ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｋ ａｐｐ ａ  Ｂ

－

棱 因 子  ｋ ａ ｐｐ ａ Ｂ  受 体激 活 物



Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ  Ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐｈ ａｇｅ
－

 ｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ  ｓ ｔ ｉ ｍ ｕ ｌ ａｔ ｉ ｎ ｇ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ

 巨 噓细 胞集落 刺 激 因 子



正 －

６  Ｉｎ ｔｅｒ ｌ ｅ ｕｋ ｉ ｎ ６ －

 白 细胞介 素 

６

ｓＩ Ｌ －

６民 Ｓｏ ｌ ｕｂ ｌ ｅ  ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ ６ －

 ｒｅ ｃ ｅ
ｐｔｏ ｒ  可 溶 性 白 细 胞介 素 ６ 受体



ｍ Ｉ Ｌ ６ Ｒ  Ｍ ｅ ｍ ｂ ｒ ａｎ ｅ ｂ ｏ ｕ ｎ ｄ ｅ ｄ  ｎ ｔ ｅ ｒ Ｉ ｅ ｕ ｋ ｉ ｎ ６  ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ
－ －

ｉ
－

膜结合 型 白 细 胞介素  ６ 受体



ｇｐ
－
１ ３０ Ｇ ｌ
ｙｃ ｏｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ ｉ
－

１ ３０  糖 蟹 白 １ ３０



Ｎ ＦＡＴｃ  Ｎ ｕ ｃ ｌ ｌ ｅ ａ ｒ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ  Ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  １
－

活化  Ｔ  细 胞核 因 子 １



Ｔ Ｒ Ａ Ｐ  Ｔａ ｒ ｔ ａ ｒ ｉ ｃ  ａｃ ｉ ｄ
－

ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎｔ
 ｐ ｈ ｏ ｓ ｐｈ ａ ａ ｓ
ｔ ｅ  抗酒石酸酸牲瓣酸酶



Ｃ Ｋ Ｇ ａｔｈ 巧 ｓ ｎ ｉ  Ｋ 组织 蛋 白 酶 

Ｋ

ＭＭＰ －

９  Ｍａ ｔｒｉ ｘ ｍ ｅｔ ａ
 ｌ ｌ ｏ ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ ａ ｓ ｅ ９ ｉ
－

 基质 金属 蛋 白 酶  

９

Ｃ ＴＲ  Ｃ ａ ｌ ｃ ｉｔ ｏｎ ｉ ｎ  ｒ
ｅ ｃｅ ｐｔｏ ｒ  降 钩 素受体



Ｔ ＲＡＦ ６  ＴＮＦ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ  ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａｔ ｅ ｄ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ６  肿 瘤坏 死 因 子 受 体 相 关 因 子 

６

ＮＦ －

ｋＢ  Ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ
－

ｋａ ｐｐ ａ Ｂ   核因子  ｋ ａ ｐ ｐ ａＢ



ＮＦ －
ｋＢ  Ｆ ｈ ｏ ｓｐ ｈ ｏ ｒ ｙ ｌ ａ ｔｅ ｄ
－

Ｎｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ
－

ｋ ａｐ ｐ 过  Ｂ 麟 酸 化 核 因子 ｋ ａｐｐ 泌


Ｐ 

１０


 山 东 大学博±学位论文
 



ＭＡ Ｐ Ｋ  Ｍ ｉｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ  ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ
－


 丝裂原 活化 的 蛋 白 激酶



Ｅ Ｒ Ｋ  Ｅ ｘｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａｒ  ｓｉ
ｇｎ ａ
ｌ
－

ｒｅ
ｇｕ ａ ｅ ｄ  ｋ ｎ ａ ｓ ｅ
ｌ ｔ ｉ
 细胞外信 号调 节薇酶



ｐ Ｅ Ｒ Ｋ  Ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｒ ｙ ｌ ａｔ ｅ ｄ Ｅ ｘ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｕ ａｒ  ｓ ｇ ｎ ａ
－
ｔ ｌ
－
ｌ ｌ ｉ
－

ｒｅ
ｇ ｕ ａｔ ｅ ｄ
ｌ
 麟 酸 化 细 胞 外 信 号 调 节激 酶



ｋｉ ｎ ａ ｓ ｅ



Ｊ Ｎ Ｋ ｃ －

Ｊ ｕｎ  Ｎ －

ｔｅ ｒ ｍ ｎ ａ ｌ  ｋ ｎ ａｓｅ  ｃ
ｉ ｉ
－
Ｊ ｕｎ  氨 基 末端 薇 酶



ｐ
－

Ｊ Ｎ Ｋ  Ｐ ｈ ｏ ｓｐ ｈ ｏ ｒ
ｙ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ Ｃ Ｊ ｕｎ 
＊ ＂ －

Ｎ －
ｔｅｒ ｍ ｎ ａ ｌ  ｋｉ ｎ ａｓ ｅ
ｉ
 麟 酸化 
ｃ －

Ｊｕ ｎ  氨 基 末端 激 酶



ｐ ３８
－

 ｐ３ ８  ｍ ｉ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ  ｐ ３ ８ 
－
ｉ

 經裂原 活化 的 蛋 白 激酶



ｐ ｐ ３ ８
－

Ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｒ ｙ ａｔ ｅ ｄ ｐ ３ ８  ｍ
－
ｌ
－

ｉ ｔｏ
ｇ ｅ ｎ ａｃ ｔ ｉｖ ａｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ
－


磯 酸 化 ｐ
３ ８ 逆裂原 活化 的 蛋 白



ｋ ｎａ ｓ ｅ
ｉ
 激酶



Ａｋ  Ｐ ｒｏ ｔ ｔｅ ｉ ｎ  Ｋ ｉ ｎａ ｓ ｅ Ｂ 
 蛋 白 激酶  

Ｂ

ｐ
－

Ａ ｋ  Ｐ ｈ ｏ ｓｐ ｈ ｏ ｙ
ｔ ｉ ｌ ａｔｅ ｄ －
Ｐ ｒｏ ｔｅ ｎ  Ｋ ｎ ａ ｓ ｅ
ｉ ｉ  Ｂ  麟 酸化 蛋 白 激酶 


Ｂ

１１


 山 东 大学博±学位论文
 



前言


牙周 炎是 种 发 生在 牙 齿支 持组 织 的 慢性 炎症 性疾病 临床上 Ｗ 牙銀 红肿
一

， 

、

牙周 袋形 成和 牙槽骨 吸 收 为 典 型 特征 ， 常 导致牙齿松 动 、 脫落 ， 是导致成年人失




牙 的主要原 因 ［ Ｕ 。 由 于牙 周 炎 患 者剩 余牙 齿 固 位力 及支持 力 较 差 ， 为 临 床传 统修



复带来 了 困 难 ， 即 使 种 植修 复后 也 容 易 罹 患 种 植 体周 围 炎 从而 造成种 植体脱落 


。

目 前 研 究 认 为 菌 斑 微生 物 是 牙 周 炎 的 启 动 因 素 牙 周 致 病 菌 及 其 内 毒 素 等 代 谢 产

 ，

物 激 活 牙 周 局 部 炎 症 性 免 疫 反应 致 使 免 疫 细 胞产 生 大 量 ， ＴＮＦ ａ －

、 Ｉ Ｌ ６ －

等炎 症 因



子 ， 这 些 炎 症 因 子 能 够 促 进 破骨 细 胞 分 化 及 其 骨 吸 收 活 性 ， 进而造成牙 槽骨 吸 收



破坏 ［
２ ， 
３
］


。

骨 改 建 是 由 成骨 细 胞介 导 的 骨 生 成 和 破骨 细 跑 介 导 的 骨 吸 收共 同 作 用 来 实



现的 个 生 理 进程 在 这 个 动 态 平 衡 的 过 程 中 成 骨 细 胞 和 破 骨 细 胞 通 过彼 此 之


一

。 ，

间 的 偶联调节二者 的 生物 学活性 ［
４］ 。
哺現动物 体 内 的 破骨细 胞来源 于 造血细 胞



系 造 血 干 细 胞 在 特 定 条 件 下 能 够 分 化 为 破骨 细 胞 前 体 细 胞 进 而 特 化 为 成 熟 的 破
， 


曾细 胞 行使骨 吸 收 的 功 能 ［
５ ， 句 。 破骨 细 胞在体 内 的 分化主要 受 到 成骨细 胞和 骨



髓基质 细 胞 分泌 的 核 因 子 ｋＢ 受体激活物 配体 （ Ｒｅ ｃ ｅｐ ｔｏ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｏ ｒ ｏ ｆ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ



ｋ ａｐ ｐ ａ －

Ｂ ｌ ｉ
ｇ ａ ｎｄ ，
Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ ） 和 巨 隨细 胞 集 落 刺 激 因 子 （ Ｍ ａ ｃｒ ｏ ｐｈ ａ ｇ ｅ  ｃ ｏ ｌｏ ｎ
ｙ 
ｓｔ ｉ ｍ ｕ ｌ ａｔ ｉ ｎ


ｇ

ｆａｃ ｔ ｏ ｒ， Ｍ Ｃ ＳＦ ） 的 调 控
－

［
７， ８
］
， 其中 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的 作 用 最为 重要 。 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 与 其 表达



于 破骨 细 胞 前体细 胞表面 的 受体 Ｒ Ａ ＮＫ 结合 ，
募 集肿 瘤 坏 死 因 子 ａ 受体相 关 因



子 ６ （ ｔｕ ｍ ｏ ｒ ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃｅ
ｐ ｔ ｏ ｒ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ａ ｅ ｄ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ６
ｔ
－

ｉ ，  Ｔ ＲＡＦ ６ ） ， 激活下游核 因 子



ｋ ａｐ ｐ ａ Ｂ  （ Ｎｕｃ ｌ ｅ ａ ｒ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ
－

ｋ ａｐｐ ａ  Ｂ ，
ＮＦ 证 －

） 、 丝裂 原 活化 的 蛋 白 激 酶 （ Ｍ ｉｔ ｏ ｇ ｅｎ 

－

ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ
 ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｓ ，
ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ ） 等 多 条 信 号 通 路 
，
 使得 释放到 胞质 中 的  ＮＦ －

ｋＢ 

、

ｃ
－

ｆｏ ｓ 等 转录 因 子 入 核 ，
促进 破 骨 细 胞 分 化 相 关 转 录 因 子 的 表 达 ， 最 终 完 成 破骨



细 胞 的 分化和 活化 ［
９ ，
１ ０
］
。 上述 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｒ ＡＮＫ －

信 号 系 统 启 动 的 破骨 细 胞 分 化 是



破骨 细 胞 生 成 的 主 要 途 径 ，
除此之外 ， 许多 细胞 因 子如 ＴＮＦ ａ －

、 正 －

１ 、 正 －

６ 和 忙 

－

１ １ 也 被 发 现 具有 诱 导 骨髓来源 的 破骨 细 胞 前 体细 胞分 化 为 成 熟 的 破骨 细 胞 的 功



能 ［
Ｕ －

１ ４］ ， 可 能 在 某 些 病 理性骨 吸 收 相 关 疾病 中 发挥重 要 作 用 ， 但 目 前为止对于




其 内 在 的 调 控机制 还不太清 楚 

。

正 －

６ 属于糖蛋 白 １ ３ ０（
ｇ ｙ ｃ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔｅ ｉ ｎ
ｌ
－

１ ３０ ，
 ｇｐ
－
１ ３０ ） 家族 ， 其他 家 族 成 员 还 包



括 正 －

１ １ 、 白 血病抑制 因 子 （ ｌ ｅ ｕ ｋｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎｈ 化 ｉ ｔｏ ｒ
ｙ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ， Ｌ圧 ） 、 抑癌 蛋 白 Ｍ （ ｏｎｃ ｏ ｓ ｔａｔ ｉ 

ｎ

１２


 山 东 大 学博 ± 学 位论文





Ｍ ， Ｏ ＳＭ ） 、 屯肌营养素 －
１ （ ｃ ａｒ ｄ ｉ ｏ ｔ ｒ ｏｐ ｈ ｉ ｎ
－

１ ） 等 ， 它 们 的 共 同 特征是都依赖靴细



胞膜 上表 达 的 ｇｐ
－

１ ３０ 向 细胞 內 传导信 号 ［
１ ５
］
。 正 －
６ 与 其 受体 正 －

６Ｒ 结合后促使



ｇｐ
－

１ ３０ 二 聚化 ， 激 活 下 游 两 面神 激酶 （ Ｊ ａｎ ｕ ｓ ｋ ｎ ａｓ ｅ
ｉ ， Ｊ ＡＫ ） ／ 信 号 转 导 和 转 录激 活



子 依 １１５ 加０ ６［ 如乂３ 化犯 化 ３ 了乂了 和 的 ＼？松 信 号通路

＊ ＇

（ ５１
留 １ ３１ １ ３１ １ （ ５３ １ ；
０ １ ０（ １
咕 １１ 〇１１ ， ） ／ 

，

介导 Ｗ 免疫调 节为主 的 系 列 生理反应 临 床研 巧 发现类风湿 性关 节 炎

一

。
［
１
巧 

、

Ｐ ａ ｇｅ ｔ 病 ［
１ ７］ 和 多 发性硬 化症 ［
１
巧 等 关节 与 骨 破 坏 相 关 疾病 患 者 血 清或 关 节 液 中



正 －

６ 水 平较 健康对 照 组 显 著 升 高 ， 而给 予 正 －

６ 抑 制 剂 塔 西 单抗 治 疗 后 ， 关节 炎



症 明 显 减轻 ， 提示升高 的 正 －

６ 可 能 是 关节 炎 症 的 致病 因 素 ［
１ ９］ 。 另外 ， 基 因 改造



动物研究显示 正 －

６ 基 因 敲除小 鼠 与野生小 鼠相 比 ， 在胶 原 或抗原 的刺 激下 ， 


不

易 诱发关节炎症 ，
即 使 发 生 关节 炎 其 炎 症 程度 和 骨 破 坏 也 比 较 轻 微 ［
２０ ，
２ Ｕ 。 ｙ Ｊ
ｌ 

上

研究表 明 Ｌ 是 种 潜 在 的 骨 吸 收促进 因 子 在 炎症性骨破坏 的 病理发生 中 发



一

６
－

Ｉ ，

挥重要作用 

。

此外 ， 科 研 人 员 还通 过大 量 体 外 实 验探 讨 了 正 －

６ 对破骨细胞生成 的 影 响 

。

早 期 的 研 巧表 明 Ｉ Ｌ －

６ 不 仅 能 够 促 进 大 鼠 和 人 全 骨 髓 细 胞培 养 体 系 中 破 骨 细 胞 的



生成 ［
２０ ， ２ 巧 ， 还 能 够 促 进 成 骨 细 胞 破骨 细 胞共 培 养 体 系 中 破 骨 细 胞 的 分 化 和 成

 －

熟 ［
２３］ ， 但 是对 纯 化 的 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 的 分 化 却 没 有 显 著 影 响 ［
２４ ］ 。 还有研 究



发 现 破 骨 细 胞前 体细 胞 表 达 的 正 －
６ 受体 （ 正 －

６  ｒｅｃｅ
ｐ ｏｒ
ｔ
，
忙 －
６氏 ） 远 高 于 成骨 细 胞 

，

但是 只 有成骨细胞表面 的 正 －
６ Ｒ 才是 正 －
６ 増 强 破骨细 胞 分 化 所 必 需 的 ［
２３］ 。 基于



上 证据 ， 学术界普遍认为 正 －

６ 促 破骨 细 胞 生 成 的 作 用 是 间 接 地 通 过诱 导 成 骨



细胞或骨髓 间 充质 细 胞分泌 ＲＡＮＫ Ｌ 来 实 现 的 而 非 直 接 作 用 于 破骨 细 胞 及 其 前


 ，

体细胞 另外 由于 化 是 种 多 功 能 的 炎症 因 子 它还可 刺激成骨细胞或



一

６
－

。 ， ，

间 充质 细 胞释放 Ｉ Ｌ －
１ 、 ＴＮＦ ａ －

等 促 炎 因 子 而 送 些 因 子 也 被 发 现 具 有 直接 或 间 接

 ，

的 促破 骨 细 胞 分 化 的 功 能 ［
２２ ，
２５］ 。
但是 ， 对 于 某坚病 理状况 下 的 破骨 样 细 胞 ， 

比

如 骨 巨 细 胞瘤 来源 的 破骨样 细 胞 ， 其表面 也表达 正 －

６ Ｒ 并且 正 －

６ 能够直接诱 导



此种 破骨样细 胞 的 骨 吸 收活性 口巧 

。

虽 然现 有 证 据 表 明 正 －

６ 不 足 凶 诱导 纯化 的 破骨 细 胞前 体细 胞 分化 ， 但是可



溶性 正 －

６ 受体 （ ｓ ｏ ｈｉ ａｂ ｌ ｅ 化 －

６  ｒｅ ｃ ｅ
ｐｔ ｏ ｒ ， 
８ 比 化 －

） 的 加 入却 可 １ ＾＾ 大 大増 强 圧 －

６ 对破



骨 细 胞 前 体 细 胞 分化 成 熟 的 促 进作 用 。 Ｓ 正 －

６Ｒ 是 Ｉ Ｌ ６Ｒ－

的 可 溶性 亚 型 ， 与 膜结合



型 正 －

６ 受体 （ ｍ ｅ ｍｂ ｒａｎ ｅ ｂ ｏ ｕ ｎ ｄ －

正 －
６ｒｅｃ ｅ
ｐ ｏ ｒ ｍ 圧 ６民
ｔ
，
－

） 相 比缺 乏胞膜结合 序 列 

，

１３


 山 东 大学博±学位论文





因 此溶 解于 组织 液 中 与 。 ｍ ｍ ６民 －

相似 ， ｓＩ Ｌ －

６民 与 正 －

６ 结 合 后 诱 导 细 胞膜 上 ｇｐ ｌ ３０



的 二 聚 化 和 下游 通路 的 激活 ［
２７
］
。 早在 １ ９９３ 年 ， Ｔａ ｍｕ ｒ ａ 等在研巧 Ｉ Ｌ －

６ 对 前 破骨



细 胞 与 骨 髓 细 胞 共培 养 体 系 中 破 骨 细 胞 生 成 影 响 时 发 现 单 独 使 用 正 －

６ 或 ｓ ｌ －

６Ｒ



不 能诱导 破骨细 胞生成 ， 而 两 者 联合 应 用 则 能 够 明 显 促 进破 骨 细 胞 的 分 化 形 成 


。

２ ０ ０２ 年 ， Ｐ ａｌ ｍ ｑ ｖ ｉ ｓｔ 等在 小 鼠 烦骨体外培养体系 中 加 入 正 －

６ 和 或 ／ Ｓ 正 －

６ ＲＷ 检 测



其 对 顾骨 破 骨 细 胞 分 化 的 影 响 时 也 发 现 了 类 似 的 现 象 ， 即 单独使用 比 －
６ 或 ８ 比 

－

６民 对破骨 细 胞 分化和 骨 吸 收没有影 响 ， 但是 二 者联合应用 却 显 著 促进烦骨骨 吸




收和 巧离子 的 释放 年后 Ｋ ｕ ｄｏ 等又用 正 和 或 正 ６Ｒ 处 理人 外 周 血单


一

２ ８］ 。 ，
－

６ ／ Ｓ
－

核 细 胞 破骨细 胞 前 体细 胞 的 种 发现 单 独 使 用 正 不 能诱导破骨细 胞形成

一

（ ） ，
－

６ 

，

而 正 －

６ 与 ｓ ＾ －

６Ｒ 联用 却 能 诱 导 抗酒 石 酸 酸 性磯酸酶 （ Ｔａ ｒ
ｔａｒ
ｉ ｃ  ａｃ ｄ ｉ
－

ｒｅ ｓ ｉｓｔ ａ ｎｔ



ｐ ｈｏ ｓｐ
ｈ ａｔ ａ ｓ ｅ ，
ＴＲ Ａ Ｐ ） 阳 性 的 多 核 巨细 胞 和骨 吸收 陷 窝 的 形胸 Ｍ ］
。 此外 ， 在该实



验 中 研 巧 者还 发 现 正 －

６ 与 Ｓ 正 －

６ Ｒ 对破骨细 胞形成 的 诱导不依赖于 Ｒ ＡＮＫ Ｌ ， 


因

为 人 外 周 血 单 核 细 胞 为 血液 分离 的 纯 化细 胞 其 中 不 含 有 能够 分 泌 ， Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的其



他细胞 ， 提示 圧 －

６ 在 Ｓ 正 －

６Ｒ 存在 的 情 况 下 能够 直接 作 用 于 破骨 细 胞 前 体细 胞进



而 促进其 分 化 上 述研 究 结 果 指 向 了 这 样 条 假 设 表 达于 破骨 细 胞 前 体 细 胞 表


一

。 ；

面的 ｍ ＩＬ ６ 民 ￣

可 能 是生 理性 不饱和 的 ， 在 正 －

６ 过量 的 情 况 下 不 能 介 导 正 －

６ 信号



通路 的 完 全激活 ， 只 有补充 外源性 Ｓ 正 －

６Ｒ 才能实现 正 －

６ 生 理功 能 的 充分 发挥 

。

而 正 －

６ 对 破骨 细 胞 生 成 的 直 接 促 进 作 用 较 弱 ， 需 要在其生理作 用 完全发挥 的 条



件 下 才 能表 现 出 来 

。

到 目 前为止 ， 关于 正 －

６ 对破骨 细 胞 生成 的 直 接 作 用 的 研 究 还 比 较 少 ， 但现



存 的 证据表 明 比 －

６ 对破骨细 胞前 体 细 胞成 熟 分 化 的 直接作用 是抑 制 而 不 是促进 


。

１ ９９５ 年 ， Ｆ ａｎ ａ ｇ ａｎ
ｌ
等在体外 研 究 正 －

６ 对人 破 骨 细 胞 分 化作 用 时 首 次 发 现 正 －
６ 

抑

制 了 活性维生素 Ｄ 对 人骨 髓 细 胞培 养体 系 中 破骨 细 胞 分 化 的 诱 导 作 用 ［
２ ９］ 

。

Ｒ ＡＮＫ Ｌ ＲＡ ＮＫ －

信 号 系 统 发现之后 ， ２００８ 年 Ｙｏ ｓ ｈ ｉ ｔ ａｋｅ 等利 用 正 －

６ 干预 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



诱 导 的 小 鼠 骨髓 单核细 胞 （ Ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａｒｒｏ ｗ  ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａｇ ｅ ｓ ，  Ｂ ＭＭ ｓ ） 向 破骨细胞分化




体系 ， 发现 Ｉ Ｌ －

６ 抑制 了 小 鼠 Ｂ ＭＭｓ 的 破骨 向 分 化 。 几乎 同 化 Ｄ ｕｐ ｌ ｏ ｍｂ 等也报



道称 Ｉ Ｌ －

６ 能 够 通 过 促 进 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 向 巨 儀 细 胞 分 化从 而 抑 制 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 

诱

导 的 破骨细 胞生成 ［
３０
］
。 但截至 目 前 ， 对于 正 －

６ 抑 制 破骨 细 胞 分 化 的 机 制 还 不 清



楚 

。

１４


 山 东 大学 博壬 学 位论文
 



综上所述 ，
学 术 界 对 于 在 炎 症 性 骨 破坏 中 正 －

６ 的 效应鞭细胞和 具 体机制 还



存在 较大争 议 。 我们 之前在 研 究 正 －

６ 基 因 敲 除对 小 鼠 破骨细胞生 成影 响 时 发 现



正 －

６ 缺 失 小 鼠 长 骨 破 骨 细 胞数 量 増 加 但 其 骨 吸 收 活 性 降 低 表 现 为 破 骨 细 胞 分 化

 ，

和 功 能 的 分离口 ４ 进 步凸显 了 正 在 破骨细胞活 化通路 调 节 中 作 用 的 复杂



一

，
－

性 。 因此 ， 明确 正 －

６ 在 破骨 细 胞 分 化 成 熟 中 的 作 用 有 助 于 我 们 加 深 对 炎 症 性 骨



吸 收 病 理机 制 的 理 解 为 牙 周 病 治 疗 新 鞭 点 的 筛 选 和 相 关 骨 吸 收 抑 制 药 物 的 研 发
， 


奠 定 理论基础 

。

第 一

部分 ： 体外 破 骨 细 胞 巧 导 模 型 的 建 立


生 物 体 骨 组 织 终 生 都 处 于 动 态 的 改建 过 程 中 。 在 送个过程里 ， 成骨细 胞 不 断



形 成新 的 骨 基质 而 破 骨 细 胞 不 断 吸 收 旧 的 骨 基质 如 此新 旧 交 替 共 同 维持骨 改 建

 ，

的 平 衡 使 骨 量 及 曾 强 度 与 身 体 所 处 的 环 境 状 态 相 适应 但 是 在 某 些 病 理 条 件 下
， 。 

，

如 机体 内 分 泌 发 生棄 乱 或者细 菌入侵 引 起 急慢性炎 症 会 直接 或 间 接 导 致骨 代谢


 ，

调 节 因 子 产 生 失衡 ， 破 骨 细 胞 数 量増 加 、 活性上 调 ， 骨 吸 收大 于骨 形 成 ， 造成骨



质 疏 松 或 牙 槽 骨 吸 收 等病 理性骨 质 破坏 ［
３ ２］ 

。

破骨 细 胞 是 行 使 骨 吸 收 功 能 的 主 要 细 胞 类 型 对 于 骨 稳 态 的 维 持 起 着 至 关 重

 ，

要 的作用 ［
７
］
。 破骨 细 胞起源 于造血器 官 中 的 单 核 巨 處 细 胞 系 ， 在破骨 诱 导 因 子



Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 的 作 用 下可 分化 并 相 互融合 形成 多 核 巨 细 胞 ， 同 时 细 胞 骨 架 重新 排布 

，

通过多 种 粗 附分 子巧 附于 骨 基质 表 面 能够在 骨表 面移 动并进 行骨 吸 收 ，

［
７ ， 
８ ，
１
巧 

。

处 于 功 能 活 跃 状 态 下 的 破 骨 细 胞 与 矿 化 基 质 结 合 形 成 封 巧 区 封 巧 区 的 细 胞 膜特

 ，

＋
化形成 皱擢 缘 ， 同 时 胞体分 泌 Ｈ 和 多 种 蛋 白 水解 酶如 组 织 蛋 白 酶 Ｋ （ ｃ ａｔ ｈ ｅ ｐ ｓ ｉ ｎ Ｋ 

，

０ １〇 基质 金属 蛋 白 酶 的３１ ＾ 姐 〇口 ＾１ ＼１ ？ ３ 等 降解骨 基 质 口
＇ ＇

、 （ １ １１１ ６１ ：
１ 〇 ＊６ １ １１ ３８ ６ ５ ，
）
］


。

破骨 细 胞是 种 由 多 个单核细 胞融 合 而 成 的 巨 型 多 核细胞 属 于 终 末 分化细



一

胞 本身 不能继续増殖
， 。 另 外 由 于 成熟 的 破骨细胞 多 贴 附 于 改建活跃 的 骨 组织表



面 且 数 量 较少 ，
因此难 ＾ ＾ 实现体 外 分 离培养 。
为 了 建立 破 骨 细 胞 体 外 培 养体 系 

，

早 期 学 者通过将 小 鼠 烦顶骨来源 的 成骨 细胞和骨 髓造血干细 胞共培养诱导 形成




了 具有骨 吸 收 功 能 的 成熟破骨 细胞 但 这种 方法 由 于在培养过程 中 渗杂 了 大量其


 ，

他 骨 髓细 胞 ， 使得 诱 导 生 成 的 破骨 细跑 纯度 非 常化 ， 仅 为 ％左 右 １
［
３３ －

３ ５
］
。 随着



研 究 的深入 ， 主 导 破骨细胞分化 的 主 要信 号 机制 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ －

系 统逐渐被 阐



明 ，
使 得 破骨 细 胞 的 体 外 培 养 成 为 可 能 口６ ］
。 ＲＡ ＮＫＬ 与 其 位 于 破骨 细 胞 前 体细



１５


 山 东 大学博±学位论文
 



胞表面 的 受体 Ｒ ＡＮＫ 结合 启 动下游 系 列 破骨 细 胞分化 相 关 的 信 号通路及转



一

录 因 子 的表达 最终 导致细 胞表 型 的 改变 此外 参与破骨细胞分化形成 的 另



一

， 。 ，

重要 因 子 就是 Ｍ Ｃ ＳＦ －

， 它 是造血 系 单 核 细 胞 増 殖 和 破骨 细 胞 前 体细 胞 融 合 的 必



需因子 ［
３ ７
］
（ 图 １
－

１ ） 。 １ ＾ 上两种 破骨细 胞 诱 导 因 子 的 发现及其作 用 机制 的 阐 明




为破骨细 跑 的 体外 诱 导 形成提供 了 理论依据 和 实 践基础 


。


ｅ ｏ ｄ ａ ｓ ｓ  Ｆ ｕ ｓ ｅ ｄ  Ａ Ｃ ｗ ？ｔ ？ ｄ
Ｂ ａｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ  Ｐｒ ｔ ｏｓ ｔ ｊ ｔ

 

ｊ

巧 ｅ ｃ ｕ ｓ ｏ  庐巧 ｒ Ｈｔ ａｒ
ｙ
ｏｎ  ｏ 巧ｅｏｃ ｔ ａ 巧

奪 ｎ？ＡＰ
Ｃ ＴＲ

知 Ｐ
、


－
？

 Ｃ ＴＲ
杂 媒娜 身

 Ｔ ＲＡＰ

ｓ
－
－

 Ｃ ＴＲ 
．


 Ｌ

 Ｍ 巧０
Ｔ Ｒ ＡＰ
＊


＊
－


 Ｍ 凤

Ｔ ＲＡ Ｐ

Ｃ ＴＲ
．



，


－



＊

私 ＊


＊
Ｐ ！


图 １
－

１ ： 破骨 细 胞 分化 各 阶段 及 相 关 调 节 因 子 。 引 自 Ｂ ｏｙ ｌ ｅ Ｗ Ｊ ，
Ｓ ｍｏ ｎ ｅｔ
ｉ Ｗ Ｓ ，
Ｌ ａｃ 巧



Ｄ Ｌ Ｏ ｓ 出 筋 ｒ ｅｎ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｔ ｏ ｎ  ｉＶ ａ／＂化 ２００３ ４封 ６９３ ７ ３ ３ ７ ３ ４２

－

 ． ｔ ｅ ｏ ｃｌ ａｓｔ ｔｉ ｉ ｉ ．

， ，  （ ）
：


＇

在 Ｒ ＡＮＫ Ｌ Ｒ ＡＮＫ －

系 统发现之前 ， 体 外 破骨 细 胞 诱 导 主 要 依 靠全骨 髓培 养



或 者 骨 髓基 质 细 胞与 单 核 细 胞共 培养来 实 现 这种 两 种 培 养 方 法 的 优 点 是 能 够 很

 。

大程度 上 模 拟 破骨细 胞在 体 内 分化 的 生 理环 境 但 由 于 因 涉 及 骨髓细 胞 的 分 离 和


 ，

多 种细胞 的 共培养 ，
实 验操 作 较 为 复杂 ， 且 易 受 分 离 细 胞 的 纯度 、 各细胞组份 的



比例 和 培养 条件等 多 种 因 素 影响 难 Ｗ 实现单 实验条 件 的 控制 因此 目 前常用



一

。
，

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 和 Ｍ Ｃ ＳＦ
－

诱 导 纯化 的 破骨 细 胞前 体 细 胞 向 成 熟破骨 细 胞分 化 。 小 鼠骨



髓单核细 胞和 白 血 病 小 鼠 单 核 细 胞 株 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ．
７ 是 最 常 用 的 两种 小 鼠 破骨细 胞



前 体细胞模 型 在第 部分实验 中 我们分别 昆 明 小 鼠骨髓单核细胞和



一

。 ，

ＲＡＷ ２ ６ ４ ．
７ 细胞作 为前 体细胞 ， 在 ＲＡ ＮＫＬ 和 Ｍ Ｃ ＳＦ －

诱 导 下 分 化为 成 熟 的 具 有



骨 吸 收 功 能 的 破骨细 胞 建立 破 骨细 胞 诱 导 分化 体 系 为下 步 的 研 究 做准 备
一

， ， 

。

材料 和 方 法


１ 实验材料


１ ． １ 主 要 仪 器 和 设备


二 氧化碳培 养箱 （ Ｓ ＡＮ Ｙ Ｏ ， 日 本 

）

Ｓ Ｗ ＣＪ － －

１ ＦＤ 超净工作 台 （ 江苏 通净 ， 中国 

）

Ｃ ＫＸ ４ １ 倒 置光学 显 微镜及拍 照 系 统 （ Ｏ ｌ
ｙｍｐ ｕｓ ， 日 本 

）

ＫＤ Ｓ －

２２ 电热恒温水浴锅 （ 上海精宏 ， 中国 

）

１ ６


 山 东 大 学博± 学位论文
 



高压 灭菌 器 （ 上海 申 安 ， 中国 

）

ｓ ｔａｒ
ｔ ｅｒ ３ Ｃ 实 验 ＰＨ 计 （ 上海奥 豪斯 ， 中国 

）

Ｕ ＴＲＡＰ Ｏ ＲＥ  超纯 水 系 统 （ Ｓ ｈｎ ｌ ｉ ｃ ｉｔ
ｙ ＵＶ ， 美国 

）

巧 １ ２４５ 分析天平 （ 北 京利 斯 ，
中国 

）

Ｃ 超 低 温 冷 冻 存储 冰 箱 中 科美 菱
°
－

８０ （ ， 中国 

）

ＴＧ １ ６５ ０ －

ＷＳ 台 式 高速 离 也机 （ 上海卢 湘 仪 ，
中国 

）

ＹＢ ３ Ｌ ０ ０ ６ ２ １ ６ 电动 移液器 （ Ｓ Ｃ Ｉ Ｌ Ｏ ＧＥ Ｘ ， 美国 

）

微 量移 液 器 （ Ｅｐｐ ｅ ｎ ｄ ｏ 比 德国 

）

１ ． ２ 魏 器材


塑料离也管 （ １ ５ｍ ｌ 、 ５０ ｍ ｌ ） 、 细 胞冻 存 管 （ ２ ｍｌ ） 、
．

６ 孔板 （ Ｃ ｏ ｍ ｎｇ ｉ ，
美国 ） 、 ２４



孔板 美国 细 胞培 养瓶 美国 培 养皿
２
（ Ｃｏｍ ｉ ｎｇ ， ） 、 Ｔ ２５ －

（ Ｃ ｏｍ ｉ ｎｇ ， ） 、 １ ０ ０  ｍｍ 

、

眼科剪 ， 眼科綴 ， 注射器 （ １ ｍ ｌ 、 ５ｍ ｌ ） 、 吸管 、 烧杯若 干 


。

１ ． ３ １ ５ ＾ ＾剂


（ Ｘ
－

ＭＥＭ  培 养基 （ Ｈ ｙｃ ｌ ｏｎｅ ， 美国 

）

胎 牛血清 （ Ｇ化ＣＯ ， 美国 

）

青 霉素 链霉 素双抗 －

、 膀蛋 白 睦 （ Ｈｙ ｃ ｌ ｏｎ ｅ ， 美国 

）

４ ％多聚甲醒 （ 联科生物有 限 公 司 ， 中国 

）

Ｆ ｉ ｃｏｌｌ 淋 己细胞分离液 （ ＧＥ ， 美国 

）

ＴＲＡＰ 染色试剂 盒 （ Ｓ ｉ ｇｍａ ， 美国 


）

Ｖｏ ｎ Ｋ ｏ ｓ ｓ ａ  染色剂 ： ２％ 硝 酸 银 溶 液 ＋ ５ ％ 硫代硫 酸 轴 溶 液



Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ  （ Ｐ ｅｐ ｒ ｏ Ｔｅ ｃ ｈ ，
美国 

）

Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ  （ Ｐ ｅｐ ｒ ｏ 恥 ｃ ｈ
－

， 美国 

）

１ ． ４ 

 细施巧

小 鼠单核 巨隨细胞 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ ， 购 自 中 国 科 学 院 上 海 细 胞库 

。

１ ． ５  动物


４ 周 龄雄性 昆 明 小 鼠 ，
购 自 于 山 东 大学 实验动 物 中 也 

。

２ 娥诚


２ ． １ 小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 的分离


１ ） 选择 ３ 个 １ ０ ０  ｍｍ
２
无 菌 培 养皿 ， 分别倒入 ７５ ％酒精 、 无菌 ＰＢ Ｓ 和 Ｂ ＭＭ ｓ 

培

１７


 山 东 大 学 博± 学 位论文
 



养液 ； 准备 １ ０ ０ ｍ ｌ 小 烧杯
一

个 ，
内 盛有 ７５ ％酒精 

。

２ ） 将 ４ 周 龄雄性 屋 明 小 鼠 断 颈处死 ，
投入盛 有 ７５ ％酒精 的 烧杯 中 浸泡 ５ 分钟 进



行 体表 消 毒 

。

３ ） 取小 鼠 置于灭菌操 作 台 上 ， 用 眼科 剪 分离 小 鼠 下 肢 ， 剔 除 下 肢 皮肤 及 附 着 肌



肉 组织 ，
暴露股骨和胶骨 。
将 股骨 和 腔骨 自 关节 腔 处 断 离 ， 勿 损伤关节腔 。 将分



离 之下 肢骨置 于 盛 有 ７５ ％酒精 的 培 养皿 中 ３ 分钟 后 移 入超净 台 


。

４ ） 从酒精 中 将 下肢长骨 取 出 ， 置于无菌 ＰＢ Ｓ 培养皿 中 ３ 分钟 


。

５ ） 用 无 菌 眼 科 剪从 长骨 骨術 处剪 断 ， 暴 露 骨 髓腔 

。

６ ） 用 １ ｍｌ 无菌注射器抽 取 Ｂ ＭＭ ｓ 培 养 液 反 复 从 骨 髓腔
一

端向另
一

端冲洗 ， 

直

至 骨髓腔 发 白 

。

７ ） 用 吸 管 反 复 吹 打 冲 出 之骨 髓 组 织 培 养 液 液 ，
使之均 质 化 

。

８ ） 将盛有骨髓细胞悬液 的培养皿移入细 胞培养箱 中 滕 育 ２４ ｈ  后 收集 上 清 液 中 的




未贴壁细胞 

。

９ ） 在 １ ５ｍ ｌ 离屯 管 中 加入 、
５ｍ ｌ Ｆ ｉ ｃｏｌｌ ， 将 等 体 积 细 胞 悬 液 缓 慢 加 入其 上层 ， 同时



保持 二 者 分 界 液 面 的 平 稳 

。

离也 分钟 用 吸 管 吸取 两层 液 体分 界 面 处 的 雾 状 层 液 体 于 另


一

１ ０ ） ３ ０ ０ ０ ｒ
ｐｍ ３０ ，

１ ５ｍ ｌ 离也管 中 ， 加 入少 量 培 养 液冲 洗 、 混巧 

。

１ １ ） ｌ Ｏ Ｏ Ｏ ｒ
ｐｍ 离也 １ ５ 分钟 ，
弃上清液 ， 重悬细 胞 ， 此即为 Ｂ ＭＭ ｓ 

。

２ ２ ．
小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 的 培养



用 血 细 胞 计 数 板 进行 细 胞 计 数 按照 个 的密


４ ２
１ ） 将分离 的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ ， ３ｘ ｌ 〇 ／ｃ ｍ

度 接种 于 培 养瓶 中 加 入含有 Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 的 培 养液 进 行 培 养
２
３ ０ｎ
７ ５ｃｍ ｇ ／ｍ
－

， ｌ 

。

２ ） 培养 １ ２ｈ 后 进 行 细 胞 换液 ， 定 期 观 察 细 胞生 长 状 况 ， 隔 天更换含有 ３ ０ｎ
ｇ ／ｍ


ｌ

Ｍ Ｃ ＳＦ 的 培 养液
－



。

２ ３ ．
小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 的 破骨 细施 向 诱导



１ ） 将小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 抖 ３Ｘ １ ０
４
个 孔 的 密 度接种 于
／ ２４ 孔板 中 ， 加 入含有 ３ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ
Ｍ 

－

Ｃ ＳＦ 的 培 养液 ， 移入 培 养 箱 中 使 细 胞 贴 壁过 夜 。
第 二 天进行 细 胞 换 液 ，
并在培 养



液 中 加入梯度 浓度 的 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  （ ０ －

１ ０ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ ） ， 同 时 保持 Ｍ －

Ｃ ＳＦ 浓度不变 

。

２ ） 加 入 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的 时 间 为初始 时 间 点 Ｏ ｄ ， 持续培养 ， 隔 天更 换培养基 ， 换液




时 谨 记 向 培 养 基 中 添 加 与 之 前浓 度 致的 ＲＡ ＮＫＬ 和 Ｍ Ｃ ＳＦ 定期在倒置显微


一

１８


 山 东 大 学博 ±学位 论 文
 



镜 下观 察细 胞 的 分化及 融 合情况 。 培养到第 ３ ｄ 时可观察 到 多 核 巨巧胞 出 现 ，



第

时 达到 顶峰 可进 行 下 步 Ｔ Ｒ ＡＰ 染色
一

４ｄ ， 

。

２ ４  Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ７
． ．
细 胞 的 获得 及破骨细胞 诱 导



本 实验 中 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞购 自 中 国 科 学 院 上 海 细 胞 库 由 细 胞 库 技 术 人 员 代

 ，

为复苏并邮寄 

。

２ ５ ．
细 胞冻 奋 方 法


１ ） 冻 存液配置 ：
按 照 培 养基 （ Ｄ ＭＥ Ｍ ） ： 血清 （ ＦＢ Ｓ ） ： 二 甲 基亚讽 （ ＤＭ ＳＯ ）


＝

７ ； ２  ： １ 的 比 例 配置细施冻存液 

。

冻存前 天进 行细 胞 换 液 Ｗ 保 证 其 处于 对 数 生 长 期
一

２ ） ， 

。

３ ） 由 于 破骨细 胞前体细胞为单核 圆 形 ， 胞体较 小 ， 无胞质 突 ， 因 此无 需 膜酶 消




化 仅 用 移 液 器 较轻 吹 打 即 可 使 细 胞 悬 浮
， 。 ｌ ＯＯＯ ｒ
ｐｍ 离也 ５ 分 钟 获 得细 施 沉 淀 

。

４ ） 弃 去 培 养 液 用 冻 存 液重 悬 细 胞 充 分 吹 打 成 单细 胞 悬 液
， ， ， 收集 于 冻 存 管 中 

。

采用 梯度 降 温方法冷却 先将冷冻 塑料管置入 Ｃ冰 箱 中 分钟 然后 移 至



°
５ ） ： ４ ３０ ，

冰 箱 冷冻 室 分钟 最后移至 Ｃ 冰 箱 长 期 保 持 。
° °
Ｃ 内
一 一

（ ２０ ） ９０ ， ８０

２ ６ ．
细 胞复苏方 法



从 Ｃ冰 箱 取 出 冻 存 管 后迅速置 于 Ｃ 水 浴箱 中 反 复摇 晃 使冻 存 管 内 细


一
° °
１ ） ８０ ３７ ，

胞悬液在 １ 分钟 内 完全 融化 。
Ｗ７ ０ ％ 酒 精 喷 拭 冻 存 管 外 部 ，
移入无菌操作 台 内 

。

２ ） 将 所得 细 胞 悬 液 转 移 至 含 有 ５
－

ｌ Ｏ ｍｌ 完全 培 养 基 之 １ ５ ｍｌ 离也管中 ， ｌ ＯＯ Ｏ ｒ
ｐｍ



离也 ５ 分钟 

。

３ ） 弃 上清 ， 加 入 新 鲜培 养 基 重 悬 细 胞 ， 接种 至培 养 瓶 中 培养 

。

２ ７ ．
细 胞传 代方 法


１ ） 当 细 胞 铺 满 整 个 培 养 瓶后 ， 吸弃 旧 培养液 ， ＰＢ Ｓ 冲 洗两遍 

。

２ ） 加入 ２ ｍｌ 新鲜培 养基 ， 用 務 液 枪或吸 管反复 吹打 并轻 捏摇 晃 ， 直至大部分 贴




壁细 胞开 始 脱 落 

。

３ ） ｌ Ｏ Ｏ Ｏ ｒｐ ｍ 离也 ５ｍ ｉｎ ，
弃上清 ， 加 培 养基 轻 柔 吹 打 

。

将细胞悬液按照 的 比 例 进 行 分 瓶传 代 小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞每 隔 天传代



一

４ ） １ ： ４ 。 ４

次 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ 细胞每 隔 天传代 次
一

， ． ７ ２ ３
－



。

２ ８ Ｔ ＲＡＰ 
．
染色



１ ） Ｂ ＭＭ ｓ 或 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱导培养 ４ 天后 ， 弃 去 培养 基 ， 郎Ｓ 冲洗



１９


 山 东 大学博±学位论文
 



两次 ， ４ ％多 聚 甲 酵溶液 固 定 ５ 分钟 ， Ｓ蒸水洗 ３ 次 Ｗ去除残 留 固 定液 ， 按照试




剂 盒 说 明 书 方 法 染 色 后 显 微镜 下 观 察 

。

２ ）  ＴＲ Ａ Ｐ 染 色液 的 距 制



表 １ ．  Ｔ ＲＡＰ 染 色工 作液配制 方法



Ａ 液 （ 不含酒石 酸 Ｂ 液 ） （ 含酒石 酸 

）

Ｃ 去 离 子 水
°
３７ ４ ５ｍ
． ｌ ４ ． ５ｍ ｌ



蔡酷 ＡＳ Ｂ －

Ｉ 磯 酸 盐 溶 液 ０ ． ０ ５ｍ ｌ ０ ． ０ ５ｍ ｌ



重 氮 化快 速 石 楠 石 ＧＢ Ｃ 溶液 ０ ． １ ｍｌ ０ ． １ ｍ 

ｌ

醋 酸 盐 溶 液  ０ ．
． ２ ｍ ｌ  ０ ２  ｍ ｌ
 ．

酒 石 酸 溶 浓 一

 ０ ． １ ｍ 

ｌ

３ ） 在 ＥＰ 管 中 分别 加入 ０ ０５ｍｌ ．
快速石權 石溶液 和 ０ ０５ ｍｌ
． 亚硝 酸钥 溶液 ， 反复倒



置混匀 ３ ０ 巧后 ， 放 置 沉淀 ２ 分钟 

。

４ ） 按 照表 １ 所 示 配方配 制 ＴＲＡＰ 工 作液并 充 分 海匀 


。

将 配 置 好 的 染 色 液转 移 至 离也管 中 水 浴 锅 中 预温
°
５ ） １ ５ｍｌ ， ３７ Ｃ 

。

将 预 温好 的 染 色 液 加 入 到 孔板 中 将 孔板置 于 Ｃ 水浴锅 中 避光脖 育

°
６ ） ２４ ， ２４ ３７ 


４０ 分钟 至 １ 小时 

。

７ ） 解 育 结束后 弃 去 染液 ， ＰＢ Ｓ 冲 洗去 除 多 余染 液 ， 加 入苏木素溶液复染细 胞核



２ 分钟 

。

８ ） Ｐ Ｂ Ｓ 冲 洗去 除 苏木素 ， 自 然 风干 并 置 于 光 学 显 微 镜 下 观 察 

。

２ ９ ．
破骨 细 胞骨 吸收 功 能 检测



或 细 胞 Ｗ 个 孔 的 密度接种 于 孔破 骨 细 胞 功 能 检


４
１ ）  Ｂ ＭＭ ｓ Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ Ｉ
ｘ ｌ Ｏ ／ ９６

测板中 ，
贴壁过夜 

。

２ ） 次 日 换液 ， 同 时 按 照 既 定 浓 度 梯 度 加 入 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  （ Ｏ －

ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ／ｍ ｌ ） 。 细胞 隔 天换



液 ， 换液 时在 培养基 中 加 入与 之前相 同 浓度 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 


。

３ ） 培养 ７ 天后 弃 去培养基 ， ＰＢ Ｓ 洗细 胞 ２ 次 ， 在 孔板 中 加 入 ５ ％次 氯酸钢 溶液 

，

用 吸 管 反 复 吹 打 使 贴 壁 细 胞 从培 养 板 钩 磯 酸 盐 基底 上 充 分分 离 

。

４ ） 弃 去 次 氯酸 钢 和 悬 浮细 胞 的 混 合 液 ， ： ＰＢ Ｓ 冲洗 ２ 次 ， 自 然风干 

。

５ ）  Ｖｏ ｎ  ｋ ｏ ｓ ｓ ａ 染色 ２ 小 时 Ｗ 增 强破骨 细 胞 吸 收 陷 窝 与 巧 憐 酸 盐 基底 之 间 的 对 比



度 

。

２０


 山 东大学 博±学 位论文
 



６ ） 弃去染色液 ， ＰＢ Ｓ 冲洗 ２ 次 ， 自 然风干 。
光镜 下 观察 破骨细 胞 吸收 陷 窝 ， 

分

区 对孔板基 底 面进 行 拍 照 ， 使用 Ｉ ｍ ａｇ ｅ Ｐ ｒ ｏ －

 Ｐ ｕｓｌ 对所得 图 片 中 陷 窝 面 积进 行统计




学分析 

。

结果


３ ． １ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 小 鼠 骨 巧单核细施及 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 向 破 骨 细 胞分 化 的 体 外 形



态学观 察



小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞及 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞属 于单核 巨 隨细胞系 ，

胞体较 小 ， 呈圆



形 ， 在 培 养 的 过程 中 増 殖速 度较 快 ， １
－

２ 天后细 胞汇 聚可达 ６０ ％ ＾上 １
。 当加入



Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导分化后 ， 细 胞逐渐分化 并 相 互 融 合成为 多 核 的 巨 细 胞 ， 可通过光学




显 微镜观 察细 胞 形 态 判 断 。 成 熟 的 破骨 细 胞通 常 有 下 几个判 断标准  ！ １ ） 细胞




胞体 巨 大 ， 经 ＴＲＡＰ 染 色 后 胞浆 会 变 成 酒 红 色 ，
即 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色阳 性 。 ２ ） 苏木素



复染 思 示细 胞核 数 目 过 个 。 ３ ） 细胞能够在骨基质 或径 基憐 灰 石基底 表面形 成骨




吸收 陷 窝 

。

界 學读 彌 课拭游 徽 磅 鞭 讀 新難

 ５

瓣 该 鑛渡 娜 續據 葉 菊 織 蟲啥 护

 ？

臀 薇 縣驗薦綾 谦 ？ 

０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ １ ０ ｎ
ｇ／ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ



＊
巧 赞 罐 心 於 驴餐
．

反ｐ 

？

，
＾
琴 ：

鱗 哪 鄭
曲 熱 濕觀 游 據
＇

Ｉ Ｖ
裳奪
．

 ’

、 巧＾ 獻


簇 ＇
＾  ｒ：＾ 衫雞穿 娩 黨 故 逆Ａ 濤
據證赏 襄


２ ０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ５ ０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ ＡＮ ＫＬ



图 １
－

２  ＲＡ ＮＫＬ
：
诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 向 破 骨样 细 胞分化 的 作 用 。 Ａ Ｄ －

： 不 同 浓 度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 破骨 细 胞形 成 的 Ｔ ＲＡＰ 染 色 

。

２１


 山 东 大 学 惶壬学 位论 文
 



破骨细 胞 前 体细 胞 在 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的 不 同 时 间 点 呈现 不 同 的 形 态学变化 如

 。

图 １
－

２ 所示 ， 小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 贴壁生长 ， 形态 处 圆 形为主 ＾ ， 少 数为 多 边形和梭形 ， 


细

胞 体积较 小 ，
单核 ， Ｔ ＲＡＰ 染色 阴 性 。
诱导 １ 天后 ， 细胞増殖明 显 ，
数量 增 多 

，

但 是无 ＴＲＡＰ 阳 性细 胞 出 现 。 诱导 ２ 天 后 细 胞汇合达 ８０ ％ ，
圆 形 及 多 边形细 胞



所 占 比例 增 多 ， 开始出现 ＴＲＡ Ｐ 阳 性 的 单 核细 胞 。 诱导 ３ 天后 ， 可见 明 湿 的细胞




融合 ， 由 相 互化邻 的 多 个单 个 核 细胞 融合成为 巨 大 的 多 核细 胞 ， 细胞呈 圆 形或多




边形 ， Ｔ ＲＡ Ｐ 染色阳 性 ， 可 见胞质 突 向 外伸 展 。
诱导 ４ 天后 ， 视野 中 可 见 大量



Ｔ ＲＡＰ 阳 性 的 巨细施生成 ，
细胞形态不规则 ， 大部分呈煎蛋状 ， 胞核数量多 少不



有 的 巨细 胞胞核 多 大数十 个 呈 簇 聚 集在 细 胞 中 央 或边缘 此外 我们 还检



一

， ， 。 ，

测 了  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 浓 度 的 改 变 对 破 骨 细 胞 生 成 的 影 响 。 结果显示 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 浓 度 对 破骨



细胞 的 生成具有决定作用 ， ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 仅 能 诱 导 出 极少量 的 ＴＲＡＰ 阳性



多 核 巨细胞 ， 且细 胞 体积 小 ， 分 布较 为 分散 ； 当 ＲＡ ＮＫＬ 浓 度 提 升 到 ２ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 

时

产 生 的 破骨 细 胞数量 及 体积 明 屋 増 加 ； 当 ＲＡ ＮＫ Ｌ 浓 度 到 达 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ 时 对破骨



细胞 的 诱 导 达到饱和状态 ， 此时 ＴＲ ＡＰ 阳 性 多 核 巨细胞数量极 多 ，
体积 巨 大 ， 

相

互连接成 片 ， 继续增 大 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 浓度 对 破 骨 细 胞 的 生 成 无 明 显 促进 作 用 


。

錢 巧说 巧 偕 孜 爭 撥議 Ｐ 句提
：


知游 乱 记 爷  汽必 韩舒 巧 哨 孩 糸 女 ｆ
ｅ＃
’

Ｖ ． ．



？

豁 礙 卽 ＾ 二 瓣 著 繫 鑛 豁 ＾ ？｜＾ 

．

； ：
＾：
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．

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麵 議 霉豪 瓣 錢 議 懿 

麵
獲 雜沒海 邸 緊 茲辕 香  皆 锋蹲舊議 緣冀 ＾

 ．

０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  １ ０  ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ ＡＮ ＫＬ



懸論

 ２ ０ ｎ ｇ／ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化  卽  ｎ ｇ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ



国 １
－

３ ：  ＲＡ ＮＫＬ 诱导 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 向破骨 样 细胞分化的 作 用 。 Ａ Ｄ －

： 不 同 浓度



Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 細 胞破 骨 细 胞 形 成 的 ＴＲＡＰ 染色 

。

２ ２


 山 东 大 学博±学 位论 文
 



Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞胞 体 积较 大 ，
増 殖较快 ， 在 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 刺 激下破骨分化诱导情



况与 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 大致 相 同 ， 但形成的 Ｔ ＲＡ Ｐ 阳 性 的 破骨样细 胞数 目 较多而




且胞体较大 （ 如图 １
－

３ 所示 ） 。
诱 导 培养 中 还 发现 ， ＲＡ Ｗ ２ ６ ４ ．
７ 细 胞诱 导 形成 的 破



骨细 胞形 成后 维持时 间 较 短 ， １ ２ 小 时 内 便会崩 解消 失 ， 周 围 生长 的 前体细胞会




继 续 融合成为 新 的 破骨 样细 胞 ， 如此周 而复始 。

诱导培养 １ ０ 天左右 ， 当 孔板 内



多 数 前 体细 胞 都经 历 融 合之后 ， 细胞逐渐趋于 死亡 消 失 。 而小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞诱




导 形 成 的 破骨细胞生存 时 间 较长 （ 三２４ 小时 ） ， 经过 １ ４ 天 的 诱 导 培养之 后 依 然 会




有 破骨细 胞 形成 。 同小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞类似 ， Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ．

７ 细 胞 诱 导 的 破骨细胞生成



也与 ＲＡＮＫ Ｌ 浓度 呈剂 量依赖性关系 ， 诱导 形成 的破骨细胞 的 数量和 体 积 随着




ＲＡ ＮＫＬ 浓度 的 升 高而增加 ， Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 浓度为 ５ ０ｎ

ｇ／ ｍ ｌ
时达到 饱和 状态 

。

３ ２  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ
．
诱导 的 小 鼠 骨 髓 单核细 胞巧 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 

细胞 形 成 的 破 骨细 胞体 外骨

陷 巧 形成 能力 观察



￡ 導


０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ １ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化



Ｈ Ｒ ＨＵ

 ２ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ


５ ０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ ＡＮＫＬ



围 １
－

４ ：  ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 所 形 成破骨 细 胞 的 骨 吸收 功 能 检测 。 Ａ Ｄ
－

： 不同浓



度 ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 向破骨 细胞分化后 在破骨 細 胞功 能 检测 板 上形 成 的 吸收




陷寫 

。

２３


 山 东大学博±学 位论文
 



成熟 的 破骨细 胞及 刚 融合但 未完全成熟 的 破骨 样细 胞 都具有 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 阳




性及 多 核 巨细 胞 的 形 态 但 只 有 分化成 熟 的 破骨细 胞才 具有 降解 吸收骨基质 并在


 。

骨 牙本质 表 面形 成骨 吸收 陷 窝 的 能 力
／ ， 因 此骨 陷 窝 形 成 实验 是 检 测 破 骨 细 胞 功



能 是 否 完 全 的 金 标准 。 本 实验采 用 市场 化 生产 的 破骨细胞功 能 检测 板 替 代 牛骨 

／

象 牙 骨 质 片 对 诱 导 形 成 的 破骨 细 胞进 行骨 吸 收 功 能 分 析 该检 测 板孔板 基 底 覆 盖

 。

层磯酸巧 结 晶涂层 成 分 与 人 体 骨 质 非 常 类似 可 作 为破骨细 胞骨 基质 降解



一

， ，

吸 收作 用 的 底物 我 们 在 实验 中 发现 诱 导 分化 成熟 的 破骨细胞 能够 吸 收 板底覆盖
。 


的 憐 酸巧 ， 形成 圆 形 或 不规则 形边 界清 晰底色透 明 的 吸 收 陷 窝 。
如图 １
－

４ ， １ －

５ 

所

示 ， 箭头所指为透 明 的 吸收 陷 窝 

。

矿 ⑥ ＾  
＾
－

ＭＭ



哪 Ｉ
当 ＂ 冊ｙ ＂ｉ
＂ 

咖

２ ０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ５ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ



国 １
－

５ ：  ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 所形 成破 骨 细 胞 的 骨 吸 收 功 能 检测 。 Ａ Ｄ －



：

不 同 浓 度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 細 胞 向破 骨 細 胞 分化后 在破骨 细 胞功 能 检测




板上形 成透 明 的 吸收 格 寫 

。

小鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 和 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞经过 ７ 天的 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 之后 都 能够在 破骨



细胞功 能检测 板基底 形成 明 显 的 吸收 陷 窝 。

陷 窝 形态 Ｌ Ａ
： 圆形 、 多 边形和 不规则 形



２４


 山 东 大 学博 ± 学位 论 文
 



为主 面积 大小 不 也 可见长条形 陷 窝 表 明 破骨细胞 的 移行 轨迹 从吸收陷



一

， ， ， 。

窝 的 形态和 数量来 看 ， Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 分化形成 的 破 骨 细胞所形 成 的 陷 窝 面积 更




大 、
数 量更 多 ， 证 明 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 来 源 的 破骨 细 胞 较 Ｂ ＭＭ ｓ 形成 的 破骨 细 胞



具 有更 强 的 骨 吸收 能力 

。

与 ＴＲ ＡＰ 染色结果 致 骨 陷 窝 数 量及 面积 与 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 的 浓度呈 正相 关

一

， ， ５０



ｎ ｇ ／ｍ ｌ
浓 度 时 所 形 成 的 骨 陷 窝 数 量及 面 积 最 大 ， 而 ＲＡＮＫＬ 浓度 的 继续升 高不 能



诱 导 更 多 的 骨 陷 窝 形成 进 步证 明 接近 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导破骨细胞形成


一

ｇ ／ｍ ｌ
。 ５ ０ｎ

的 饱 和 浓度 

。

竹论


成 熟 的 破骨 细 胞 体积 较 大 而 且 是 终末 分化 细 胞 虽 然 通 过现有 手段可 Ｗ 直 接

 ，

从活体 生物骨 组织 中 分 离 纯 化 获得 ， 但数量极少 ， 在 体外 难 Ｗ 传 代 培养 。 因此 


目

前 只 能 通 过 诱 导 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 向 成 熟 的 破 骨 细 胞 分 化 的 方法 来 获 得 常 用 的

 。

破骨细 胞前体细 胞主 要有两种 是 小 鼠 原 代造 血细 胞 来源 的 单 核 细 胞 包括骨



一

， ，

髓单 核细 胞 、 外 周 血 单 核 细 胞 及 脾 脏单 核 细 胞 。 这类细 胞 是 小 鼠 体 内 生 理状态 下



的 破骨 细 胞 前 体 细 胞 ， 最 能 反 映破骨细 胞生成 的 真 实 情 况 但 是单 核细 胞分离 纯


 。

化 较 为 困 难 在 体 外 分 离 过程 中 容 易 混 杂 细 胞 密 度 相 近 的 间 充 质 细 胞
， ，
并 且増 殖



速度 较 慢 ，
需要外源性 Ｍ Ｃ ＳＦ －

刺 激才能 维 持单核细 胞 的 存活及正 常増 殖 。 另



一

种 是永生化 的 小 鼠 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 ， 该细胞系 最初 由 Ｒ ａｓ ｃ ｈｋｅ  Ｗ Ｃ 等从 Ａｂ ｅ ｌ ｓｏｎ




小 鼠 白 血 病 病 毒 所致 的 肿 瘤 组 织 中 分 离 培 养 建 立 ［
３ ８］ ， 经 民 Ａ ＮＫ Ｌ 诱导 后可形成



ＴＲＡＰ 阳 性 的 多 核 巨细胞 ， 并表 达 破 骨 细 胞 表 型 标 志 基 因 ， 且 能 在 体外 牛 骨 片 和



牙本质 表面形成骨 吸 收陷 窝 。 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞系 的 优 点 是单核细 跑纯度 高 ，

体外



增 殖速 度 快 在 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 的 诱 导 下 可获得 Ｔ ＲＡＰ 阳 性 的 具有骨 吸收能 力 的 多 核 巨




细胞 ，
便于 在 体 外 进行破骨细 胞分化 和 功 能 的 研 究 口 ９  ］


。

在 实验过程 中 ，
我们 发现两种 细 胞 的 具 有不 同 的 生物学特点 ， 因 此培养及 诱



导条件也有所差异 。 首先 ， 在 Ｂ ＭＭ ｓ 分离诱 导 破骨细胞形成培养体 系 中 ， 由于




骨髓 中 含有大量 间 充质 细 胞 ， 密度与 Ｂ ＭＭ ｓ 相似 ， 因 此使用 ｆ ｃ ｏｌｌ

ｉ 密度梯度 分 离



过程 中 容 易 混 杂其 中 ， 需 要在后续 的培养 中 利 用 两种细胞不 同 的 贴壁 能 力 将




Ｂ ＭＭ ｓ 分离 出 来 即 便 如 此 细 胞 的 纯度 仍会 受 到 骨髓 中 其他密 度巧 似细 胞 的 影
。 ， 


响 ， 镜 下 可 见 圆 形 的 单 核 细 胞之 间 混 杂 有 梭 形 的 污 染 细 胞 在 后 续 的 实 验 中 这 些

 ，

２５


 山 东 大学博±学位论文





污 染细 胞 的 增 殖 会影 响 破骨 细 胞 前 体细 胞 的 融合 Ｗ 及 最终破骨细 胞 的 形 成 其 次 。 

，

Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 的 加 入 对 Ｂ ＭＭ ｓ
－

破骨细胞诱 导 培养 体 系 的 维 持至 关重要 ， 无论 是在 破骨



细 胞 前 体细 胞 的 増 殖还 是 在 分 化 为 成 熟 的 破 骨 细 胞 的 过程 中 Ｍ Ｃ ＳＦ －

都是不 可或



缺 的 关键诱导 因 子 。 Ｍ ＣＳＦ －

可与 Ｂ ＭＭ ｓ 胞膜上 的 受体 ｃ
－

ｆｍ ｓ 结合 通过上调 ， Ｂｄ 

－

Ｘ Ｌ （ ）
介导 ｃａ ｓ
ｐａｓｅ ９
－

的 抑 制 物 的 活性而抑 制 细 胞调 亡 ， 增 强其生存能力 ［
仙 ］


。

除此之外 ， Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 还 具 有 刺 激 Ｂ ＭＭ ｓ
－

增 殖及 促进 前破骨 细 胞融合 的 作 用 ［
３ ７ ，
４ １
］


。

而对 于 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细施而 言 Ｍ ＣＳＦ －

不是必 需的 。 许 多 研 究 发现 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 在仅



有 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 存 在 的情况 下 即 可 分化成为 功 能成 熟 的 破骨细胞 ［

３ ９ ４２
］
，
。
甚至有报



道在缺 芝 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 时 ， ＴＮ Ｆ －

ａ 也 可 诱 导破骨细 施 的 分化 ［
４３ ，
４ ４］ 。 我们 在实验 中 也



发现类似现 象 ，
即 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞在仅 有 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 存在 的情况 下 即 可被诱 导成为



成熟 的破骨细胞 ，
而且此细 胞 系 增 殖极快 ，
无需加入 Ｍ ＣＳＦ －

进行増 殖诱导 ， 

如

果在培 养过程 中 加入 Ｍ －

ＣＳＦ 反而会 因 细胞数量增 长过快而 影 响 细 胞 分化 此外 。 


，

由 于 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ 细胞成分单 不存在 其他细 胞污染 的 情况 在 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 作用 下



一

． ７ ， ，

较 Ｂ ＭＭ ｓ 更容 易 分化 为破骨细 胞 而 且所形 成 的 破骨细 胞数量更 多 体积 更 大 ， ， 


，

是 种 比 较理想 的 破骨细胞前体细胞模型
一



。

分化形成 的破骨细 胞最重要 的特点 就 是 巨大 的 细 胞体积 和 众 多 的 细 胞 核 除


 ，

了 形志学上 的 改变之外 ， 成熟 的破骨细胞还表达其特异 性 的 蛋 白 水解 酶 ，

其中



Ｔ ＲＡ Ｐ 为其特异 性标 志 酶 Ｔ ＲＡ Ｐ 是 种 酸性稱 酸酶 在酸性条件下 能够将细胞



一

。 ，

基质 中 的 蔡献 ＡＳ －

ＢＩ 憐 酸 盐 水解成 蒙 酿 ＡＳ Ｂ－

Ｉ 。 本实验 中 使用 的 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色试



剂 盒 的 快速石檔 石 ＧＢ Ｃ 碱 溶 液 与 亚 硝 酸 盐反 应 后 可 Ｗ 形 成 新 鲜 的 重氮 盐 ， 该重



氮盐与蔡酷 ＡＳ Ｂ －

Ｉ 混 合后 可在 酸 性 条件 下 发 生 化 学 偶 联形 成 不 溶 于 水 的 酒 红 色



至 紫 色沉淀 ，
从而 检测 细 胞 内 产 生 的 酸 性 憐 酸 酶 。 Ｌ（ ＋ ）
－

酒石酸可 Ｗ 阻断上述



偶 联反应 抑 制 红 色沉淀 的 产 生 Ｔ ＲＡＰ 与 般 的 酸性磯酸酶不 同 它 能够抵抗



一

， 。 ，

Ｌ（ ＋ ）
－

酒石酸 的 偶 联反应 阻断 作 用 ， 从而 在 Ｌ （ ＋ ）
－

酒石 酸存 在 的 情 况 下依 然 可



＾ ｉ
Ｊ＞
形成 酒 红 色沉淀 。 因 此如 果 在上述 实验体系 中 加入 Ｌ（ ＋   ）
－

酒石 酸 能够形成酒



红色沉淀 则 可 ，
［ ＾ １
＞
显示 出 细 胞质 内 表 达 Ｔ ＲＡ Ｐ 的 细 胞 。 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色结果显示 ＢＭＭ ｓ



和 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞经过 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 之后 都 能够 形 成 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 阳 性 的 多 核 巨



细胞 ， 但 是所形成 的破骨细 胞在数量及 体 积 上略 有差异 ： ＲＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞诱 导 形




成 的破骨细 胞体积较大 ， 数量多 ， 这可能与 Ｂ ＭＭ ｓ 分 离过程 中 惨入污 染细 胞致




２６


 山 东 大学 博 ± 学位 论文
 



使 其 纯 度 降 低 影 响 了 破骨 细 胞 前 体 细 胞 的 融 合 有 关 

。

细 胞 形 态 的 改 变及 标 志 性 酶 ＴＲＡ Ｐ 的 表达 只 是评价破骨细胞 的 个方面 成



一

熟 的 破骨细 胞不仅 具有上 述特征 ， 最 主要 的 是 获得 了 骨 吸 收 的 能 力 ， 送 是 其他所




有细胞所不具各 的 。 体 外 诱 导 形 成 的 未 成 熟 的 破骨 细 胞 也 表 现 为 Ｔ ＲＡＰ 染色 阳



性 的 多 核 巨 细 胞 但 是此 时 的 破骨细 胞 不 能 与 矿 化 基质 结 合形 成皱權 缘
， ，
因 此不



具备骨吸收能为 ［
４５］ 。 另 外 ， 也 有 研 究 发现 单 核细 胞趋化 因 子 （ Ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｙ ｔｅ



ｃｈ ｅｍ ｏｔａｃｔ ｉ ｃ
ｐ
ｒｏ ｔ ｅ ｉ ｎ
－

１
，  ＭＣ Ｐ －

１ ） 可 （ ｉｔ 在 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 不 存 在 的 情 况 下 诱 导 破骨 细 胞 前



体细胞分化 为 ＴＲＡＰ 染色 阳 性 的 多 核 巨细胞 ， 但是这些细胞不表达组织 蛋 白 酶




Ｋ 、 基 质 金 属 蛋 白 酶 等 破 骨 细 胞 的 功 能 性 酶类 ， 也 不 能 在 牛 骨片 上形成 骨吸 收 陷



窝 ， 同 样 不 具 备骨 吸 收 能 力 ［
４巧 。 由 此可见 ， 骨 吸 收 能 力 的 获 得 是 评 判 破骨 细 胞



功 能 是 否 成 熟 的 金标准 单 纯靠 细 胞形 态 学及 标 志 性酶 的 染 色 决 定 破骨细 胞 的 成

 ，

熟度有时候 并不 十分可靠 特别 是对 于骨 吸收抑 制 药物 的 研发 ， ， 破骨细胞功 能 的




研 宛 显 得尤 为 重 要 

。

早先 ， 研 究 者 们 主 要 在 牛 股骨 皮 质 骨 磨 片 上 进 行 破骨 细 胞 培养 通 过观 察破

 ，

骨 细 胞在 牛 骨 片 表 面 形 成 骨 吸 收 陷 窝 的 多 少 及 面 积 大 小 来 评 价 破 骨 细 胞 的 骨 吸



收能为 。 这种方法优 点 是 牛 骨 易 得 ， 材 质 与 人骨 相 似 ，
有利 于破骨细 胞粘 附和 生



长 ， 但 缺 点 在 于制 备 过程极其精 细 而 繁 琐 ， 首 先 要 用 硬 组织 切 片 机将 牛 骨 皮质 切



成薄片 ， 然后 再打 磨 成厚度为 １ ０ ２０ ｎ ｍ

－

的 超薄骨 片 ， 由 于 厚度 极薄 ， 在 制 备过



程 中 非常容 易 碎片 ， 而且后 期还 需要严格 的 消 毒灭菌 ， 对设备和技术 的 要 求 比较




高 另 种 应用 较广泛 的 骨吸收 能力 检测 材料是 象牙骨 质 片 因 为 没有骨 皮 质 纹



一

。 ，

理及晚弗 氏 管等结 构 ， 其质 地 较 牛 骨 片 更 为 均 匀 细 鼠 ， 因 此 便 于 破骨 细 胞 的 粘 附



和骨吸收陷 窝 的观察 ［
１ ４ ， ４ ７］ 。 但 缺 点 是 进 口 产 品 价格 昂 贵 且 有违珍 惜动 物 保护



的原则 在 实验 过程 中 两 者 其 有 的 个缺 点 是骨 吸 收底 物材料 不透 明 细胞诱导



一

。 ，

分 化 培 养 过程 中 无 法 在 镜 下 观 察 细 胞 的 生 长 和 分 化 状 况 因 此 在 实 验 中 对 诱 导 体

 ，

系 的 稳 定 性和 操 作 经验要 求 较高 。
随着 Ｒ ＡＮＫ Ｌ Ｒ ＡＮＫ －

通路在破骨 细 胞分化过



程 中 决 定 性 作 用 的 逐 渐 明 晰 市 场 上 逐 渐 出 现 了 Ｗ 人 工 合 成 的 破 骨 细 胞 降 解底 物

 ， 

替 代 原 有 的 生 物 骨 基 质 材 料 的 破 骨 细 胞 功 能 检测 培 养 板 此 类检 测 板 孔 板底 部 覆

 。

盖 层 无机縣 酸 盐材料 表面粗髓呈半 透 明 这 种 设 计 在 模拟 骨 成 分 的 同 时 还 可



一

， ，

Ｗ 在细 胞培养过程 中 观察细胞 的 生长和 分化状况 另外 由 于 商 业化产 品 的 均



一

。 ，

２７


 山 东 大学博± 学 位论文
 



性 该 检测 板 的 应 用 相 比 传 统 的 牛 骨及 牙 骨质 片 可 Ｗ 减少 材料之 间 差 异 造成 的 结
，



果偏倚 所得 的 实 验 结 果 具 有 更 高 的 致性和 可重 复性 在 实验 中 我们 发现 

破
一

， 。 ，

骨细 胞 功 能 检 测 板 的 粗 糖 表 面在 促 进 细 胞 初 期 粘 附 的 同 时 也 会 影 响 培 养 后 期 破



骨 细 胞 前 体细 胞 的 融 合 具 体表 现 为 诱 导 过 程 中 所 形 成 的 多 核 巨 细 胞 相 比 普 通 培
， 


养 板 数 量少 体积小 究 其 原 因 可 能 与 粗機 表 面 影 响 细 胞 迁移 有 关 持续诱导


一

、 ， 。

周 后 去 除细 胞 可 （ ＾＾ 看 到 培 养 板 底 部 边 缘清 晰 的 骨 吸 收 陷 窝 图 像 分 析 软 件 计 算 结

 。

果 显 示骨 吸 收 陷 窝 面积 大 小 与 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 浓度 呈 正相 关 说 明 破骨 细 胞 功 能 检测 板
， 


作为 种 新 型 人工 合成产 品 可 替 代 牛骨片 和 牙本质 片 用 于破骨细胞骨吸 收功 能



一

的 检测 。
 

．

小 鼠 骨 髓 单 核细 胞 和 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞系是 目 前 最常 见 的 两种 用 于 破骨 细胞



诱导 分化 的 破骨细 胞前 体细胞 能够在 定浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 和 Ｍ Ｃ ＳＦ 的 诱 导 培 养



一

下 分 化 为 具 有 特 征 性 形态 和 骨 吸 收 能 为 的 成熟 破骨 细 胞 同 时 表 达 破骨 细 胞特 有

 ，

的 分 化 转录 因 子 和 标 志 性 蛋 白 水 解 酶 在 这 部 分 实 验 中 我 们 建 立 了 Ｗ 上 两 种 破 骨

 。 

细 胞 前 体 细 胞 的 破 骨 细 胞 诱 导 分 化 模 型 并 检测 了 最 终诱 导 形 成 的 多 核 巨 细 胞 的



生物 学 特性 证实 其 为 具备骨 吸收功 能 的 成熟破骨细 胞 为下 步探 究 比 ６八 比

一

－ 

－

， ，

６民 对破 骨 细 胞 分 化 及 功 能 的 影 响 做 准 备 

。

２８


 山 东 大学博±学位论文
 



第二部分 ： Ｉ  ＾ ６／ ｓ ＾ ６ Ｒ Ｉ
对 不 同 浓度 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的破骨 细 胞 分



化和 活 性 的 差 异 性 调 节



牙周 炎 是 由 牙 菌 斑 及 其 代谢产 物 引 起 的 牙周 局 部 的 特异 性 炎 症反应 在牙 周

 。

炎 的 发展 过程 中 ，
除牙周 致病 菌及其产 物对牙 周 组 织 的 直接 破坏 外 ， 过度 而 持 久



的 宿 主 炎 症 反应所造成 的 间 接破坏对于 牙周 组织 的 损 害 尤 为严 重 众 多 的 免疫 细

 。

胞被 募集到 局 部 组织 并分泌 大量 的 炎症 因 子如 ＴＮ Ｆ ａ －

、 化 －

１ 、 比 －

６ 等 ， 在 引 起炎



症反应 的 同 时 还 能够 促进破骨细 胞 的 分化和 功 能 ， 引 起 牙 骨 质 和 牙槽骨 的 破坏 


。

化 作为 种 多功能的细胞因子 能 够 调 节宿 主 的 免疫 反应 在牙周 炎 的发


一

６ ， ，

生 和 发 展 过程 中 也 起 着 重 要 作 用 。 临床研究发现 ， 牙周 炎 患 者 局 部牙周 姐织 、 

銀

沟 液及 血清 中 正 －

６ 水平 思 著 高 于 正 常对 照 组 ， 而且 比 －

６ 浓度与 牙 周 炎 的 严重程



度呈正相关 ，
而 经过系 统 的 牙 周 治 疗后 上述组织及体液 中 的 忙 －

６ 水平则 恢复 到



正 常水平 ［
４８ －

５０
］
。
鉴于此 ，
有 学者提 出 可 Ｗ 将 銀沟 液 正 －

６ 浓度作为判 断牙周 炎



严重程度和 预后 的 个指标 此外 与牙周 炎类似 类风湿性关节炎



一

５ １ 。 ， ，
［ ］

ａｒ
ｔｈ ｒ ＲＡ 是 种 則曼 性 炎 症性滑膜炎 为 主 要 临 床表现 的 系 统


一

（ ｒ ｈ ｅ ｕｍ ａｔｏ ｄ ｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ， ） 、

性疾病 ， 其 主 要 致 病 机 制 为 关 节 腔 液及 体 液 中 ＴＮ Ｆ －

０ Ｕ 山 －

６ 等炎症 因 子 水平 显 著



升高 ， 引 起关节炎症和 软骨破坏 。 Ｔｅ ｔ ｓ ｕ ｏ 等用 １ 以６ 受体抑制剂塔西 单抗




ａｏ ｃ ｉ ｌ ｉ ｚｕｍ ａｂ ） 治 疗伴有慢 性牙 周 炎 的 类风湿性 关节 炎 患 者 时 发现 ， 不仅全 身大




关节 的 炎症性肿 痛得 缓解 局 部 牙 周 炎 症 状 况和 主 要 牙 周 指 标 也 得 到 了 定程


一

度的改善 这进 步证 明 了 宿 主 免疫反应产生 的 过量 正 对于 牙 周 炎症 发展


一

５２ ６
－

。
［ ］

的 促进作 用 

。

忙 －

６ 对破骨细 胞 生成 的 促进作 用 已 经为 许 多 体 内 和 体外实验所证实 。 在 


．

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 发现之前 研 究破骨细 胞分化主 要通过建立破骨细 胞 前体细胞和 间 充 质 细




胞或成骨细胞共培养体系来实现 ， 因 此对于 正 －

６ 促进破骨 细 胞生成 的 机 制 ， 

主

流观 点 认为 正 －

６ 对于 破骨 细 胞 前 体细 胞无 直接 作 用 ， 而 是 间 接地通过作 用 于 间



充 质 细 胞和 成骨细 胞促使其 分泌 Ｒ ＡＮＫ Ｌ ， 进 而 促进 破骨 细 胞 的 分 化 和 形 成 ［

２８ 

，

５ ３
］
。 但 也 有 报 道 称 在 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 和 成 骨 细 胞共 培 养 体 系 中 ， 化 －

６ 能够 １＾ 

１

不依赖于 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 的 途 径 促 进 破 骨 细 胞 的 生 成 ［
１ ４
］
。 但是关于 正 －

６ 对破骨细胞生



成 直接作 用 的 研 巧还 不 多 见 。 目 前 所 能检 索 到 的 相 关文 献仅有 两 篇 ， 这两个 独立




的研究都 不 同 浓度 的 忙 －

６ 干预 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导 的破骨细胞生成体系 ， 与 前述研


２ ９


 山 东 大 学博 ± 学位 论文





究 不 同 的 是 该 体 系 完 全 由 纯 化 的 破 骨 细 胞前 体 细 胞 构 成 （ 如 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 、 

小
＋ ＋
鼠 骨髓 Ｃｍ ｉ ｂ 单 核细 胞和 人 外 周 血 ＣＤ １ ４ 单核细胞 ） ， 不含 间 充质 细胞 及成骨



细胞 ， 结果表 明 正 －

６ 对于破骨细 胞生成 的 直接作 用 不是促进而是抑制 ［

５ ４ ，５ ５
］


。

Ｗ 上 证据 表 明 正 对破骨细 胞 的 作 用 存在 定 的 争议和 复杂 性 作用 的大小和



一

６ ，

结 果 与所建立 的 破骨细 胞诱导培养体系 和 细胞种 属 密切 相 关 


。

另外 ， 部分早期研 巧发现单纯 正 －

６ 不足 增 强破骨细 胞 的 分化和 功 能 ， 

只

有在 Ｓ 正 －

６Ｒ 存在 的 情况 下 比 －

６ 才具有 明 显 的 促破骨作 用 ［
２８ ，
５
巧 。 提示 破骨 细 胞



前 体 细 胞 膜表 面 表 这 的 膜 结 合 型 正 －

６Ｒ 可 能 处 于生理不饱和 状态 ， 在 送种 情况



下 ， Ｓ 正 －

６ Ｒ 对于 正 －

６ 生 理 功 能 的 完 全 发挥 至 关 重 要 。 因此 ，
。
在本 部 分 实验 中 

，

我们用 Ｉ Ｌ －

６ 及其可溶性受体 ＳＩ Ｌ －

６Ｒ 作用 于不 同浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞形



成体 系 期验证 正 －

６ 信 号 转导 系 统 完全激活对破骨 细 胞诱 导 分化 的 确 切 影 响 

。

材料 和 施


１ 銳 材料


１ ． １ 主雖 器和设备


低温 高速 离 也 机 （ Ｔｈ ｅ ｒｍ ａ ｌ ， 美国 

）

Ｔ１ ０ ０  Ｔｈ ｅ ｒｍ ａ ｌ  Ｃ ｙｃ ｌ ｅ  梯度  ＰＣＲ  仪 （ Ｔｈ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ， 美国 

）

Ｌ ｇ ｈｔ Ｃ ｙ ｃ
ｉ  ｌ ｅｒ ４ ８ 〇ｎ

实时巧光定量 
ＰＣＲ  仪 （ Ｒ ｏ ｃ ｈｅ ， 瑞± 

）

Ｂ Ｉ Ｏ Ｒ ＡＤ －

垂直 电 泳仪 （ Ｂ 阳 ＲＡＤ －

， 美国 

）

Ｓ ｍ ａｒ ｔ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ  ４ ２ ０  体 式微型化学 发光成像仪 赛智 中 国 北京
一

（ ， 

）

１ ． ２ 材


塑料 离 也 管 （ １ ５ｍｌ 、 ５ ０ｍ ｌ ） 、 细 胞冻 存 管 （ ２ｍｌ ） 、 ６？Ｌ 板 （ Ｃ ｏｍ ｎ ｇ ｉ ，
美国 ） 、 ２４ 

孔

板 （ Ｃ ｏ ｍ ｎｇ ｉ ， 美国 ） 、 Ｔ －

２５ 细 胞培 养 瓶 （ Ｃ ｏ ｍ ｎｇ ｉ ， 美国 ） 、 １ ０ ０ ｍｍ
２
培养皿 、 眼科



剪 ， 眼科 綴 ，
线剪 ， 注射器 （ １ ｍ ｌ 、 ５ｍｌ ） 、 吸管 、 量筒 、 烧 杯若干 

。

１ ３ ．
剂


？
Ｂ ＣＡ  蛋 白 定 量 试剂 盒 （ Ｍ ｉ ｃ ｒｏ  Ｂ Ｃ Ａ  Ｐ ｒ ｏｔ ｅ ｎ ｉ  Ａｓ ｓａｙ 
ｋ ｉｔ ） （ Ｐ ｉ ｅｒｃｅ ， 美国 

）

Ｔｒ ｉ ｚｏ ｌ  （ Ｉ ｎｖ ｉ ｔ ｒｏ
ｇｅｎ ， 美国 

）

Ｒ ＮＡ  提取 试剂 盒 （ ＲＮｅ ａｓ ｙ Ｍ ｎ Ｋ ｉ ｉ ｉ ｔ ） （ Ｑ ＩＡ Ｇ ＥＮ ， 美国 

）

焦炭酸二 芒醋 （ Ｄ ＥＰ Ｃ ） （ 碧云 天 ， 中 国 上海 

）

０ １ ｉ
ｇ ｏ （ｄ Ｔ ） 
１ ２ －

１ ８ Ｐ ｒ ｍ ｅｒ  （
ｉ Ｉ ｎｖ ｉ ｔ ｒｏ
ｇｅ ｎ ， 美国 

）

３０


 山 东 大学博 ± 学 位论文
 



Ｓ 叩ｅｒ Ｓ ｃｒｉｐｔ  Ｉ ＩＩ 逆转录试剂盒 （ Ｉ ｎｖ ｉ ｔｒ ｏ ｇ ｅｎ ，

美国 

）

ＰＣＲ 引 物 （ 生 工 生物 工 程 公 司 ， 中 国 上海 

）

２ 嫌瓣


２ ． １ 小鼠 Ｂ ＭＭｓ 细胞及 ＲＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 的 获取 及培养



巧见第 部分小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞及 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ 细 胞 的 获 取及培养



一

． ７

２ ２  ＩＬ
．
－

６／Ｓ ＩＬ ６ Ｒ－

对小 鼠 Ｂ ＭＭｓ 细胞 向 破 骨 细 胞分 化 的 影 响



将小 鼠 细胞 个 孔 的 密 度 接 种 于 ２４ 孔 板 中 加 入 含 有
４
Ｂ ＭＭ ｓ ３ Ｘ １ ０ ／ ， ３ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ

Ｍ Ｃ ＳＦ 的 培 养 液
－

， 移 入培养箱 中 使细 胞 贴壁过夜 。
第 二 天进行 细 胞换 液 ， 并在 培



养液 中 加入梯度浓度 的 正 －

６ 或 圧 －

６＋ ｓ ＩＬ －
化 （ （ Ｕ －

１ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ） ，
同 时保持 ３ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ

Ｍ Ｃ ＳＦ －

浓度不变 。 诱导 培养过程 中 显 微镜观察 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞増 殖分化情况 ， ４ 


天

后进行 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 

。

２ ３ Ｉ Ｌ ６ ／ Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ
．
－ －

对 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 小 鼠 Ｂ ＭＭｓ 细胞及 Ｒ ＡＷ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 向 破骨细




施分 化 的影 晌



将小 鼠 细 胞及 细 胞 Ｗ３ Ｘ 个 孔 的 密度接种 于 孔板


４
Ｂ ＭＭ ｓ ＲＡＷ ２ ６ ４ ． ７ １ ０ ／ ２４

中 ， 加 入含 有 ３ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ Ｍ Ｃ ＳＦ 的 培 养液
－

，
移 入培 养箱 中 使 细 胞 贴壁过夜 。 第二天



进 行 细 胞换 液 ，
并 在 培 养液 中 加 入梯 度 浓 度 的 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  （ ０ 、 １ ０ 、 ２０ 、 ５ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ） 

，

同 时保持 ３ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ  Ｍ
－

Ｃ ＳＦ 浓度不变 。 根据处 理 方 法 的 不 同 分 为 ｛ ＾；ｌ 下Ｈ组 


；

Ａ） 在 上 述破 骨 细 胞 诱 导 培 养 体 系 中 加 入 不 同 浓 度 的 Ｓ 圧 －

６Ｒ （ Ｏ －
ｌ ＯＯｎ
ｇ ／ｍ ｌ ） 

；

Ｂ ） 在 上述破 骨细 胞诱 导 培养体系 中 加 入不 同 浓 度 的 正 －
６（ Ｏ －
ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ ） 

；

Ｃ ） 在 上述破 骨 细 胞诱 导 培 养体 系 中 加 入不 同 浓度 的 正 －

６ ＋Ｓ 正 －

６民 （ Ｏ
－

ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ／ ｍ ｌ ） 

；

诱 导 培 养 过趕 中 显 微 镜 观 察 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞増 殖分化情况 ， ４ 天 后 进行 ＴＲ ＡＰ 

染

色 

。

２ ４  ＴＲＡ Ｐ
．
随 及破 骨 细 胞 鉴 定



详 见第 部分 ＴＲ Ａ Ｐ 染 色及 破 骨 细 胞 鉴 定
一



。

２ ５ ．
破骨 细 胞骨 吸 化 功 能检 测



弹 见第 部 分破 骨 细 胞 骨 吸 收 功 能 检测
一



。

２ ６ ．
实 时 定 量 ＲＴ －

ＰＣＲ 检 测 破 骨 细 胞禄 志 性 基 因 的 表 法



２ ６ ． ． １ 细胞 内 总 ＲＮＡ 的 提取


１ ） 吸去 原细 胞培养液 ，
按 １ ｍ ｌ ／ １ ０ｃｍ
２
加 的量加 入 Ｔｒ ｚ ｏ
ｉ ｌ 后反复吹打 ２ （Ｍ ０ 次Ｗ



３１


 山 东 大学博 ：ｉ ： 学位论文
 



充 分裂解细 胞 

。

２ ） 收集裂解液到 １ ． ５ｍ ｌ 卧 管中 ，
每 １  ｍ ｌ  Ｔｒ ｚ ｏ ｉ ｌ
液中 加入 ０ ２ｍ
． ｌ
氯仿 ，
盖好盖



子剧 烈 震荡 １ ５Ｓ ， 在 冰 上静置 ２ －

３ｍ ｉ ｎ 

。

４ Ｃ下 离屯 此 时液体分为 Ｈ层 下层 为红色有机物层
°
３ ） １ ２０００ ｒ
ｐｍ
、
１ ５ ｍ ｎ ｉ ， ： 、 

中

间 层和 上层无色水相 层 。 小 屯 吸取 上层 无 色 的 水相 上清 移入新 的 ＥＰ 管中 

。

４ ） 按照 １ ｍ ｌ  Ｔｒ ｉ ｚｏ ｌ 加入 ０ ５ｍ ｌ ．
的 异 丙 醇 的 比 例 加 入 预冷 的 异 丙 醇 ， 颠倒混匀 

，

室温放置 １ ０ｍ ｎ ｉ 

。

离必 弃 上清 在 管 的 侧 壁及底 部 可 见泪 滴状沉


。
５ ） ４ （ ： 下 １ ２０００ 呼 １ １１ １ ５ 〇１ ； １１ ， 。 ６？

淀物 ， 此即为 ＲＮＡ ＿


。

６ ） 按照 １ ｍ ｌ Ｔｒ ｚ ｏ ｉ ｌ 加入 １ ｍ ｌ 的 八％ 乙 醇 的 比例加 入预冷 的 八 ％ 己 醇 ， 振荡洗




涂 ＾ 去 除残 留 异 丙 醇 ？


。

４ 离屯 小 也 吸去 上清 勿 吸沉淀 剩 余 少 量液体 可用
°
７ ） Ｃ 下 １ ２ ０ ０ ０ ｉ
ｐｍ ３ｍ ｉ ｎ ， ， ， 


小 离也机离屯 数秒 、
， 吸弃剩 余溶液 

。

８ ） 用 无 酶滤纸吸干剰余 乙 醇 室温干燥 ， ２ －

３ｍ ｉ ｎ ， 加入无 Ｒ ＮＡ 酶水 Ｗ 充 分溶解 


。

取少 量用 紫 外 分光光度 计检测 浓度 样本置于 保存

°
９ ） ＲＮ Ａ ，
－

７０ Ｃ 

。

２ ６ ２
． ．
逆 转录 合成 ｃ Ｄ ＮＡ



？
按照  ＴＡ Ｋ Ａ Ｒ Ａ  Ｐ ｒ ｍ 巧 ｃ ｒ ｐ ｔ ｉ ｉ 民Ｔ  ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ  Ｋ ｉ ｔ ｗ ｉ ｔ ｈ
ｇ
ＤＮ Ａ 垃ａ ｓ ｅ ｒ
  说 明 书进行操



作 

：

１ ） 去 除基 因 组 ＤＮ Ａ 反应 

：

按 如 下 成 分 于 冰 上 配 制 反应 混 合 液 ， 为 了 保证反应液配制 的 准确 性 ，
进行各



项 反 应 时 应 先 按 反 应 数 ＋２ 的 量 配 制 ， Ｍａｓ ｔ ｅｒ  Ｍ ｉ ｘ ， 然 后 再 分 装 到 每 个反应 管 中 

，

最后加 入 ＲＮ Ａ 样品 

。

试 剂 使 用 量



５ ｘ 

ｇ
ＤＮＡ Ｅｒａｓ ｅ ｒ Ｂ ｕ   ｆ ｆｅ ｒ  ２ ０ ．

 ｜
ａ ｌ

ｇＤＮ Ａ Ｅ 
＇

ｉ ａＫ ｒ １ ． 

０

Ｔｏ ｔ ａ ｌＲ Ｎ Ａ 《 １ ． ０
｜
ｉ


ｇ

ＲＮ ａ ｓ ｅ Ｆ ｒｅ ｅｄ Ｈ ２ ０   ｕ ｐ 〇１ ０
！；
｜
ｉ ｌ

室温 反应 １ ０ｍ ｎ ｉ 

。

２ ） 反转录反应



３２


 山 东 大学博 ±学位论文
 



反应液配制 应 在冰 上进 行 为 了 保证 反应液 配 制 的 准确 性 进 行各 项 反应 时 。 ， 

，

应 先 按 反 应 数 ＋２ 的 量 配 制 Ｍａｓ ｔ ｅｒ  Ｍ ｉ ｘ ，
然后再分装 １ ０ 到 每 个 反 应 管 中 。 轻柔



混 匀 后 立 即 进行 反转录反应 

。

试 剂 使 用 量



步骤 １ 的 反 应 液 １ ０ ０

．



Ｗ

Ｐ ｒ ｍ ｅ Ｓ ｃ ｒ ｐ ｔ ＲＴ  Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ  Ｍ ｘ  Ｉ 
ｉ ｉ ｉ １ ． ０
 ｊ
ａ ｌ

ＲＴ  Ｐ ｒ ｍ ｅ ｒＭ ｘ
ｉ ｉ １ ． ０
 ｜
ｉ 

ｌ

５ ｘ
 Ｐ ｒ ｍ ｅ Ｓ ｃ ｒ ｐ ｔ  Ｂ ｕ ｆｆｅ ｒ  ２  （
ｉ ｉ 化 ｒ 民ｅａ  ｌ  Ｔ ｍｅｉ ） ４ ． ０
 

叫

ＲＮ ａ ｓ ｅ Ｆ ｒ ｅ ｅ  ｄ Ｈ ２ ０  ４ ０ ．

 

叫

Ｔｏ ｔ ａ ｌ  ２０



反应 条件 膊育 Ｃ处理 终 止反应 冷却 产物
° ° °
： ３７ Ｃ Ｉ ５ ｍ ｎ ｉ
后 ８５ ５ ｓ ， ４ Ｃ 。 ｃ ＤＮ Ａ



于 －

７ （Ｐ Ｃ 保存 

。

２ ６ ３ Ｒｅ ａ ｌ －

ｔｉ ｍｅ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔａ ｔ ｉｖｅＰ Ｃ Ｒ


ｑ
． ．

１ ） 将逆转录 的 ｃ ＤＮ Ａ 产物进行实 时 定量 ＰＣ民 扩增 ， 反应体 系 如 下 表 所 示 


：



￣

试剂   用 量 Ｉ Ｉ
终浓度

Ｓ ＹＢ Ｒ？  Ｐ ｒ ｅ ｍ ｘ Ｅ ｘ Ｔａ ｑ ｉ  

ＩＩ
 （
Ｔ ｌ ｉ ＲＮａ ｓ ｅ Ｈ Ｐ  ｌ ｕ ｓ ） （ ２ ｘ ）  １ ２ ５ ．

 叫 ｌ


ｘ

Ｐ Ｃ 民 Ｆ ｏ ｒｗ ａｒ ｄＰ ｒ ｍ ｅ ｒ（
 ｉ １ ０
｜
ｉ Ｍ  ） １ ． ０
 ｜
ｊ ． １ ０ ． ４ ｊ
ｉ 

Ｍ

ＰＣ民 民ｅ ｖｅ ｒｓ ｅ Ｐｒ  ｉ ｍ ｅ ｒ （ １ ０
 ｐ
Ｍ  ） １ ． ０
［
ｉｌ ０ ． ４
 ）
ｘ 

Ｍ

ＲＴ 反应液 （ ｃ Ｄ ＮＡ 溶液  ） ２


叫

ｄＨ２ ０（ 灭菌蒸觸水  ） ８ ５ ．

 ｜
ｉｌ



Ｔｏ ｔ ａ ｌ  ２５
 ｊ
ｉ ｌ

２ ） 扩增 引 物如 下 團所示 

：

基 因 名 寡 核 昔 酸 序 列 ＾
＇ ＇

５ ３
（ 

）

Ｆ ｏ ｒ ｗ ａ ｒ ｄ  Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ｇ ＡＴ Ｇ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ｃ Ａ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ



Ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ  Ｃ Ｃ Ａ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ ＡＴＡＴＡＴ Ｇ ＡＴ Ｇ Ｇ



Ｆ ｏ ｒ ｗ ａ ｒ ｄ  Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｇ Ｇ Ｃ ＴＡＴＡＴ Ｇ Ａ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ｇ


ａｔ
ｑ３ ｓ ｍ
Ｒ ｅｖ ｅ ｒｓｅ  Ｃ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｃ Ｃ ＡＡ Ｇ Ａ Ｇ Ａ Ｇ Ｃ ＡＴＡＴ Ｃ



Ｃａ ｌ ｃ ｉ ｔ ｏｎ ｎ ｉ  Ｆ ｏ ｒ ｗ ａ ｒ ｄ  Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ Ｃ ＧＡ Ｇ Ｃ ＡＡ Ｃ Ｇ Ｃ Ｃ ＴＡ Ｃ Ｇ Ｃ



ｒｅ ｃ ｅ
ｐ ｏ ｒ
ｔ Ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ  Ｇ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｃ ＴＴ Ｃ Ａ Ｇ Ｇ ＴＡ Ｃ



Ｆ ｏ ｒ ｗ ａ ｒ ｄ  Ｃ Ｇ ＴＣ Ｇ Ｔ Ｇ ＡＴ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ ＴＴＡ Ｃ Ｔ


ＭＭＰ －



９
Ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ  八 Ｇ Ａ Ｇ ＴＡ Ｃ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ｇ Ｇ Ａ



３ ３


 山 东 大学 博± 学位 论文
 



Ｆ ｏ ｒ ｗ ａｒ ｄ  Ｔ ＧＧ Ｃ Ｃ ＴＴ Ｃ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ ＴＴ Ｃ Ｃ ＴＡ Ｃ



Ｒｅｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ＧＡ Ｇ ＴＴ Ｇ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ ＧＡＡ Ｇ Ｔ Ｃ Ｇ Ｃ Ａ
  



３ ） 扩増 反应程序 如 下 

：

步骤 １ ； 预变性


°
９５ Ｃ  ３ ０Ｓ



重复次数 ： 

１

步骤 ２ ： Ｐ ＣＲ 反应


°
９５ Ｃ  ５Ｓ



°
６０ Ｃ  ３０ －

６ ０ ｓ



循环数 ４ ０


？

步骤 ３ ： 分离



４ ） 反应结束后 确 认 Ｒｅａ Ｔ ｌ ｉ ｍｅ ＰＣ民 的 扩増 曲 线 和 溶 解 曲 线 ， 进行 ＰＣＲ 定量时




制 作 标准 曲 线 等 

。

２ ７  Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ  ｂ ｌ ｏ ｔ
．
检测 破 骨 细胞 生成相关 转录 因 子 Ｎ ＦＡＴｃ 及 ｌ ｃ －
ｏｓ
ｆ 的 表达



将小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 Ｗ １
Ｘ １ ０
５
个 孔 的 密 度 接种 于
／ ６ 孔板 中 加 入含 有 ， ３ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ


Ｍ Ｃ ＳＦ －

的培养液 ， 移 入 培 养 箱 中 使 细 胞 贴壁 过 夜 第 二 天 进 行 细 施 换 液 并 在 培

 。 ，

养 液 中 加 入 浓度 为 １ ０ ０ ｎ ｇ／ｍ ｌ 

的 Ｉ Ｌ －

６＋ｓｎ ＾
－

６ Ｒ Ｗ 及
 １ ０ ｎ ／ｍ ｌ 

ｇ 或者  ５０ ｎ 
ｇ
／ ｍ ｌ  ＲＡＮＫ Ｌ 

，

同 时保持 ３ ０ｎ
ｇ ／ｍ
ｌ Ｍ Ｃ ＳＦ
－

浓度不变 ， 连续培养 ２ 天 后 收集细 胞 ， Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎ ｂ ｏｔ

 ｌ 

法

检测 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 及 ｃ
－

ｆｏ ｓ 的 蛋 白 表达水平 

。

２ ７ ． ． １ 细胞 总 蛋 白 的 提取


１ ） 吸 弃 细 胞 培 养板 中 的 培 养 基 ， 用 预冷 的 ＰＢ Ｓ 清 洗细 胞 ３ 遍 ， 吸弃 培养板 中 的



ＰＢ Ｓ ， 注 意 不 要有残 留 液体 。 加入 Ｒ Ｉ ＰＡ 裂解 液 （ 强 ） 裂解 细 胞 ， 裂解液应 覆



盖 细 胞 表 面 用 细 胞 刮 刮 取 裂解 液 和 细 胞 裂 解 产 物 到 ， ＥＰ 管 中 置 于 冰 上裂解

 ，

１ ５  ｍｉ 打 

。

将 裂解 产物 转 移 至 微 量 离 也 管 中 用 超 声 粉碎 仪 处 理 样 本 Ｃ下
°
２ ） ， ｌ Ｏｓ ， ４ １ ２０００



ｒ
ｐｍ  离也 ５ ｍ ｎ 。
ｉ

３ ） 将 上清 转移 至新 的 离 也 管 中 取 少 量用 ， Ｂ ＣＡ 法测 定 蛋 白 浓度 加 入 ４ Ｘ ， ｌ ｏ ａｄ ｎ ｇ

 ｉ

蛋白
°
ｂ ｕ ｆｅ ｒ ， 
９７ Ｃ煮 ５ｍ ｉｎ 

。

然冷却 分装 后 Ｃ备 用
°
４ ） 自 ，
－

８０ 

。

２ ７ ２Ｂ ＣＡ
． ．
法測 总 蛋 白 浓度



３４


 山 东 大 学 博 ± 学 位论 文
 



细 胞总 蛋 白 浓度 的 检测 按 照 Ｂ ＣＡ 法 蛋 白 浓 度 测 定 试剂 盒 说 明 书 进 斤 

：

蛋 白 标准 品 的 准 备 取 蛋 白 标 准配制 液加 入到 管蛋 白 标准
一

２ｍ ｌ （ ３ ０ｍ
１ ） ： １ ．



ｇ

Ｂ ＳＡ ） 中 ， 充 分溶解后 配制 成 ２ ５ ｍ ｇ ／ｍ ｌ 的 蛋 白 标准溶液 。 取 适量 ２５ ｍ
ｇ ｍ
／ ｌ


蛋

白 标准 ， 稀 释 至 终 浓度 为 ０ ５ ｍ ｇ／ ｉｎ ｌ
． 

。

２ ） Ｂ Ｃ Ａ 工作液配制 ： 根据样 品 数量 ， 按 ５０ 体积 Ｂ ＣＡ 试剂 Ａ 加 １ 体积 Ｂ ＣＡ 

试

剂 Ｂ （ ５ 化 １ ） 配 制 适量 Ｂ ＣＡ 工作液 ， 充 分混 巧 

。

３ ） 蛋 白 浓度 测 定 ；
将标准 品 按 ０ 、 １ 、 ２ 、 ４ 、 ８ 、 １ ２ 、 １ ６ 、 ２０ ＾
Ｕ 加到 ％ 孔板 的 标



准 品 孔 中 加 标 准 品 稀释液 补 足 到 ， ２０
叫 ， 相 当 于 标准 品 浓度 分别 为 ０ 、 化 ０２ ５ 

、

０ ０５
． 、 ０ ． １ 、 ０ ２ ． 、 ０ ３ ． 、 ０ ４
． 、 ０ ５  ｍ ｇ／ ｍ ｌ
． 。 加适 当 体积样 品 到 ９６ 孔板 的 样 品 孔 中 。


．

如果样 品 不足 ２０
叫 ，
需 加 标准 品 稀 释 液 补 足 到 ２０
叫 。
各 孔加 入 ２００
叫 ＢＣＡ



工作液 ， ３ ７
°
Ｃ 放置 ２０ －

３０ ｍｉ ｎ 。 用 酶标仪 测 定 Ａ５ ６２ ，
或 ５ ４ ０ ５ ９ ５  ｎｍ －

之间 的其



他波长 的 吸光度 。
根 据 标 准 曲 线 和 使 用 的 样 品 体 积 计 算 出 样 品 的 蛋 白 浓度 

。

２ ７ ３Ｓ Ｄ Ｓ
． ．
－

ＰＡ Ｇ Ｅ  电泳


１ ） 将 制 胶玻 璃 板 洗 净 垂 直 卡 入 制 胶架 中 准 备 灌 胶 

。

２ ） 配制 ６％ 分离臉 加入 ＴＥ ＭＥＤ 后 迅 速摇 匀 并 灌 胶 。 １ ｍ ｌ 去 离 子 水 封胶 隔 绝



空气 分离胶与 水么 间 产 生 明 显 界 限 表 明 胶 己 经凝 固 将 上层 水倒 掉 并用


一

， ，

滤 纸 吸干 

。

３ ） 将配制 好 的 浓缩胶 灌注于分离胶上 ，

灌 满 后 立 即 插 入梳 子 ， 巧插入 的 过程 中



避免产生气泡 ， ３ ０ｍ ｉｎ 后 等胶凝 固 


。

４ ） 将 凝 固 后 的 凝胶 置 于 电 泳槽 中 ， 加 入 电 泳 缓冲 液 ，
取 出 梳子 ， 根据 蛋 白 浓度



测 定 结 果 在 凝胶 样 品 孔 中 加 入 总 量 致的蛋 白样品
一



。

５ ） 设置 电 压 ６０ Ｖ 开始 电 泳 ， 待 ３ ０ｍ ｉ ｎ 漠献蓝指 示剂 跑 至 分离 胶 的 上缘后 将 电




压提 高 至 １ ２ ０Ｖ ， 直 至 漠 酪 篮 跑 至 玻璃 板 底 部 即 将 溢 出 时 即 可 终 止 电 泳 

。

２ ７ ４
． ．
转膜


１ ） 按照蛋 白 Ｍ ａ ｒｋ ｅ ｒ 裁出 目 的 蛋 白 所 在 区 域凝 胶 ，
将 凝 胶 置 于 预 冷 转膜 缓 冲 液



浸泡 的 Ｈ层滤纸上 

。

２ ） 将 与 凝胶 大 小 相 同 的 ＰＶＤ Ｆ 膜置于 甲 醇 中 浸泡 ＾３ ｍ ｎ ｉ 后 放 入 转 膜液 中 备 用 

。

３ ） 将浸透转膜液 的 海 绵 、 滤纸 、 Ｐ ＶＤ Ｆ 膜 和 凝胶 按 照 从 下 往 上 的 顺 序 依 次 叠 放



于转膜板 的 黑 色 塑 料板上 。 从下往上依次为 ：

海绵 －

兰层滤纸 －
Ｐ ＶＤ Ｆ 膜 凝胶

 －

３己


 山 东 大学博 ± 学位 论文
 



－
呈层滤纸 －

海绵 。 注意 Ｐ ＶＤ Ｆ 膜对正极 ， 凝胶对 负 极 ， 轻轻挤压 Ｗ 上转膜系




统 ， 驱趕各层 中 间 中 可能存在 的 气泡 

。

４ ） 按 上 顺 序 安 装好 转膜 系 统 之 后 将转膜板插 入 到 转膜 槽 中 ， 加 入 转膜 液 ， 

将

电压调 至 １ ００ Ｖ 、 ５ ３ｍｉｎ ， 置于冰槽 中 开始转膜 


。

２ ７ ５
． ．
封巧 、 

杂交

转 膜完 成 后 取 出 Ｐ ＶＤ Ｆ 膜 在 紧贴凝胶 的 面右上角 剪 角 Ｗ 标记正反面 


将
一

１ ） ， 。

膜置于在 ５ ％  Ｂ Ｓ Ａ ＴＢ Ｓ Ｔ －

溶 液 中 并 置 于 摇 床 上 缓慢 摇 动 解 育 比 封 闭 非特



异性 蛋 白 结合位 点 

。

封 闭 完 之后 将 ＰＶ Ｄ Ｆ 膜放入加 有 抗 的 杂 交袋 中 驱赶气 泡 封 膜机 封 口
一

２ ） ， ， 

，

Ｃ解 育 过夜
°
４ 

。

３ ） 次 日 将膜 自 杂 交袋 中 取 出 ， 回 收抗 体 ， ＴＢ Ｓ Ｔ 洗 ３ 次 ，
每次 １ ０ｍ ｉｎ 

。

４ ） 将 膜 放入 盛 有 ＨＲＰ 标记 的 二抗 的 蘇 交盒 中 解 育 １ ｈ 后取出 ＴＥ Ｓ Ｔ 洗 ３ 次 每

 ，

次 １ ０  ｍ ｉｎ 

。

２ ７ ６
． ．
化 学发光 及 显影



等 比 例 混合 Ｅ ＣＬ 发光剂底物 ， 将混合后 的 发光剂 滴加 于 ＰＶＤ Ｆ 膜上 ， 于凝




胶 扫 描 仪 中 设定 曝光时 间 进行 显 影 

。

２ ７ ．
统升方 法



采用 ＳＰ Ｓ Ｓ １ ６ ０ ．
软 件 包 进行 数据 的 统 计 学 分 析 ，
各组 实验均 重 复 ３ 次 ， 计量



资 料 采 用 均 数 ± 标准 差 表 示 ， 组 间 差 异 比 较采 用 方 差 分 析 ， ｆ ＜〇 ． 〇５ 视为差异有 统



计学 意 义 

。

结果


３ １ ． 化 ￣
６ 只 有在 ＳＩ Ｌ －
６ Ｒ 存在 的 倩况下 才 能 轻微诱导 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 破骨细胞 生成



首先 ， 我 们 探讨 了 正 －

６ 及其可溶性受体 Ｓ 正 －

６ Ｒ 在没有 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 存在 的 情况



下对 小 鼠 破骨细 胞 前体细 胞 向 成熟破曾细 胞 分 化 的 作 用 如 图 。 ２ －

１ 所示 单 纯 ， 正 

－

６（ Ｏ ． ｌ
－

ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ ） 或者 Ｓ 正 化 －

（ Ｏ ． ｌ
－
ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ ） 处 理 組细 胞 体 积 小 ， 呈圆形 、 

梭

形或 多 边形 ， 在视野 中 分布 均 匀 ， 无 多 核细 胞及 Ｔ Ｒ ＡＰ 染色 阳 性细胞生成 。 但是



当 ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ 的 正 －

６ 与 正 化 联 用 化 视野 内 除 大 部 分 圆 形
Ｓ
－

、 多 边形 小 细 胞 外 还



可见少 量 ＴＲＡ Ｐ 染 色 阳 性 的 多 核 细胞 生 成 另 外 部 分 单 核 细 胞 也 呈 现 。 。 ＴＲ ＡＰ 

阳

性 染色 。
当 正 －

６／Ｓ 正 化 －

浓度提 高到 １ ０ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ 化 视爵 内 ＴＲＡＰ 染色阳性 的多核




３６


 山 东大学博壬学 位论文
 



巨细胞明 显増加 ，
但 此 时 生 成 的 破骨 样 细 胞 与 典 型 的 破骨 细 胞相 比 胞 体较 小 

、

Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 强度较弱 。 上结 果提示 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞膜表 面表 达 的 膜 结 合 型 正 


－

６Ｒ 相对于细胞外 正 －

６ 而 言处于不饱和 状态 不足 ， 介导 正 －

６ 的 促 破骨 细 胞 形成



作用 ， 该 作 用 需 要 外源性 ＳＩ Ｌ －

６ Ｒ 的 协助才 能实现 

。

０ ＾１＊ ＾ 纖 狡 碱 幾 媒 带 

黯 難 Ｉ鍵黯 辕為 键 巧 背鞍 谋 系 療讀鑽齊
Ｉ 

Ｉ

器 攀 囊 摹琴蒙鑛發 心 起 碟 熬豁 魏 錢 
 ．

總 纖 纖細 护 麵


．

Ｏ ｌ ｎｇ／ｍ Ｌ
－

６ Ｉ ｎ ／ ｍ Ｉ Ｌ
－



６
ｇ
． ｌ ｌ ｌ

載
１？麵 補 誦 疆纖 觀


式 身 瑪媒 巧斬 耗安 知 话 掉 巧的
－

媒 兴 為苗 站１扣
＇
．
．
： ．
：

； ：
，
； ＾ ．
＾


＾

ｌｉ ＾Ｐ 賴 ＨＩ議議Ｉ 顯

 ｆ
；

ｌ Ｏ ｎ ｇ／ｍ ６ ｌ Ｏ Ｏ ｎ 

６
Ｉ Ｌ
ｇ／ｍ Ｌ
－


－

ｌ ｌ Ｉ

嫌冀 際 誦画 辦 

數 鑽
‘
＇

营雌 善 訪 叛 罵 ＾ 皆媒
｜＾ 巧
＂
＾ ； 六 片 ＾ ＾｜ 巧 ＞ ；

｜
： ． ．
： ＿


齡 鑛龜 齡 變ｉ 哉 ：

議Ｉ纖


ｃ 絞 惡藤
ｆ ；

Ｍ ６ ＋ ０
；

６ Ｒ Ｉ ｎ ｇ ／ ｍ
鏡 １ 懸議臟 Ｓ ｉ ｉ


６ ＋ ｌ ｎｇ／ｍ
０ １ ｎ ｇ／ｍ Ｌ １ ｎｇ ／ ｍ Ｌ ６Ｒ


－

ｓ
－

ｓ Ｉ Ｌ
－
－

． ． ｌ ｌ ｌ ｌ ｌ ｌ＿

隱 Ｓ ｌｔｅ 

画 ｉｌ ｌ
编ｔ
ｅ 觀 鱗 踞 ？＾ 顧 装 麵 蘇 謙
ｌ 
 萬

ｎ 战 说 餐架 茲款蘇斯成如 聲 游 较 祥煤 成 综Ｖ 爲 麵 結拭 ｉ ｉ 锦巧

 ；

．
，

１０ ｎ ｇ／ ｍ Ｕ ！＞
－
６ ＋ １０ｎｇ／ｍ ｌ ｓ ｌ Ｌ £ Ｒ ｌ Ｏ Ｏ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ  Ｉ Ｌ
－

６ ＋ ｌＯ Ｏｎｇ／ｍ ｌ ｓ ｌ Ｌ
－
６Ｒ



图 ２ －

１ ：  ｓ ＩＬ ６民 －

对 ＥＬ ６ －

诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 向破骨 样细胞分化 的 作 用 。 Ａ Ｄ －

： 不 同 浓度



３７


 山 东大学傳壬学 位论文
 



正 －

６ 对 Ｂ ＭＭ ｓ 向破骨 細胞分化的影响 。 Ｅ Ｈ －

： 不 同 浓度 ｓＩ Ｌ －

６ 民 与 Ｉ Ｌ －

６ 联用 对



Ｂ ＭＭ ｓ 向破骨 细胞分化 的影响 。 红 色箭头 指 示 ＴＲ Ａ Ｐ 染 色 阳 性 的破骨样 细 胞 


。

３ ２ ． 比 －

６ 抑 制 高浓 度 ＲＡ Ｎ ＫＬ 诱 导 的 破 骨 细 胞形 成而 对 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导



的 破 骨细 胞形 成 无 影 响



前述实验证 明 圧 －

６ 只 有在 Ｓ 正 －

６民 存在 的 情况 下 才 能轻微 诱 导 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 

破

骨细 胞生 成 为了进 步验证 Ｌ 及 正 ６Ｒ 对 ＲＡ ＮＫＬ 诱 导 的 破骨 细 胞 形 成 的



一

６
－ －

， Ｉ Ｓ

影响 ， 我们 用 不 同 浓度 的 正 －

６ 和 或 ／ Ｓ 正 －

６Ｒ 干预加 有 不 同 浓度 ＲＡ ＮＫＬ 的 破骨细




胞诱导培养 体系 。 如图 ２ ２  ＴＲＡＰ
－

， 染色显 示诱 导培养 ４ 天后 ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ 的 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



只 能 诱 导少 量 的 破骨样细 胞形成 ， 随着 ＲＡ ＮＫ Ｌ 浓度 的 升 高 ， 破骨 样 细 胞 的 数量



和 体积 也逐 渐増 大 ， 当 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 浓 度 为 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ
时达到顶峰 。 Ｓ 正 －

６Ｒ 的加入对



Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞形 成无影响 （ 图 ２ ２Ａ －

） 。
当在诱导体系 中 加入 圧 －

６ 时 

，

较 高浓度 的 正 －

６（ ＞ １ ０ ｎ
ｇ／ ｍ ｌ ） 抑制 了 ５ ０ｎ ｇ ／ ｍ ｌ 的 ＲＡ ＮＫＬ 诱 导 的 破 骨 细 胞 生 成



但 是对较低 浓度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  （ １ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ 和 ２ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ） 诱 导 的 破骨细胞生 成却 无 明 湿



影响 （ 图 ２ －

２Ｂ ） 。 （ ＾＾ 上 结果提示 正 ５
－

６ 民 对 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞 生成无 影响 

，

而 正 －

６ 对 Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ 诱 导 的 破骨细 胞生成起 负 性调 控 作 用 ，
并且此作 用 的 大小 与



ＲＡ ＮＫ Ｌ 的 浓 度 密 切 相 关 

。

Ｗ。

’

ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  Ｍｎｇ ｉ

ｍ ｌ
 Ｒ５ Ｎ Ｋ Ｌ
，
Ｓ ０ｎ ｇｍ



ＲＡ ＮＫＬ   Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ
‘

 一
ｌ怖
２ ０ｎｆ ２０ｎｇ 

Ｍ
－

古
Ｉ
＿


伽 －
— 况 ０  
蔓
．

一
罢 今  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ０ｎ
ｇ ｍ  ＲＡ Ｎ ＫＬ 
＞

？＊ Ｏｎｇｍ
广
 １ ｌ ． ｌ 

！

广
Ｉ 跳
１

１ 令 眶琴
 Ｉ 

伽
￣ ￣


￣


—
Ｉ ￣
￣

１
Ｉ Ｉ １ ｔ 

Ｉ
＊ ＊ ＊＊
■
— ￣

阳
 査 

＊
＇

１
０。
〇
＇

Ｊ
？ ？ ？
   

〇 ？ ？ Ｊ
￣ ￣ 

 〇 ？


？


？


９


？




Ｓ Ｌ ６Ｒ
－

＞
ｇ ｎｔ
ｉ
０ ０   ０ 的 Ｌ名
巧 〇  Ｏ  １ ０ 

的
／
Ｉ

（
ｉ
． １ １ １ １
 ） Ｉ
．
ｔ １ １
（

图 ２ ２ －

： 正 －

６ 或 ＳＩ Ｌ －

６ Ｒ 对 ＲＡ ＮＫＬ 诱导 的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 向 破骨 细 胞分化 的 彰 响 

。

Ｐ＜ ０ ０ ５ ＇ 

．

３ ３ ． 比 －

６／ ｓ 比 ６ Ｒ －

对 不 同 浓度 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 施 生 成 的 差异性 调 节



为 了 评价 正 －

６ 与 ＳＩ Ｌ －

６Ｒ 联合应用 对 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 生 成 的 影 响 

，

我们 在 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介 导 的 破骨 细 胞 诱 导 培 养 体 系 中 加 入 系 列浓度 的 正 及 正
一

６ ５


－

６ Ｒ ， ＴＲＡＰ 染色观 察破骨 样 细 胞 的 生成情况 。

如图 ２ －

３ ， 结果思示诱导培养 ４ 

天

后 ， 生 成 的 破骨 细 胞 的 数 量 和 大 小 与 所 加 入 １１ ＾ ？？１ ＾
的浓度成正 比 。 当 １ ＾１ 不 同浓



度 正 －

６ ／ｓ 正 －

６Ｒ 干预 ＲＡ ＮＫＬ 破骨细 胞 诱 导 体 系 时 ， Ｔ ＲＡＰ 染色 显示 正 －

６／ｓ正 ６Ｒ

 －

对 破骨 细 胞 生 成 的 影 响 取 决 于 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 的 浓 度 ： （ １ ） 在低浓度 ＲＡ ＮＫＬ Ｃ ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 

）

３ ８


 山 东大学博止 学位论文
 



的情况下 ， 正 －

６／Ｓ 正 －

６ Ｒ （ ＞ １ ０ ｎ ／ｍ
ｇ ｌ ） 表现为 促进 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞生成 

，

并且此促进 作 用 随 正 －

６ ／Ｓ ＩＬ ６ Ｒ －

浓度 的 升 高而 増 强 。
与 单纯 １ ０ｎ
ｇ ／ ｍ ｌ  ＲＡＮＫ Ｌ 

诱

导姐相 比 正 ６ ／Ｓ 正 ６ 民 的 加 入 使诱 导 生成 的 破 骨 细 胞 得 数量增 加 了 倍
一

００ ｎ
ｇ／ ｍｌ
－ －

１  

。

（ ２ ） 在 中 浓度 ＲＡ Ｎ ＫＬ  （ ２ ０ ｎ ／ｍｌ
ｇ ） 的情况下 ， 不 同 浓度 正 －

６ ／ｓ 正 ６ Ｒ －

对 ＲＡＮ Ｋ Ｌ



诱 导 的 破骨 细 胞生成无 明 湿 作 用 。 （ ３ ） 在 高浓 度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  （ ５０ ｎ ｇ／ ｍ ｌ ） 的情况下 

，

正 －

６／Ｓ 正 化 －

（ ＞ １ ０ ｎ ／ｍ
ｇ ｌ ） 表 现为剂量依 赖性地抑 制 ＲＡ ＮＫＬ 诱 导 的 破骨 细胞生成 

。

与单纯 ５ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导组相 比 ２ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ 正 －

６ ／ ｓ ＩＬ －

化 的加 入使诱导 生成 的



破骨细胞 的 数量减少 了 １ ／３ ， 而 １ ０ ０ｎ

ｇ ／ｍ ｌ 正 －

６ ／Ｓ ＩＬ －

６ Ｒ 更 是 使诱 导 生成 的 破骨细



胞 的 数量 降 低 到 基准 值 的 半 上结果表 明 正 ６／５正 民 对于 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的


一

。 ＾ ＾ － －

破骨细 胞 生 成具有差 异性调 节 的 特 点 ， 具 体 的 调节 效果取决于 ＲＡ ＮＫＬ 的 浓度 


，

即 促 进 低 浓 度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 生 成 而 抑 制 高 浓 度 Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破 骨



细胞生成 

。

４０〇 １


ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  備ｇ ／ ｍ 

ｌ

＿  ？  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  ２ ０ｎ
ｇ／ ｍ 

ｌ

？  ３ ００ ？
 ｗ



？  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  ０ｎ
＂

妻 ｉ Ｔｖ  ． 少ｍ １ 

ｌ



丄

Ｉ

寺  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ Ｏｎ 怖
１ ｇ 

Ｉ



＂
一

２  ｆ

１ 朋 ．

ｇ



＾


＾
０ ９
＊ ￣
？
  
？




？ ？
－

Ｉ Ｌ ６ Ｓ Ｌ ６Ｒ
－

／ Ｉ
－

 （
ｎ ｇ／ ｍ ｔ
）  〇  １  １ 〇  ２ ０  １ ００



图 ２ －

３ ： 正 －

６／ ｓＩ Ｌ －

６民 对 ＲＡＮＫＬ 诱导 的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 向 破骨 细 胞分化 的 影响 

。

Ｐ＜０ ．
０５ 

．

为 了 更 方 便 地进 行 组 间 比较 我们 将 ，
ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 设 定为 低 水平 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 的 代表



浓度 将 ， ５ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ
设 定 为 高 水平 ＲＡ Ｎ ＫＬ 的 代表浓度 ， 因为 １ ０ ０ ｎ ／ｍｌ
ｇ 的 正 －

６ ／ ｓ ＩＬ 

－

６ 民 作用 最为 明 思 ， 因 此在 后 续实验 中 将 正 －

６／ｓ 正 －

６民 的 浓度 固 定为 １ ０ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ 

。

另外 ，
为 了 验证结 论 的 可靠性和普遍适用 性 ，
评估 不 同 来源 的 破骨细 胞前 体细胞



对实验结果 的 影响非常必 要 ， 因 此 我 们 分 别 用 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞和 ＲＡＷ ２ ６ ４ ．

７ 

细

胞重 复 了 相 关 实验 

。

如图 ２ ４Ａ－

，
Ｂ 所示 ， １ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ ＲＡ Ｎ ＫＬ 诱导 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ  ４ 天后 可 见少量 Ｔ ＲＡ Ｐ



染色阳 性 的 多 核 巨细胞生成 ， 胞核多位于胞体中 央区 域 ， 细胞体积较小 。



当

ＲＡＮ Ｋ Ｌ 浓度提 高 到 ５ ０ｎ

ｇ ／ｍ ｌ
时 ， 视野 内 出 现 大量 ＴＲ Ａ Ｐ 染色 阳 性 的 多 核 破骨 样



３ ９


 山 东大学博壬学 位论文
 



细胞 细跑 体积及细 胞核数量都较 ，
ｌ Ｏ ｎ ｇ／ｍ ｌ ＲＡＮＫ Ｌ 涛导组明 显增加 在 。 ｌ Ｏ ｎ ／ｍ
ｇ 

ｌ

ＲＡＮＫＬ 诱导体系 中 加入 １ ０ ０ｎ

ｇ／ｍ  ＩＬ ６ ／ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ
ｌ
－ －

后 ， 诱 导 生成 的 破骨 样 细 胞数量



增加 ＋ 个孔 ＋ 个 孔 体积 明 显 增 大
２
（ ８ ７ ２ １
 ／  ＶＳ  ５ ４   ７ ／ ） ， （ ０ ０ ． １ １ ± ０ ０ ０ ３ｍ ｍ
．  ＶＳ０ ０ ０ ４
． 


± ０ ００
． １ ｍｍ
２
） ， 差 异 具 有 统计 学 意 义 （ Ｐ ＜０ ．
０５ ） 。 与 此相 反 ， 在 ５０ ｎ ｇ／ｍ ｌ ＲＡ ＮＫＬ



诱导体系 中 加入 ｌ Ｏ Ｏ ｎ ／ｍｌ
ｇ 正 －

６／ｓ 正 －

６ Ｒ 后 ， 诱导 生 成 的 破骨 样细 胞数量 却 显 著 减



少 个 孔 个化 同时 体积也 明 显减 小 ＋ ２
（ １ ０ ５ ±２ ６ ／ ｖｓ ｌ ８ ４±３ ０ ） ， （ ０ ００９
．   ０ ０ ０ ２ｍ ｍ
．
 ＶＳ



０ ０２４
． 
＋  ０ ０ ０ ６ｍｍ
．
２
） ， 差异 具有 统计 学 意 义 （ 户＜ ０ ． ０ １ ） 。 统计 表如 图 ２ ４Ｅ
－

，
Ｆ 所示 

。

辑 察譲漏 穿＾



耗觀 濟 辕纖 滅 的
ｌＯ ｎ ｇ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 
？

５０ ｎ
ｇ／ ｍ ｌ
、
 Ｒ
、

乃經


Ａ Ｎ ＫＬ



ｌ Ｏｎ ｇ／ｍ ｌ  ＲＡＮ 化＋ １ ００ ｎ
ｇ／ｍ
ｌ  １ Ｌ
－

６ ＋ Ｓ Ｉ Ｌ
－

６ Ｒ ５ ０ｎｇ／ｍ ｌ Ｒ ＡＮ ＫＬ ＋ ｌＯＯｎ
ｇ／ｍ ｌ  ｌ
ｌ
－

６＋ ｓ ｌ Ｌ
－

６Ｒ



？ ？

 ＊＊
巧〇 化 ０４
■  Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ
 
￣

１
！
Ｉ   Ｉ ｜  Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ  

＊

ｔ ｉ
ＲＡＮ Ｋ Ｗ Ｌ 斯 Ｌ＾
￣￣


＂
ｓ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ． Ｌ ６／ Ｓ Ｌ ６ Ｒ

－ －

Ｉ Ｉ １

 比 ０３
．

Ｓ
窒
下


？

＂。

ｌ ｙ ＾  ｍ
．

Ｉ 
 １ ０ ０２
．
．

＾■   ＾  ■ 

■
ｉ 如 －

ｊ   ■ 
１

１ Ｉ
ｔ

ｒ ＾
．

Ｓ －
？
？


；

〇
Ｊ ＿

＾  ｍＫｍ ＾

〇 ． 〇〇
Ｊ ＿ 



ＲＡ Ｎ ＫＵ ｎ ｇ／ ｍ ｌ

｝  １ 〇  ５０ １ ０  ５０



图 ２ ４ －

： 正 －

６／ ｓＩ Ｌ －

化 对 ＲＡ ＮＫＬ 诱导的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 向 破骨 细胞分化的影 响 


。

Ａ  ： １ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ  ＲＡ ＮＫＬ 诱导形 成 的破骨 細胞 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 。 Ｂ  ５ ０  ｎ ｇ／ｍ
： ｌ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 

诱

导形 成 的破骨 细 胞 ＴＲ ＡＰ 染色 。 Ｃ １ ： ０ｎ
ｇ ／ ｍ ｌ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 与 １ ０ ０ｎ
ｇ／ ｍｌ
正 －

６／ ＳＩ Ｌ －

６ 

Ｒ

共 同 作 用 下诱导 形 成 的破骨 细胞 Ｔ ＲＡ Ｐ 染色 。 Ｄ ５ ０ ： ｎ ｇ ／ｍ ｌ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 与 ｌ Ｏ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 


正 －

６／ ＳＩ Ｌ －

６ Ｒ 共 同 作 用 下 诱导形 成 的破骨 細胞 ＴＲＡＰ 染色 。 Ｅ ： 各 组每孔诱导 形 成



４０


 山 东大学博±学 位论文
 



的 破骨 细 胞 数 量 统计 分析 。 Ｆ ： 各 组 诱导 形 成的 破骨 細胞平 均 面 积 统计 分析 

。

＊ ＊ ＊

Ｐ ＜０ ． ０５ ，  Ｐ ＜０ ． ０ １ 

．

接下 来我们 用 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞重复 了 上述实 验 ， 也 获 得 了 类似 的 结 果 。

如图



２ －

５ 所示 ， １ ０ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ
正 －

６ ／ ｓ ＩＬ －

化 明 显 增 强 了 １ ０ ｎ ｇ／ｍ ｌ Ｒ ＡＮＫＬ 诱导 的 破骨细胞生




成 （ 图 ２ －

５ Ａ Ｃ ，
） ， 表现为 破骨 样 细 胞数量增 加 （ １ ２ ６±２ ３ 个 孔 ／ ｖｓ ５ 化 １ ０ 个孔 ／ ） 

，

体积增大 （ ０ ０ ． 巧±０ ． ０ ０ ５  ｍｍ
２
ＶＳ０ ．
００ 化０ ． ０ ０ ２ｍ ｍ
２
） 。 在 ５ ０ｎ
ｇ／ ｔ ｎ
ｌ ＲＡ ＮＫ Ｌ  中 加入



１ ０ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ Ｉ Ｌ －

６／ｓ 正 －

６ Ｒ 却 蟲著抑 制 了 破骨细施生成 （ 图 ２ －

５ Ｂ ，
Ｄ ） ， 破骨样细胞数



量 个 孔 个 孔 与 体积 ＋ ＋
２
（ １ ５ 化扣 ／  ｖ ｓ  ２ ８ ７± ４ ２  ／ ） （ ０ ０２． １ ０ ０ ０ ６ｍ ｍ Ｖ Ｓ０ ０ ５ ２
．
．   ０ ０
． １ 

１

都明 显减小 统计表如 图 所示
２
ｍｍ ） 。 ２ ４Ｅ －

，
Ｆ 

。

ｍｍ ｍｍｍ


鮮 觀 巧的


ｌＯｎｇ／ｍ ！  ＲＡ Ｎ 化 ５０ｎｇ／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ 

化
■

繫窺 雀公鮮 攀藻 鐵觀 蜀


織 杂 當巧 部 鄉 寶
‘
？

＾＾ ■

去
貪 

，

為苗 城 遍 鱗 證 觀塵


ｌ Ｏｎ
ｇ／ ｍ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ ＋ ｌ ＯＯ ｎｇ ／ ｍ  Ｉ Ｌ
－

６／ Ｓ Ｌ
－

６Ｒ ５０ ｎｇ ／ｍ ｉ Ｒ ＡＮ ＫＬ ＋ ｌ ＯＯ ｎ ｇ／ ｍ ｌ  ｌ Ｌ
－

６／ｓ ｉ Ｌ
－

ＳＲ



忘 ？
ｌ ｌ Ｉ



化化


；
 Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 化Ｗ ｓ ｌ Ｌ ６Ｒ－

ｐ＾   側Ｌ ．

６Ｒ



ｒ  占
］
．
１
肪

ｉ


。 ＇

！
遥 ２ ００
．

了



１
１ ００
．
八
■ ■ ！
。 。２．


－

ｉ  Ｊ ｓ

ｉ
■  

Ｊ
ＲＡＮ Ｋ Ｌ ｎ ｇ ｍ 如 ０  ５０
（
／ ｌ

）  １ ０ １ 


国 ２ －

５ ： 正 －

６／ｓ 正 －

化 对 ＲＡＮＫ Ｌ 诱导的 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 細 胞 向破 骨 细 胞分化的 影 响 


。

Ａ  ： ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ｌ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导形 成 的破晋 细胞 ＴＲＡ Ｐ 染 色 。 Ｂ  ５ ０ ｎ ｇ／ ｍ

： ｌ Ｒ ＡＮＫ Ｌ 

诱

导形 成的破骨 细胞 Ｔ ＲＡＰ 染 色 。 Ｃ ：  １ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 与 １ ０ ０  ｎ ｇ／ｍ ｌ 正 －

６ ／  ｓ ＩＬ －

６ 

民

共同作 用 下诱导形 成的破骨 细胞 Ｔ ＲＡ Ｐ 染 色 。 Ｄ ５ ０ ： ｎ ｇ ／ｍ ｌ Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 与 ｌ Ｏ Ｏ ｎ ／ ｍ ｌ

ｇ

４１


 山 东大学 博± 学 位论文
 



正 －

６／ Ｓ 正 －
６Ｒ 共同作 用 下 诱 导 形 成 的 破 骨 细 胞 ＴＲＡＰ 染 色 。 Ｅ ： 各 组每孔诱导 形 成



的破骨 细 胞数 量 统计 分析 。 Ｆ ： 各 组 诱导 形 成 的 破 骨 细 胞 平 均 面 积 统 计 分析 

。

＊ ＊

＞＜０ ．
０５ ，
户＜ ０ ． ０ １ 

。

３ ４
． 比 －

６ ／ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ ￣

对不 同 誠 ＲＡＮ ＫＬ 巧 导 的玻 骨细胞 吸收 陷 窝形 成 的 差异 侧




节
进 行 骨 吸 收 是破 骨 细 胞 的 主 要 生 理 功 能 而 在 体 外 培 养 状 态 下 在 骨 片 或 矿 物

 ，

质 表面 形成 吸 收 陷 窝 数量与 面积 的 大小 直接反 映 了 破骨细 胞骨 吸 收功 能 的 强 弱 


。

在 发现 正 －

６ 与 ＳＩ Ｌ －
６Ｒ 联合应用 对 不 同 浓度 ＲＡＮＫＬ 诱 导 的 破骨细胞生成 其 有差



异性调 节 作 用 之后 ， 我 们 进 行 了 破骨 巧 胞 吸 收 陷 窝 形 成 实 验 ， 验证 正 －

６ ／Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ

 －

对 不 同 浓度 ＲＡＮＫＬ 诱 导 的 破 骨细 胞骨 吸收 功 能 的 影 响 是否 与 破骨细胞生成 的



结 果相 致
一



。

如图 ２ －

５ Ａ Ｂ ， 所示 ， ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ＲＡＮＫＬ 诱导 小 鼠 Ｂ ＭＭｓ  １ ０ 天后 在培 养板底部



可 见少 量透 明 吸 收 陷 窝 形成 。 透 明 陷 窝 散在分布 ，
数量很少 且 陷 窝 的 平 均 面积较



小 。 当 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 浓 度 提 高 到 ５ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ 化 视野 内 出 现 的 透 明 吸 收 陷 窝 的 数 量 明 显



增加 且平均 面巧 显 著 增 大 ， 部 分 陷 窝 相 互重 叠 或连接成 片 ， 提示 骨 吸收 能 力 明 显



増强 。 在 １ ０ ｎ
ｇ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ 诱导体系 中 加 入 １ ０ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ  ＩＬ ６ ／ ｓ Ｉ Ｌ ６Ｒ
－ －

后 ，
诱导生成



的透 明 吸收 陷 窝 数量増加 （ ９ ２± １ ２ 个 孔 ／ ｖｓ ６ ０± ７ 个 孔 ／ ） ， 面积 占 比明 湿增大



（ ３ ． ２ ３ ± ０ ５ ２ ％ ｖｓ ０ ８ ３ ±０
． ． ．
１ １ ％ ） ， 差异 具有 统计 学 意 义 （ ｆ＜０ ． ０５ ） （ 图  ２ ６Ａ－

，
Ｃ ） 。 

与

此相 反 ， 在 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导体系 中 加 入 １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｉ Ｌ ６ ／ Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ－ －

后 ， 诱导生



成 的 透 明 吸 收 陷 窝 数量却 显 著 减 少 （ １ １ ８ ±２ ０ 个 孔 ／ ｖｓ ２ ０ ８ ± ３ ４ 个 孔 ／ ） ， 同 时面积 占



比也明 忌减小 （ ３ ． ８ ６± ０ ． ４１ ％ ｖｓ ６ ８ ． ５ ±０ ７０ ％ ） ． ， 差异 具有 统计 学 意义 （ 户＜０ ． ０５ ） （ 


围

２ ６Ｂ
－

，
Ｄ  ） 。 统计表如 图 ２ －
祀 Ｆ ， 所示 

。

我们用 Ｒ ＡＷ２ ６ ４ 细 胞 重 复 上 述 实 验之 后 发 现 结 果 与 Ｂ ＭＭ ｓ 的 表 现基 本


一

． ７

致 。 １ ０ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ 正 －

６ ／Ｓ 正 －

化 明 显 増 强 了 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的 破骨细胞 吸 收 陷



窝 生 脱 表现 为 透 明 吸 收 陷 窝 数 量 増 加 （ １ ６ ２± ２ １ 个 孔
／ ｖｓ Ｉ ０ １ ±１２ 个 孔 ／ ） ， 面积 占



比增大 （ １ ． ４ ４± ０ ３ ２ ％ ｖ ｓ ０ ８ ２ ± ０
． ． ． １ ０ ％ ） ， 差 异 具有 统 计 学 意 义 （ 戶＜０ ．
０５ ） （ 图 ２ ７Ａ－



，

Ｃ  ） 。 在 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ
ｌ ＲＡ ＮＫＬ 中 加入 １ ０ ０ ｎ
ｇ／ｍ ｌ
正 －

６／３正 ６民 －

却 湿 著 抑 制 了 破 骨细胞 吸



收 陷 窝 生成 ， 透 明 吸 收 陷 窝 数量 （ ２ １ １ ±３ ３ 个 孔 ／ Ｖ Ｓ  ３ ８ ７± ５ ２ 个 孔 ／ ） 与 面积 占比



（ １ ．
９ ６± ０ ４ ２ ． ％ ｖｓ ４ ６ ８ ± ０ ７ ３ ％ ． ． ） 都明 显减小 ， 差异具有 统计 学 意 义 ＣＰ ＜ ０ ０ ５ ． ） （ 

图

４２



山 东大学 傳±学 位论文




２ ７Ｂ
－

，
Ｄ ） 。 统计表 如 图 ２ －

７Ｅ ，
Ｆ 所示 

。

ｍＫｍ


Ｈ ｜Ｈ


ｎ
ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 十 巧 ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｈ Ｌ ６ ／ｓ －

＾ －

６ Ｒ  ＲＡ Ｎ ＫＬ 十 ｌ ＯＯ ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｉ Ｌ ６ ／ｓ 化 － －

６Ｒ



＾＾
１ 〇 ■  ＲＡＮ ＫＬ  ３００ ■  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ


； １  ］  ＊＊


窒  賊  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ＋ Ｌ ６／ ｓ Ｌ ６Ｒ ＝ 的  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ＋ Ｌ ６ ｓ Ｌ ６Ｒ 
广
－ －
一


－ －

Ｉ ｉ Ｉ ／ ｌ

图
ＲＡＮ ＫＬ ｎ ｇ ｍ

２ －

６ ： 正
（

－
／ ｌ

６ ／Ｓ ＩＬ ６ 民
） 

－
１ 〇  抑  ＲＡ Ｎ Ｋ Ｍ ｎ ｇ

对 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的
１ 心 ／

Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 破 骨 细 胞 吸 收 巧 窝
ｍ〇  １ ０
ｉ唯

 

沉

形成能 力 的



影响 。 Ａ  ： ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导形 成 的破骨 细 胞吸收 陷 寫 ：
Ｂ ５ ０ ： ｎ ｇ／ ｍ ｌ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ



诱导形 成 的 破骨 细胞哎收 陷 寫 ；
Ｃ ： 在 １ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ  ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 的破骨 细 胞巧 成体



系 中 加入 ｌ Ｏ Ｏ ｎ ／ ｍｌ
ｇ 正 －

６ ／ Ｓ ＩＬ －

６ 民 干 预 后 形 成 的 破骨 细 胞 吸收 憎 寫 ：
Ｄ ：
在 ５ ０ ｎ ｇ ／ｍ 

ｌ

ＲＡＮＫＬ 诱导 的破骨 细胞形 成体 系 中 加入 ｌ ＯＯ ｎ

ｇ／ｔ ｎ ｌ 正 －

６ ／ｓ 正 ６Ｒ －

干预后 形 成的破



骨 细 胞 吸收 陷 寫 。 Ｅ ：
各 组每孔破骨 细 胞 吸 收 陷 窝 面 积 统计 图 。 Ｆ ：
各 组每 孔破 骨



细胞吸收 陷 窝 数量 统计 图 。
＊
户＜０ ． ０ ５ ，
＊ ＊
戶 ＜０ ． ０ １ 

。

４３


 山 东大学博±学 位论文
 



ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ５ ０ ｎ ｑ ／ ｍ

＆
ｌＯ ｎ ｇ／ｍ ｌ  ｌ  ＲＡＮ 

化

ＭＢ
＾ ｌ 

ｌ

ｌＯｎ
ｇ ｍ ／ ｌ  ＲＡ Ｎ 化
■

Ｈ ＯＯｎｇ ／ｍ ｌ Ｉ Ｌ
－

６／ｓ
－

ｌ ｌ ＿
－

６ Ｒ  ５ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ 
＾Ｐ


ＲＡ Ｎ 化 牛 ｌ ＯＯ ｎ ｇ ／ｍ ｌ ｌ ｌ ＿
－

６ ／ｓ
－

Ｉ Ｌ
－

６Ｒ



？ ？

 ＊＊ ＊＊

 国  ＲＡ Ｎ 化
６ ５００
国  ＲＡ Ｎ 化
＊

 
＊

：   
ｉ

Ｉ
 

！

菱
］ Ｉ １ ■

ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ＋ Ｌ ６ｆ
－

ｅ Ｌ －

斯 下 三 瓦  ＲＡ Ｎ ＫＬ ＋ Ｌ＆ ｓＨ ＾
－

欢 下



占 ｒ  占
Ｉ ＿
；
Ｉ ｌ



。
’

■ ■



ｉＬ
Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ｎ ｇ ／ｍ
（
ｌ
￡ Ｊｌ
）  １ ０ 
ｌ
５０  ＲＡ Ｎ ＫＭｎｇ
＿
 ｄ 
／ ｍ ｔ
攝
）  １ ０ 妨


■自



图 ２ ７
－

： 正 －

６ ／ ｓ ＩＬ －

６ 民 对 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞破骨 细 胞 吸化 陷 寫 形 成 能



力 的彰响 。 Ａ  ： ｌ Ｏ ｎ ｇ／ ｍ ｌ ＲＡＮＫＬ 诱导形 成 的破骨 细胞 吸收 陷 寫 ：

Ｂ ５ ０ ： ｎ ｇ ／ ｍ ｌ

Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导形 成 的破骨 细胞吸收 陷 窝 ；

Ｃ ： 在 ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ＲＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细胞



形 成体 系 中 加入 １ ０ ０ ｎ ｇ／ ｍ ｌ Ｉ Ｌ －

６ ／ｓ ＩＬ
－

６ 民 干预后 形 成 的破骨 细 胞吸收陷 窝 ；

Ｄ ： 

在

５ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的 破晋 细 胞形 成体 系 中 加入 １ ０ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ 正 －

６ ／ｓ 正 ６ Ｒ －

干预后



形 成 的破骨 细胞吸收 陷 寫 。 Ｅ ： 各 组每 孔破 骨 细 胞 吸 收 陷 窝 面 积 统 计 图 。 Ｆ ： 各组



每孔破 骨 细 胞吸化 陷 窝 教量 统计 图 。
＊
户＜０ ．
０５ ，
＊ ＊
ｉ
＂
＜０ ０ ．
１ 

。

３ ５ ． 比 －

６／ｓ ＾ ６ Ｒ －

对 不 同浓 度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细施 分化 标 志 基 因 巧 关键转 录



因 子 表 法 的 差异世 调 节



为了进 步 验证 正 正 Ｒ 对 不 同浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细胞分 化 的 差



一

６／Ｓ －

４４


 山东 大学博 ±学 位论文 




异 性调 节 并初 步探讨 其 内 在 机 制 ，
我们利 用 ｑ
ＲＴ Ｐ Ｃ Ｒ－

检测 了 破骨细 胞 分化相 关



的 几个标志 因 子 Ｃ ＴＲ 、 ＣＫ 、 ＭＭ Ｐ －

９ 和 ＴＲＡＰ 的 ｍ ＲＮＡ 的 表达 

。

如图 ２ －

８ Ａ Ｄ －

所示 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 ２ 天 后 破骨 细 胞 分化 相 关 标 志 因 子
， Ｃ Ｔ 民 、

ＣＫ 、 ＭＭ Ｐ －

９ 和 ＴＲＡ Ｐ 的 ｍ Ｒ ＮＡ 的 表达 呈 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 浓度 依 赖 性增 加 。 在 １ ０ｎ
ｇ ／ｍ 

ｌ

ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 体 系 中 加 入 １ ０ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ｌ Ｌ －
６ ／ｓ 比 －

６ 民 后 ， Ｃ ＴＲ 、 ＣＫ 、 ＭＭ Ｐ －

９ 和  ＴＲＡ Ｐ



的 ｍＲＮ Ａ 的 表达较对照 组思 著增 强 ； 而在 ５ ０ｎ

ｇ／ｍ
ｌ Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导体系 中 加入 １ ００



ｎ ｇ／ ｍ ｌ  比 ６ ／ ｓ 正 ６ 民 － －

后 却 大幅 抑 制 了 上述破骨 细 胞 分化 标 志 因 子 的 ｍ ＲＮ Ａ 的 表达 

，

降低 到 与 １ ０ ｎｇ／ ｍ ｌ ＲＡＮ Ｋ Ｌ ＋ １ ０ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ Ｉ レ ６／ｓ レ 化 Ｉ 组相 似水 平 。 上述结果表 明 正 

－

６／ｓ Ｉ レ ６民 差异性调 节不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨细 胞分化标志 基 因 的 表达 ，



与

前述 ＴＲＡ Ｐ 染色和 破骨细 胞功 能检测 结 果 相 致

一



。

？ 舊  ？
讓
１
 １ ０００ ，



 Ｔ 


Ｉ
Ｉ 

＾
Ｔ
－

Ｃ
 ｃ ｌ ８助
－



長ｉ
雛
 ■ １  咖

 １

Ｊ ＬＭ ＂ 擊
２－

Ｉ  ｊ ， 
ｌ １ 申
材 名 ＳＦ  夺 手 卡 ４ 夺
 祷 疋ＳＦ 牛 寺 夺 夺 

夺

扮 辦 ＫＬ   役  據 ？
熟 熟  软獨 化   ，
１ ０ 馈 汾 

顯
ｉ Ｌ ｍ ｕｍ  ｔ
？ －
１斌 ，
 １ 飘 －  －

 ３絶 －

 １ 

辦

？


？ ？
。
Ｉ ２０Ｃ ｈ ？窃 巧１



 Ｔ  Ａ Ｉ

 麗

ｉ
 ｌ 国ｉ

 ｌ
ａ
＾ －

 Ｔ ■   Ａ 国
｜
孤


Ｘ
－
１

Ｉ 畜 Ｉ ｉ

！ ５。

Ｗ ｉ ｒｉ ｌ ｌ ｉ
．

１  

Ｍ Ｇ Ｓ Ｆ 专 ＋ ＋ ４ 夺 Ｍ Ｃ Ｓ Ｐ 牛 牛  ４  牛 ＋

 ＊
－
，

ＲＡＩ ？ － 
？
 ＩＱ １ ０ 效 歎  Ｒ Ａ Ｎ仍 Ｌ   轉  猶 ？
鐵 

餘

心 贷 过 ＾课 １ ００  １ ００  比＾ 紅 為 巧  ？
－  －

 獨  游

 １
－
１

图 ２
－

８ ： 祀 －

６／５ 记 －

６ 民 对不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫＬ 诱导的 Ｂ ＭＭ ｓ 破骨 细胞分化标志基 因 表




达的 穀 响 。 Ａ Ｄ －

分别 为 ｑＲ
Ｔ Ｐ Ｃ民
－

检测 ＣＴ民 、 ＣＫ 、 Ｔ ＲＡＰ 、 ＭＭ Ｐ －

９ 的 ｍＲＮ Ａ 

的

表 达情况 

。

４５


 山 东 大学博±学位论文
 



Ｎ Ｆ ＡＴ ｃ ｌ 和 Ｃ
－

化 Ｓ 是破骨细 胞分化 的 最为重要 的 两个转录 因 子 ， 为了 探究 正 


－

６ ／５ 正 ６ 民
－

对 不 同 浓度 ＲＡＮＫＬ 诱导 的 破骨细胞分化 的 差异 性调 节是 否发 生在转录




水平 ，
我们 用 Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎｂ ｏｔ ｌ
检测 了 上述两个转录 因 子 的 蛋 白 表达 。 蛋 白 电泳结果



显示 １ ０ｎ
ｇ／
ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 仅能诱 导 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 少 量表达 ，
当 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 浓 度 提



升到 ５０ ｎ ｇ／ ｍ ｌ 时 ， Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 的 蛋 白 表达 明 显增 加 。 １ ０ ０ ｎ ｇ／ｍ ｉ ｎ ＾
－

６／ｓ ｎ
ｒ －

６ 

Ｒ

显著增强 了 … ｎ ｇ ／ｍ ｌ Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ

－

ｏｓ
ｆ 表 达 而对 ， ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ
ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



诱导 的 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 表达 却 表现 为 抑 制 作 用 ， 如图 ２ －

９ Ａ Ｃ －

所示 

。

？ 
ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ １ ０  １ ０ ５ ０ ５ ０



１ ＾ ６ ／岂 心 目 巧   １ ０ ０   １ ０ ０

 － －

Ｎ ＦＡ Ｔ ｃ ｌ



ｃ ＾
Ｆｏ ｓ ＇  ‘

端 始 

：

 Ｉ

３ ｃｔ
 戀隱 嘯顏雜顚瞭


＾

ｒｉ
￣

５

ｉ
ｌ Ｉ

？ ？


惡 勺  Ｃ
手


±■
ｉ 

Ａ



Ｕ


ｉ Ｕ ｉ ｌ ｉ  Ｐ ｉｌ ｌ
Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ  （
打目細 ０  ； ０ １ 日  Ｓ Ｏ ５ ０ ＲＡ ＨＫ ｌ  （
ｎ ｇ ／ｍ ｌ
） 弓 ０  ３ 日  孤５０



Ｉ
－

ｉ ｇ ／ｍ
Ｌ ０／Ｓ Ｌ ６ Ｒ （ ｆ Ｉ
－
ｉ
）   －
１ ００  １ —
００  Ｉ Ｌ
－
Ｗｓ Ｕ Ｓ Ｒ
ｌ
 村ｇ ／ ｍ ！
｜  ■
１ ０ ０ －
１ ００



图 ２ ９ －

： 比 －

６ ／ｓ 正 ６ 民 －

对不 同 浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｂ ＭＭ ｓ 細 胞 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 Ｃ
－

ｆｏ ｓ 

蛋

白 表达的影响 。 Ａ  ＾乂  ： １ ０ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ  ＾ －

６／ ｓ Ｉ Ｌ ６ 民 －

干 预 １ ０  ｎ ｇ／ｍ ｌ  或 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ
ｌ  ＲＡＮ ＫＬ



诱导的 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 ２ 天 后 Ｎ ＦＡＴ ｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 蛋 白 表达的 ｗ ｅ ｓ ｔｅ ｒｎ  ｂ ｌ ｏ ｔ 检测 。 Ｂ Ｃ－



：

Ａ 图 １ ０ｎ
ｇ／ｍ
ｌ 和 ５ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱字组 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 免疫 印 遊条 带 信 号 强



度 的 统计 学 分析 。 ａ ｃ
－

： 不 同 字母代表 组 间 差 別 有 统计 学 意 义 

。

４６


 山 东 大学博± 学 位 论文
 



讨论


Ｔａ ｍ ｕ ｒ ａ 等 在 通 过 建 立 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 与 骨 髓 细 胞共 培 养 体 系 研 究 正 －

６ 

对

破骨 细 胞 生成 的 影 响 时 发现 单 独应 用 圧 －

６ 或 ｓＩ Ｌ －

６民 都 不 能诱 导破骨 细跑 生成 

，

而 两 者 联合 应用 却 能 明 显 増 强 破 骨 细 胞 的 分 化 生 成 ［
５
巧 。 相 似 的 结 果 也 出 现在



Ｐ ａ ｍｑｖ ｌ ｉ ｓｔ 等 的研 究 中 ， 他们用 正 －

６ 和 ８ 比 －

６ 民 处理 小 鼠 顾晉 ， 发 现 单独 应 用 正 

－

６ 或 Ｓ 正 －

６民 对骨 吸 收 没 有影 响 ， 但 化 －

６ ／８ 心６民 联 合 应 用 却 能 够 促 进烦 骨 骨 吸 收



和 巧释放 ［
２
巧 。
Ｗ 上 研 究 结 果 提 示 破 骨 细 胞 前 体 细 胞细 胞 膜 表面 的 膜 结 合 型 止 

－

化 处于生理不饱和 状态 ， 只 有补 充 外源性 Ｓ 正 －

６民 才 能 实现 Ｉ Ｌ ６
－

生理功 能 的 最



大化 

。

我们 分别 正 －

６ 、 ｓ ｍ －

６Ｒ 及 两 者 的 联合 应 用 干 预 不 同 浓 度 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导



的 破 骨 细 胞生 成 。
结果发现 Ｓ 正 －

６Ｒ 对 于破骨细 胞生 成无影响 ， 表 明 破骨细胞前




体细 胞 细 胞膜表面 的 民 在 正 常 体 外 培 养 状 态 下 处 于 不 饱 和 状态 ， 能够 完全



介导 培养液 中 含有 的 （ ＾＾ 及破骨细胞 前体细 胞分泌 的 少 量 正 －

６ 的 生 理功 能 ， 而无



需 外源 性 Ｓ 正 －

６Ｒ 的 辅助 。 当 我 们 向 破 骨 细 胞 诱 导 分 化培 养 基 中 加 入 正 －

６ 后 发现



较 富浓 度 （ ＞ ２ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ） ＲＡＮＫＬ 诱导 的破骨细胞生成 受到 抑 制 这与 ， Ｙｏ ｓ ｈ ｉｔ ａ ｋｅ ［ ５ 

Ｗ

和 Ｄ ｕｐ 等人 的报道 致 然而 与 之不 同 的 是我们 测 试 了 系列 ＲＡＮＫＬ



一 一

ｌ ｏｍｂ 口 ０］ 。 ，

浓 度 诱 导 的 破骨 细 胞 生 成 对 于 正 －
６ 的 反应 ， 而 不 仅仅 是 饱 和 浓 度 的 ＲＡ ＮＫ Ｌ 。 

意

外 地 发 现 低 浓度 （ １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ）  ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 生成 并 未 受 到 外 源 性 正 －


６

的 影响 。 因 此我们 推测 正 －

６ 对于 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨细 胞 生成 的 影 响 可 能具 有



ＲＡＮＫＬ 浓度 依 赖 性 ， 但对 于 其 中 的 原 因 我 们 还 不 得 而 知 。 最后 ， 正 －

６ 与 ＳＩ Ｌ －
６ 

Ｒ

联 用 对 于 破 骨 细 胞 生 成 的 作 用 与 二 者 单独 应 用 时 又 有 不 同 ， 正 －

６／Ｓ 正 －
６ 民 对于高



浓度 （ ５ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ ） Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞生成产 生 了 明 显 的 抑 制 ， 对于 中 等浓度



（ ２ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ）  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 生 成 影 响 微 弱 ， 而 在 低浓度 （ １ ０ｎ

ｇ ／ｍ ｌ 

）

ＲＡＮＫ Ｌ 诱 导 组 却 表 现 为 显 著 促进 的 作 用 。 这种 独特 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 浓度 依赖性调 节




作用 在 Ｉ Ｌ －

６／ｓ 正 化 －

处理 组 表 现 尤 为 明 显 。 鉴于 Ｓ 正 －

６民 在 常规 正 －
６ ｍ
－
正 －

６ 民 信号



转 导 通路激活 中 的辅助 作 用 ， 我们 推测 在低浓度 （ ｌ Ｏ ｎ ／ｍ ｌ

ｇ ） ＲＡＮＫＬ 环境 下 ， 

由

于 ＲＡ Ｎ ＫＬ 浓度太低 ，
介 导 的 生理作 用 较弱 ， 与 正 常无 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 环 境 类似 ， 正 －



６

的 破骨 诱 导作用 因 Ｓ 正 －

６民 的 辅助而得 Ｗ 增 强 ， 因 此 表 现 为 在 低 浓度 （ １ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ 

）

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 环境下 对 破骨 细 胞 生 成 的 促进作 用 

。

４７


 山 东 大 学 博± 学 位论文
 



根据 先 期 实 验 的 结 果 我们 选 择 ， １ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ 作为 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 的 低 浓度 标准 ，
将 ５０



ｎ ｇ／ ｍ ｌ 作 为 高浓 度 的 标准 ， 分别 利 用 Ｂ ＭＭ ｓ 和 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞重复 上 述 实验 

，

ＴＲ Ａ Ｐ 染色结果证实 了 正 －

６ ／ Ｓ ＩＬ
－

６Ｒ 对不 同 浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 生成 的



差异 性调 节作 用 。 相对于 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导组 ， １ ０ ０ｎ

ｇ ／ｍ ｌ 正 －

６／ ｓ ｌ ６ 反 －

的加



入 显 著 増 加 了 生 成 的 破骨细 胞 的 数 目 和大小 。 而相反的结果 出 现在 ５ ０ｎ

ｇ ／ｍ ｌ

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导组 ： 饱 和 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 由 于 … ０  ｎｇ ／ ｍｌ 正 －

６／ ｓ 正 ６ Ｒ

 －

的加入而 明 显受到抑制 ， 其数 目 和大小 与 经过 正 －

６／ Ｓ 正 ６ Ｒ －

处理后 的低浓度



ＲＡＮＫＬ 诱 导 组 破骨 细 胞 类 似 。 破 骨细 胞 功 能 检 测 实 验 与 ＴＲＡ Ｐ 染色结果也具有




高度 的 致性 正 ６ ／ ８ 比 ６民 显 著 提 升 了 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 组 破骨 细 胞


一

ｇ／ ｍ ｌ ０ｎ
ｇ／ ｍ
， １ ０ ０ｎ － －

１ ｌ 

吸 收 陷 窝 的 数量和 面 积 同 时 降低 了 ， ５ ０ ｎ ｇ ／ｍ ｌ
  ＲＡＮ Ｋ Ｌ 组破骨细 胞 的 骨 吸 收能 力 

。

上实验结 果证 实 Ｉ Ｌ ６／ｓ 正 ６Ｒ
－ －

对于不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞 分 化和 功



能 的 调 节 都具 有差异 性 的 特点 

。

在 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 的作用 下 ， 破 骨 细 胞 前 体细 胞 胞 体 发 生 极 化 ， 内 部 结构及细胞骨



架 改变 ， 细 胞膜与 骨表面 紧密 连接 并 形 成封 闭 区 ， 为 骨 吸 收功 能 做 准 备 。 细胞 内



由 ＡＴ Ｐ ６ ｉ 复合体 合 成 的 氨 离 子 首 先被释放 到 骨 吸 收 区 形 成酸性环 境 ， 溶解矿物




质 ， 继 而 细 胞 分 泌 多 种 组 织 降 解 酶 降 解骨 基 质 巧 ［
。 在这个过程 中 ， ＴＲＡ Ｐ 、 ＣＫ



和 ＭＭＰ －

９ 是 破 骨细 胞 行 使 骨 吸 收 功 能 的 主 要 酶 类 ［
５８
－

６０］ 。 而 Ｃ ＴＲ 主要表达于



成熟 的 破骨细胞 ， 其生理功 能 是 与 甲 状腺滤 泡 旁 细 胞 分 泌 的 降巧素结 合 ，

抑制破



骨细 胞 的骨 吸收功 能 ， 减 少骨 量 丢 失 ， 促 进 骨 骼再 生 ， 増 加 晉密 度 ， 为破骨细胞



的 特征性标志 之 ＲＴ ＰＣＲ 显示 正 ＭＬ ６民 对 于 低浓度和 离浓度 ＲＡＮＫＬ



一

６ Ｕ 。
ｑ
－ －

６ －

诱导 的 １＾ １ 上 四 种 破 骨 细 胞 标 志 基 因 表 达 分 别 表 现 为 促 进和 抑 制 的 作 用 ， 证明 比 

－

６ ／Ｓ 正 －

６Ｒ 对 ＲＡ ＮＫＬ 诱 导 的 破骨 细 胞 分 化及 功 能 的 差 异 性 调 节 也 体现 在 功 能 标

 ／

志 因子的  ｍ Ｒ ＮＡ  水平 。 Ｙｏ ｓ ｈ ｉｔ ａｋ ｅ  等 用 １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  正 －

６ 干预 １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫＬ  

诱

导的 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细胞 ， ２４ｈ 及 ４化 后进行 ＲＴ Ｐ Ｃ Ｒ －

检测 发 现 破 骨 细 胞 分 化 标 志 因



子 ＴＲＡ Ｐ 、 Ｃ ＴＲ ＣＫ 的 ｍ Ｒ ＮＡ 表达都显著 降低 与 我们 的 实验结果 致

一

、 ５４ ， 

。
［ ］

Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ ｆｏ ｓ
－

是 调 节 破 骨 细胞 分 化 的 主 要 转 录 因 子 ，
能 够 促 进 破 骨 细胞



标志基 因 如 Ｔ Ｒ Ａ Ｐ ＸＫ 和 ＭＭ Ｐ －

９ 的 表达 ［
１ ０ ，
拍 ，
６３ ］ 。 我们 在 实 验 中 发 现 正 －
６／３ 正 

－

６Ｒ 促进低浓度 Ｒ ＡＮＫＬ 诱导 的 ］ ＾乂化 １ 和 。化８ 蛋 白 的 表达 ， 而 抑 制 高浓度




ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 Ｗ 上 两种 促破骨分 化 的 转录 因 子 的 表达 ，
提示 Ｉ Ｌ ６／ ｓ 正－ －

６艮 

对

４８


 山 东大学博±学位论文
 



Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 分 化 及 功 能 的 差 异 性 调 节 发 生 在 转 录 水平 

。

我们 在 实验 中 发现 的 正 －

６ ／ＳＩＬ ６ Ｒ －

对 不 同 浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介 导 的 破骨细胞分化



的 差 异性 调 节 具 有 重 要 的 病 理 意 义 。 基于牙周 炎 的 病 理 发生特 点 ， 我们 推测 圧 

－

６ 对 破 骨 细 胞 分化 的 作 用 表 现 为 促 进 还 是 抑 制 取 决 于 牙 周 炎 所处 的 病 理 阶 段 。 

在

发病 早 期 ， 牙 周 姐织 微环境 中 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 浓度 较低 ，
被细 菌及 其代谢产 物 激活 的 免



疫 细 胞 聚 集 并 释 放大 量 正 及 正 ６Ｒ  方面 通过 刺 激 成 骨 细 胞 间 充 质 细 胞 分


—

６
－ －

Ｓ ， ／

泌 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 破骨 细 胞 生 成 另 方面 正 ６民 也 能 直接作 用 于 破骨细 胞


一

ＩＬ ６ ／ｓ
－ －

前 体 细胞促进 其 分化 成 熟 。 上 述 两 条 途 径 都 可 Ｗ 导 致破 骨 细 胞数 量増 加 、 骨吸收



活性増 强 ， 引 起 牙 槽骨 的 病 理性 吸 收 。 当 牙 周 炎 症 发展 到 进展 期 或 晚 期 时 ， 牙槽



骨 中 成骨细 胞 间 充质 细胞 由 于 长期 受炎症 因 子測 激 而分泌 大量

／ Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 使局 部



牙 周 微环 境 中 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 浓度 显 著 升 高 ， 此时 正 －

６ ／Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ －

表现为抑 制 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 

诱

导 的 破骨 细 胞 形 成 ， 此平 衡 高浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 的 骨 吸 收 促进 作 用 ， 保 护 牙 槽骨 组



织 免 受 过度 破坏 

。

在本 部 分实验 中 我们 通过用 不 同浓度 的 ， Ｉ Ｌ －

６ 和 或 ／ ＳＩＬ
－

６Ｒ 在体 外 干预不 同



浓度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 分化 体 系 ， 发现 了 正 －

６ ／Ｓ Ｉ Ｌ ６ 艮
－

对 破骨 细 胞 分 化 的



差异 性 调节作 用 ， 即 促 进 低 浓 度 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 分 化 而 抑 制 高 浓 度



Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 分化 。 同时 破骨 细胞 功 能 实验证实破骨细 胞 的 骨 吸 收 

．

活性 与 其 分化 程度相 致 并 从 巧 胞 生 物 学 角 度 阐 明 破 骨 细 胞 标 志 因 子 义及 关 键


一

，
レ

转录 因 子 也 参与 了 该差异性调节 的 过程 为 下 步探 究 其 信 号通路调节 机制 奠定


一

了 基础 

。

４９


 山 东 大学博±学位论文 




第Ｈ 部分 ： Ｉ  ｌ＞
－

６／ ｓ Ｉ Ｌ
－

６Ｒ 对 不 同巧度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的破骨 细胞分




化 和 活 性 的 差 异 性调 节 的 机制 研 究


Ｒ ＡＮＫＬ ＲＡ ＮＫ －

系统是 目 前 为 止 发现 的 激 活 破骨 细 胞 分化 的 主 要 信 号 通路 

。

而 Ｌ 也 是通过其 唯 的受体 Ｌ Ｒ 向细胞 内 传 递信 号 的 所 Ｗ 正 对 ＲＡ ＮＫＬ



一

Ｉ
－

６ Ｉ
－

６ ，
－

诱 导 的 破骨 细 胞分化 的 调 控 必 然 与 正 －

６
－

Ｉ Ｌ －

６ Ｒ 、 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ －

这两 条信 号转导



通路 间 的 交 互 对 话 （ ｃ ｒｏ ｓ ｓ
－

ｔ ａｌ ｋ ） 有关 。 正 －

６ 主要通过 Ｊ Ａ Ｋ ／ Ｓ ＴＡＴ 信 号通路调 节细




胞增 殖 、 分化 、 调 亡和 炎症 反应 ，
另 外 也 能够通过 ｒ ａｆ
－

ＭＥ Ｋ Ｅ Ｒ Ｋ －

信 号通路参与



细胞代谢 ［
６４
－

６６
］
（ 见團 ３
－

１ ） 。 而 ＲＡ ＮＫＬ ＲＡ ＮＫ －

则 主 要 通 过 募集 ＴＲＡＦ ６ 激活 下



游 ＮＰ －

ｋＢ 、 ＭＡＰ Ｋ 等信 号通路 介 导 破骨细 胞 的 分化 ［

７ ，
９ ，
６７
］
。
从 目 前 已知 的信息



来看 ， 正 －

６ －

Ｉ Ｌ －

６Ｒ 、 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ －

信 号通路之 间 没有 明 显 的 通 讯交叉 ， 但由于




信 号 通路 的 网 络 复 杂性 的 特 点 ， 同 时还 因 为有 大量 的 分支 通 路 及 关键 的 节 点分子



未被 阐 明 ， 使 发现 两 条 通路 间 潜 在 的 交 互 对 话 关 系 变得 尤 为 困 难 

。



…
－
＊ ｎａｃ
■

ｉ ｔ ｈ ａｔ ｉ
ｏ ｎ
  

ｑ
—

１ １ ＇
＊
 ■
 

９ Ｗ，
ｓ ｒ ｖ
‘ ｉ ｊ 

Ｉ

Ｉ  Ｓｏ ｌ ｉ ｉ

 山



Ｍ ｒｍ ｔ ＞

Ｉ
｜ 

Ｉ
．

６ Ｒ
ｉ ｌ ｉ ｒ

 Ｉ


Ｉ Ｕ６ ｓ ｉ
ｇｎａ ｌ ｌ ｉ ｎｇ
１



＿  


Ｕ
Ｉ
▼


— 

＾
＿ 

１
▼





心。


—



）

图 ３
－

１ ： 正 －

６ 受体 系 统 及 相 关 信 号 转 导 通路 。 引 自 Ｍａｓ 池 ｉ ｋｏ Ｍ ｉ ｓ ａｔ ｏ  Ｈ ，
Ｈ ｉ ｒｏ ｔｏ



Ｙｅ ｔ  ａ  ＥＬ ６ ／ＩＬ ６  ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ  ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ  ａｎ ｄ 
ｌ ．
－ －

ｉ ｔｓ ｒｏ ｌ ｅｉ ｎ
 ｐ ｈｙ ｓ ｏ ｏ ｇ ｉ ｌ ｉ ｃ ａｌ  ａｎ ｄ
 ｐ ａｔ
ｈｏｌｏ
ｇ ｉ ｃ ａｌ



ｃｏ ｎ ｄｉ ｔｉ ｏ ｎ ｓ  ． Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃａ ｌ  Ｓｃ ｉ ｅ ｎ ｃｅ ， 
２０ １ ２ ， 
１ ２２ ： １ ４３ －

１ ５９ 

．

目 前针对 正 －

６ 和 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 信 号通路之 间 交 互作 用 的 研 究还 很少 。 Ｙｏ 油 ｉ ｔ ａｋ ｅ



等 利 用 基 因 芯 片 技术检测 正 －

６ 对小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 基 因 表达 的 影响 时 发现与 泛素化通



路相 关 的 两个基 因 说 《戶 ２ 和 ［
表达 降化 ， 而 编 聘 ＭＡＰ Ｋ 麟 酸 酶 的 两 个 基 因



ＭＫ Ｐ ＾ Ｄ ＭＫ Ｐ ７ 表达 升 高 ，
抑制 了  ＪＮ Ｋ 的 磯 酸 化 激 活 和 Ｉ ｋＢ 的 降解 ，
最终 导致



破骨细 胞分 化 的 抑 制 ［
５４
］
。
另外 ， Ｄ ｕｐ ｌ ｏｍｂ 等 研 究 发现 正 －

６ 介导的 Ｓ ＴＡＴ 不 同氨



５０


 山 东 大学 博±学 位论文
 



基 酸 残 基 的 憐 酸 化 状 态 干 扰 了  ＲＡＮＫ Ｌ －

ＲＡ Ｎ Ｋ 信 号通路 的 激活 ， 使破骨细 胞 前



体 细 胞 转 向 巨 幢 细 胞分 化 而 破 骨 向 分 化 受 到 抑 制 口 〇  ］
。 式 上 研 究 结 果提 示我们 正
＾ 

－

６ 能 够 通 过 改 变 下 游 关 键 信 号 分 子 的 表 达 及 稱 酸化 修 饰 参 与 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｒ ＡＮＫ －



细

胞通路 的 激 活状 态 的 调 节 ， 但是 圧 －

６ 通 路 的 激 活 具 体 影 响 了  ＲＡＮ Ｋ Ｌ －

Ｒ ＡＮＫ 

下

游 哪 些 与 破骨细 胞分化相 关 的 信 号 通路 及 关 键 信 号 分 子 ， 现在 还没有 相 关报道 


。

截至 目 前 ， 已 经 发 现 的 与 破 骨 细 胞 分 化 的 密 切 相 关 的 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 下 游 通 路 主 要



有 师 －

ｋＢ 、 Ｍ ＡＰＫ 、 Ａｋ ｔ 等 （ 见图 ３
－

２ ） 。 在本部分实验 中 ， 我们 按 照信 号通路 从



上往 下依次激活的顺序 ， 分别 检测 了 圧 －

６／Ｓ 正 －

６民 对 ＲＡ ＮＫＬ 信 号通路 中 重 要信



息 传 递分子 Ｔ ＲＡＦ ６ 的 时 序 性 表 达 和 ＲＡ ＮＫ －

Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 结合 的 影响 ， 及 ＮＦ －

ｋＢ 

、

Ｍ Ａ ＰＫ 、 Ａｋ ｔ 等 下游信 号通路激活 的情况 ， 筛选 出 受 Ｉ Ｌ －

６ 调 控 的 信 号通路及 关键



分子 ， Ｗ期初步 阐 明 Ｉ Ｌ －

６ ／Ｓ ＩＬ －

６Ｒ 对不 同 浓度 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱导 的 破骨细胞 生成 的 差



异性调控 机 制 

。

Ｉ ＰａＨＲ ｌ 

Ｉ

Ｃ ｅａ  ｓｕｒｆ ａｃ ｅ  ｈ
—

Ｉ Ｐ ＫＩ 

ＯＫ 

］

Ｅｍ
尹
 ＿  —
 —  

！

 人
、

 叫


＊
＼ Ｉ
２ 化

Ｉ

＼ Ｉ

｜ ｐｒ
〇｛ 试 ｔ 乂内 Ｓ ｕ ｖ ｖ ａ ｉ  ｍｏｉ ｉ
ｆ ｉ ｉ ｔ
ｙ
ｗｄ  ［
仍托权 ４ 〇。＂ ｛ ＞ 立， 出
弓 巧仪 ＜



ｔ Ｍｆ －

ｊ
－

Ｓ ｒ ｃ  ｎ？ｃ £ ｜
Ａ Ｑｒ



图 ３
－

２ ： 破 骨 细 胞 分 化 相 关 Ｒ Ａ ＮＫ 信 号 通 路 。 引 自 Ｂ ｏｙ ｌ ｅ Ｗ Ｊ ，
Ｓ ｉ ｍｏ ｎ 巧 Ｗ Ｓ ，
Ｌ ａｃ 巧



Ｄ Ｌ Ｏ ｓ
 ． ｔ ｅ ｏ ｃｌ ａｓｔ 出 游ｒｅｎ ｔｉ ａｔ ｏ 打  ａ ｎ ｄ  ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｉ ｏ ｎ
ｉ ． Ｔ Ｖ ａ 化 ｒｅ ， 
２００ ３ ， 
４２３
（
６ ％７ ）
： ３ ３ ７
－

３ ４２ 

．

材料 与 方法


１ 实 验材特


同第 二 部分 

。

２ 魏 方 法



２ ． １ 小鼠 ＳＭＭｓ 细胞及 ＲＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 施 的 获 取及當养




详见第 部分小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞及 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ 细 胞 的 获取及培养

一

． ７ 

。

５１


 山 东 大 学 博± 学 位论 文
 



２ ２ ｎ ＾ ６ ／ ｓ Ｉ ｋ ６ Ｒ
．
－

对 ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 化 向 破 骨细 施々 化过程 中



Ｔ ＲＡ Ｍ 表法 的 獅



将小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 １＾ ； ３ ｘ ｌ ０
４
个化 的 密 度 接 种 于 ２４ 孔板 中 ， 加 入含有 ３ ０



ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｍ Ｃ 沈 －

的 培养液 ， 移入培 养箱 中 使细 胞 贴 壁过 夜 。
第 二 天进 行 细胞 换液 

，

并 在 培 养液 中 加 入浓 度 为 １ ０ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ 的 正 －

６ ＋ ＳＩ Ｌ ６ Ｒ  －

Ｗ及 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ 或者 ５ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ

ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ， 同 时保 持 ３０ ｎｇ ｍ ｌ ／
Ｍ Ｃ ＳＦ
－

浓度不变 ， 连 续培 养 ４ 天 。 分别 在 ０ 、 ２ 、 

４

天 收集细 胞 ， Ｗ的 ｔ ｅ ｍ 村 ｏ ｔ 法检测 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 表达水平 


。

２ ３ ． 心 ６ ／ ８ 心 ６ １１ 对 ＲＡＮＫＬ 谤导 的 小 巧 Ｂ ＭＭ ｓ 细 化 巧 破 骨 细胞 分化 过程 中



Ｒ ＡＮＫ Ｔ ＲＡ Ｆ ６ －

结合的 影 巧



２ ３ ． ． １ 细臓纖 的樹备


将离 也 机预冷 至
°
１ ） ４ Ｃ 

。

２ ） 收集细跑 前用 血 球计数 板对 细胞进行计数 


。

离也 收集细胞
。
３ ） ４ £ ！
、 １ ０ ０ ０ 〇 １ １９ ５ １１１ １ １ １ ， 

。

用 冰上 预冷 的 洗 涂细 胞 ＾ 次 每 个细胞加 入 预冷 的
６
４ ） １  Ｘ  ＰＢ Ｓ ， １ ０ １ ００ 

巧

ｌ
ｙｓ ｉ ｓｂ 地ｅ ｒ  （ 含有 １
Ｘ  Ｐｒ
ｏ ｔ ｅ ａｓ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔｏ ｒ ） 

。

在 Ｐ ｙｓ 地ｅ ｒ 中 重 恳 细 胞 冰上裂解 期间每 轻柔颠倒



…

５ ） Ｉ  ｌ ｉ ｓｂ ，
３ ０ｍ ｉ ｎ ， １ ０  ｍｉｎ

次 

。

超 声 波破碎细胞裂解物 使得裂解更 加 充 分 同 时 使 Ｄ ＮＡ 片 段 化 般细


一

６ ） ， ， 。

胞超 声 １ ｍ ｎ ｉ ， 整个超 声 过程在冰 上进 行 

。

裂解物冰上 放置 期 间每 颠倒 次
一

７ ） ６ ０ｍｉ ｎ ，
１ ０ ｍｉ ｎ 

。

将上清转入新 的 管 中 备 化 弃沉淀 或储存

°
８ ） ４ Ｃ 、 ｌ ＯＯ ＯＯ ｒｍ
ｐ 离也 ２０ ｍ ｉ ｎ ， 邸 


用 于 后 续 问 题分 析 

。

９ ） Ｂ Ｃ Ａ 法 测 定 裂解物 的 总 蛋 白 浓度 

。

裂解物 置 于 保存 实验
°
１ ０ ）
－

８ ０ Ｃ ， 用于后续 ＩＰ 

。

２ ３ ２  Ｐ ｒｏ ｔ
． ．ｅｉ ｎ  Ａ  ｓｅ
ｐ ｈ ａ ｒｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａ 化 

的

１ ） 旋转 储存 Ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ  Ａ  ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｒ
ｉ ｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａ ｄ ｓ  ｓ ｕ ｒｒ ｙ ｌ 的管子 ， 取 出 所 需 数量 的 Ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ ｉ  

Ａ

ｓｅ
ｐ ｈ ａｒ ｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａ 化 ｓ ｌ ｕｒ ｒ
ｙ ，  ＾其 ［
１ ０ 倍体积 ｂ ＥＢ Ｓ 通过 瞬时离 也洗涂 Ｐ ｒ ｏｔ ｅ ｎ  Ａ
ｉ


ｓｅ
ｐ ｈ ａ ｒ ｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａｄ ｓ  ｓ ｕ ｒ ｒ ｙ
ｌ ， 并将  Ｐ ｒｏ ｔ ｅｉｎ Ａ  ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｒ ｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａ ｄ ｓ  ｓ ｌ ｕ ｒｒ ｙ 、 重悬至 原 体积 

。

角 剪掉 已 灭菌枪 头 的 末端 快速 吸 取 重 悬 的
°
２ ）  ｌ ｉｌ  ４ ５ ， Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｎ  Ａ  ｓ ｅｐ ｈ ａｒｏ ｓ ｅ  ｂ ｅ ａｄ ｓ
ｉ 


５２


 山 东 大 学博 ±学位论文
 



Ｓ 山巧 ， 加 入 含 有 裂解 物 的 邸 管中 。 通常 １
－
３ｍ
ｇ 总 蛋 白 裂 解物 需 加 ３０
＾ １ 

重

悬的  Ｐｒｏ ｔ ｅｉ ｎ  Ａ  ｓ ｅ
ｐ ｈ ａｒｏ 化 ｂ ｅ ａ ｄ ｓ  ｓ ｕｒｒｙ


。  ｌ

旋转解育
°
３ ） ４ Ｃ ６ ０ｍ ｉｎ 

。

离屯 将 上 清转 入 新 的 管中
°
４ ） ４ Ｃ 、 １ ０ ００ ｒ
ｐｍ
、
１ ｍ ｉｎ ， 邸 

。

２ ３ ３
． ．
免 疫沉淀



１ ） 吸 取含有 １
－

３ｍ
ｇ 总 蛋 白 的 裂解物 或 预 处 理 （
） ２００ ３ ５０ －

叫 ， 加 入下端带有 Ｅ ｎｄ



ｃａ
ｐｓ 的 Ｓ ｐ ｉｎ  ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ｓ 中 ， 同 时加入 １
－

４ 帖 特异性抗体 （＾
＾＞
及 １ ５０ －

３ ００


叫

Ｉ ｎ ｃ ｕｂａｔ ｏ ｎ  ｂ ｕ ｆ ｆｅ ｒ 〇
ｉ 

２ ） 向 相 同 数量 的 裂解物 与 Ｉ ｎ ｃ ｕ ｂ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｕ ｆｅ ｒ 
中 加入 同种属 相 同数量 的 Ｃ ｏ ｎｔｒ ｏ ｌ Ｉ
ｇＧ  

．

作 为 阴 性对 照 

。

下 旋 转脖 育 过夜或
°
３ ） ４ Ｃ ， ２ ４ ｈ －



。

４ ） 向 却 １ １１  ｃ ｏ ｌ ｕｍ ｎ ｓ  中 加入  ５０
 叫 重悬 的  Ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ ｉ  Ａ ｓｅ
ｐ ｈ ａｒ ｏ ｓ ｅ ｂ ｅ ａ ｄ ｓ   ｓ ｈｉ ｎｙ
！
＾
ｉ
＞
沉淀免



疫复合物 旋转解 育
°
， ４ Ｃ １
－
４ ｈ 

。

５ ） 取下 Ｅｎｄ  ｃａ
ｐｓ ， 将 上清 流 出 弃 除 ， 必要时 ， 可 Ｗ 通过重 悬 Ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｎ ｉ  Ａ  ｓｅ
ｐ ｈ ａｒｏ ｓ ｅ



ｂ ｅ ａ ｄ ｓ  ｓ ｌ ｕｒ ｒ ｙ
 Ｗ 提 高上清 的 流速 

。

６ ） 用８ ００ 叫  
１ Ｘ Ｗａ ｓ ｈ ｉ ｎ ｇ ｂｕ ｆｅ ｒ  （

纯 水稀 释 
２ ０Ｘ  Ｗａ 沈 ｉ ｎ ｇ ｂ ｕ ｆｅ ｒ

； 含有 １
Ｘ  Ｐｒｏ ｔ ｅ ａ ｓ ｅ



洗涂 沉淀复合物 次 洗緣 结束后 在 下将
°
ｉ ｎｈ ｂ ｉ ｉ ｔｏ ｒ ） ４ ５ －

。 ， ４ Ｃ ， ５ ０ ０ｒ
ｐｍ Ｓ
ｐ 
ｉ
ｎ

ｃ ｏ ｌ ｕｍｎ ｓ  置入  Ｃ ｏ 化 ｃｔ ｉ ｏｎ  ｔ ｕｂ ｅ ｓ  中 离也 ３ ０ｓ ， 弃  Ｃｏ ｌｌ ｅ ｃｔ ｉ ｏ ｎ  ｔｕ ｂ ｅ ｓ  Ｗ及离 也产物 


。

２ ３ ４
． ．
雅脫


１ ） 将 Ｓｐ ｉ ｎ Ｃ Ｏ 山 ｍｎ ｓ 畳入新 的 １ ． ５ｍ ｌＥ Ｐ 管中 收集洗脱产 物 ， 用 ４０
叫 Ｅ 山 ｌ ｉ ｏｎ



ｂ ｕ ｆｅ ｒ 洗 脱 沉 淀 复 合物 ， 并在 ４
°
Ｃ 、 １ ００００  ｒ
ｐｍ 下离也 Ｉ ｍ ｎ ｉ
收集产 物 ， 重复



洗脱 次
一



。

２ ） 向 洗脱产 物 中 加 入 １ ０ Ａ ｌ ｋａ ｌ ｉ ｎ ｅ ｕｔ ｒ ａ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｕ ｆｅ ｒ   Ｗ及 
３０
（
ａ１５
Ｘ  Ｓ ａｍ
ｐｌ ｅ  Ｂ ｕ ｆｅ ｒ 

，

沸 水 洛加 热 ５ｍ ｉｎ 

。

２ ３ ５  Ｗｅ ｓ ｌ ｅ ｒ ｎ  ｂ ｌ ｏ ｔ
． ． ：

 

分析
１ ） 取 ２ ０ ４ ０  ｎ ｌ  ＩＰ
－

样 晶 加入 ＳＤ Ｓ －

ＰＡ Ｇ Ｅ 对应泳道 ， 同 样 可 Ｗ 将剩 余 Ｉ Ｐ 样 品置于



保存 备 用
°
－

８０ Ｃ 

。

２ ） 通过 ＳＤＳ －

ＰＡＧ Ｅ 分离 Ｉ Ｐ 样品 ， 并将蛋 白 质 向 Ｐ ＶＤ Ｆ 膜转 移 。 使用 检测 抗体



杂交 及 １ ： １ ５００
－

１ ： ３ ０ ０ ０ 稀释 度 的  ＨＲＰ －

ｃ ｏｎ
ｊ
ｕ ｇ ａｔｅ ｄ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉｎ 
 Ａ 二 抗 进 行 Ｗｅ ｓ
  ｔｅ 

ｎ
ｒ

５３


 山 东 大学 博± 学位论文
 



ｂ ｌ ｏｔ 分析 

。

２ ４  ＩＬ ６／Ｓ Ｉ Ｌ ６ Ｒ
．
－ －

对 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 的 小 鼠 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 向 破 骨细 胞 分 化 过程 中 相 关



僖 号通 路撕 的 影 喃



将小 鼠 细胞 Ｗ 个化 的 密 度接 种 于 孔板 中 加 入含有
４
Ｂ ＭＭ ｓ 扣 １ 〇 ２４ ， ３０



ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｍ Ｃ ＳＦ 的 培 养 液
－

， 移 入培 养 箱 中 使细 胞 贴 壁过夜 。 第 二 天 进行 细 胞换液 

，

并在培养 液 中 加 入浓度 为 １ ０ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ  的 化 －

６＋８ 比 －
６民 预处理 ４ ｈ ， 之 后 向 培 养体 系



中 加入 １ ０ｎ
ｇ ／ｍ ｌ 或者 ５ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 分别 处理 ５ 、 １ ０ 、 １ ５ 、 ３ ０ｍ ｉｎ ， 不加 正 

－

６＋５ 正 －

６民 的 细胞作 为对照 组 ， 在指 定 时 间 收集细胞 ， 提取 细 胞总 蛋 白 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ




ｂ ｌ ｏｔ  检测  ｐ ３８
－
、
ｐ ｐ ％ ｐ
－
ＥＲＫ 、 ；
－

Ｅ ＲＫ ｐ ；
－

ＩＮ Ｋ 、 Ｊ ＮＫ ；
ｐ
－

Ａｋ ｔ 、 Ａ ｋ  ｐ ＮＦ ｔ ；
－ －

ｋＢ 、 ＮＦ 

－

ｋＢ 的 蛋 白 表达水 平 

。

结果


３ ． １  ＩＬ ＞
６ ／ｓ 比 －
６ Ｒ 对不 同 浓度 ＲＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞 生 成 的 调 节 发 生在


ＲＡＮＫ Ｌ Ｒ Ａ ＮＫ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ － －

 的 下游


ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 与 其受体 Ｒ ＡＮ Ｋ 结 合后 募集胞质 侧 的 Ｔ Ｒ ＡＦ ６ ， 进而激活 下 游 讲 ？ 

－

Ｍ Ａ ＰＫ ｓ Ａｋ 等 系 列信号通路 通过促进破 骨 细胞分化相 关转录 因 子



一

ｋＢ 、 、 ｔ ，

Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 和 ｃ
－

ｆｏ ｓ 的 表达 诱 导 破骨 细 胞 前 体 细 胞 向 成 熟 的 破 骨 细 胞 分 化 。 ＴＲＡＦ ６



在这 过程 中 起 到 个 重 要 的 信 号 传 递 的作 用 Ｒ Ａ ＮＫ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ 复合 物 的 形 成 是


一 一

－
。

细 胞 内 信 号通路激活 的 前提条件 ， 因 此我们 首先检测 了 正 －

６／Ｓ 正 －

６Ｒ 在 不 同 浓度



Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 过程 中 对 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 蛋 白 表达 的影响 

。

如图 ３ －

３ Ａ Ｂ ，
所示 ， 当 Ｗ １ ０ｎ
ｇ ／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫ
Ｌ 处理 Ｂ ＭＭ ｓ 时 ， Ｔ ＲＡＦ ６ 表达呈



时 间 依 赖性增 长 ， 到 ２４ｈ 后 达顶 峰 ， 此后到 ４ ８ｈ

—

直 处 于 离 表 达 状态 。 在 １ 

０

ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导体系 中 加入 １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ 正 －

６ ＭＬ －

６Ｒ 后 ＴＲＡＦ ６ 表达 未 见 明 显 变



化 。
在 ５０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 体系 中 ， ＴＲ ＡＦ ６ 也 呈 现 时 间 依 赖 性表 达 升 高 ， 表达



趋势 与 低浓度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 处理组类似 ， 在此体系 中 加入 １ ００ ｎ

ｇ／ ｍ
ｉ ｍ －

６ ／ ｓ ＥＬ ６ Ｒ－

后未



能 改变 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 的 蛋 白 表达 （ 图 ３
－

３ Ａ Ｃ ，
） 。 １＾
＾
１ 上证据 说 明 正 －

６ ／８ 比 －

６民 对于低浓度



或 高浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＴＲＡ Ｆ ６ 表达 无 明 显 影 响 

。

５４



山 东 大学博±学位论文 



ｌＯ ｎｇ／ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化 ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化 ＋ Ｌ ６ ／ｓ Ｉ ｌ Ｌ －

６Ｒ




￣

Ｏ ｈ  ２ ４ ｈ ４ ８ ｈ Ｏ ｈ ２４ ｈ ４ ８ ｈ

Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ８  ｍｍｍ


－

Ａ —
９ ｒ ｔ ｎ ｉ ｉ ＭＨＵ Ｉ 

ｋ

５ ０ ｎ ｇ／ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化 ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ｌ  ＲＡ Ｎ 化＋ ｌ Ｌ －

６ ／ｓ ｌ ｌ＿
－

６Ｒ


￣ ￣ ￣ ＂ ＂ ￣￣



Ｏｈ ＾ ４ ＾ ｏ ｉｌ  ＾ ＾
ｔ ｒａ ｆ ６
 纖 貧警


■


－
 产
，
－

 Ｉ

巧 ３ Ｃ ｔ 口 ｍ ＾ Ｂ ｅ
ｆ Ｂａ ８ ａ
＿


＇

 ： 
＾ｊｕ ｉ ｉ ｉ ｉ ｉｉｙ ｇ ｜＾ ｜｜｜
广
｜

 ， Ｂ Ｂ Ｐ Ｂ Ｓ ＢＲ Ｐ  诵 Ｐ画賴 ＨＰ琴
 ｊ ｉ ｊ ｊ ｊ

Ｉ （

？ ？

 ■ ５ ０ ｎ ｇ ｍ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ
■１ 皆 ｍ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  石  ５ 

？

３ ０ｎ ｌ 
／ ｌ 

石 ＾ 


｜

ｏ ｇ ｍ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｗ Ｌ ６ Ｓ Ｌ £ Ｒ  置  誦  ５ ０ｎ ｇ
ｍ ｔ ／ ｍ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ＋ Ｌ ６ ／ ｓ Ｌ６ Ｒ



泣風


Ｉ
＊ －
Ｉ ｌ
ｉ
１ ／ ｌ ／ Ｉ
ｌ

Ｉ
ｈｏｕ ｒ ｓ ０ ２ ４ ４ ８ ｈ ｏ ｕ ｒｓ  ０ ２ ４ ４ ８



图 ３
－
３ ： 正 －
６／ｓ ＾ －

６民 对 不 同 浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＢＭＭｓ 细 胞 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 表达的



影响 。 Ａ ： 止 －

６ ／５ 比
－

６ 民 对 ｌ Ｏ ｎ ｇ／ ｍ ｌ  和 ５ ０ ｎ ／ｍ Ｉ
ｇ Ｒ ＡＮＫ Ｌ  诱导的  Ｂ Ｍ Ｍ ｓ细 胞ＴＲＡ Ｆ ６



蛋 白 表达的 ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒｎ ｂ ｏ ｔ ｌ 检测 。 Ｂ Ｃ Ａ 图
－

： １ ０ｎ
ｇ／ｍ
ｌ 和 ５ ０ｎ
ｇ／ ｍ  Ｒ Ａ Ｎ ｌ ＫＬ 诱导组



Ｔ ＲＡ Ｆ －

６ 免疫 印 迹 条 带 信 号 强 度 的 统计 学 分析 。
ｐ
－

ａｃ ｔ ｎ ｉ
作 为 内 参 ， 蛋 白 的 表达强



度 乂 目
ｋ 的蛋白 与 Ｐ
－

ａｃｔ ｎ ｉ 电 泳 条 带 信 号 的 比值表 示 

。

整于 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ －

复 合物 的 形 成 是 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｘ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ －

通路激 活 的 必 要 条 件 

，

而 ＴＲＡＦ ６ 只 有 与 ＲＡＮ Ｋ 结 合 后 被磯 酸 化 才 能 发 挥 生 物 学 功 能 ， 因 此这里 我 们 用




Ｃｏ －

Ｉ Ｐ 技术 检 测 比 －

６／ｓ 正 －

６ 民 对 ＲＡＮ Ｋ Ｔ ＲＡ Ｆ ６ －

复合物 形成 的影 响 。 如图 ３ －

４Ａ Ｂ

 ，

所示 ｇ／ ｍ ｌ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 在 时诱导 Ｒ ＡＮ Ｋ 与 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 的 显著结合 直持


一

， １ ０ｎ ５ｍ ｉ ｎ ，

续到 １ ５ｍ ｍ 后 ＲＡＮＫ 与 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 的 结合作用 逐渐消 失 。 １ ０ ０ｎ

ｇ
／ ｍ ｌ 正 －

６ ／ Ｓ ＥＬ －

６ Ｒ 

预

处理不 能改变 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导的 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｔ ＲＡ Ｆ ６ －

结合情况 。 ５ ０ｎ
ｇ ／ ｍ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ ｌ
处理



组与 １ ０ｎ
ｇ
／ ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 处 理 组 结 果 类似 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 ５ｍ ｉ ｎ 后 Ｒ ＡＮ Ｋ 与 ＴＲＡ Ｆ ６



的 结合最 明 显 ， １ ５ ｍ ｎ ｉ
后 逐渐减弱 忙 ，
－

６／５ 比 －

６ 民 对高浓 度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导的 Ｒ ＡＮ Ｋ 

－

５５


 山 东大学博±学位论文
 



Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 结 合无 明 显影 响 

。

上 述 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒｎ  ｂ ｌ ｏｔ Ｗ及 Ｃｏ －

Ｉ Ｐ 结果表 明 正 －

６ ／ｓ Ｌ
－

化 对 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 的 表达及



ＴＲ Ａ Ｆ ６ Ｒ ＡＮＫ －

复 合 物 的 形 成 均 无 明 显 影 响 提示 正 。
－

６／ ｓ 圧 化 对 不 同 浓 度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ
－




诱 导 的 破骨 细 胞 形 成 的 差 异 性 调 节 作 用 不 是 通 过 改 变 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 表达或生物 学



活性进而 影响 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ －

通路激活 来实现 的 

。

？ 
ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ （
１ ０ ｎ ／ ｍ Ｉ） 
ｇ ： ０ ５ １ ５ ３ ０ ０ ５  １ ５ ３ ０  （
ｍ ｎ
ｉ ．


）

Ｉ Ｌ －

６／ ｓ ＩＬ －

６ Ｒ（ １ ０ ０ｎ
ｇ ／ｎ ｉ ｌ ） ：
－  －  －  －

 牛 牛 卡 

卡

＾

鱗晒曝 Ｔ ＲＡ Ｆ ６
‘

－ ＾
伴 ＲＡ Ｎ Ｋ
‘

細辦 挙 

。
亩
输 辦旅

：

ａｎ
－

： ｔｌ

ｌ
ｙ ｓ ａ ｔ ｅ ｓ 賴 Ｍ ｌ ｉ  賴 ｌ ｉｉｐ ｉ
ｉｉ ｉ ｉ ｌ Ｐ ＭＨ Ｉ Ｈｉｉｌ Ｍ ｉ ｉｎ Ｎ ｉ ｌ ｉ ｉ ｉｇ ｉｉＭｌｉ ｉ ｌｌ  ＾
ｆ ￣

Ｔ ＲＡ Ｆ ６


仲 萬雪 相ｒ

 

—

？  ＲＡ Ｎ ＫＬ 巧 ０ 
 ｎ ｇ／ 邮 ： ０ ５ １ ５ ３ ０  ０ ５ １ ５  ３ ０  （
ｍｉ ｎ ．


）

Ｉ Ｌ －

６ ／ｓ Ｉ Ｌ ６
－
Ｒ作 ０ ０ｎ
ｇ
／ ｍｌ）  －
 牛 ＋ 牛 ＋



Ｒ Ａ Ｎ Ｋ
？

Ｔ ＲＡ Ｆ ６


Ｉ Ｐ ： ａ ｎ ｔｉ
－

ｍｒ
ｎｍｍ  ｍｍｍ ｍｍｍｍ  ＾ ￣

 


Ｋ ｓ 泣 化 Ｓ  觸―酵 賴ＶＭ赚 麵 麵 麵 Ｍ ｉ ｌ Ｍ Ｍ ｉ ｉ Ｍ Ｈ Ｍｉ 麵 Ｈ Ｐ 爾 ｉ ｉ Ｗ 
 
￣
Ｔ ＲＡ Ｆ ６



图 ３
－

４ ： 正 －

６ ／ｓ 正 －

６民 对不 同 浓度 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 ＲＡＮ Ｋ －
ＴＲＡＦ ６ 复合



物形 成的影响 。 用 ｌ ＯＯ ｎ
ｇ ｍ
／ ｌ 正 －

６ ／ｓ ＾ ６ Ｒ －

预 处理 Ｂ ＭＭ ｓ ４ ｈ ，
之后 将细 胞分 别 置



于含有 ３ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ  Ｍ Ｃ ＳＦ 和
－

 １ ０ｎ
ｇ／ ｍ ｌ （ Ａ ） 或者 ５ ０ｎ
ｇ／ ｍ 
ｌ 化 ） Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ  的 培养液



中 培养 ，
在培养 ０ 、 ５ 、 １ ５ 、 ３ ０ｍ ｉ ｎ 后 用 抗 小 鼠 ＲＡＮ Ｋ 抗 体 免 疫 沉 淀 含 有 Ｒ ＡＮＫ



的 蛋 白 复合物 ，
Ｗｅ ｓ ｔｅ ｎ ｂ ｏｔ
ｒ  ｌ 检 测 民ＡＮＫ 沉 淀 复 合 物 中 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 的表达 。 Ｉ
ｇＧ



作 为 阴 性对照 ，
细 胞 总 蛋 白 中 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 作为 内 参 

。

３ ２
． ＩＬ －

６ ／Ｓ Ｉ Ｌ －

６ Ｒ 对不 同 浓度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｊ ＮＫ 和 ＮＦ －

ｋＢ 磯 酸化 的 差 异 性 调



节作用



ＮＦ －

ｋＢ 信 号通路是启 动 破骨细胞 分化 的 主要细 胞 内 信号通路 。 通常 


，

Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ －

信 号 级 联反应磯 酸化 激活 Ｉ ｋＢ 进而 泛素 化 降 解 ， 释放 ＮＦ －

ｋＢ 

并

使其 核 移位与 Ｄ ＮＡ 中 特异 性调控序 列 结合 ， 启 动 破骨 分化相 关基 因 的 转录 。



除

此之外 ， ＮＦ －

ｋＢ 中 ｐ
６５ 亚 基 的 磯 酸 化 也 能 够 增 强 ＮＦ －

ｋＢ 的 转录活性 。
在本 实验



中 ，
我们 Ｗ  ＮＦ －

ｋＢ  ｐ ６ ５ 亚 基 的 憐酸 化水平 判 断 ＮＦ －

ｋＢ 信 号 通路 的 激活情 况 。 

如

图 ３ －

５ 所示 ， 蛋 白 电 泳 显示 １ ０ ｎ ／ｍ ｌ
ｇ  ＲＡＮＫ Ｌ 能够诱导 ＮＦ －

ｋＢ 的 少 量磯 酸化 ， ５０



ｎ ｇ ／ ｍ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ
ｌ 在 ３ ０ｍ ｉ ｎ 时 使 得 ＮＦ －

ｋＢ 稱酸化显 著 增加 ，
到 ６ ０ｍ ｉ ｎ 后 礙酸化作


己６



山东 大学博 ± 学位论文 



用 逐渐 消 失 。 加入 １ ００ ｎ
ｇ／ｍ ｌ ＾ －

６ ／ｓ 比 －

６ 民 后 １ ０ ｎ ／ｍ
ｇ ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导组 ＮＦ －

ｋＢ 磯酸



化明 显增强 ，
而 ５０ ｎ
ｇ／ ｍ ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导沮 ＮＦ －

ｋＢ 稱酸化却 受到抑 制 。 上述实验提




示 Ｌ －

６／ｓ 正
－

化 可 能 通过 差异 性地调 节 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＮＦ －

ｋＢ 通路激 活干 预破骨



细 胞 分 化及 活 性 

。

＠
ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ Ｈ
ｌＯ ｎ
ｇ／ｍ
ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ
 ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ｍ ６ ／ｓ ６Ｒ


－

Ｌ Ｌ
－ －

ｌ  ｌ  ｉ

０  １ ５  ３ ０  如 ０  １ ５  ３ ０  ６ ０



ｋ Ｂ  辛

Ｐ Ｎ
ｅ
ｆ
Ｆ
－ － － 

Ｉ
ｓ －
ｘ

Ｎ Ｆ ｋ Ｂ  ｍｍｍｍｍ  讀 戀 Ｈ 嚇 儀 ｎｍｍ
網 辆 ㈱ ｒ
＂

－ Ｉ 

：

５ 〇ｎ
ｇ／ ｍ Ｒ Ａ Ｎ 化 ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ＲＡＮ ａ ＋ Ｕ ６／ ｓ Ｌ ６ Ｒ



＠
ｌ  ｉ  ｉ ！ ｌ

０ １ ５ ３ ０ ６ ０ ０ １ ５  ３ ０ ６ ０



ＮＦ ｋ Ｂ
＊ －

ＮＦ －

ｋ Ｂ  Ｍ ＷＭ ｐ ｒ  ＜
编嚇 蒙 ｍｍｓＦ  ｗｍｍ



图 ３
－

５ ： Ｌ －

６／ ｓ 正 －

６ 民 对不 同 浓 度 ＲＡＮＫ Ｌ 诱导的 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 ＮＦ －

ｋＢ 蹲酸化 的 影



响 。 Ａ ： 正 －

６／ ｓ ＾ －

６ 民 预 处理后 ，
Ｗ ｌ Ｏ ｎ ／ｍ
ｇ ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 不 同 时 间 点 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞



中 ＮＦ －

ｋＢ 確跋化蛋 白 的 ｗ ｅ ｓｔｅ ｒ
ｎ ｂ ｏｔ  ｌ 检测 。 Ｂ ： ｍ ６ ／ｓ ｍ ６ 民
－ －

预处理后 ，
乂 ５ ０ ｎ ｇ／ ｍ
＾  

ｌ

ＲＡＮＫ Ｌ 诱导不 同 时间点 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 中 ＮＦ －

ｋＢ 蹲酸化蛋 白 的 ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒｎ  ｂ ｏ ｔ ｌ 检测 

。

ＮＦ －

ｋＢ 总蛋 白 作为 内 参 

。

除 ＮＦ －

ｋＢ 之外 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＭＡ Ｐ Ｋ 信 号通路激活 也参与 了 破骨细 胞 分




化的调节 。 如图 ３
－

６ 所示 ， 我们 分别 检测 了 正 －
６ ／ Ｓ ＩＬ －

６民 对 ｐ
３ ８ 、 Ｅ ＲＫ 和 Ｊ ＮＫ 

信

号通路 中 关键信 号 分子 磯酸化 的 影 响 ， 结果发现 １ ０ｎ

ｇ ／ ｍ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ ｌ 和 ５ ０ｎ
ｇ／ ｍ


ｌ

Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 都 能诱 导 Ｗ 上兰条信 号通路 的 激活 ，
ｐ３ ８ 的 礎酸化 出 现在诱导后 １ ５ｍ ｉ ｎ 

，

持续到 ３０  ｍ ｎ ｉ 后 逐渐 消 失 ；
Ｅ ＲＫ 的 憐 酸 化在 １ ５ｍ ｉ ｎ 时 明 显加 强 ， ３０  ｍ ｎ ｉ 后达到



顶峰 ， 之后 随 时 间 降低 ；
Ｊ ＮＫ 的 磯 酸 化 趋 势 与 Ｐ Ｅ ＲＫ
－

的 变化较为相 似 。 当用 比 

－

６／Ｓ 正 －

化 预处理细 胞之后 ， Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ 显示 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 ｐ３ ８ 信 号 通路激活




状况与 对 照 组相 比 变化不大 ， 然而 ， 不 同浓度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＥＲＫ 和 Ｊ ＮＫ 的 磯




酸化表现为截然 不 同 的 两种趋势 ：
在 １ ０ｎ
ｇ／ｍ
ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 组 ， 化 －

６ ／５ 比 －

６艮 显 著促进



了  Ｅ ＲＫ 和 Ｊ ＮＫ 的 磯 酸 化 ； 而在 ５ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｘ 组 ， 正 －
６／ｓ Ｌ 化 －

对于 Ｅ ＲＫ 

和

Ｊ ＮＫ 的 憐 酸 化 却 表 现 为 抑 制 作 用 。 提示 比 －

６／ｓ ｌ －

６民 可能通过 Ｅ ＲＫ 与 ＮＫ 信 号

 Ｊ



巧
 山东 大学博±学位论 文 




通路调 节 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 介 导 的 破骨 细 胞 生 成 

。

ｌＯｎ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  ｌＯｎｇ／ｍ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ＋ 比 ６ ／ｓ ６巧


ｇ／ ｍ
－

Ｌ
－

ｌ  ｌ  ！

０ １ ５ ３ ０ ６ ０ ０ 玉 ５ ３ ０ ６ ０

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Ｐ ｐ ３ Ｓ
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…
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ＥＲＫ
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
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＾
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＾苗 巧 度 把货
＇

一

 ， 
 祈咕



ｐ
广
－

Ｊ ＮＫ


礙矮 ５
ｉ
＾ ｓ
镑 巧释 
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々 驗 祭私 ■
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
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Ｙ

图 ３
－

６ ： 正 －

６ ／ｓ ＾ 化 －

对不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导的 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 Ｍ Ａ ＰＫ ｓ 信 号 通 路 激



活的 影响 。 Ａ ： Ｉ Ｌ －

６／ｓＩＬ
－

６艮 预 处理后 ，
Ｗ ｌ Ｏ ｎ ／ｍ
ｇ ｌ ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱导不 同 时间点 Ｂ ＭＭ ｓ



细胞 中 Ｐ
－

３ ８ 、 ＥＲＫ 和 ＪＮ Ｋ 蹲 酸 化 蛋 白 的 ｗ ｅ ｓ ｔｅ ｒ
ｎ ｂ ｏｔ  ｌ 检测 。 Ｂ ； 化 －

６／ｓ 正 －

６ 氏 预 

处

理后 ，
Ｗ５ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ ＲＡＮＫＬ 诱导不 同 时 间 点 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 中 Ｐ ３８
－

、 Ｅ ＲＫ 和 脚Ｋ 蹲



酸化蛋 白 的 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒｎ  ｂ ｌ ｏｔ 检测 。 Ｐ３ ８ 、 Ｅ ＲＫ 和 ＮＫ 总 蛋
Ｊ 白 分別作 为 内 参 

。

５８


 山 东大学博±学位论文
 



ＰＩ ３ Ｋ／ Ａｋ ｔ 是 调 控 破骨细 胞生 存 的 重 要胞 内 信 号 通路 ， 该通路 的 激活 能够延




长破骨细 胞 的 生命 周 期 ， 从而 增 强 破骨 细 胞 的 骨 吸收 活性 为 了 探 究 。 圧 －

６ ／Ｓ 正 ６ Ｒ

 －

是 否通过调 节 ＰＩ ３ Ｋ ７ Ａ ｋ ｔ 信 号通路 影 响 ＲＡ Ｎ ＫＬ 诱 导 的 破骨细胞生成 ， 我们用




Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎｂ ｏ ｔ ｌ
检测 正 －

６ ／ ｓ ＩＬ －

化 预处理对 Ａｋ ｔ 磯 酸化 的 影 响 。 如图 ３
－

７Ａ ，
Ｂ ， 蛋白



电泳结 果 显 示 １ ０ ｎ
ｇ／ ｍ ｌ  ＲＡ ＮＫＬ 和 ５ ０ｎ
ｇ／ｍ ｌ  Ｒ ＡＮＫ Ｌ 都能诱导 Ａｋ ｔ 的 磯酸化 ， 

但

５ ０ｎ
ｇ ／ ｍ  ＲＡＮＫ Ｌ ｌ
诱导 的 Ａｋ ｔ 磯 酸 化程度 明 湿 强于 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ  Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ ｌ 组 ， Ａ ｋｔ 

憐

酸化 的 高 峰 出 现在 １ ５ ｍｉ ｎ ， 之后逐渐 降低 。 正 －

６／ｓ 正 －

６Ｒ 预处理对 不 同浓度 民 Ａ ＮＫ Ｌ



诱导组 Ａｋ ｔ 的 稱酸 化都无显 著 影响 ， 提示 ＰＩ３ Ｋ／Ａ ｋ ｔ 可能不参与 正 －

６ ／ｓ ＩＬ －

６ 民 

对

Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介 导 的 破骨细胞分化 的 调节 

。

ＲＡ Ｎ 化  ｌ Ｏ ｎ ｇ ／ ｍ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ＋ 

抓
＠
Ｒ
ｇ／ ｍ
ｌＯｎ ６ ／ｓ
－ －

ｌ  ｌ Ｉ Ｌ ｌ Ｌ


０ １ ５ ３ ０ ６ ０ ０ １ ５  ３ ０ ６ ０



 
Ｐ
－

Ａ ｋｔ  Ｉ Ｉ

Ａ ｋｔ



ｇ／ ｍ
ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ  ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍ ＲＡ Ｋ Ｌ＋ ６ ／ｓ ＬＷ


＠
５０ｎ Ｌ
－

ｌ  ｌ  Ｉ Ｖｌ Ｉ ｌ

０  １ ５  ３ ０  ６ ０  ０  巧 ３ ０  ６ ０



Ｐ ￣

Ａ ｋｔ —
…  

一

Ａ ｋｔ  麵？


图 ３
－

７ ： 正 －
６ ／ｓ 正 －

６ 民 对不 同 浓 度 ＲＡ ＮＫＬ 诱 导 的 Ｂ ＭＭｓ 细胞 ＰＩ ３ Ｋ ／Ａ ｋ ｔ 信 号 通路



激活的影响 。 Ａ ： 正 －

６ ／ Ｓ ＩＬ ６ Ｒ
－

预 处 理后 ，
Ｗ ｌ Ｏ ｎ ｇ／ ｍ ｌ ＲＡ ＮＫＬ 诱导 不 同 时间 

点

Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 中 Ａｋ ｔ 礎酸 化蛋 白 的 ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ  ｂ ｏ ｔ ｌ 检测 。 Ｂ ： 正 －

６ ／ｓ 正 －

６Ｒ 预 处理后 

，

Ｗ  ５ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  ＲＡ ＮＫＬ 诱导 不 同 时 间 点 Ｂ ＭＭ ｓ 细 胞 中 Ａ ｋ ｔ 礎酸化蛋 白 的 Ｗｅ ｓｔｅ 


ｎ
ｒ

ｂ ｌ ｏｔ 检测 。 Ａｋ 总 ｔ 蛋 白 作为 内 参 

。

综上所述 ， 我们 认为 正 －

６ ／Ｓ 圧 －

６ 民 可 能通过激 活 正 －

６
－

ｇｐ ｌ ３ ０ 信 号通 路干 预 了



Ｒ ＡＮＫ Ｌ Ｒ Ａ ＮＫ 下游 Ｅ ＲＫ ＮＫ ＮＦ ｋＢ 等 关键信 号 分子 的 憐 酸 化 进 步影响



一

Ｊ
－
－

、 、 ，

了  ＮＦ －

ｋＢ 、 ｃ
－

ｆｏ ｓ 等转录 因 子 的 入核 ，
从而 改变 了 破骨细 胞分化相 关 转 录 因 子



Ｎ ＦＡＴ ｃ ｌ 、 ｃ
－

ｆｏ ｓ 和 破骨 细 胞标志 基 因 的 表达 ， 最终 实现其对不 同 浓度 Ｒ Ａ Ｎ ＫＬ 

诱

导 的 破骨细 胞生 成 的 差异性调 节 作 用 （ 模式 图 见 图 ３
－

８ ） 

。

已 ９


 山 东大学博±学 位论文
 



Ｉ Ｌ
－



６

〇 Ｒ Ａ Ｎ Ｋ 

Ｌ

ｙ  ／ Ｖ
ｃ 

ｃ
＾
ｉ ｆ ｉ

＾
＾

ｄ ｉ ｆｅ ｗ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏｎ



图 ３
－

８ ： 正 －

６ ／ ｓＩ Ｌ －

化 对 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱导 的破骨 细胞生成 的 差 异性调 节 作 用 的 分子机




制示意图 

。

巧论


Ｒ Ａ ＮＫＬ 是 激活破 骨 细 胞分化 的 主 要 效应 因 子 。 ＲＡＮＫ Ｌ 与 其配体 Ｒ ＡＮＫ 

结

合后 募集胞 质 中 的 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 通过憐酸化作用 启 动 下游 系 列 的瀑布式级 联 反应

一

， 

。

目 前 研 究 发现 ， ＲＡ ＮＫ Ｌ 下 游 与 破骨 分 化 相 关 的 信 号 通路 主 要 有 下五条 ： 娜 

－

ｋＢ 、
Ｐ
－

３ ８ 、 Ｅ ＲＫ 、 Ｊ ＮＫ 和 円 ３ Ｋ ／Ａ ｋ ｔ 。 因此 ， 在 本 部分实验 中 ， 我们 主 要探讨 了 正 

－

６／Ｓ 正 化 －

对 ＴＲ ＡＦ ６ 的 募集 作 用 及 ＲＡＮＫ Ｌ 诱导 ｌ ｉｌ 上五 条信 号通路激 活 的 影响 

。

Ｔ ＲＡＦ ６  属 于  ＴＮＦ受 体相关 因 子家族 （ ＴＮＦ  ｒｅ ｃ ｅｐｔｏｒ

－

ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａｔ ｅ ｄ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ， Ｔ Ｒ ＡＰ 

）

的成员 ， 是 ＲＡ ＮＫ Ｌ ＲＡＮＫ －

结 合后 向 胞 内 传 递信 号 的 重 要 媒介 分子 ［
６８
］
。
动物实



验显示 Ｔ ＲＡ Ｆ ６ 基 因 突变 小 鼠 体 内 不 能形成破骨细胞 ， 表现为严重 的骨硬化症和




牙齿萌 出 障碍 ［
６９
］
。 此外 ， Ｔ ＲＡＦ ６ 结合位 点 突变 后 的 Ｒ ＡＮＫ 将 不 能恢复 

Ｒ ＡＮＫ

敲除小 鼠 造 血 前 体细 胞 向 破 骨 细 胞分 化 的 能 力 ［
７０ ］ 。 胞 内 信 号转导研 究 发现 

，

Ｔ ＲＡＦ ６ 缺失后 ＲＡ ＮＫＬ 将无法激活破骨细 胞 前 体细 胞 内 的 ＮＦ －

ｋＢ 和 ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ 

信

号通路 ， 也 就不 能诱 导 破骨细胞分化 ［
６８
］
。 ＴＲ ＡＦ ６ 主要与 ＲＡ ＮＫ 近 中 胞质 段 的



特 定 基 序 结 合 后 被泛 素 化 修饰 而 活化 ， 活化 的 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 与转化生长 因 子激酶



１
 （
ｔｒ ｉ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ  ｋ
ａｎ ｓ ｆｏ ｒ ｍ ｎ ｇ  ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｂ ｅ ｔ ａ ａ ｃ ｔ
－

ｉ ｉ ｕ ｓ ｅ１ ，  了人 ＆ 叫 和  ＴＡ Ｋ １  结合蛋 白 

１

（ Ｔ ＧＦ ｂ ｅ ｔ ａ －

 ｉ ｖ ａｔ ｅ ｄ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ  １  ｂ ｉ ｎ 出 ｎ ｇ ｐ ｒ
ａ ｃｔ  ｏｔｅｉ ｎ１ 
，  ＴＡ Ｂ ｌ ） 及  ＴＡ Ｂ ２  形 成 复合物 ，


激

６０


 山 东 大 学 博±学 位论文
 



活作为 Ｉ ｋＢ 激酶 （ ｉ ｎ ｈ 化 ｉ ｔｏ ｒ ｏ ｆ ｎｕ ｃ   ｌ ｅ ａｒ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｋ ａ
ｐｐ ａ
－

Ｂ  ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ  Ｉ ＫＫ ， ） 的  ＴＡ Ｋ １ ［ ７ １ ］


，

并进 步激活 ＫＫ 复 合体 调 控 下 游 与 破 骨 细 胞 分 化相 关 信 号 通 路 蛋 白 的 表 达
一

Ｉ ， 

。

为了判断 Ｉ Ｌ ６／ｓ ＾ ６ Ｒ
－ －

是 否 通 过 改 变 ＴＲＡＦ ６ 的 表 达 来 调 节 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 介 导 的 破骨 细



胞分化 ， 我 们 分 别 在 破骨 细 胞 分 化 诱 导 后 第 ０ 、 ２４ 、 ４８ 小 时 收集 细 胞 总 蛋 白 检 测



ＴＲＡ Ｆ ６ 蛋 白 的 表达情 况并 与 对 照 组做 比 较 。 电泳结 果 显示低浓度和 高浓度




ＲＡＮＫＬ 都能诱导 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 Ｔ ＲＡＦ ６ 表达增 加 ， ２４ 小 时后达到 高峰并 持续 到 ４８




小时 。 正 －
６／ ｓ ｍ ６Ｒ －

的 加 入 对 不 同 浓 度 ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ 诱 导 姐 ＴＲ ＡＦ ６ 的 表达均 无 明 显 影



响 这与 Ｙｏ ｓ ｈ 等 的 研巧结果 致 他们在研 巧 正 对 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨


一

。 ｉ ｔａ ｋｅ ，
－

细 胞分 化 抑 制 的 机 理 时 发 现 １ ０ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ  Ｉ Ｌ ６ －

并 不 能 改变 ＴＲＡＦ ６ 蛋 白 的 表达 ［
５４
］


。

鉴于 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 主要与 Ｒ ＡＮＫ 结 合 后 被 泛 素 化激 活 才 能 发 挥 启 动 下 游 信 号 通 路 的



作用 ，
所 Ｗ 在本实验 中 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 的 蛋 白 表达 虽 未受 到 正 －

６ ／ ｓ ＩＬ
－

化 的影响 ，
但是



正 －

６ ／Ｓ 正 －

６Ｒ 是 否 干扰 了  Ｒ ＡＮＫ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ －

的 结合却 不 得而知 ， 接 下来我们采用 免疫




共 沉 淀 的 方法 明 确 止 －

６／ Ｓ 正 化 －

对 ＲＡＮ Ｋ Ｌ 介导的 ＲＡＮ Ｋ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ －

结合的影响 

。

凝胶 电 泳 结 果表 明 Ｒ ＡＮＫ ＴＲ Ａ Ｆ ６ －

的 结 合在 两种 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 ５ 分钟 后达到



峰值 ， 直到 １ ５ 分 钟 后 逐渐 下 降 。 在上述体系 中 加 入 圧 －

６ ＭＬ －
６Ｒ 后 检测 到 与



ＲＡＮＫ 结合 的 ＴＲＡＦ ６ 的 量在 各 个 时 间 点 与 各 自 对 照 组相 比 并未发生显 著变化 


，

提示 正 －

６／Ｓ正 ６ －

Ｒ 不影响 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导 的 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ －

的 结合 。 通 过 上 述两 个



实验 我们 可 Ｗ 推 知
， 正 －
６／ Ｓ 正 ６ Ｒ －

的 作 用 範 点 不 是 ＴＲＡＦ６ 而 有 可 能 存 在 于 ， Ｔ ＲＡ Ｆ ６



下 游 的 信 号 通路 中 

。

ＮＦ －
ｋＢ 信 号 通路是 ＴＲＡＦ ６ 下游与 破骨细胞分化 关系 最 为密切 的 信 号通路 

。

经 典 的 ＮＦ －

ｋＢ 信 号 通 路激 活 过 程 为 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 与 Ｒ ＡＮ Ｋ 结合后 活化 的 ， ＴＲＡＦ ６ 


与

ＴＡＫ １ 结合蛋 白 （ ＴＡ Ｂ ２ ） 形成 复合物 激活 下游 的 ＴＡ Ｋ １ ， 后者诱导 ＮＦ －

ｋＢ 激酶诱



导剂 Ｉ ＫＫｏ ／
ｐ 磯酸 化 而 活 化 活 化 的 。 Ｉ ＫＫ ａ ／ ｐ 催化 ｉ ＫＢ ａ 憐 酸化 继 而 泛 素 化 被 ， ２６Ｓ



蛋 白 酶 小 体 快速 降 解 ，
释放 ＮＦ －

ｋＢ 入核 ，
与 ＤＮＡ 特异 区 域 结 合 ， 启 动範基因 的



转录和 表达 除此之外 还存在 条 旁路 非 ｋＢ 依赖 的途径 即 Ｄ ＣＫ 直 接憐



一

［
７２］ 。 ， Ｉ ，

酸化 ＮＦ －

ｋＢ 的 ｐ６
５ 亚 基 也 能 够 促 进 ＮＦ －

ｋＢ 的 转录活性 ［
７３］ 。 研 充发现 ＮＦ －

ｋＢ 

的

两个亚 基 ｐ ５ ０ ／ｐ ５ ２ 基 因 敲 除 的 小 鼠 牙 齿不 能萌 出 ，
并 且 患 有 由 于 缺少 破 骨细 胞 导



致 的 骨骼硬化症 ［
７４ ，
７５］ ， 证 实 了 ＮＦ 
－

ｋＢ 信 号通路在 破骨细 胞 分 化 中 的 重 要 作 用 

。

在 本 实验 中 ， 我 们 通过 检 测 ＮＦ －

ｋＢ 亚基 ｐ６ ５ 的 憐 酸 化 评 估 ＮＦ －

ｋＢ 通路 的 激活情



６１


 山 东 大 学 博± 学位 论文
 



况 。 Ｗｅ ｓ ｔｅ ｒ ｎｂ ｏ ｔ ｌ
结果显示 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ 和 ５ ０  ｎ ｇ／ ｍ ｌ 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 都能够 不 同 程度 地激



活 ＮＦ －
ｋＢ 通路 ， 正 －

６／ ｓ ｌ ６ Ｒ －

分 别 促 进和 抑 制 了 低 浓 度 和 高 浓 度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的



的 磯酸化 与 第 二 部 分 破骨 细 胞 生 成 及 功 能 实 验 结 果 致 提示 忙 ６／５ 忙 ６ 民


一

ｐ６５
－ －

， ，

可 能 通 过 ＮＦ －

ｋＢ 通路 参 与 对 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 破 骨 细 胞分 化 的 差 异 性 调 节 

。

ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ 是 组能被细胞 因 子 神 经递质 细 胞 应 激 等 激活 的 丝 氨 酸 苏 氨 酸


一

、 、

蛋 白 激酶 ， ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ 信 号 通路包 括 ＥＲＫ 、 Ｊ ＮＫ 和 ｐ ３ ８Ｈ 条子通路 ， 广泛参 与 细 胞




的 生长 、 分 化 对 环 境 的 应 激 适 应 炎 症 反应 等 多 种 重 要 的 细 胞 生 理 病 理 过程
、 、 ／ 

，

在 破骨 细 胞 分 化 调 节 过 程 中 具 有 重 要 作 用 ［
７ ６ ７ ７］
，
。 ＥＲＫ 包括 Ｅ ＲＫ １ 和 ＥＲ Ｋ２ 

，

是最经典 ＭＡ Ｐ Ｋ 信 号 转 导 途径 ， 也 是将物理化 学信 号 从细胞表 面 受体传 导 至 细




胞 核 的 关键通 路 。
外 界刺激通过 Ｒ ａ ｓ Ｒ ａｆ ＭＥ Ｋ Ｅ Ｒ Ｋ  Ｈ 级 酶 促 级 联 反 应 磯 酸 化
－ － －




Ｅ Ｒ Ｋ １ ／２ 使 之激 活 ， 活化 的 ＥＲ Ｋ １ ／２ 由 胞质 转位到 胞核 ， 进 而 磯 酸化 激 活 核 内 的



某 些 转录 因 子如 Ｃ
－

仿Ｓ 、 ｃ －

Ｊ ｕｎ 等 调 控细 跑増 殖 与 分化
，
［
７
巧 。 Ｗ 往研巧证实 ， Ｅ ＲＫ



通 路 的 激活 除 了 能 够 维 持 破骨 细 胞及其 前 体 细 胞 的 生 存之 外 还 可 Ｗ 通 过 增 加 ， Ｃ


－

的 表 达 促 进 破骨 细 胞 生 成 而另 方面 有学 者应用 ＭＥ Ｋ 的 抑 制 

剂
一

ｆｏ ｓ ［
７ ９］ ； ，

ＰＤ ９ ８ ０巧 和 Ｕ０ １ ２６ 特异性 阻 断 ＥＲＫ 通路之后 发现 ＲＡＮＫ Ｌ 诱 导 破 骨 细 胞 分化 的




效果得到増 强 ［
８０
］
。 送些证据表 明 ＥＲＫ 参与 了  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 介 导 的 破 骨 细 胞生 成 ，


并

且 在 此 过程 中 ， ＥＲＫ 可 能 对 破 骨 细 胞 分 化起双 向 调 节 作 用 。 在本实验 中 ， 蛋白 电




泳结果显示 １ ０  ｎ ｇ ／ｍ ｌ 和 ５ ０  ｎ ／ｍ ｌ
ｇ 的 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 都 能 够 不 同 程度地诱 导 ＥＲＫ 的 磯酸



化 ，
高浓 度 ＲＡＮＫ Ｌ 对 Ｅ ＲＫ 通 路 的 激活 程度 远 大 于 低 浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 。 正 －

６ ／８ 比 －

６反



预 处理 能够 显著 増 强低浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 ＥＲＫ 憐酸化 ， 而抑 制 高




浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介导的 Ｅ ＲＫ 通 路 的 激活 。 正 －

６ 与 其 受体 正 －

６ 民 结合后 引 起 ｇｐ
ｌ ３０



二 聚化和 Ｊ ＡＫ ｓ 的 反式 激 活 ， 被激活 的 ｇｐ
ｌ ３０ 通过磯酸化 的第 ７ 巧 位 的 酪氨酸残



基募集 ＳＨＰ ２ 通过 系 列 的 反 应激 活 ＥＲＫ 信 号通路 因化 正 与 Ｒ ＡＮＫ Ｌ



一

，
［
８ １
］
。
－

均可与 各 自 受体 结 合 启 动 Ｅ ＲＫ 信 号 通 路 本 实 验得 到 的 ， 正 －

６／ｓ 正 －

６Ｒ 对不 同 浓度



Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 ＥＲＫ 磯酸化 的 差异 性调 节结 果 暗示 正 －

６ －

正 －

６Ｒ
－

ｇｐ ｌ ３０ 信 号转导


＂ ＂
通路 和 Ｒ ＡＮＫ Ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ ＴＲ Ａ Ｆ ６ － －

信 号转 导 通路之 间 存在 ｃ ｒｏ ｓ ｓ ｔａｌ ｋ ， 并且 Ｅ ＲＫ 

很

可 能是上述两条通路 的 交 叉节 点 

。

Ｊ ＮＫ 和 ｐ３ ８ 是 ＭＡＰＫ ｓ 的 另 外 两 个 亚 类 ， 与 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介 导 的 破骨 细 胞 分 化 也



有密切联系 。
当 外 界刺 激信 号 传入胞 内 后 ， Ｍ ＫＫ ４ 和 ＭＫＫ ７ 通 过双 磯 酸 化 Ｊ ＮＫ



６２


 山 东大学博±学位论文
 



的 苏氨酸和 酪氨 酸位 点 而激 活 Ｊ ＮＫ ， 激活 的 Ｊ ＮＫ 通过诱导 ｃ －

Ｊ ｕｎ 氨基末端 活性



区 丝氨酸 －

６３ 和丝氨酸 －

７３ 位 点双 磯酸他而提高 ｃ
－

Ｊ ｕｎ 转录活性 ， ｃ
－

Ｊ ｕｎ 是 转录 因



子激活蛋 白 ＡＰ 复合体 的 个組成部 分 在细 胞 増 殖

一

１  （ ａｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔｅ ｉ ｎ －

１ ，
－

１ ） ， 

、

分 化 和 肿 瘤 转 化 等 过 程 中 起重 要 作 用 巧 ２ ］
。 在破骨 细 胞 分 化过程 中 ， ＲＡＮＫＬ 

与

ＲＡ ＮＫ 结 合后 通 过 ＴＲ Ａ Ｆ ６ 激活 Ｊ ＮＫ ， 増加 ＡＰ －

１ 的 表 达 和 转 录 激 活活 化 上调



破骨分化相 关 转录 因 子 Ｎ ＦＡＴｃ －

１ 的 表 达 促 进 破骨 细 胞 的 分 化 和 成 熟
， ， 而在 体 外



用 Ｊ ＮＫ 的 小 分 子 抑 制 剂 ＳＰ６ ０ ０ １ ２５ 阻 断 ＪＮＫ 信 号 通 路 后 则 会 显 著 抑 制 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



诱 导 的 破 骨 细 胞生 成 ［
８ ３ ８ ４
］ ，
。 另外 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 激活 的 Ｊ ＮＫ 信 号通路还 可 Ｗ 启 动



破骨细胞 的 抗调 亡作用 ： 提 高 破骨细胞 的 生存率 ［

８５
］
。 本实验结 果显示 Ｒ ＡＮＫ Ｌ



对 Ｂ ＭＭ ｓ 细胞 Ｊ Ｎ Ｋ 的 磯 酸 化 呈 浓 度依 赖 性 ， ５ ０ ｎ
ｇ／ ｍ ｌ ＲＡ
ＮＫ Ｌ 诱 导 组磯酸化 Ｊ ＮＫ



的 表达 明 显 多 于 ｌ Ｏ ｎ ｇ／ｍ ｌ Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导组 。 正 －

６ ／Ｓ 正 －

６民 预 处 理对低 高浓度

 ／

ＲＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｊ ＮＫ 憐 酸化 分别 表 现为 促进和 抑制 的 作用 ， 说明 Ｊ ＮＫ 也可能处




于 Ｉ Ｌ －

６ 和 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 信 号转导 网 络 的 交叉节 点 是 ， 正 －

６ ／ｓ 正 －

６Ｒ 差异性调节 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ



介 导 的 破骨 细 胞 分 化 的 潜 在 範 点 。 Ｙｏ 油 ｉｔ ａｋ ｅ 等在研 巧 Ｉ Ｌ －

６ 对 破骨 细 胞 分 化 抑 制



作用 的 机理 时发现 正 －

６ 预处理破骨细胞 前体细胞 能够 减弱 ＲＡ ＮＫ Ｌ 诱导 的 Ｊ ＮＫ



磯酸化 与 本实验 的 结果相 致 同 时 Ｙｏ ｓ ｈ 等 通 过基 因 芯 片 技 术 筛 选 出



一

［
５ ４］ ， ， ｉｔ ａｋｅ

编码 ＭＡ Ｐ Ｋ 磯酸酶 的 两个基 因 Ｊｌｉ ＫＰ ／ 和 Ｍ ＫＰ ７ ， 认为 正 －

６ 可 能通过调 控 Ｗ 上两 

．

种 基 因 的 表适从而 抑 制 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 诱导 的 Ｊ ＮＫ 磯酸化 ［
５ ４］ 

。

作 为 ＭＡ Ｐ Ｋ 家 族 的 重 要 成 员 ，
ｐ３ ８ 由 ％０ 个氨 基 酸 组 成 的 分 子 量 为 ％ ＫＤ ａ



的 酪 氨 酸 磯 酸 蛋 白 激 酶 由 Ｈ ａｎ 等 用 内 毒 素 刺 激 小 鼠 肝 脏 细 胞 分 离 纯 化 获 得 巧 巧 ， 

。

细 胞 外 多 种 刺 激 都 可 通过 经 典 的 兰 级 酶促 级 联 反 应 Ｍ Ｅ ＫＫ ｓ 几 Ａ Ｋ ＭＫＫ ６ ／ ＭＫ Ｋ ３ － 

－

ｐ３ ８ 激活效应细胞 内 的 ｐ３ ８ ， 活化后 的 ｐ３ ８ 转位入核 内 ， 作用 于转 录 因 子 ， 调节




特定 基 因 的 表达 ［
８７ ， 
８８
］
ｄ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ Ｒ ＡＮ Ｋ －

结合后通过 Ｍ Ｋ Ｋ６ 的 磯 酸 化 激 活 ｐ ３ ８ 

，

后 者 接着通过 转录 因 子 ｍ ｉ ／ Ｍ ｔ
ｆ ｉ
调 节 破骨细 胞功 能 蛋 白 ＴＲＡＰ 和 ＣＫ 基 因 的 表达



巧９ ，
９ ０］ 。 使用 ｐ３ ８ 的 小 分子抑 剌 剂 ＳＢ２０３ ５ ８ ０ 预 处 理 破 骨 细 胞 前 体 细 胞 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． 

７

细胞能够抑制 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱导 的 破骨细 胞 向 分化 ［

９ １
］
， 证实 Ｒ ＡＮＫ Ｌ Ｒ ＡＮＫ －

下游启



动的 ｐ３ ８ 信 号 通 路 为 破 骨 细 胞 形 成 所 必 需 我们 在 实 验 中 发 现低 高 浓 度 。 ／ Ｒ ＡＮＫ Ｌ



均 能激活 ｐ３ ８ 信 号通路 ， 正 －

６ ／５ 比 －

６ 民 预 处 理 对 两种 浓 度 Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 介导 的 ｐ３ ８ 

的

憐 酸 化没 有 明 显 影 响 ， 提示 ｐ３ ８ 不参 与 正 －
６ ／Ｓ 正 ６ Ｒ －

对 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨 细 胞



６３


 山 东 大 学博±学 位论文
 



分化 的 差 异 性调 节 为什么 。 比 －

６／ｓ 正 ６ Ｒ
－

能够 改变 ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ 中 的 ＥＲ Ｋ 和 Ｊ ＮＫ 而对



ｐ３ ８ 没有影 响 ， 究其原 因 ， 我们推测 可能 是 因 为 ｐ３ ８ 不位 于 Ｉ Ｌ －

６ －

Ｉ Ｌ －

６ Ｒ －

ｇｐ ｌ ３０ 

信

号转 导 通路和 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６
－ －

信 号转 导通路交叉 的节 点 

。

除上述 ＮＦ －
ｋＢ 和 ＭＡ Ｐ Ｋ 信 号 通 路 之 外 ， Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ Ｒ Ａ Ｎ Ｋ －

结合 ＴＲＡＦ ６ 之后



还可 Ｗ 激活 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／Ａ ｋ ｔ 信 号 通路 。 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／Ａ 虹 信 号 通 路对 于 破骨 细 胞 的 分 化和 存活



至 关重要 ［
９２ －

９４
］
。 研 巧表 明 ， Ｒ ＡＮＫ Ｌ 通过 ＰＩ３ Ｋ 激活 Ａｋ ｔ 后 ， 经磯酸化而活化



的 Ａｋ 可 抖 通 过 磯 酸 化 ｔ Ｇ ＳＫ３ Ｐ 的 丝 氨 酸残 基抑 制 Ｇ Ｓ Ｋ ３ Ｐ 的 激 酶 活 性 而 Ｇ Ｓ Ｋ ３ Ｐ

 ，

能 够 通 过磯 酸 化 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 而 阻止 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 的 核 转 位 Ｗ 及 与 ＤＮＡ 的 结 合 ， 进而抑




制 Ｎ ＦＡＴｃ ｌ 介导 的 破骨细胞 分化 ［
９５］ 。 因此 ，
＾对 ＧＳＫ３ Ｐ 激酶活性 的 阻断促进



了  Ｎ ＦＡＴｃ ｌ
介 导 的 转录 激 活 和 破 骨 细 胞 分 化 。 此外 ， ＴＲＡＦ ６ 还可 Ｗ 激活 ｃ
－

Ｓ ｒｃ 

，

ｃ
－

Ｓ ｒｃ 依 次激 活 ＰＩ ３ Ｋ 和 Ａｋ ｔ ， 活化 的 Ａｋ ｔ 可 Ｗ 磯 酸 化 激 活 ＡＦ Ｘ ／ Ｆ ｏｘ０ ４ 而使 么与



Ｂ ＣＬ Ｇ 结合 ， 增加调亡蛋 白 Ｂ ＣＬ ＸＬ －

的 表达 ， 从 而 抑 制 破骨 细 胞 调 亡 ， 增强了其



生存 能力 ［
９ ６］ 。 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／Ａ ｋ ｔ 信 号 通 路 与 破骨 细 胞 骨 架 结 构 和 骨 吸 收 功 能 也 息 息 相 关 

，

Ａｋ ｔ 可 从通过 下 调 Ｇ ＳＫ３ Ｐ 的 活性 稳 定微管 的 结 构 ， 有助 于破骨细 胞 形态 的 维




持 Ｗ 及运动粘 附等 ［
９ ７］ 。 我 们 在 实验 中 发现 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱导 Ｂ ＭＭｓ 细胞 １ ５ｍ ｉ ｎ 

后

Ａ ｋｔ 磯酸化 加 强 ， Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ＡＫｔ 信 号 通 路 被 激活 。 正 －

６／Ｓ 正 －

６Ｒ 预 处理细 跑 对高低浓



度 ＲＡＮＫＬ 诱导 的 Ａｋ ｔ 磯酸化都没有影响 ， 提示 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／Ａ ｋ ｔ 信 号通路不参与 正 


－

６ ／ Ｓ ＩＬ
－

６Ｒ 对 破 骨 细 胞 分 化 的 调 节 过程 

。

６４


 山 东 大学博± 学位论 文
 



全文总 结


１ ．
分别 培养小 鼠 原 代骨髓单核细 胞 Ｂ ＭＭ ｓ 和 小 鼠 单核 巨礎细胞系 ＲＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 

，

并 不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 刺激 ， 两 种 细 胞 均 可 ｍ秀 导 分 化 为 ＴＲ Ａ Ｐ 染色 阳 性 的



多 核 巨细胞 ， 并具有在 体外 进行骨 吸收 的 能 为 ， 且 破骨 细 胞 形 成 数 量 和 骨 陷




窝 面积 呈 Ｒ Ａ Ｎ Ｋ Ｌ 剂 量 依 赖 性 増 长 ， 表 明 体 外 破曾 细 胞 诱 导 分 化 模 型 建 立 成



功 

。

２ ．
在无 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 存在 的情况下 ， 正 －

６ 和 Ｓ 正 －

６ Ｒ 都 不 能 单独 诱 导 破 骨 细 胞 形 成 

，

而 Ｉ Ｌ －

６ 与 Ｓ 正 化 －

联 合 应 用 则 能 够 诱 导 少 量体 积 较 小 、 ＴＲ ＡＰ 染色 阳 性 的 破 骨



样细 胞形成 。 在低浓 度 ＲＡＮＫＬ 诱导 的情况下 ， 比 －

６ ／Ｓ ＩＬ ６ －

民 促进 了  Ｂ ＭＭ ｓ 

和

Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ． ７ 细 胞 的 破 骨细 胞 分 化 而 在 高 浓 度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 诱 导 的 情 况 下
： ， 正 －

６ ／Ｓ 正 

－

６艮 对 上述两种 破骨 细 胞 前体细 胞 的 破 骨 向 分化 表现 为 显 著 抑 制 ， 说明 Ｉ Ｌ 

－

６ ／ Ｓ ＩＬ ６ －

民 对 破骨细 胞 分化 的 调 控呈 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 浓度依赖性 ， 即 对不 同 浓度



ＲＡＮＫＬ 诱导 的 破骨细胞 分化呈现 出 差 异 性 的 调 节作用 


。

３ ．  Ｌ
Ｉ
－

６ ／ｓ 正 －

６Ｒ 对不 同 浓度 Ｒ Ａ ＮＫ Ｌ 介导 的 ＴＲＡＦ ６ 蛋 白 的表达 从及 Ｒ ＡＮＫ 


－

ＴＲ Ａ Ｆ ６ 的 结合没有影 响 ， 却 分 别 促进 抑 制 了 低 高浓度 ／ ／ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ 刺 激下



ＴＲＡ Ｆ ６ 下游的 ＮＦ －

ｋＢ 信 号 通路和 ＭＡ Ｐ Ｋ ｓ 中 的 ＥＲＫ 、 Ｊ ＮＫ 信 号 通 路 中 关键



信 号 分 子 的 磯 酸化 激活 ，
提示 正 －

６／ ３ 正 ６ 民
－

可 能 通 过 ＮＦ －

ｋＢ 、 Ｅ ＲＫ 、 Ｊ ＮＫ 信号



通路 差 异 性地 调 节 不 同 浓度 Ｒ ＡＮＫ Ｌ 诱 导 的 破骨细 施分化成熟 


。

６５


 山 东 大学博±学 位论支
 



参考文 献


［
１
］ Ｈ ｉ ｅ ｎｚ Ｓ 八 ，
Ｐａ ｌ ｉ ｗａ ｌ Ｓ ，
Ｉ ｖ ａｎ ｏ ｖ ｓ ｋ ｉ  Ｓ Ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ． ｉ ｓ ｍ ｓ  ｏ ｆ  Ｂ ｏ ｎ ｅ  民 ｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｏ ｎ  ｎ

 ｉ ｉ

Ｐ ｅｒ ｏ ｄｏ ｎｔ ｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ．  ２０ １ ５ ＾０ １ ５ ： ６ １ ５４８６ 

．

［
２
］  Ｂ ａ ｒ ｒ ｏ ｓＳ Ｐ ，
Ｗ ｉ ｌ ｌ ｉ ａ ｍ ｓ 民 ，
Ｏ ｆｅ 打 ｂ ａ ｃ ｈ ｅ ｒ  Ｓ ，
Ｍｏ ｒｅ ｌ ｌ ｉ  Ｔ ．  Ｇ ｉ ｎｇ ｖａ ｉ ｌ ｃ ｒ ｅ ｖ ｉ ｃｕ ｌ ａ ｒｆ
ｌｕ ｉ ｄａ ｓａ



ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ  ｏ ｆ ｂ ｏ ｍ ａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｓ  ｆｏ ｒ  ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ  ｉ ｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ． Ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ｏ ｌ  ２ ０ ０ ０２ ０ １ ６ ；
７ ０ ５ ３ ：
－

６４ 

．

［
３
］ Ｈ ａ
ｊ
ｉ ｓｈ ｅｎ
ｇａ
ｌ ｌ ｉ ｓ Ｇ ．
Ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ 打 ｔｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ：  ｆｒ ｏ ｍ  ｍ ｃ ｒ ｏ ｂ ａ  ｍ ｍ ｕ ｎ ｅ  ｓ ｕ ｂ ｖ ｅ ｒ ｓ ｏ ｎ  ｔ ｏ  ｓ
ｙｓｋｍ ｉ ｉ ｌ ｉ ｉ ｉ 

ｃ

ｉ ｎｆ ａｍｍａｔ ｏｎ ｌ ｉ ．  Ｎ ａ Ｒｅ ｖ ｔ Ｉ ｍｍｕｎｏ ｌ ２ ０ １ ５ ；
１ ５ ３ ０ ：
－

４４ 

．

［
４］  Ｓ ｍ ｉ ｓ ＮＡ ， Ｍ ａ ｒ
ｔ ｉ ｎＴ Ｊ Ｃ ｏ ｕ ．

ｐ
ｌ ｉ ｎ ｇＳ ｇｎ ａ ｉ ｌ ｓ ｂ ｅ ｔｗ ｅ ｅ ｎ  ｔ ｈ ｅ  Ｏ ｓｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔａ ｎ ｄＯ ｌ ｓ ｔ ｅｏｂ ｌ ａ ｓｔ 

：

Ｈ ｏ ｗ  ａ ｒ ｅ  Ｍ ｅ ｓ ｓ ａ ｇ ｅ ｓ  Ｔｒ ａ ｎ ｓ ｍ ｔ ｅ ｄ  ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ  Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ  Ｔｅ ｍ ｐ ｏ ｒ ａ ｒ ｙ  Ｖ ｉ ｉ ｓ ｋｏ ｒ ｓｔ ｏｔ ｈ ｅＢ ｏ ｎ ｅ




Ｓ ｕ ｒ ｆａ ｃ ｅ ？Ｆ ｒ ｏ ｎｔＥ ｎ ｄ ｏ ｃ ｒ ｎ ｏ ｉ ｌ Ｌ ａ ｕ ｓ ａｎｎ ｅ ）２ ０ １ ５ ６ ： ４ １ 


．

（ ；

［
５
］
民 ｏ ｏ ｄ ｍ ａ 打 Ｇ Ｄ ． 民ｅ ｇ ｕ ｌ ａｔ ｏ ｎ ｏ ｆｏ ｉ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｄ ｆｆｅ ｒ ｅ 打 ｔ ａ ｔ ｏ ｎ 
ｌ ｉ ｉ ｉ ． Ａ 打 ｎＮ Ｙ  Ａ ｃ ａ ｄ Ｓ ｃ 

ｉ

２００６ ；
１ ０ ６ ８ １ ０ ０ ：
－

９ 

．

［
６］ Ｈ ａｙ ａ ｓ ｈ 化 ａ ｒ ａＴ ，
Ｈ ｉ ｒａ
ｇａ
Ｔ ，
Ｓｕ
ｇ
ｋａ 八 ，
Ｗａ ｎ ｇ  Ｌ ，
Ｈａ ｔ ａ Ｋ ，
Ｏ ｏ ｓｈ ｉ ｍ ａＴ ，
Ｙｏ ｎ ｅ ｄ ａ  Ｔ 

＼

民ｅ ｇｕ ｌ ａｔ ｏ ｎｏ ｆ ｏｉ  ｓｔ ； ｅｏｃ ｌ ａ ｓ ｔｄ ｉ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｐ ｈ ｏ ｓ

ｐ
ｈ ａｔｅ ：

 ｐｏｋ ｎ ｔ ｉ ａ ｒｏ
ｌ ｌ 

ｅ

 ｎｔ ｈ ｅｓ ｋｅ ｅ ｓ ｎｈ ｙ ｈ

ｐ ｈａｔｅ ｍ
ｅ ｔ ａ ｌ  ａ ｂ ｎ ｏ ｍｉ ａ ｃｃ ｏ ｎ ｄ ｏ ｎ ｓ Ｊ
ｏ ｆｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｓ
ｐｏｐ ｏ 

ｔ ： ｌ ｔ ｉ ｌ ； ｌ ｉ ｔ ｉ ｉ ｓ ｉ ｉ ｔ ｉ ．

Ｂ ｏ ｎ ｅＭ ｎ ｅ ｒ Ｒｅ ｓ２ ０ ０ ７ ２ ２ ｉ 
；
： １ ７ ４ ３
－

５ １ 

．

［
７］  Ｙａ ｓ ｕ ｄ ａ  Ｈ ，
Ｓ ｈ ｍ ａ ｉ Ｎ ，
Ｎ ａ ｋ ａ ｇ ａｗ ａ  Ｎ ．  Ｙａ ｍ ａ ｇ ｕ ｃ ｈ ｉ Ｋ ，
Ｋ ｉ ｎｏ ｓ ａｋ Ｍ ｉ
，
Ｍｏｃｈ ｉ ｚ ｕ ｋ Ｓ ｉ


，

Ｔｏ ｍ ｏ ｙ ａ ｓ ｕ Ａ 
，
Ｙａ 打 ｏ  １ Ｃ ，
Ｇｏ ｔ ｏ Ｍ ，
Ｍ ｕ ｒ ａ ｋａ ｍ ｉ  ＿ Ａ ，
Ｔｓ ｕ ｄ ａ  Ｅ ，
Ｍｏｒ ｉ ｎａ
ｇａ
 Ｔ ，  Ｈ ｉ
ｇａｓ
ｈ ｏ  １Ｃｉ


，

Ｕ ｄ ａ ｇａｗ ａ  Ｎ Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ ，
ｉ  Ｎ ，
Ｓ ｕｄ ａＴ ．  Ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｄ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｌ ｉ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｉ ｓａｌ ｉ
ｇａ打
ｄ  ｆｏ ｒ



   
－

ｏ ｅｏ 〇 ｅ ｇ ｅ ｎ ｎ／ ｏ ｓ ｅｏｃ ａｓｔｏ ｅｎ ｅ ｓ ｎｈ ｂ ｏ ｒｙ ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｎｔ ｃａｌ 


ｏ
－

ｓｔ ｓ ｔ ｓ ｔ
ｐ
ｉ ｔ ｌ ｉ
ｇ
； ｔ： ； ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ

Ｔ Ｒ ＡＮ Ｃ Ｅ ／ Ｒ ＡＮＫ Ｌ ．  Ｐ ｒｏ ｃＮ ａｔ ｌ Ａｃ ａｄ Ｓ ｃ ｉ  ＵＳ Ａ  １ ９９８ ；

９５ ： ３ ５ ９７ －

６０２ 

．

［
８
］ Ｕ ｄ ａ ｇ ａｗ ａ  Ｎ Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ ，
ｉＩ Ｓｆ ，
Ｊ ｉ ｍ ｉ  Ｅ ， 
Ｍａ ｔ ｓ ｕｚａｋ ｉ  Ｋ Ｔｓ ｕ ｒ ｕ ｋ ａ Ｔ
，
ｉ 
， 
Ｉｔｏ ｈ Ｋ ， 
Ｎ ａｋａｇａｗ ａ Ｎ 


，

Ｙａ ｓ ｕ ｄ ａ  Ｈ ，
Ｇｏ ｔ ； ｏＭ ，
Ｔｓ ｕ ｄ ａ  Ｅ ，
Ｈ ｉ
ｇ ａ ｓ ｈ ｏＫ ｉ
，
Ｇ ｉ ｌ ｌ ｅｓ
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ｉ
，
Ｍａｒ ｔｉ ｎＴＪ ，
Ｓ ｕ ｄ ａＴ 

．

Ｏｓ ｔ ｅｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ ／ｓ ｔ ｒ ｏ ｍ ａ ｌｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｓ ｔ ｍ ｕ ａｔ ｅｏ ｓ ｈ ｏ ｃ ｉ ｌ ｌ ａ ｓ ｔ  ａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｉ ｏ 打  ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｉ
ｇ
ｈｅ ｘ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｏ ｎｏ


ｆ ｉ

ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔｄ ｌ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉ ａｔ ｉ ｏ ｎ 拉ｃ ｔ ： ｏ ｒ ／ Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ  ｂ ｕ ｔ  ｎ ｏ ｔ  ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ  ｃ ｏ ｏ ｎ ｙ ｌ
－

ｓｔｉ ｍ ｕ ａｔ ｎ ｇ

 ｌ ｉ

ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ； ： ｒ ｅ ｃ
巧 １： ｏ ｒａ ｃ ｔ ｉｖ ａ ｔ ｏ ｒｏ ｆ  ＮＦ －

ｋ ａ ｐｐ ａＢ ｌ ｉ
ｇａ ｎ ｄ ．  Ｂ ｏｎ ｅ １ ９９９ ２５ ；
： ５ １ ７
－

２３ 

．

ｒＨ Ｃ
［
９］
Ｂ ｌ ａ ｉ
 Ｒ ｏ ｂ ｎ ｓ ｏ ｎ Ｌ Ｊ  Ｚ ａ ｄ  Ｍ  Ｏ ，
ｉ
，
ｉ ｉ ． ｓ ｔ ｅｏｃ ｌ ａｓ ｔ ｓ ｇｎ ａ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎｇ
ｐ ａｔ ｈｗ ａ ｙｓ ． Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈｅｍ



Ｂ ｏｐ ｈ ｙｓＲｅ ｓ Ｃ ｏ ｍ ｍ ｕｎ  ２ ０ ０ ５ ３ ２ ８ ７ ２ ８ ３ ８
－

ｉ ： 

．

［
１ ０ ］Ｂ ｏ ｙ ｅ ｌ ＷＪ ，  Ｓ ｍ ｏ ｎ ｅ ｔ  Ｗ Ｓ Ｌ ａ ｃ ｅ ｙＤ Ｌ Ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ
ｉ
，
． ｌ ａ ｓ ｔｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｎａ ｎ ｄａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｏ ｎ ｉ 

．

Ｎ ａＵ ｉ ｒｅ２ ００３ ；
４２３ ： ３ ３ ７
－

４２ 

．

Ａ ｚ ｕ ｍ ａＹ Ｋａ  Ｋ Ｋ ａ ｏ  民 Ｔａ ｋ ｅ ｓ ｈ ａ  Ｓ  Ｋ ｕ ｄ ｏ  Ａ  Ｔｕ ｍ ｏ ｒ  ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ  ｆａ ｃｔ ｏ ａ ｈａ


－

１ ｔ ｔ ｒ
１
ｐ
ｉ
ｇ
ｉ ｉ ｉ ｌ

．

［ ］ ，
ｊ ， ， ，

ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｅ ｓｄ ｉ ｆｅ ｒｅ ｎ ｔ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ａ ｎ ｄ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｏ ｎ  ｂ ｙ  ｏ
ｉ ｉ ｉ ｓ ｂｏｃ ｌ ａ ｓｔｓ ．  Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ Ｃ ｈ ｅ ｍ



２０００ ２７５ ；
： ４８ ５ ８
－

６４ 

．

［
１ ２
］ 
Ｋ ｕ ｄ ｏ０ ，
Ｆ ｕｊ 化 ａ ｗ ａ  Ｙ  Ｉ ｔ ｏ ｎ ａ ｇ ａ  Ｉ ， ，  Ｓ ａ ｂ ｏ ｋ ｂ ａ ｒ  Ａ  Ｔｏ ｒ ，
ｉ ｓ ｕ Ｔ ，
Ａ 化 ａ ｎ ａ ｓ ｏ ｕ  ＮＡ 

．

ｌ ａ ｍ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ  ｃ ｙｔ ｏ ｋ 打 ｅ  （ Ｔ Ｎ Ｆ ａ ｐ ｈ ａ／ Ｉ Ｌ
Ｐｒｏ ｎ ｆ ｉ ｉ ｌ
－

１ ａｌ ｈ
ｐ ａ） ｎ ｕ ｃ
ｄ ｔ ｏ 打ｏ ｆｈ ｕ ｍ ａ ｎｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔ
ｉ 
 ｉ ｌ

ｆ ｂ ｒｍ ａ ｔ ｏ ｎ ｉ ． Ｊ Ｐ ａ化 ｏ ｌ ２ ００２ ；
１ ９８ ： ２ ２０ －

７ 

．

１ ３
］ 
Ｋｏ ｌ ａｋ ｅＳ Ｓ ａｔ ｏ  Ｋ Ｋ ｉ ｍＫ Ｊ 
Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ ｉ  Ｎ Ｕ ｄ ａ ｇ ａｗ ａ Ｎ Ｎ ａ ｋ ａ ｍ ｕ ｒ ａ  Ｉ Ｙａ ｍ ａ ｇ ｕ ｃ ｈ Ａ ｉ
［ ， ， ， ， ， ， 

，

Ｋ ｉ ｓｈ ｉ ｍ ｏ ｔ ｏＴ Ｓ ｕ ｄ ａＴ Ｋ ａ ｓ ｈ ｗａ ｚ ａｋ Ｓ Ｉ ｎｔｅ ｒ ， ，

ｉ ｉ ． ｌ ｅｕｋｉ ｎ
－

６ａｎ ｄｓ ｏ ｕ ｂ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｎ ｌ ｌ ｉ ｌ ｉ
－



６

ｒｅ ｃｅ
ｐ ｏ ｒ ｓ
ｎｔｈ ｅｓ ｎ ｏ ｖ ａ
ｔ
ｙ
ｉ ｉ ｌ  ｆｌ ｕ ｄ ｓ  ｆｒ ｏ ｍ  ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ａ ｔ ｏ ｄ  ａ ｒ ｔ ｈ ｒ ｔ
ｉ ｉ ｓｐ ａ ｔ ｅｎｔ ｓ  ａ ｒ ｅｒｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｂ ｉ ｉ ｉ ｉ ｌ 

ｅ

ｆ ｂ ｒ ｏ ｓｔｅｏｃ  ｌ ａ ｓｔ
－

ｌ ｉ ｋ ｅｃ ｅ ｌ ｌ  ｆｏ ｒ ｍ ａｔ ｏ ｎ ｉ ． Ｊ 目 ｏ ｎｅＭ ｉ ｎ ｅ ｒＲｅ ｓ１ ９ ９ ６ ；

１ １ ： ８ ８
－

９５ 

．

［
Ｍ ］  Ｋ ｕ ｄｏ０ ，
Ｓ ａ ｂ ｏ ｋｂ ａ ｒ Ａ  Ｐ ｏ ｃ ｏ ｃ ｋＡ
．
，
ｈｏ ｎ ａ ｇ ａ Ｉ ，
Ｆ ｕｊ ｋ ａ ｗ ａ  乂  Ａ ｔ ｈ ａ ｎ ａ ｓ ｏ ｕ  Ｎ Ａ
ｉ 

．

Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｅ ｕｋ ｍ ｌ
－

６ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｔｅ ｒ ｅｕ ｋ ｎ ｌ ｉ
－

Ｉ Ｉ  ｓ ｕｐ ｐ ｏ ｒ  ｈ ｕ ｍ ａ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｔ ｅｏｃ ｌ ａｓｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏｎ  ｂ ｙａ




Ｈ Ａ＞ Ｊ ＩＣ Ｌ －

ｉ ｎ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎｔｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ，  ｇ ｏ ｎｅ２ ０ ０ ３ ；
３ ２ １ ：
－

７ 

．

６６


 山 东 大学 博七 学位论 文
 



［
１ ５
］ 
Ｈｅ ｉ 打ｒ ｉ ｃ ｈＰ Ｃ ，
目 ｅ ｈ ｒｍ ａ ｎ ｎ  Ｉ ， 
Ｍｕ ｌ ｌ ｅｒ
－

Ｎ ｅ ｗ ｅ ｎＧ ， Ｓ ｃ ｈａ
ｐ
ｅ ｒＦ  ，
Ｇ ｒａ ｅ ｖ ｅＬ ． Ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｎ ｌ ｉ
－

６


－

ｔ
ｙｐ ｅ ｃ ｙ ｏ
ｔ ｋ ｎ ｅｓ ｇｎ ａ ｉ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ
ｇ
ｔ ｒｏ ｕ ｇ ｈ ｌ： ｈｅｇ ｐ ｌ ３ （ Ｖ Ｊ ａ ｋ ／ Ｓ ＴＡＴ  ｐ ａ ｔ ｈ ｗ ａ ｙ ． Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈｅ ｍＪ



１ ９９８ ；
３ ３４
（
Ｐｔ２ ） ： ２ ９７ －

３ １ ４ 

．

［
１ ６］ 民 ｕ ｄ ｅ ｒｍ ａ 打 Ｅ Ｍ Ｒｈ ｅ ｕ ｍ ａｔ ｏ  ．  ｉ ｄａｒｔｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ： Ｉ Ｌ －

６ ｎ ｈ ｉ 化 ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｎ Ｒ ｉ Ａ —

ｄ ｅｊ ａ ｖ ｕ  ａ  ｌ ｌ  ｏ ｖ ｅ ｒａｇａ ｎ ？

 ｉ

Ｎ ａ 民 ｅ ｖ Ｒｈ ｅ ｕ ｍ ａ
ｔ  ｔ ｏ ｌ  ２０ １ ５ ；
１ １ ： ３ ２ １
－

２ 

．

民 ｏ ｏ ｄ ｍ ａ 打Ｇ Ｄ
＇

７］ Ｓ ｕ ｄ ｅ ｓ  打 Ｐ ａ ｓｄ ｅ ａ ｓ ｅ ａｎ ｄ ｈｅ ｅ ｖ ａ ｎ ｃ ｅｔ ｏｏ ｎ ｃ ｏ ｏ ｇ ｙ Ｓ ｅ ｍ ｎ



ｇｅ
１ ． ｌ ； ｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ｌ ； ｉ ｒｒ ｅ ｌ ｉ ． ｉ
［

Ｏｎｃｏ ｌ  ２００ １
；
２ ８ １ ５ ：
－

２ １ 

．

［
１ ８
］ 
Ｋ ｌ ｅ ｉ ｎ Ｂ ，
Ｗ ｉ
ｊ
ｄ ｅｎｅ ｓＪ ，
Ｚｈ ａ ｎ ｇＸ Ｇ ，
Ｊ ｏ ｕ ｒｄ ａ ｎ Ｍ ，
Ｂｏ ｉ ｒｏ ｎＪ Ｍ ，
Ｂ ｒｏ ｃｈ ｉ ｅ ｒＪ ，
Ｌ ｉ ａ ｕ ｔ ａ ｒｄ  Ｊ 

，

Ｍｅｒ ｌ ｉ ｎ Ｍ ， Ｃ ｌ ｅ ｍ ｅ ｎｔ Ｃ Ｍ ｏ ｒｅ ，
ｌ
－

Ｆ ｏ ｕ ｒｎ ｉ ｅｒ  Ｂ  ｅ ｔ ａ  Ｍ ｕｒ ，
ｌ ． ｉ ｎ ｅａ ｎｔ ｉ －

ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｌ ｅｕｋ ｉ ｎ －



６

ｍｏｎｏｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌａ ｎ ｔ ｂ ｏ ｄ
ｙ
ｔｈ ｅ ｒ ａ
ｐ ｙ ｏ ｒ  ａ
ｆ ａ ｔ ｅ ｎ ｔ ｗ ｉ ｔ ｈｐ ａ ｓ ｍ ａｃ ｅ ｌ  ｌ ｅ ｕ ｋｅ ｍ ａ Ｂ ｏ ｏ ｄ


ｐ
ｉ ｉ ｌ ｌ ｉ ． ｌ

１ ９９ １
；
７ ８ １ ： １ ９８ －

２０４ 

．

［
１ ９ ］ Ｋ ｉ ｍＧ Ｗ ，
Ｌｅ ｅ  Ｎ民 ，
Ｐ ｉ  ＲＨ ，
Ｌ ｍＹ Ｓ ｉ
，
Ｌｅｅ ＹＭ 
，
Ｌ ｅ ｅＪ Ｍ ，
Ｊ ｅｏ ｎ ｇＨ Ｓ ，
Ｃ ｈ ｕ ｎｇＳ Ｈ ． Ｉ Ｌ ６


－

ｉ ｎ ｈ ｂ Ｕ ｏ ｒ ｓ  ｆｏ ｒ  ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ  ｏ ｆ  ｒ ｈ ｅ ｕ ｍ ａ ｏ ｄ  ａ ｒ ｔ ｈ ｒ
ｉ ｔ ｌ： ｉ ｉ ｔ ｉ ｓ ：

ｐ ａ ｓ
ｔ
，
ｐｒｅ
ｓ ｅｎｔ ，  ａ ｎ ｄ  ｆｕ ｔ ｕ ｒ ｅ ．  Ａ ｒｃ ｈ




＊

Ｐ ｈ ａ ｒｍＲｅ ｓ２ ０ １ ５ ；
３ ８ ： ５ ７５
－

８４ ． 
 Ｈ ａｎ ｇ ｏ ｃ  Ｇ
［
２０
］
Ｊ ｉ ｌ ｋａ  ＲＬ ，
Ｇ ，
ｉ ｒａｓ ｏ ｅＧ ｌ
，
Ｐ ａ ｓ ｓ ｅ ｄＧ ， 
Ｗ ｉ ｌ ｌ ｉ ａ ｍ ｓＤ Ｃ ， 
Ａ ｂ ｒ ａ ｍ ｓＪ Ｓ ，
Ｂ ｏ ｙ ｃ ｅＢ 

，

Ｂ ｒ ｏ ｘｍ ｅ ｙ ｅ ｒＨ ，
Ｍ ａｎ ｏ ｌ ａ 呂ａ ｓＳ Ｃ ． Ｉｎ ｃ ｒｅ ａ ｓ ｅ ｄｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔｄ ｅ ｖ ｅ ｏ ｍ ｅ ｎ ｔａ 行 ｅ ｒｅ ｓ ｔ ｒｏ ｅ ｎ
ｐ ｇ  ｌ ｌ

ｏｓｓ ｍ ｅ ｄ ａｔ ｏ ｎ  ｂ ｙ  ｎ ｔ ｅ ｒ ｅ ｕｋｉ ｎ ６ Ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ１ ９ ９ ２ ２５７ ８ ８ ９

－
－

ｌ ；  ｉ ｉ ｉ ｌ ． ｉ
；
： １ 

．

［
２
 Ｕ Ｐ ｏ ｌ ｉ
乂
Ｂａ ｌ ｅ ｎ ａ 民 ，
Ｆ ａｔｔ ｏ ｒ ｉ Ｅ ，
Ｍａ ｒ ｋ ａｔ ｏ ｓ  Ａ ，
Ｙａ ｍ ａ ｍ ｏ ｔ ｏＭ ，
Ｔａ ｎ ａ ｋ ａ  Ｈ ， Ｃ ｉ ｌ 化ｅｒ ｔ ｏＧ 

，

Ｒｏ ｄ ａｎ Ｇ Ａ Ｃ ｏ ｓ 
， 
ｔ ａｎｔ ｉ ｎ ｉ  Ｆ ． Ｉ ｎｔｅ ｒ ｅ ｕｋ ｎ ｌ ｉ
－

６ｄ ｅ ｆ ｃ ｅ ｎｔｍ ｉ ｉ ｉ ｃ ｅａｒ ｅ

 ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ  ｆｒ ｏ ｍｂ ｏ ｎ ｅ ｏ ｓ ｓ

 ｌ

ｃ ａ ｕ ｓ ｅ ｄｂ
ｙ ｅ ｓ ｔｒ ｏ
ｇｅ ｎ
 ｄｅ
ｐ
ｌ ｅｔｉｏｎ ．  Ｅ Ｍ Ｂ ＯＪ１ ９９４ ；
１ ３ １ ： １ ８９
－

９６ 

．

Ｋｕ ｈ ａ ｒａＮ Ｂ ｔｏ
ｒ ｎ Ｄ Ｓ ｕ ｄ ａＴ Ａｋ Ｙ 民ｏ ｏ ｄｍ ａ 打Ｇ Ｄ  Ｌ
＊

２ ２ ］ ｅ ａ ｍ ａ ６ ｓ ｔ ｍ ｕ ａｔ ｅ
－

ｉ Ｉ 

ｓ
ｙ
ｉ ｉ ｌ ｉ ｉ ． ｉ ｌ
［ ， ， ， ，

ｏ ｓｔｅｏ ｃ ａ ｓｔ ｋｅｍ ｕ ｎｕｃ ｅ ａｔ ｅ ｄ  ｃ ｅ ｆ ｏ ｒｍ ａｔ ｏ ｎ  ｎ  ｏ ｎ ｇ  ｔ ｅ ｒ ｍ  ｈ ｕ ｍ ａ ｎ  ｍ ａ ｒｒ ｏ ｗ  ｃ ｕ ｕｒｅ ｓ

－

ｌ ｌ ｉ ｌ ｔ ｉ ｌ ｌ ｌ ｉ ｉ ｌ ｌ ｔ 


ｂ ｙ ｎ ｄ ｕ ｃ ｎ ｇ Ｉ Ｌ
ｉ ｉ
－

１ｒ ｅ ｌ ｅ ａ ｓ ｅ ＪＩ ｍ ｍ ． ｕｎ ｏ ｌ １ ９ ９ ０ ； 
１ ４４ ：  ４２２ ６ －

３ ０ 

．

＾  Ｕ ｄ ａ ｇ ａ ｗ ａ Ｎ Ｔａ ｋ ａｈ ａ Ｎ Ｋａ ｉ
ｒ Ｔａ ｍ ｕ Ｗａ ｄ ａ Ｄ Ｍ Ｍ ａｒ ｎＴＪ
＂

［
２ 
，
ｓ ｈ ｉ
， 
ｔａ
ｇ ｉ  １ ，
ｉ ａ  ＩＴ ， 
 Ｓ ，
Ｆ ｎｄ ａｙ ｉ ｌ
 ，
ｔ ｉ


，

Ｈ ｉ ｒｏｔ ； ａ Ｈ Ｔａ ｇ ａ Ｔ Ｋ，

，
ｉ ｓ ｈｉｍｏ ｉ ｘ） Ｔ
，
Ｓ ｕ ｄ ａＴ Ｉｎ ． ｔｅ ｒ ｌ ｅｕｋ ｎ
ｙ
Ｌ） ｉ
－

６ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｏ ｎｏ ｆ ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ

 ｉ  ｔ ：
ｌ

ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔｉ ｉ ｏ ｎｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｓ ｏ 打Ｉ Ｌ
ａｔ
－

６ｒ ｅ ｃ ｅ
ｐ ｔ ｏ ｒ ｓｅ ｘ
ｐ
ｒｅ ｓ ｓ ｅ ｄ  ｏ ｎ  ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｂｕｔ ｎ ｏ ｔ



ｏ ｎｏ ｓｔｅ ｏｃ ａｓｔ

ｐ ｒ ｏ ｇｅ ｎ
ｌ

ｉ ｔ ｏｒｓ ．  Ｊ ＥｘｐＭ ｅ ｄ １ ９９ ５ ；
１ ８ ２ １ ４ ６ ： １
－

８ 

．

［
２４
］ 
Ｈａ ｔｔ ｅ ｒｓ ｅ ｙ ｌ Ｇ ，  Ｄ ｏ ｒ ｅ ｙＥ ，  Ｈｏｒ ｔ ｏ ｎ ＭＡ ，
Ｃ ｈ ａ ｍ ｂ ｅ ｒ ｓ ＴＪ ．  Ｈ ｕ ｍ ａ ｎｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅｃ ｏ ｌ ｏｎ
ｙ


－

ｓｔ ｍ ｕ ａ ｔ ｎ ｇ  ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｎｈ 化 ｉ ｉ ｔ ｓ ｂ ｏ 打 ｅｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｔｉ ｏ ｎｂ ｙｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｓｄ ｉ ｓ ａ ｇ ｇ ｒ ｅ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ  ｆｒ ｏ ｍ  ｒ ａ ｔ



ｐ
ｉ ｌ ｉ ｌ

ｂ ｏｎｅ ． Ｊ Ｃｅ ｌ ｌ  Ｐ ｈ ｙ ｓ ｏ １ ９ ８ ８ ｉ ｌ
；
１ ３ ７ １ ９ ９ ：
－

２０３ 

．

［
２５
］ 
Ｄ ｅｖ ｌ ｉ ｎＲＤ ，
民 ｅ ｄ ｄ ｙＳ Ｖ Ｓ ａｖ ，
ｉ ｎ ｏ民 ，
Ｃ ｉ ｌ ｉ ｔ ｏＧ
ｂｅｒ ，
民 ｏ ｏ ｄ ｍ ａ ｎＧ Ｄ ．  Ｌ －

６ｍ ｅ ｄ ａｔｅ ｓ ｉ 化ｅ



ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆＩ Ｌ －

１ ｏ ｒＴＮ Ｆ ，
ｂ ｕ ｔ  打 ｏ ｔ  Ｐ Ｔ Ｈｒ Ｐｏ ｒ ｌ ，
２５ （
ＯＨ ）
２ Ｄ ３ ｏ ｎｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ＞ ，
ｌ ｌ ｌ ｉ ｋｅｃ ｅ ｌ ｌ



ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｉ ｎ  打 ｏ ｒｍ ａ ｌ ｈ ｕ ｍ ａ ｎｂ ｏ ｎ ｅｍ ａ ｒｒ ｏ ｗｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ ＪＢ ｏ 打 ｅＭ ｎ ｅ ｒＲｅ ｓ１ ９ ９ ８

． ｉ
； 
１ ３ 

：

３ ９３ －

９ 

．

［
２６
］ Ｏ ｈ ｓ ａ ｋ
ｉ Ｙ ，
Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ  Ｓ ｉ
，
Ｓ ｃ ａ ｒ ｃ ｅ ｚ Ｔ ， Ｄ ｅ ｍｕ ｌ ｄ ｅ ｒＡ ， Ｎ ｉ ｓ ｈ ｈ ａ ｒ ａＴ ｉ
， Ｗ ｉ ｌ ｌ ｉ ａｍ ｓ 民 

，

民 ｏ ｏ ｄ ｍ ａ ｎＧ Ｄ ． 巨ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ  ｆｏ ｒ  ａ 打  ａ ｕ ｔ ｏ ｃ ｒ ｎ ｅ ／ ｐ ａ ｒ ａ ｃ ｒ ｉ 打 ｅ  ｒ ｏ ｅ  ｆｏ ｒ  打 ｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｉ 打 ６  ｎ  ｂ ｏ 打 ｅ

 ｉ ｌ ｉ ｌ
－

ｒｅ ｓ ｏ ｐ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎｂ ｙｇ ａｎｔｃ ｅ ｉ ｌ ｌ ｓ  ｆｒ ｏ ｍｇ ｉ ａ ｎｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ｓｏ ｆ ｂ ｏ ｎ ｅ  ．  Ｅｎｄｏｃｒ ｉ ｎ ｏ ｏ ｇｙ １ ９ ９ ２


ｌ
；
１ ３ １ 

；

２２２９ －
３ ４ 

．

［
２ ７］ 民ｏ ｓ ｅ －
Ｊ ｏ ｈ ｎ Ｓ ，
Ｎｅｕ ｒａｔ ； ｈ Ｍ Ｒ Ｉ Ｌ ６ ｒ ａ ｎ ｓ －

ｔ
－

ｓ ｉ
ｇｎ ａ ｌ ｉ ｎｇ ： ｌ ； ｈ ｅ ｈ ｅ ａｔ   ｉ ｓｏ ｎ ． Ｉ ｍｍｕｎ ｉ ｔ
ｙ ２００
４ ２０

；


：

２ －

４ 

．

［
２８
］ 
Ｐａ ｍｑｖ ｌ ｉ ｓ ｔ Ｐ Ｐｅｒｓ ｓ ｏｎ Ｅ
， 

，
Ｃ ｏ ｎ ａ ｗ ａ ｙ Ｈ Ｈ Ｌ ｅ ｒｎ ｅ ｒ Ｕ Ｈ  ，
 ． Ｉ Ｌ －

６ ， 
ｌ ｅｕ ｋｅｍ ｉ ａ ｉ ｎ Ｗｂ ｉ ｔ ｏｒ
ｙ ｆａ
ｃｔｏｒ
 

，

ａ ｎ ｄ ０ 打 ｃ ｏ ｓ ｔ ａｔ ｎ 
 ｉ Ｍ 巧  ｉ ｍ ｕ ａｔｅ ｂ ｏ ｎ ｅ ｌ   ｒｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｉ ｏ 打 ａ ｎ ｄ  ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ ｅ  ｌ  ｔｈｅｅ ｘ
ｐ
ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏ打 ｏｆ   ｒｅｃ ｅ
ｐ
ｔｏ ｒ



ａ ｃｔ ｖ ａ ｔ ｏ ｒｏ ｆＮ Ｆ ｋ ａ ｐ ｐ ａＢ  －

ｇａｎ
ｄ ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｒｏ ｅ
ｇ
ｅｒ ｎ ａｎ ｄｒ ｅ ｃ ｅ
ｐ ｏ ｒａ ｃ ｔ ｖ ａ ｏ ｒｏ ｆ
ｔ ＮＦ 

－

ｐ
ｉ ｌ ｉ ｔ ： ｉ ｉ １ ：

， ，

ｋａｐ ｐ ａ  Ｂ  ｎ ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ ｃ ａ ｖ ａ ｒ
ｉ ｌ ｉ ａｅ ． ＪＩ ｍｍ ｕｎｏ ｌ ２ ０ ０２ ； 
１ ６９ ： ３ ３ ５３
－

６２ 

．

６ ７


 山 东 大学博±学位论文
 



［
２９
］ 
Ｆ ｌ ａｎａ
ｇ
ａ ｎ ＡＭ ，
Ｓ ｌ： ｏ ｗ ＭＤ ，  Ｗ ｉ ｌ ｌ ｉ ａｍ ｓ 民 ． Ｔ ｈ ｅ  ｅ ｆｆｅ ｃ ｔ  ｏ ｆ  ｉ ｎｔｅ ｒ ｅ ｕｋ 打 ｌ ｉ
－

６ａｎ ｄｓ ｏ ｕ ｂ ｅ

 ｌ ｌ

ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｎ ６ｒ ｅ ｃ
ｌ ｉ
－

ｅ
ｐ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｅ ｎｏ ｎ
ｔ ｔ

ｉ  ｔ ｈ ｅ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｖ ｅ  ａ ｃ ｔ ｖ ｉ ｉ ｉ ｔ
ｙ ｏ
ｆ ｈ ｕ ｍ ａｎｏ
 巧ｅｏｃ ｌ ａ ｓｔｓ



ｇ
ｅ ｎ ｅ ｒａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎｖ ｉ ｔｒ ｏ ． Ｊ Ｐ ａｔ ｈ ｏ ｌ １ ９ ９ ５ ； 
１ ７６ ： ２ ８９
－

９７ 

．

Ｄ ｕｐ ＬＢ ａ ｕ ｄ ｈ ｕ ｎＭ Ｂ ｅ ｒｒ ｅ ｕ ｒ  Ｍ ｈ ｅ ｔＶ Ｂ

＇

３ ０ ｏ ｍ ｂ ｉ Ｃ ｈ ａ ｒｒ ｉ ｅ ｒ Ｃ Ｔｒ ｃ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｒｄＦ

ｌ ｉ
，
［ ］ ， ， ， 

，

Ｈ ｅ ｙｍ ａｍ ｉ  Ｄ ． Ｉ 打ｔ ｅ ｒ ｌ ｅｕｋｉ打
－

６ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｓｒ ｅ ｃｅ
ｐ ｏ ｒ  ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ  ｎ ｕ ｃ ｅ ａ ｒ  ｆａ ｃ ｏ ｒ
ｔ ｔ ｋ ａ
ｐｐ
ａＢ


ｉ ｌ

ｌ ｉ
ｇ ａｎ
ｄ －

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｏ ｅ ｎ ｅ ｓ ｌ ｉ ｓｂ
ｙ ｄ ｖ ｅ ｒｔ 打 ｇ  ｃ ｅ
ｉ ｌ ｌ ｓｉ ｎ ｔ ｏｔｈ ｅｍ ａ ｃ ｒｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｌ ｉ ｎｅ ａ ｇｅ
ｇ
ｉ 

：

ｋｅ
ｙｒ ｏ
ｌ ｅｏ ｆＳ ｅ ｒ ｉ ｎ ｅ ７ ２ ７
ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ
ｈｏｒ
ｙ
ｌ ａｔ ｏ ｎｏ ｆｓ ｉ ｉ
ｇｎ ａ
ｌ ｔ ｒａ ｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｅ ｒ ａ ｎ ｄａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｏ ｒ ｏ ｆ

 ｉ

ｔｒ ａｎ ｓ ｃ ｒ ｉ
ｐ
ｔ ｉ ｏ ｎ３ ．  Ｅｎｄｏｃｒ ｉ ｎｏ ｏ
ｇｙ
ｌ

２００８ ；
１ ４９ ： ３ ６８８ －

９７ 

．

［
３
 ＵＬ ｉ ｕ Ｈ ，
Ｆｅｎ ｇ 
Ｗ Ｙ ，
ｉ ｍ ｎ ｉ
，
Ｃｕ ｉ  Ｊ ，
Ｌ ｖＳ ，
Ｈａ ｓ ｅ
ｇ ａ ｗ ａ１ ，
Ｓ ｕ ｎＢ ，
Ｌ ｉ Ｊ
，
Ｏ ｄ ａ Ｋ Ａｍ 
，
ｉ ｚ ｕ ｋａ  Ｎ 

，

Ｌ ｉ Ｍ Ｈ ． ｉ ｓｔ ： ｏ ｏｇ ｃａ ｌ ｉ ｌ Ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅｏ ｆ Ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ Ｏ ｓｌ ： ｅｏｃ ｌ ａｓｔ Ｃ ｅ Ｎ ｕ ｍ ｂ ｅ ｒａｎ ｄ


 ｌ ｌ

Ａ ｓ
ｙ
ｍ ｍ ｅ ｒ ｃ  Ｂ ｏ ｎ ｅ  民 ｅ ｓ ｏ ｒｐ ｔ ｏ ｎ  Ａ ｃ ｔ ｖ
ｔ ｉ ｉ ｉ ｉ ｔ ｈ Ｔ ｂ
ｙ ｎｔ ｅ ｉ ｉ ｉ ａ ｅｏ ｆＩ ｎ ｌ： ｅｒｌ ｅｕｋｍ
－

６
－

Ｄ ｅ行ｃ ｉ ｅ ｎｔ



Ｍ ｉ ｃｅ ． Ｊ Ｈ ｉ ｓｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ  Ｃ ｙｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ  ２ ０ １ ４ ６２ ；
： ５ ５ ６
－

６４ 

．

［
３２
］
Ｍａｒ
ｔ ｉ ｎＲＢ ．  Ｔｏ ｗ ａ ｒ ｄ  ａ ｕ ｎ  ｉ ｆ
ｙ ｎ ｇ ｉ 化 ｅ ｏ ｒｙ 
ｏ ｆ ｂ ｏ ｎ ｅｒ ｅ ｍ ｏ ｄ ｅ  ｌ ｉ ｎｇ ．  Ｂ ｏ ｎｅ２ ０ ０ ０ 這 ６ ： １ －

６ 

．

［
３ ３
］ 
Ｋ ａｒ ｔｓ ｏ ｇ ａｎｎ ｉ ｉ ｓ  乂  Ｕ ｄ ａ ｇａｗ ａ Ｎ  Ｎ 呂 Ｋ Ｗ ， ，
Ｍ ａ ｒｔ ｉ ｎ Ｔ Ｊ ，
Ｍｏ ｓ ｅ ｌ ｅ
ｙ Ｊ Ｍ ， Ｚ ｈ ｏ ｕ Ｈ 

．

Ｌｏ ｃ ａ ｌ ｉ ｚ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ ｉ
ｐ
ａｒａｔｈ
ｙｒ ｏ ｄ  ｈ ｏ ｒ ｍ ｏ ｎ ｅｉ
－

ｒｅ ｌ ａｔｅ ｄ
ｐ
ｒｏｔｅ ｉ ｎ ｎｏ ｉ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｓｂ ｙ 打ｓ ｌ ｉ ｉ ｔ 

ｕ

ｈｙ ｂ ｒ ｄ ｚ ａ ｔ ｏ ｎａ ｎ ｄ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｈ ｏ ｃ ｈｅ ｍ ｙ Ｂ ｏ ｎ ｅ ９９８ ２ ２ １ ８ ９ ９４
－

ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ ｓ１ ： ｉ ｓｔｒ ．  １
；
： 

．

［
３４
］
Ｓ ｃ ｈｅ ｖ ｅ ｎＢ Ａ ，
Ｖ ｉ ｓ ｓ ｅ ｒＪ Ｗ Ｎ ，
ｉ
ｊ
ｗ ｅ ｄ ｅ  Ｐ Ｌ Ｉ ｎ ｖ ｉ ｉ ｔｒ ｏｏ ｓｔ ｅ ｏｃ ａｓｔ ｌ
 ｇｅｎ
ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｆｒ ｏ ｍ  ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ 

ｔ

ｃ ｈ ｅ ｄ  ｈ ａ ｅｍ ａ ｔ ｏ
ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒｒ ｏ ｗ  ｆｒ ａ ｃ ｔ ｏ ｎ ｓ ｉ
，  ｎ ｃ ｕ ｄ ｎ ｇａｈ ｇｈ ｙｅ ｎｒ
ｉ ｌ ｉ ｉ ｌ ｉ
ｐｏ ｉ ｅ ｔ ｃｓ １ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ
ｉ ： 

ｌ

ｐ
ｏ
ｐ ｕ ａｔ ｏ ｎ ｌ ｉ ．  Ｎａ ｔ ｕ ｒ ｅ１ ９ ％ ；
３２ １ ： ７ ９ －

８ １ 

．

［
３
引  Ｈ ｄ ｆｒ ｉ ｃ ｈＭ Ｈ ， Ｔｈ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ ｈＣ Ｗ Ｍ ，
ｉ ｅ ｒ ｅ ｍ ｅｔ ＲＨ ， ｖ ａ ｎＩ ｐｅｒｅｎ
－

ｖ ａｎＧｅ ｎ ｔＡ Ｓ ．  Ｏｓ ｔ ｅ ｏｃ ａ ｓｔ

 ｌ

ｇｅｎ ｅ ｒａ
ｔ ｉ ｏ ｎ  ｆｒ ｏ ｍ  ｈ ｕ ｍ ａ ｎ  ｆｅ ａ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒ ｒ ｏ ｗ  ｎ  ｃ ｏ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ  ｗ １ ； ｌ ｉ ｉ ｔ ｈ  ｍ ｕ ｒ ｎ ｅ  ｆｅ ａ ｉ ｔ ： ｌ ｌ ｏ ｎｇ



ｂ ｏ ｎｅ ｓ ．  Ａ  ｍ ｏ ｄｅ ｌ  ｆｏ ｒ  ｎ  ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ  ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ
ｙ ｏ
ｆ ｈ ｕ ｍ ａｎ ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ
 １； ｌ ａ ｓ ｔ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｏ ｎ ｉ ．  Ｃｅ ｌ ｌ



Ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅＲｅ ｓ１ ９ ８ ７ ２ ４ ９ １ ２ ５ ；
：
－

３ ６ 

．

［
３ ６
］
Ｆｕ ｌ ｌ ｅ ｒ Ｋ ，
Ｗｏ 打 ｇ  Ｂ ，
Ｆ ｏ ｘＳ ，
Ｃｈｏ ｉ  Ｙ Ｃ ｈ ａｍ ｂ ｅ ｒｓＴＪ
，
．  Ｔ Ｒ ＡＮ Ｃ Ｅ  ｉ ｓ打 ｅ ｃ ｅ ｓ ｓ ａｉ
ｙ ａ ｎ ｄ



ｓ ｕｆ
ｉｃ ｉ ｅ 打 ｔ  ｆｏ ｒ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｂ ｌ ａｓｔ
－

ｍ ｅ ｄ ａ ｔ ｅ ｄ  ａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｏ 打  ｏ ｆ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｔ ｏ 打  打  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ
ｉ
ｐ
ｉ ｉ ｉ ｉ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ Ｊ

 ．

Ｅ ｘｐ Ｍ ｅ ｄ１ 
９９８ ；
１ ８ ８ ９ ９ ７ ：
－

１ ００ １ 

．

［
３７
］ Ｓ ｕ ｄ ａ
１ ，
Ｔａ 打 ａ ｋ ａ  Ｓ ， 
Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ ｉ  Ｎ Ｍ ａ ｃ ｒｏｐ ｈ ａ ｇｅ ．  ｃ ｏ ｏｎ ｌ
－

ｓｔｉ ｍ ｕ ａ ｔ ｎ 呂  ｆａ ｃ ｏ ｒ  （ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ ） 
ｌ ｉ ｌ：
－

ｉ 

ｓ

ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｈ ｅ ｒ ｅｎｋｏ ｒｓ
＇

ｅ ｓ ｓ ｅ ｎｔ ｉａ ｌ  ｆｏ ｒ  ｄ ｉ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｉ ａ ｔ ｔ： ｈａｎ
ｐ
ｒｏ ｌ ｉ ｆｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ  ｏ ｓｔ ｅｏｃ ｌ ａｓｔ
ｐ
ｒｏ
ｇ 

．

Ｏ ｓ ｂ ｏｐ ｏ ｒｏ ｓ Ｉ ｎ ｔ１ ９ ９ ３ ；
３Ｓ ｕ
ｐｐ
ｌ １ ： １ １ １
－

３ 

．

［
３ ８
］ 
Ｒ ａ ｓ ｃ ｈ ｋ ｅＷ Ｃ ， Ｂ ａ ｉ ｒ ｄＳ
，
民ａ ｌ
ｐ ｈＰ ，
Ｎ ａ ｋｏ ｉ ｎｚＩ Ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｏ ｎ ａ ｍ ａ ｃ ｒ ｏ ｈ ａ ｇ ｅ ｃ ｅ
ｐ
． ｉ ｌ ｌ ｌ  ｌ ｉ ｎｅ ｓ



ｔ ｒａ 打 ｓ ｆｏ ｒ ｍ ｅ ｄ  ｂ
ｙ 
Ａｂｅ ｌ ｓ ｏ ｎ ｅ ｕ ｋｅ ｍ ａ ｖ ｍ ｓ ｌ ｉ ｉ ．  Ｃｅ ｌ ｌ １ ９７８ ； 
１ ５ ： ２ ６ １
－

７ 

．

［
３ ９
］ 
Ｘｕ  Ｊ， Ｔａ ｎ  Ｊ Ｗ Ｈ ｕａｎｇ Ｌ Ｇａｏ ＸＨ
，
 ，

，
Ｌａ ｉ ｒｄ 民 Ｌ ，
ｉ ｕＤ ， 
Ｗｙ ｓ ｏ ｃ ｋ ｉ  Ｓ ，
Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ＭＨ  Ｃ 
． ｌ ｏｎｉｎ
ｇ 

，

打ｃ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ  ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ
ｉ ｚ ａｔ ｉ ｏ 打ｏ ｆ ｔｈ ｅｒａｔｈ ｏ ｍ ｏ ｏ ｇ ｕ ｅｏ ｆｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ
ｑｕｅ
ｓ ｅ ｉ ｌ 

，

ａｃ ｔ ｖ ａｔｏｒｏ ｆ
ｉ  ＮＦ －

ｋ ａｐ ｐ ａ Ｂ  ｌ ｉ
ｇａ
ｎｄ ． Ｊ Ｂ ｏ ｎｅＭ ｉ ｎ ｅ ｒ民 ｅ ｓ２ ０ ０ ０ ；
］ ５ ２ ： １ ７ ８
－

％ 

．

［
４ ０ ］  Ｗｏ ｏ  Ｋ Ｍ ，
Ｋ ｉ ｍＨ Ｍ ，  Ｋ ｏＪ Ｓ ．  Ｍ ａ ｃ ｒｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅｃ ｏ ｌ ｏｎ
ｙ
－

ｓｔ ｉ ｍ ｕ ａ ｔ ｎ ｇ  ｆａ ｃ ｏ ｒ  ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ｓ 
ｌ ｉ ｌ ；
ｔ ｈｅ



ｓ ｕ ｒｖ ｖ ａ ｉ ｌ  ｏ ｆｏ ｓ ｔ： ｅｏｃｌ ａｓｔ

ｐ ｒｅ ｃ ｕ ｒ ｓ ｏ ｒ ｓｂ
ｙｕｐ
－

ｒｅ
ｇｕ ａｔ 円
ｉ ｌ
ｇ
Ｂ ｄ Ｘ （ Ｌ ）  Ｅｘ ｐ  Ｍ ｏ  Ｍ ｅ ｄ

 －

． ｌ

２００２ ；
３ ４ ： ３ ４０ －

６ 

．

［
４ １
］ 
Ａ ｍ ａ ｎ ｏ  Ｈ Ｙａ ｍ ａ ｄ ａ  Ｓ ， ，
Ｆｅ ｌ ｉ ｘ民 ． Ｃｏ ｌ ｏｎｙ －

ｓｔｉ ｍ ｕ ａ ｔ ｎ ｇ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒｌ ｉ
－

１ ｓ ｔ ｍ ｕ ａｔｅ ｉ ｌ ｓｔ ｈ ｅ  ｆｕ ｓ ｏ ｎ

 ｉ

ｐ ｒｏ
ｃｅ ｓ ｓ ｉ ｎｏ ｓｔ ； ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔｓ ｌ ． Ｊ Ｂ ｏ ｎ ｅＭ ｉ ｎ ｅ ｒ民ｅ ｓ１ ９９８ ；
１ ３ ８ ４ ６ ：
－

５ ３ 

．

［
４２
］ 
Ｘｕ Ｊ
，
Ｗａ ｎ ｇ Ｃ Ｈ ａ ｎ 民  ， 

，
Ｐ ａ ｖ ｏ ｓＮ ｌ
，
Ｐ ｈ ａｎＴ ， Ｓ
ｈ ｅｒＪ Ｈ ，
Ｂ ａ ｋｋ ｅ ｒ  八Ｊ ， 
Ｊ ｏ ｙ ｃ ｅＤ Ａ ，
Ｚｈ ｅ ｎ ｇ



ＭＨ Ｅ ｖ ．  ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅｏ ｆ  ｒｅ ｃ ｉ
ｐｒｏ ｃａ ｌ ｒ ｅ
ｇｕ ａ ｏｎ
ｔ ｂ ｅｔｗ ｅ ｅ 打 ｌ ｉ  ｔ ｈ ｅｈ ｉ
ｇ
ｈｅ ｘｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ａｒ ｌ  ｃａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍａ ｎ ｄ



Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ  ｓ ｉ
ｇｎａ
ｌ ｔ ｒａ ｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｐ
ａ ｔｈ ｗ ａ
ｙ ｓ  打  Ｒ ＡＷ  ｃ
ｅ ｉ ｌ ｌ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ 巧 ｓ ＪＣ ｌ ． ｅ ｌ 

ｌ

Ｐ ｈｙ ｓ ｏ ｉ ｌ  ２００５ ；
２０２ ： ５ ５ ４ －

６２ 

．

４ ３ ］Ｈ ｓ ｕＨ Ｌ ａ ｃ 巧Ｄ Ｌ ，

Ｄ ｕｎｓ ｌ： ａ ｎＣ 民 ，
Ｓ ｏ ｏ ｖ ｙｅ ｖＩ ｌ
，
Ｃｏ ｌ ｏ ｍ ｂ ｅ ｒｏ Ａ ，  Ｔ ｍ ｍ ｓＥ
ｉ
，
Ｔａ ｎ  Ｈ Ｌ
［ ， 

，

６８


 山 东大学博±学位论文





Ｅ ｌ ｌ ｉ ｏ ｔｔ  Ｇ ，
Ｋｅ ｌ ｌ
巧 ＭＪ  ， Ｓ ａｒ ｏ ｓ ｉ Ｉ ，
Ｗａ ｎ ｇ Ｌ Ｘ  ，
ｉ ａ ＸＺ Ｅ ，
ｌ ｌ ｉ ｏ ｔ 艮 ，
Ｃｈ ｉ ｕＬ ，
Ｂ ｌ ａ ｃ ｋＴ ，
Ｓ ｃｕ ｌ ｌ


ｙ

Ｓ ，
Ｃ ａ ｐｐ ａｒｅ ｌ ｌ ｉ  Ｃ ，
Ｍ ｏ ｒ ｏ ｎ ｙＳ ，
Ｓ ｈ ｍ ａ ｍ ｏ ｔ ｏＧ ｉ
， 
Ｂ ａ ｓ ｓＭ Ｂ ， Ｂ ｏ ｙ ｌ ｅ ＷＪ ．  Ｔ＼ｉ ｍ ｏ ｒｎ ｅ ｃ ｒｏ ｓ ｉ 

ｓ

ｆａ ｃ ｏ ｒ  ｒ ｅ ｃ ｅ ｔ ；

ｐ ｏ
ｒ  ｆａ ｍｌ： ｉ ｌ
ｙｍ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ
 民 ＡＮ Ｋ  ｍ ｅ ｄ ａ ｔ ｅ ｓ  ｏ ｉ ｓ 化ｏｃ ｌ ａ ｓ ｔｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｏ ｎａ ｎ ｄ

 ｉ

ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｉ ｏ 打 ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｇ ｅ ｒ ｉ 打 ｉ ｌ ｉ
ｇａ ｎ
ｄ ．  Ｐ ｒ ｏ ｃ  Ｎ ａｔ ｌ Ａｃａｄ Ｓ ｃ  ； ＵＳ Ａ  １ ９９９ ９６ ；


：

３ ５４０ ５
－



．

［
４ ４ ］ Ｚ ｏ ｕＷ ，
Ａｍｃｈｅ ｓ ｌ ａｖｓｋ
ｙＡ ，
Ｔａ ｋ ｅ ｓ ｈ ｉ ｔａ Ｓ ，
Ｄｒ ｉ ｓ ｓ ｉ Ｈ ，
Ｂ ａｒ Ｓ ｈ ａｖ －

ｉ ｔ  Ｚ  ＴＮ Ｆ ．
－

ａｌ
ｐ
ｈａ



ｅ ｘｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓｔｒａ ｎ ｓ ｃｒｉ
ｐ
ｔ ｉ ｏｎａ ｌ ｌ
ｙ 
ｒｅ
ｇｕ ａ
ｌ １ ； ｅ ｄｂ
ｙ 
民 ＡＮ Ｋ ｌ ｉ
ｇ ａｎ
ｄ ． Ｊ Ｃｅ ｉ ｌ  Ｐ ｈ ｙｓ ｏ ｉ ｌ  ２００５ ；
２ ０２ 

：

３ ７ ８
－

１ 

．

［
４５
］ 
Ｓ ｃ ｈ ｅ ｖ ｅ ｎＢ Ａ ，
Ｍ ｉ ｌ ｎ ｅＪ Ｓ ，
Ｈ ｕｎ ｔ ｅｒＩ ，
民ｏ ｂ ｉ ｎ ｓＳ ＲＭ ａ ｃ ｒ ｏｐ ｈａ ｇ ｅ －

ｉ ｎ 打 ａ ｍ ｍ ａ ｔ ｏ ｒｙ  ｐ ｒ ｏ ｂ ｎ ｉ


－

１ ａ ｈ ａｒｅ
ｇ ｕ ａ ｅ ｓｐ ｒ ｅ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ
ｔ ｔ ｄ ｆｆｅ ｒ ｅ 打 ｔ ａ ｔ ｏ 打  ｎ  ｖ ｉ ｔｒ ｏ Ｂ ｏｃ ｈ ｅｍ Ｂ ｏ ｐ ｈ ｙ ｓ民 ｅ 

ｓ
ｐ
 ｌ ｌ ｌ ｉ ｉ ｉ ｉ ． ｉ ｉ

Ｃ ｏ ｍｍ ｕ ｎ１ ９９９ ２５４ ；

： ７ ７３ －

８ 

．

４ ６ ］Ｋ ｍＭ Ｓ Ｄ ａｙＣ Ｊ Ｓｅ ｎ ｇ ｅ ｒＣ Ｍ ａ ｇ 打 ｏＣ Ｌ Ｓｔ

ｑ池 ｅ ｎ ｓ Ｓ 民 Ｍ ｏ ｒｒ ｏ ｎ Ｎ Ａ Ｍ Ｃ Ｐ － 

－

ｉ Ｉ ｉ ｓ １
 ｌ ｉ ．

［ ， ， ， ， ，

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ  ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａｓｔ
－

Ｕ ｋｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａｒ ｅ  ｔａｒ ｔ ｒ ａｔ ｅ
－

ｒｅｓ ｉ ｓ ｔ ａｎｔ  ａ ｃ ｄ  ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａｔ ａ ｓ ｅ ｉ


，

Ｎ ＦＡＴｃ ｌ
，
ａｎ ｄ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ｏ ｎ ｎ ｒ ｅ ｃ ｅｐ ｏ ｒ ｐ ｏ ｓ ｉ ｌ ；
－

ｉ ｔ ｉ ｖｅ ｂ ｕ ｒｅｑｕ ｔ ｉ ｒｅ ｒｅ ｃ ｅ ｐ ｏ ｒａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｏ ｒｏ ｆ


 ｔ ： ｉ

Ｎ Ｆ ｋａｐ ｐ ａ Ｂ  ｌ ｉ
ｇａ
ｎ ｄ  ｆｂ ｒ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ
ｐ
ｔ ｉ ｏｎ ． Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ  Ｃ ｈｅ ｍ２ ０ ０ ６ ；
２８ １ ： １ ２ ７ ４ －

８５ 

．

４７ Ｍ ｏ ｈ ａ ｍ ｅ ｄＳ Ｇ  Ｓ ｕ ｇ ｙ ａ ｍ ａ  Ｅ  Ｓ ｈ ｎ ｏ ｄ ａ  Ｋ  Ｔａ ｋ  Ｈ  Ｈ ｏ ｕ ｎ ｏ ｋ  Ｈ Ａ ｂｄｅ Ａｚ ｚ ＨＯ
－

ｉ
［ ］  ，
ｉ
，
ｉ
，
ｉ
， ，  ｌ ｉ


，

Ｍ ａ ｍ ｙ ａ ｍ ａ Ｍ ，
Ｋｏ ｂ ａ ｙａ ｓ ｈ Ｍ ｉ
，
Ｏ ｇ ａ ｗ ａＨ Ｍ ，
ｉ
ｙ ａｈ ａ ｒ ａＴ ． Ｉ ｎ ｔ ；
ｅｒ ｌ ｅ ｕ ｋｉｎ
－

１ ０ ｎ ｈ ｉ ｉ ｂ ｉ ｔｓ



民 Ａ ＮＫ Ｌ －

ｍ ｅｄ ｉ ａ ｔｅ ｄｅ ｘ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏ 打ｏ ｆ  Ｎ ＦＡＴｃ ｌ  ｎｐ ａ ｒ
ｔ  ｖ ａ  ｓ ｕｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ 打  ｏ ｆ
ｉ ｉ ｉ  ｃ
－

Ｆ ｏ ｓａ ｎ ｄｃ 

－

Ｊ ｕ ｎ ｎ  ＲＡ ｉ Ｗ２ ６４ ． ７ｃ ｅ ｌ ｌ ｓａ ｎ ｄ  ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ  ｂ ｏ ｎ ｅ  ｍ ａ ｒｒ ｏ ｗ  ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ  ． Ｂ ｏ ｎ ｅ２ ０ ０ ７ ；

４ １ ： ５ ９２
－

６０２ 

．

［
４８
］
Ｌ ｎＳ Ｊ ｉ
，
Ｃ ｈ ｅ ｎＹ Ｉ ｖ
，  Ｋ ｕ ｏＭ 乂Ｌ ｉ Ｃ Ｉ ＾
，
Ｌ ｕ  Ｈ Ｋ  Ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｍ ｅ 打 ｔ  ｏ ｆ  ｇｐ ． ｌ ３ ０ｃ
ｙｔｏ ｋ ｎ ｅ ｉ 

ｓ

ｏ ｎ ｃ ｏ ｓｔ ａｔ ｎ ｉ Ｍ ａ ｎ ｄ Ｌ Ｉ
－

６ ｎｇ ｎ ｇ ｖ ａ ｉ ｉ ｉ ｌ ｃ ｒ ｅ ｖ ｉ ｃｕ ｌ ａ ｒｆ
ｌｕ ｉ ｄｏ ｆｐ ａｔ ｉ ｅ 打 ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ 

ｃ

ｐ ｅｒｉ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ｉ ｔ ｉ ｓ ． Ｃ ｙ ｔ ｏ ｋ ｎ ｅ２ ０ ０ ｉ ５ ；
３ ０ １ ６ ０ ：
－

７ 

．

［
４９
］ 
Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ  Ｋ ｉ
，
Ｔａ ｋ ａ ｓ ｈ 化 ａ  Ｓ ，
Ｎ ａ ｇａ ｉ  Ａ  Ｔａ ｋ
ｇ ａｗ ａＭ ，
ｉ ．  Ｍ ｙ ｏ ｕｋ ａ  Ｆ ｉ
，
Ｋｕｒ ｉ ｈ ａ ｒａ Ｈ 

，

Ｍｕ ｙ ａ ｍ ａＹ 
Ａ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｍ ｅ ｎｔ ｏ ｆ ｎｔ ｅ ｒ ６ｉ ｎ ｈ ｅ
＇

ｅｕｋｍ
ａ
ｐ ａｔｈ ｏ ｇ ｅ 打 ｅ ｓ ｏ ｆ ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔａ
－

ｉ ＊ ｉ ｌ ｌ； ｉ ｓ ｉ 

ｌ

ｄ ｉ ｓ ｅａｓｅ ． Ｊ Ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎｔｏ ｉ ｌ １ ９ ９ ４ ６ ５ １ ４ ７ ；

：
－

５ ３ 

．

［
５ ０
］ 
Ｇｅ ｉ ｖｅｌ ｉ ｓ Ｍ ，
ｎｅ ｒＤ Ｗ
Ｔｕ ｒ ，
Ｐ ｅ ｄｅ ｒ ｓ ｏ ｎ Ｅ Ｄ ，
Ｌ ａ ｍ ｂ ｅ ｒｔ ｓ  Ｂ Ｌ ． Ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔｓ ｏ ｆ



ｉ ｎ ｔｅｒ ｅ ｕｋ ｎ ｌ ｉ
－

６ｉ ｎ
ｇ
ｉ 打
ｇ ｉ ｖ ａ  ｃ ｒ ｅ ｖ ｃ ｕ ａ ｒ  ｆ ｌ ｕ ｉ ｄ  ｆｒ ｏ ｍ  ａ ｄｕ ｌ ｉ ｌ ｌ ｔ ｓｗ ｉ ｔ ｈ ｄ ｅ ｓ ｒ ｕ ｃ ｔ ｖ ｅｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｈ ｔ ｉ ｉ 

ｌ

ｄ ｉ ｓ ｅ ａｓ ｅ ． Ｊ Ｐｅｒ ｏｄｏｎｔｏ ｉ ｌ １ ９ ９ ３ ；

６４ ： ９ ８ ０ －

３ 

．

［
５ １
］
民ｅ ｉ ｓ Ｃ ，
ＡＶ Ｄ Ａ Ｃ Ｇ ｕ 
，
ｉ ｍ ａｒａｅ ｓ  Ｊ Ｔ Ｔｕ ｎ ａ Ｄ Ｂ ｒ ａ ｇ ａ
， 

， 
 ＡＣ ， 
Ｐａｃ ｈｅ ｃ ｏ  ＪＪ， Ａ ｒｏ ｓ ａ  ＦＡ ，
Ｓ ａ ａｚ ａ ｒ

 ｌ

Ｆ ，
Ｃ ａ ｒ ｄ ｏ ｓ ｏ Ｅ Ｍ Ｃ ． ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａｌ  ｉ ｍ ｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ  ｆｏ ｌ ｌ ｏ ｗ ｉｎ
ｇ ｔ ｈ ｅ ｒ ａｐ ｙ
 ｆｏ ｒ
ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎｔ ｉ ｔ ｉ ｓ 

：

Ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ａｔ ｏ ｎｗ ｉ ｉ ｉ ｔ ｈａ ｄ ｅ ｃ ｒｅ ａ ｓ ｅ ｎＩ Ｌ ｉ

－

Ｉ ａ 打 ｄＩ Ｌ
－

６ ．  Ｅｘｐ Ｔ ｈ ｅ ｒ  Ｍｅｄ  ２０ １ ４ ８ ；
： ３ ２３ －

３ ２７ 

．

［
５
马  Ｔｅ ｔ ｓ ｕ ｏＫ ，
Ｓ ａｔｏ ｓ ｈ ｉ Ｉ
，
Ｄａ ｉ ｓ ｕ ｋｅ Ｋ ，
Ａｎｒ Ｋ Ａ ｉ 
， 
ｔｓ ｕ ｓｈ ｉ Ｓ ，
Ｉ ｃｈｉ ｅ ｉ  Ｎ Ａｋ ，
ｉ ｒａ Ｍ Ｋ ，
ｉ
ｙｏ ｓｈ ｉ  Ｎ 

，

Ｈ ｒｏ ｍ ａ ｓ ａＹＩ 打 ｅｒ ｅ ｕｋｉ 打 ６ｒｅ ｃ ｅ ｐ ｏ ｒ ｎ ｈ 化 ｏ ｏｃ ｚ ｕ ｍ ａ ｂａ ｍ ｅ ｏ ｒ ａｔ ｅ ｓ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ ｌ

ｐｅ
－

ｉ ｔ ｌ １； ｉ ｉ ｔ ｒｔ ｉ ｌ ｉ ｌ ｉ ｒ ｉ

ｎ ｆ ａ ｍ ｍ ａｔ ｏ ｎ ｎ ａｔ ｅ ｎ ｋ ｗ Ｕｈｒｈ ｅ ｕ ｍ ａ ｏ ｄ  ａ ｒ ｔｈ ｒ ｔ ｓａ ｎ ｄ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄｏ ｎ ｔ ｔ ｓａ ｓ ｗｅ ａ ｓ



ｐ ｐ
ｉ ｌ ｉ ｉ ｉ ｔ； ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ ｌ ｌ

ｔ ｕ ｍ ｏ ｒｎ ｅ ｃ ｒｏ ｓ ｉ ｓ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ｎ ｈ ｂ ｉ ｉ ｉ ｔｏ ｒ ｓ ． Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄＥｘ
ｐｅｒ
ｉ ｍ ｅ ｎｔ ａ ｌ  Ｄ ｅ ｎｔ ａ  Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ

 ｌ

２０ １ ５ ；
１ ： １ １ 

．

Ｏ Ｂｒ Ａ Ｇ ｕｂｒ ｙ ｏ ｒ ｓ  ＲＬ Ｍａｎｏ Ｓ Ｔ ＡＴ Ｓ  ａ ｃ
＇

口３ ］ 
ｉ ｅ ｎＣ ，
ｊ
ｉ Ｉ
，
Ｌ ｉ ｎＳ Ｃ ，
Ｓａ ｌ
，
ｌ ａ
ｇａｓ
Ｓ Ｃ ． ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｏ ｎ ｎ

 ｉ ｉ

ｓｔｒｏ ｍａ ｌ ／ ｏ ｓｔｅ ｏ ｂ ａ ｓｔ ｃｃ ｅ ｌ ｉ ｌ ｌ ｓｉ ｓ ｒ ｅ

ｑ
ｕ ｉ ｒｅ ｄ  ｆｂ ｒ  ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｏ 打  ｏ ｆ ｉ ｉ  ｔ ｈ ｅｒｅ ｃ ｅ ｐ ｏ ｒ １：  ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔｏ ｒｏ ｆ  ＮＦ 

－

ｋ ａ ｐ ｐ ａ Ｂ ｌ ｉ
ｇａｎ
ｄａ打 ｄ ｓ ｔ ｍ ｕ ａ ｔ ｏ 打 ｏ ｆ ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｏ ｇ ｅ 打 ｅ ｓ ｉ ｌ ｉ  ｌ ｉ ｓｂ
ｙｇｐ
ｌ ３ ０
－

ｕｔ ｉ ｌ ｉ ｚ 打 ｉ
ｇ
ｃ
ｙｔ ｏ ｋ ｎ ｅ ｓ

 ｉ

ｄ化 Ｄ ３ｏ ｒ Ｂ
ｏ ｒ 打ｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｎ ｂ ｕ ｔｎ ｏ ｔ ｌ ２５
ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙｖ ａ ｍ ｎ
ｐ ａ ｒ ａ ｈ ｙ ｒ ｏ ｄ  ｈ ｏ ｒｍ ｏ ｎ ｅ Ｊ ｏ ｌ
ｔ
－
－

ｉ ｌ ｉ １ ｉ ｔ ｉ ｉ ． ｉ
，


Ｃ ｈ ｅ ｍ１ ９ ９ ９ ２ ７ ４  ９ ３ ０ ： ： １ １
－

８ 

．

［
５ ４
］ 
Ｙｏ ｓ ｈ ｋ ａ ｋ ｅ  Ｆ ，  Ｉｔ ｏ ｈＳ ，
Ｎ ａｒ ｉ ｔ ａ Ｈ ， Ｉ ｓ ｈ 化ａ ｒ ａ Ｋ Ｅｂ ，
ｉ ｓ ｕＳ ． Ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ｕｋ ｎ ｉ
－

６ｄ ｒ ｅ ｃｔ
ｙ ｎ ｈ ｉ ｌ ｉ 化 ｉ ｔｓ



ｏ ｓｔ ｅ ｏｃ ａｓｔ  ｄ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ａｔｉ ｏ ｎ  ｂ ｙ ｕ ｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｎ ｇ  ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｏ ｒ  ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ  Ｎ Ｆ ｋ ａｐ ｐ ａ Ｂ

 －

ｌ ｉ ｔｉ ｓ ｉ ｔ ； ｉ

ｓ ｉ
ｇｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇｐ ａｔｈｗ ａ ｙ ｓ ． Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ  Ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ８ ；
２ ８ ３ １ ：
１ ５ ３ ５
－

４０ 

．

６ ９


 山 东 大 学 樽 ｄｒ 学 位 论 文
 



５ ５ Ａ ｘ ｍ ａ ｎ ｎ民 Ｂ ｏ ｈｍ  Ｃ Ｋ ｒ ｏ ｎｋ ｅ  Ｇ Ｚｗｅｒ ｉ ｎ ａＪ Ｓ ｍ ｏ ｅ ｎＪ ｌ Ｓ ｃ ｈ ｅ ｔＧ Ｉ ｎ Ｗ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ 打ｏ ｆ




．

［ ］ ， ， ， ， ，

６Ｉ ｅ ｃ ｅ 化 ｒ ｄ ｋ 巧  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ
’

ｎｔ ｅ ｒ ｅｕｋ ｏ ｎｉ ｎｖ ｉ ｔ ｒ ｏａ ｎ ｄｉ ｎｖ ｖｏ

ｎ ｙ ｂ ｏ ｃ ｓ ｏ ｓ ｅｏｃ
－

ｒｅｃｔ ａ
ｌ
ｐ
ｉ ｉ ｉ ｌ ｌ ｔ ； ｌ ｉ ｉ 

．

Ａｒ ｔ ｈｒ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｒｈ ｅ ｕ ｍ ２ ０ ０ ９ ；
６０ ： ２ ７４ ７ －

５ ６ 

．

Ｔａ ｍ ｕ ｒ ａ Ｕ ｄ ａ ＾ ａ ｗ ａ Ｎ Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ Ｎ Ｍ Ｃ Ｔａ ｎ ａ ｋ ａ  Ｓ Ｙａ ｍ ａ ｄ ａ Ｙ Ｋ ｏ Ｗ ｈａ
＇
＊

５ ６ ＩＴ
ｙａｕ ｉ ａ ｓ 

ａ
  ｉ ｉ  ｉ ｉ
［ ］  ，  ， ，  ， ， ，

Ｙ Ｏ ｈ ｓ ｕ ｇ Ｙ Ｋｕ ｍ ａｋ  Ｋ  Ｔａ ａ  Ｔ
．

，
ｉ  ，
ｉ
ｇ ， ，
ｅ ｔａ ｌ ． Ｓ ｏ ｕ ｂ ｌ ｌ ｅｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｅ ｕ ｋ ｌ ｉ ｎ ６ｒ ｅ ｃ ｅｐ
－

ｔ ｘｎ  ｔ ｒ ｉ
ｇｇ ｅ ｒｓ



ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ 化 ｒｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｂ ｙ

ｉ ｎ ｔｅ ｒ ｌ ｅ ｕ ｋ ｎ６ ｉ ．  Ｐ ｒ ｏ ｃＮ ａｔ ｌ Ａ ｃ ａ ｄＳ ｃ Ｕ Ｓ Ａ  ｉ   １ ９９３ ；
９ ０ １ ： １ ９２４


－

８ 

．

［
５７
］ 
Ｌ ｉ  ＹＰ Ｃ ｈ ｅ 打Ｗ ， ，
Ｌ ｉ ａｎ
ｇ 乂Ｌ ｉ  Ｅ ： Ｓ ｔ ： ａ ｓ ｈ ｅ ｎ ｋ ｏ ＲＡ ｌ ；

ｐ６ ｉ
－

ｄｅｆ ｃ ｉ ｉ ｅ ｎ ｔｍ ｉ ｃ ｅｅ ｘ ｈ 化 ｉ ｔｓ ｅｖｅ ｒｅ




ｏ ｓｂ ｏ
ｐ ｅ ｒｏ ｓ
ｔ ｉ ｓｄｕ ｅｔ ｏｌ ｏ ｓ ｓｏ ｆｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａｓｔ
－

ｍｅｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｅ ｘ ｔｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ａｒａ ｃ ｄ ｌ ｉ ｉ ｆｉ ｃ ａｔ ｉ ｏｎ  ． Ｎａ 

ｔ

Ｇｅｎ ｅ ｔ１ ９９９ ２３ ；

： ４４７ －

５ １ 

．

口８ ］ 
Ｌ ｎ ｄ ｕ ｎ 呂 ｅ ｒＡ  Ｍ ａ ｃ Ｋ ａ ｙ Ｃ Ａ
ｉ
， ，
Ｅ ｋ 民ｙ －

ｌ ａｎ ｄｅｒ  Ｂ  Ａ ｎ ｄ ｅ ｒ ｓ ｓ ｏ ｎ Ｇ Ｍ ａ ｒ ｋｓ Ｓ Ｃ
， ， ，
Ｊｒ 

．

Ｈ ｈ ｅｍ ｎ ｄｂ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｙ  ｏ ｆ  ａ ｒｔ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｔａ ｃ ｄｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｈ ｓ ｅ（ ＴＲＡ Ｐ ）

ｙａ
ｒｅ ｓ
－

ｉ ｓ ｔｘ） ｃ ｉ ｓ ｔｒ ｉ ｉ ｓｔｒ １ ： ｉ ｓｔ ； ｉ



ａ ｎ ｄ  ｔ ａ ｒｔ ｒ ａ ｔ ｅ
－

ｒｅｓ ｉ ｓ ｔ ａｎｔａ ｃ ｉ ｄ  ａ ｄ ｅ ｎ ｏ ｓ ｎ ｅ  ｔ ｒ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ａ ｓ ｅ  （ Ｔ ｒ ＡＴ Ｐ ａ ｓ ｅ ）  ｎ ｂ 曰 ｎ ｅ ｉ ｉ ｔ ： ｉ
，
ｂｏｎｅ



ｍ ａｒｒｏ ｗａ ｎ ｄｓ ｐ ｅ ｅ ｎ  ｍ ｐ ｌ ： ｉ ｌ ｉ ｃ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｓ  ｆｏ ｒ  ｏ ｓ ｂ ｏ ｃ ａ 巧  ｏ ｎ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｙ  Ｂ ｏ ｎ ｅ  ｉ ． Ｍ ｉ ｎ ｅ ｒ １ ９ ９ ０ ； 

１ ０ 

：

１ ０９ －

１ ９ 

．

［
５９
］ 
Ｗ ｉ ｌ ｓ ｏ ｎＳ Ｒ Ｐ ｅ ，
ｔ ｅ ｒ ｓＣ ， Ｓ ａ ｆ ｔ ｉ
呂
Ｐ Ｂ ｒ ｏ ｍ ｍ ｅＤ  Ｃ ａ 化 巧 ｓ ｎＫ ａ ｃ ｔ ｖ ｋｙ
，
． ｉ ｉ
－

ｃ ｋ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ

ｏ ｎ ｅｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｔ ｏ ｎ ＪＢ ｏ Ｃ ｈ ｅ ｍ
ｇ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｏ ｎ  ａ ｎ  ｂ
ｄ
ｇ ｕ ａ ｏ ｎｏ ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ
ｒｅ ｔ ｆ ｔ ｔａ ｃｔ ｎｒ ｎ ｔ 

ｐ
ｌ ｉ ｌ ｉ ｉ ｉ ｉ ． ｉ ｌ

２００９ ２ ８４ ２ ５ ８４ ９２
－

： 

．
；

［
６０
］ 
Ｙｕ Ｘ 
，
Ｈ ｕ ａｎ ｇ 乂Ｃ ｏ 
ｌ ｌ ｉ ｎ －

Ｏ ｓ ｄ ｏ ｂ ｙ Ｏ ｓ ｄ ｏ ｂ ｙＰ Ｓ ｔ ｒｏ ｍ ａ ． ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ
－

ｄ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｉ
－

１
 巧ＤＦ


－

１
）  ｒｅ ｃ ｒｕ ｉ ｔｓ ｏ ｓｂ ｏ ｃ ａ ｓｔ ｌ
ｐ ｒｅ ｃ ｕ ｒ ｓ ｏ ｒｓ ｂ ｙ  ｉ ｎ ｄｕ ｃ ｎ ｇ ｃ ｈ ｅｍ ｏ ｉ ｔ ｉ ａｘｉ ｓ ， ｍ ａ ｔｒ ｉ 

ｘ

ｍｅ ｌ： ａ ｎ 〇ｐ ｒｏ ｔ ； ｅ ｍ ａ ｓ ｅ ９ （ Ｍ Ｍ Ｐ ９ ）  ａ ｃ ｔ ｖ － －

ｉ ｉ ｔ
ｙ ， 
ａ ｎ ｄｃ ｏ ｌ ｌ ａ
ｇ ｅ ｎ  Ｉｒ ａ ｎ ｓ ｍ ｉ
ｇ ｒ ａｔ ｉ ｏ打 ． Ｊ Ｂ ｏｎｅ Ｍ  ｉ ｎｅｒ



民ｅ ｓ ２００３ ；
１ ８ １ ４ ０ ４
：
－

１ ８ 

．

［
６ １
］ 
Ｐｏｎｄ ｅ ｌ  Ｍ Ｃ ａ ． ｌ ｃ ｋｏ ｎ ｎａ ｎ ｄｃ ａ ｉ ｌ ｃ ｉ ｔ ｏ ｎ ｎｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｓ ｉ ； ｂ ｏ ｎ ｅ  ａｎ ｄ  ｂ ｅ ｙ ｏ ｎ ｄ ． Ｉ ｎｔＪＥｘ
ｐ
Ｐａ ｔ ｌｉ ｏ ｌ

２０００ ８ ；
１ ： ４０ ５
－

２２ 

．

［
６ 刮  Ｃ ｒ ｏ ｔ  ＴＮ ｉ
，
Ｆ ａ ｎ ｎ ｅ ｒｙＭ
ｌ
，
Ｗａ ｌ ｓ ｈ ＮＣ ，
Ｆ ｌ ｅｍ ｉ ｎ
ｇＪ Ｄ ，
Ｇｏ ｌ ｄ ｒ ｎ ｇＳ ｉ 艮 ，
Ｍ ｃ Ｈ ｕ ｇｈＫ Ｒ



Ｎ ＦＡＴｃ  ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ  ｌ ： ｈｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎｂ ｅ ｔａ ３  ｉ ｎｔｅ ｇ ｒ ｎ ｐ ｒｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ｒ ｉ  ｉ ｎｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ


 １； ｌ

ｄ ｉ 游ｒｅｎ ｔｉ ａｔ ｏ ｎ ｉ ．  Ｇｅｎｅ  ２００ ６ ３ ７２ ；

： ９ ２ －

１ ０２ 

．

［
６
习Ｋｗ ａ ｋ 册 
，
Ｌ ｅ ｅＢ Ｋ ，
Ｏ ｈＪ ，
Ｙｅ ｏ ｎ Ｊ Ｔ；  Ｃ ｈ ｏ ｉ Ｓ Ｗ Ｃ ｈｏ ＨＪ Ｌ ｅｅ Ｍ Ｓ
，

，

， 
Ｋ ｉ ｍ 化 
Ｂ ａ ｅＪ Ｍ 

，

Ｋ ｉ ｍＳ Ｈ Ｋ ，
ｉ ｍＨ Ｓ ． Ｉｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｏ  ｓｔ ｅ ｏ ｃ ａｓ ｔｄ ｌ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｏ ｎ ａ ｎ ｄｂ ｏ ｎ ｅｒ ｅ ｓ ｏ ｒ ｔ ｏ ｎｂ
ｉ
ｐ
ｉ


ｙ

ｈ ｄ ｏ ｗ ｎ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ＲＡＮ Ｋ Ｌ ｃ Ｆ ｏ ｓ  ａ ｎ ｄ  Ｎ ＦＡＴｃ
＊

ｈｒｏ ｕ ｎｄ ｕ ｃ ｅｄ
ｒｏ ｔｅ 打 ｏ ｎｅ ｅ
ｇｕ ａ
－ － －

ｔ ｔ ｉ 

ｌ
ｇ
ｉ ｌ ｉ
，

ｅｘ
ｐｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏｎ ．  Ｂ ｏ ｎ ｅ２ ０ １ ０ ４６ ；
： ７ ２ ４
－

３ １ 

．

［
６ ４ ］ Ｋ ｉ ｓ ｈ ｍ ｏ ｔ ｏＴｉ
， 
Ａｋ ｉ ｒ ａ Ｓ 
， 
Ｔａ ｇ ａ Ｔ  ． Ｉ Ｌ －

６ｒ ｅ ｃ ｅ
ｐｔ ｏ ｒ ａｎ
ｄｍ ｅ ｃ ｈ ａｎ  ｉ ｓ ｍｏ ｆ  ｓ ｉ
ｇｎ ａ
ｌ ｔ ｒａｎｓ ｄｕｃｔ ｏｎ ｉ 

．

Ｉ ｎｔ  ＪＩｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｐ ｈ ａ ｒｍ ａ ｃ ｏ １ ９ ９ ２ ｌ
； 
１ ４ ： ４ ３ １
－

８ 

．

［
６５
］ 
Ｈｅｎ ｔｔ ｉ ｎ ｅ 打Ｔ ，
Ｌ ｅ ｖ ｙＤ Ｅ Ｓ ． ｉ ｌ ｖ ｅ 打ｎ ｏ ｎ ｅ 打０ ｉ
，
Ｈ ｕ ｒｍ ｅ  Ｍ ． Ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｔ ｏ ｎｏ ｆ ｈ ｅｓ ｉ ｉ ｌ ；
ｉ
ｇｎ ａ


ｌ

ａｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｅ ｒａ ｎ ｄｔ ｒ ａ 打 ｓ ｃ ｒｉ Ｓ ＴＡＴ ）  ｓ ｇ ｎ ａ ｎ ｇ  ｐ ａｔ ｈ ｗ ａ ｙ  打 ａ  ｐ ｒ ｍ ａ ｒ ｙ Ｔ  ｃ ｅ

ｐｔ ｏ 打
ｔｒ ｉ ｉ ｌ ｉ ｉ ｉ ｌ ｌ


（

ｒｅ ｓ ｏ打ｓｅ Ｃｒ ｃａ ｏ ｌ ｅ  ｆｏ ｒ  Ｉ Ｌ ６ ＪＩｍ ｍ ｕ ｎ ｏ １ ９ ９ ５ ５ ５ ４ ５ ８ ２ ７
－
－

 ｔ ｒ  １
ｐ ． ｉ ｉ ｌ ． ｌ ： 

．

［
６６
］ 
Ｈ化 ｉ  Ｍ Ｎ ａｋ ａ ，
ｊ
ｉ ｍ ａＫ ，
Ｈ ｉ ｒ ａ 打 ０ Ｔ ． Ｉ Ｌ
－

６ｃ
ｙ ｏ ｋ ｎ ｅ  ｆａ
ｔ ｍ ｉ ｉ ｌ
ｙａ ｎ ｄｓ ｇｎ ａ ｉ ｌ ｔｒ ａ 打 ｓ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ

 ：

ｍ ｏ ｄｅ ｌ  ｏｆ  １ ； ｈ ｅ  ｃ ｙｔ ｏ ｋ ｎ ｅ  ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｉ ． Ｊ Ｍｏ Ｍｅｄ ｌ 
（
Ｂ ｅｒ ｌ
）
１ ９９６ ＾４ ： １
－

１ ２ 

．

６７ Ｗｏ ｎ ｇ  Ｂ 民 Ｂ ｅ ｓ ｓ ｅ ｒＤ Ｋ ｉ ｍＮ Ａ ｒ ｒ ｏ ｎ  Ｊ Ｒ  Ｖｏ ｌ ｏ ｇｏｄ ｓ ｋ ａ ａ  Ｍ  Ｈ ａ ｎ ａ ｆｂ ｓ ａ  Ｈ  Ｃ ｈ ｏ

ｉ ｉ  Ｙ



．

， ， ，
［ ］ ， ， ：

Ｔ ＲＡ Ｎ Ｃ Ｅ ， 
ａ  ＴＮ Ｆ  ｆａ ｒ ｒ ｄ ｌ
ｙ ｍｅ ｍ ｂ ｅｒ
 ，
ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｅ ｓ Ａｋ ｔ／ Ｐ ＫＢ  ｔｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ  ａ  ｓ ｉ
ｇｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇｃ ｏ ｍ
ｐ
ｌ ｅｘ



ｉ ｎ ｖ ｏ ｖ ｎｇＴ ＲＡ Ｆ ６ａ ｎ ｄｃ

ｌ ｉ
－

Ｓ ｒｃ ．  Ｍ ｏ Ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ １ ９ ９ ９ ；
４ １ ０ ４ ： １
－

９ 

．

［
６ ８ ］  ＩＣ ｏ ｂ ａ ｙ ａ ｓ ｈ ｉ  Ｎ Ｋａｄ ， 
ｃ ｍ ｏＹ ， 
Ｎａ ｉ ｔ ｏ  Ａ Ｍ ａｔ ｓ ｕ ｍ ｏ ， 
ｔ ｏＫ ．  Ｙ ａ ｍ ａ ｍ ｏ ｔ ｏ Ｔ Ｔａ ｎ ａ ｋ ａ 
， 
 Ｓ ， 
Ｉ 打 ｏ ｕ ｅＪ 

．

Ｓｅ
ｇｒ ｅ ｇ ａ
ｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  Ｔ ＲＡ Ｆ ６
－

ｍ ｅ ｄ ａｔ ｅ ｄｓ 呂 ｎ ａ ｉ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇｐ ａ ｔｈ ｗ ａ ｙ ｓｃ ａｒ ｆ ｅ ｓ ｌ ｉ ｉ  ｉ ｔｓ ｒｏ ｌ ｅ  ｉ 


ｎ

ｏ ｓｔｅ ｏｃ ｌ ａｓ ｏｇｅｎ ｅ ｓ １ ； ｉ ｓ ．  Ｅ Ｍ Ｂ Ｏ Ｊ  ２００ １

 ；
２ ０ １ ２ ７ ： １
－

８０ 

．

７０


 山 东 大学博 ：ｆ ： 学位论文
 



［
６９
］ 
Ｌ ｏ ｍ ａ ｇ ａ  ＭＡ ，  Ｙｅ ｈ  Ｗ Ｃ ，  Ｓ ａ ｒ ｏ ｓ Ｉ Ｄ ｕ ｎ ｃ ａｎＧ Ｓ Ｆ ｕ ｒ ｏ ｎ ｇｅ ｒ Ｃ Ｈ ｏ Ａ  Ｍ ｏ ｒ ｏ ｎ ｙ Ｓ
ｉ
， ，
ｌ
， ， 

，

Ｃ ａｐ ｐ ａｒ ｅ ｌ ｌ ｉ  Ｃ ，
Ｖａ 打 Ｇ Ｋ ａ ｕ ｆｍ ａ 打 
，
 Ｓ ，
ｖ ａｎｄ ｅ ｒ  Ｈｅ ｉ ｄｅｎ  Ａ ，
Ｉｔ ｉ ｅ Ａ Ｗａ ｋ ｅ ｈ ａｍ Ａ Ｋ ｈ ｏ ｏ Ｗ
，

，



，

Ｓ ａ ｓ ａ ｋ Ｔ ｉ
，
Ｃ ａ ｏＺ ， Ｐ ｅ ｎ ｎ ｎ ｇｅ ｒＪ Ｍ ｉ
， Ｐ ａ ｇｅＣ Ｊ ｉ
，
Ｌ ａ ｃ 巧Ｄ Ｌ ，
Ｄ ｕｎ ｓ ｔ ａｎＣ Ｒ ，
Ｂｏｙ ｌ ｅ ＷＪ 

，

Ｇｏｅ ｄｄｅ ｌ  Ｄ Ｖ Ｍ ａ ｋ  ＴＷ 了 ＲＡ Ｆ ６  ｄ ｅ ｆ
ｉｃ
，
． ｉ ｅ打ｃ
ｙ ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓｉ 打ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ
ｐ
ｅ ｔｒｏ ｓ ｉ ｓａ打 ｄ  ｄ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｖ ｅ

 ｉ

ｉ ｎｔｅｒ ｅｕｋ ｎ ｌ ｉ
－

１
， 
ＣＤ４０ ， 
ａｎ ｄＬ Ｐ Ｓｓ
ｇｎａ ｉ ｌ ｉ ｎ
ｇ
．  Ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ Ｄ ｅ ｖ  １ ９９９ ； 
１ ３ １ ０ ：
１ ５
－

２４ 

．

［
７０
］ 
Ａ ｒｍ ｓ ｔｒ ｏ ｎ ｇ Ａ Ｐ ，
Ｔｏ ｍ ｅ ｔ ｓ ｋ ｏ  Ｍ Ｅ ，
Ｇ ｌ ａ ｃ ｃ ｕ ｍ Ｍ ，
Ｓ ｕｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｄＣ Ｉ ｌ ＾
，
Ｃ ｏ ｓ ｍ ａ ｎＤ ，
Ｄ ｏｕｇａ ｌ ｌ



ＷＣ ．  Ａ  Ｒ ＡＮ Ｋ ／ Ｔ 民 Ａ Ｆ ６ －

ｄｅ
ｐ ｅｎｄｅｎ
ｔ ｓ ｇｎ ｉ ａ ｌ  ｘ ａ 打 ｓ ｄ ｕ ｃ ｔ ｏ ｎｐ ａ ｔ ｈ ｗ ａ ｙ
Ｉ

ｉ ｉ ｓ ｅ ｓ ｓ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ  ｆｏ ｒ


ｉ

ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｃ ｙｔ ｏ ｓ ｋ ｅ ｅ ｔ ａ
ｔ ： ｌ ｌ ｌ ｏ ｒ
ｇ ａｎ ｚ
ａｔ ｏ ｎ ａｎ ｄ ｒ ｅ ｓ ｏ ｒ
ｐ ｖ ｅ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｏ ｎ
ｔ
ｉ ｉ ｉ ｉ ．  Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ Ｃ ｈ ｅ ｍ



２００２ ２ ７７ ；
：  ４４ ３ ４ ７ －

５ ６ 

．

［
７ Ｕ Ｒ ｏ ｗ ｌ ａｎ ｄＳ Ｌ ，  Ｔｒ ｅ ｍ ｂ ｌ ａ
ｙＭ Ｍ ．  Ｅ ｌ ｌ ｉ ｓ ｏ ｎＪ Ｍ ， Ｓ Ｕｍ ｚ  Ｌ Ｌ ，
Ｂ ｉ ｓｈ ｏ
ｐＧ
Ａ ，
Ｈｏｓ ｔ ； ａ
ｇ ｅ ｒＢ Ｓ
．  

Ａ

ｎ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅ ｃ ｈａ ｎ ｌ ｉ ｓ ｍ  ｆｏ ｒ  Ｔ Ｎ Ｆ 民 －

ａｓ ｓ ｏ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ  ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ６
ｉ
－

ｄｅ
ｐ
ｅ ｎ ｄ ｅ 打ｔ Ｃ Ｄ ４ ０ｓ ｉ
ｇｎ ａ
ｌ ｉ ｎ ｇ Ｊ

 ．

Ｉ ｍｍ ｕｎｏ ｌ ２ ００７ ； 
１ ７９ ： ４ ６４５ －

５３ 

．

［
７ ２ ］Ａ ｓ ａ ｇ ｉ ｒｉ  Ｍ  Ｔａ ｋ ａ ｙ ａ 打 ａ ｇ  Ｈ  Ｔ ｈ ｅ  ｍ ｏ ，
ｉ ． ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｓｔａ ｎ ｄ ｎ ｇ ｉ
ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅｏｃ ｌ ａ ｓｔ



ｄ ｉ 祗ｒｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｏ ｎ ｉ ．  Ｂ ｏ ｎ ｅ２ ０ ０ ７ ４ ０ ；
： ２ ５ １
－

６４ 

．

［
７
习Ｓ ａ ｋｕ ｒ ａ ｉ Ｈ Ｃ ｈ ，
ｉ ｂ ａＨ ，
Ｍ ｉ
ｙｏ ｓｈ
ｉ Ｈ ，
Ｓｕ
ｇ
ｉ ｔ ａＴ ，
Ｔｏ ｒ ｉ ｕｍ ｉ  Ｗ  ｋａｐ ｐ ａ Ｂ  ｋ ． Ｉ ｉ ｎａｓｅｓ



ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｒ ｙ ａｔ ｅ ｌ ｉＮ Ｆ ｋ ａ ｐｐ ａ 良 ｐ ６ ５ｓ ｕ ｂ ｕ ｎ
－

ｉ ｔ０ 打 ｓ ｅ ｒ 打 ｅ ５ ３ ６  ｉ ｎ  ｔｈ ｅ  ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｏ ｎｄ ｏ ｍ ａ ｎ
ｐ
 ｉ ｉ ｉ ｉ 

．

Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ  Ｃ ｈ ｅ ｍ１ ９ ９９ ２ ７４ ；
： ３ ０３ ５ ３ －

６ 

．

［
７４
］
Ｆ 化 ｎ ｚ ｏ ｓ ｏＧ ，
Ｃ ａｒ ｌ ｓ ｏ ｎＬ ， Ｘ ｉ ｎｇ

Ｌ ，
Ｐｏ ｌ
ｊ
ａ ｋＬ Ｓ ｈ ｏ ｒ ｅ ，
ｓ ＥＷ ，
Ｂ ｒ ｏ ｗ ｎ  ＫＤ ，
Ｌ ｅ ｏ ｎ ａｒｄ ｉ  Ａ 

，

Ｔｒ ａ ｎ  Ｔ Ｂ ｏ ｙ ｃ ｅ  Ｂ Ｆ ， ，
Ｓ ｉ ｅｂｅｎ ｌ ｉ ｓ ｔ Ｕ 民ｅｑｕ ． ｉ ｒｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ｆｏ ｒ   ＮＦ －

ｋａ
ｐｐ ａ Ｂ 打ｏ ｓ ｂ ｏ ｃ ｉ ｌ ａ ｓ ｔａｎ ｄＢ


－

ｃｅ ｌ ｌ  ｄ ｅ ｖ ｅ ｏ ｐｍ ｅ ｎｔ ｌ ．  Ｇ ｅ 打 ｅ ｓ Ｄ ｅ ｖ  １ ９９７ ；
１ １ ： ３ ４８２ －

９６ 

．

引Ｘ Ｌ Ｂ ｕｓｈｎｅ ＴＰ Ｃ ａ ｒ Ｔａ Ｚ Ｔｏ ｎ 山 Ｍ Ｕ Ｙｏ ｕ ｎ ｇ Ｂ ｏｙｃ ｅ

＊

［
７ ｉ ｎ ｇ 
ｌ ｌ 
，
ｌ ｓ ｏ ｎＩ ＾
，
ｉ 
，
ａｖ ｉ 
，
Ｓ ｉ ｅｂｅ打 ｌ ｉ ｓ ｔ ，

Ｆ ，



Ｂ Ｒ  Ｎ Ｆ ｋａ ｐ ｐ ａ 巨ｐ ５ －

０ａｎ ｄ
ｐ
５ ２ｅ ｘ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ  ｉ ｓ  ｎ ｏ ｔ  ｒ ｅ ｑ ｕ ｉ ｒ ｅ ｄ  ｆｂ ｒ  Ｒ ＡＮ Ｋ －

ｅｘ
ｐ
ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｎｇ



ｏ ｓ ｂ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ
 ｐｒｏ ｇｅ 打
ｉ ｔ ｏ ｒ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｏ ｎ  ｂ ｕ ｔ  ｉ ｉ ｓｅ ｓ ｓ ｅ ｎｔ ｉ ａ ｌ  ｆｏ ｒ  Ｒ Ａ ＮＫ －

 ａ打 ｄ巧 ｔ ｏ ｋ ｎ ｅ ｉ
－

ｍ ｅｄ ｉ ａｔ ｅ ｄ



ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａｓ ｏ ｇｅｎｅ ｓ ｌ １ ：
ｉ ｓ Ｊ ． Ｂ ｏ ｎ ｅＭ ｎ ｅ ｒ 民 ｅ ｓ ２ ０ ０ ２ ｉ 
； 
１ ７ １ ２ ０ ０
：
－

１ ０ 

．

［
７６
］
Ｌｅ ｅ  Ｋ Ｃｈ ，
ｉ ｍ
ｇ
Ｙ Ｈ Ａｈｎ Ｈ Ｋ ， 

，
ｉ ｍ  Ｈ Ｒｈ ｏ ，
Ｊ
，
Ｊｅｏｎ
ｇ 
Ｄ ．  Ｓｅ ｌ ｅ ｃｔｉ ｖ ｅ 民 ｅ ｇｕ ｌ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆｉ  ＭＡ Ｐ Ｋ



Ｓ ｉ
ｇｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ  Ｍ ｅ ｄ ａ ｔ ｅ ｓ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ  Ｏ ｓ 化 ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  Ｄ
ｉ
－

ｌ ｉ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  Ｉ 打 ｔ  Ｊ  Ｂ ． ｉ ｏ ｌ Ｓ ｃ 

ｉ

２０ １ ６ ；
１ ２ ： ２３ ５ －

４５ 

．

［
７７
］ 
Ｌ ｅ ｅＳ Ｅ ，
Ｗｏ ｏ  Ｋ Ｍ  Ｋ ，
ｉ ｍＳ 乂Ｋ ｉ ｍ  ＨＭ ， Ｋ ｗ ａ ｃ ｋＫ ，
Ｌ ｅ ｅ Ｚ Ｈ ，
Ｋ ｉ ｍ Ｈ 比Ｔｈ ｅ



ｐ
ｈ ｏ ｓｐ ｈ ａｔ ｄ ｙ ｉ ｌ ｉ ｎｏ ｓ ｋｏ ｌ ３ －

ｋ ｎａｓｅ ｉ
， ｐ
３ ８ ，
ａｎｄ  ｅ ｘｔ ｒａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ａ ｒ ｓ ｇ ｎ ａ
ｌ ｉ ｌ
－

ｒｅ
ｇ ｕ ａｔ ｅ ｄ  ｋ ｎ 化 ｅ

ｌ ｉ

ｐ ａｔ ｈ ｗａ
ｙ ｓａ ｒ ｅｉ 打 ｖ ｏ ｖ ｅ ｄ ｎｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔｄ
ｌ ｉ ｌ ｉ ｆｅ ｒｅ ｎｔ ａ ｔ ｏ 打 ｉ ｉ ． 区 ｏ ｎ ｅ２ ０ ０ ２ ；
３ ０ ７ ： １
－

７ 

．

［
７８
］ Ｃ ａ ｎ ｇ
ｈ Ｆ ， Ｓ ｔ ｅ ｅ ｌ ｍ ａ 打 Ｌ Ｓ ，
Ｓｈｅ ｌ ｔ ｏ ｎＪ Ｇ Ｌ ｅ ｅ 灯 Ｎ ａｖ ｏ，

，
ｌ ａ ｎ ｉ ｃＰ Ｍ Ｂ ， 
ｌ ａｌ ｏ ｃ ｋ ＷＬ ， 
Ｆ ｒａ ｎ ｋ ｌ ｉ 

ｎ

民 ，
Ｍ ｃ Ｃ ｕ ｂ ｒｅ ｙＪＡ ． 民ｅｇｕ ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆｃ ｅ ｌ ｌ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ
ｐ ｒｏ ｇｒｅ ｓ ｓ ｏ
ｎａｎ ｄａｐ ｏ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ； ｉ ｓ ｂ ｙｔ ｈ ｅ



民 ａｓ／ Ｒ ａ ｆ Ｍ Ｅ Ｋ／Ｅ ＲＫ ／
ｐ
ａｔ ｈ ｗ ａ
ｙ （
Ｒｅｖ ｉ ｅｗ
）
． Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｏ ｎｃ ｏ ｌ ２００３ ＾ ２ ： ４６９ －

８０ 

．

［
７９
］ 
Ｍｏ ｎ ｊ
ｅＰ ， 
Ｈｅｒ
ａ ａｎｄ ｅ ｚ Ｌ ｏ ｓ ａ －

 Ｊ ， 
Ｌｙ ｏ ｎ ｓ  Ｒ Ｊ ， 
Ｃ ａ ｓ ｔｅ ｌ ｌ ｏ ｎ ｅ  ＭＤ ， 
Ｇ ｕｔｋ ｉ ｎ ｄＪ Ｓ ．  Ｒ ｅ ｇｕ ｌ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ
ｉ 


ｔ ｈ ｅｔｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｔ ｏｎａ ａ ｃｔｉ ｖ ｔ

ｙｏ ｆ ｃ
－

Ｆ ｏ ｓ  ｂ ｙ  Ｅ ＲＸ  Ａ  ｎｏ ｖ ｅ ｒ ｏ ｅ  ｆｏ ｒ  ｔ ｈ ｅ ｒｏ ｉ ｓ ｏ ｍ ｅ ｒａ ｓ ｅ


ｐ ｙ
ｉ ｌ ｉ ｌ ｌ
ｐ
ｉ  ． ｌ ｌ


Ｐ ＩＮ ｌ ． Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ  Ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ５ ；
２８０ ： ３ ５ ０８ １
－

４ 

．

Ｈｏ ｏ ｋｅ ｚ ａｋａＨ Ｓ ａｋａ Ｅ Ｋ ａｎａｏ ｋａ Ｋ Ｓ ａ ｋｏＫ Ｍａ ｕ ｏＫ Ｈ Ｙｏ ｓ ｈ ｄ ａＮ

＊

８ ０ ｔ ｉ  ｔ ｓ ＩＣ ｉ ｔａ ｕ ｒ ａ ｉ
［ ］  ， ， ， ， ， ， 

，

Ｎ ａ ｋ ａ ｙ ａ ｍ ａＫ  Ｕ ０ ． １ ２ ６ａ ｎ ｄＰ Ｄ ９ ８ ０ ５ ９ ，  ｐ ｓ ｅｃ ｉ ｆ ｃ ｎｈ ｂ

ｉ ｉ ｉ ｉ ｔ ｏ ｒ ｓ ｏ ｆ Ｍ ＥＫ ， ａｃ ｃ ｅ ｌ ｅ ｒａｔ ｅ



祇 Ｒ ＡＷ ２ ６ ４ ｋｅ Ｂ Ｃ ｈｅｍ
＊

ｄ ｉ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ａｔ ｉ ｏ ｉｉ  ｏｆ  ． ７ｃ ｅ ｌ ｌ ｓｉ ｎ ｔ： ｏｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｌ； ｌ

－

ｌ ｉ  ｃｅｌ ｌ ｓ ． Ｊ ｉ ｏ ｌ   ２００２ ２７ ７ ；



：

４ ７３ ６６ －

７２ 

．

［
８ １
］ 
Ｈ ｉ ｍｎ ｏＴ ， 
Ｎ ａｋａ ｊ
ｉ ｍ ａＫ ，
Ｈ化 Ｍ ｉ  ． Ｓ ｉ
ｇｎａ
ｌ ｉ ｎｇｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｓ  ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｈ  ｇｐ
ｇ
ｌ ３ ０ ：  ａｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｏ 

ｆ

化ｅ Ｃ ｙｔ ｏ ｋ ｎ ｅ  Ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ  Ｆ ａ ｃｔ
ｏ 民ｅ ｖ
？

ｃ
ｙｔ ｏ ｋ ｎ ｅ  巧 ｓ ｔ ｅ ｍ ９９７ ８ ２４ ５２
－

ｉ ．  ｉ ｉ Ｉ ：
１ 

．
；

巧 叫Ｎ ｉ ｓ ｈ ｎ ａＨ ｉ
，
Ｗａ ｄ ａ  Ｔ ，
Ｋａ ｔ ａ ｄ ａ Ｔ ． Ｐｈ ｙ ｓ ｉ ｏ ｌ ｏｇ ｃａ ｉ ｌ ｒｏ ｌ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｓ Ａ Ｐ Ｋ ／ＪＮ Ｋ  ｓ ｉ
ｇｎ
ａ ｌ ｉ ｎ


ｇ

ｐａ
ｔ ｈｗａ
ｙ
． Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ４ ； 
１ ３ ６ １ ２ ３ ：
－

６ 

．

７１


 山 东 大学博±学位论文
 



［
８３
］  Ｈｃ ｅ ｄ ａ  Ｆ ，
Ｎ ｉ ｓ ｈ ｍ ｕ ｒ ａ民 ｉ
，
Ｍａ ｔｓ ｕ ｂ ａ ｒ ａＴ ，
Ｔａ ｎ ａ ｋ ａ  Ｓ ，
Ｉ ｎ ｏ ｕ ｅＪ ，
民 ｅ ｄ ｄ ｙ８ 乂 Ｈ ａｔ ａＫ 

，

Ｙａ ｍ ａ ｓ ｈ ｈ ａ  Ｋ ，
Ｈ ｉ ｒａ
ｇ ａＴ ，
Ｗａ ｔ ａ ｎａ ｂ ｅＴ ，
Ｋ ｕ ｋ ｋ ａ ＩＴ
，  Ｙｏ ｓ ｈ ｉ ｏ ｋ ａＫ ，
民 ａ ｏＡ ：  Ｙｏ ｎ ｅ ｄ ａ  ＴＴ 

．

Ｃｒ ｉ ｔ ｉ ｃ ａ ｌｒｏ ｌ ｅ ｓｏ ｆｃ

－

Ｊ ｕ ｎｓ ｉ
ｇｎ ａ
ｌ ｉ ｎ
ｇ ｉ ｎｒ ｅ
ｇｕ
ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｎ Ｆ ＡＴ  ｆａ ｍ ｉ ｌ
ｙ  ａ ｎ ｄ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｌ


－

ｒｅ
ｇｕ ａ ｌ １ ： ｅ ｄｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔｄ ｉ 祗 ｒｅ ｎｔ ａｔ ｏ ｎ ｉ ｉ ． Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎＩ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ２ ０ ０ ４ ；
１ １ ４ ：  ４７５ －

８ ４ 

．

［
８４
］ 
Ｄ ａｖ ｉ ｄ 巧 
Ｓ ａｂａ
ｐ ａｔ ｈ ｙＫ ， 
Ｈ ｏ ｆｍ ａ ｎ ｎ ０ 
， 
Ｉ ｄ ａｒ ｒ ａ
ｇ ａ Ｍ Ｈ Ｗａ ｇ ｎ ｅ ，
ｒ Ｅ Ｒ  ＪＮ Ｋ ｌ ｍ ｏ ｄ ｕ ａ ｔ ｅ ｓ

 ｌ

ｏ ｓｔ
ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔｏｇ ｅ 打ｅｓ ｌ ｉ ｓ ｔ ｈ ｒｏ ｕ ｇ ｈｂ ｏ ｔ ｈｃ －

Ｊ ｕｎ
ｐ ｈ ｏ ｓ ｐｈ ｏ ｒｙ ｌ ａｔｉ ｏ ｎ
－

ｄ ｅ ｐ ｅ 打 ｄ ｅ ｎｔ ａｎ ｄ 

－

ｉ ｎ ｄ ｅｐ ｅ ｎ ｄ ｅ 打 ｔ ｍ ｅ ｃ ｈ ａ 打 ｉ ｓ ｍｓ ． Ｊ Ｇｅ ｌ ｌ Ｓ ｃ ｉ ２ ００２ ；
１ Ｉ ５ ：  ４３ １ ７
－

２５ 

．

化 ｅ ｄ ａＦ
＇

Ｍａ ｕ ｂ ａ ｒ ａＴ Ｔｓ ｕ ｒ ｕ ｋ ａ Ｔ Ｈａ Ｋ Ｎ 民 Ｙｏ ｎ ｅ ｄ ａ  Ｔ  Ｊ Ｎ Ｋ ／ ｃ 化 ｎ
＊

８ ５ ｔ ｓ ｉ  ｔ ａ ，
ｉ ｓ ｈ ｍｕ ｉ ｉ ａ 
 ．
－

［ ］ ， ， ， ，

ｓ ｉ
ｇｎ ａ
ｌ ｉ ｎ
ｇ 
ｍ ｅ ｄ ａ ｔ ｅ ｓａ ｎ ｉ  ａｎｔ ｉ
－

ａ
ｐｏｐ化
ｔ ｉ ｃｅ ｆｅ ｃ ｔ ｏｆＲ Ａ Ｎ ＫＬ ｉ ｎ曰 ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ ｓ ｌ ．  Ｊ Ｂ ｏ ｎｅ Ｍ  ｉ ｎｅｒ



Ｒｅ ｓ  ２００８ ２３ ；
： ９０７ －

１ ４ 

．

Ｈ ａ ｎＪ Ｌ ｅ ｅＪ Ｄ Ｂ 化ｂ Ｌ Ｕ Ｒ Ｊ Ａ Ｍ Ａ Ｐ ｋ
＊

ｅｖ ｃ ｈ ｎ ａ ｓ ｅ
８６ ｓ ａ
ｇｅ
ｅ ｄｂ
ｙｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｏ ｘ ｎａｎ ｄ


ｌ ｉ ｔ   ｉ ｔ ｔ ｉ

． ；
ｉ
［ ］ ， ， ，

ｈ ｙｐ ｅ ｒ ｏ ｓ ｍ ｏ ａ ｒ ｌ ｉ ｔ
ｙ ｎ ｍ ａ ｍ ｍ ａ ｉ ｌ ｉ ａ ｎｃ ｅ ｌ ｌ ｓ Ｓ ｃ ． ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ１ ９ ９ ４ ；
２ ６ ５ ８ ０ ８ ：
－

１ １ 

．

［
８７
］ 
Ｏ ｂａ ｌ ； ａ  ＴＴ ， 
Ｂ ｒ ｏ ｗ ｎ  Ｇ Ｅ Ｙａ ｆｆｅ ，
 Ｍ Ｂ ＭＡ Ｐ ．   ｋ ｎ ａ ｓ ｅｐ ａ化 ｗａ ｙ ｓａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｔ ｒ ｅ ｓ ｓ
ｉ ｉ ： ｔ ｈｅ
 ｐ３ 

８

ＭＡ Ｐ Ｋ  ｐ
ａｔ ｈ ｗ ａ
ｙ ． Ｃ Ｍ Ｃ ａｒｅ Ｍｅｄ ｔ   ２０００ ２８ ；
：  Ｎ６７ －

７７ 

．

巧８ ］ 
Ｈａｎ Ｊ
， 
？ Ｈ ａｎ
ｇ  乂 
Ｌ ｉ  Ｚ ，  Ｋｒ ａｖ ｃ ｈ ｅ ｎ ｋｏ Ｖ Ｖ Ｕ 
，
ｌ ｅｖ ｉ ｔ ｃ ｈ  ＲＪ ．  Ａｃ ｔ ｉ ｖ ａｔ ｏ ｎｏ ｆ ｉ  ｌ； ｈ ｅ化 ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ
ｐ
ｔ ｉ ｏ打



ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ  ＭＥＦ２ Ｃ ｂ
ｙ化 ｅＭ Ａ Ｐ ｋ ｎ ａ ｓ ｅｐ ３ ８ｉ ｎｉ ｎ ｆ
ｌ ａ ｍ ｍ ａｔ ｏ ｎ Ｎａ ｕ ｒｅ１ ９ ９ ７ ３ ８６ ２ ９６ ９
－

ｉ ｉ ．  ｔ ： 

．
；

Ｌ Ｘ Ｕ ｄ ａ ｇ ａｗ ａ Ｎ Ｋ Ｓ ｕ ｄ ａＫ
Ｍ ｕｒａｓ ｅ 乂 Ｎ ｈ ｍ ａＴ Ｓ ｕ ｄ ａＴ Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ Ｎ
’

［
８９
］ 
ｉ 
，

，
Ｉｔ ｏ ｈ ， ，  
ｉ ｓｈ ｉ
， ， 
ｉ  

，

ｐ
３ ８ ＭＡ Ｐ Ｋ －

ｍ ｅｄ ｉ 別 ｅ ｄｓ ｇｎ ａ ｉ ｌ ｓａｒｅｒ ｅ
ｑ
ｕ ｉ ｒｅ ｄ ｏ ｒ
ｆ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｎ ｇ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｄ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｏ ｎ
ｉ 
 ｌ ｉ ｉ ｉ

ｂ ｕ ｔ ｎ ｏ ｔ  ｆｏ ｒ  ｏ ｓ ｔ ； ｅｏｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ．  Ｅ打ｄｏｃｒ ｉ ｎ ｏ ｏｇｙ ２ ０ ０ ２ ｌ

 ；
１ ４３ ： ３ １ ０ ５
－

１ ３ 

．

口０ ］ 
Ｍ ａ ｎ ｓ ｋｙ Ｋ Ｃ  ，
Ｓ ａ ｎ ｋ ａｒ Ｕ Ｈ ａｎ ，
 Ｊ ，
Ｏ ｓ ｔｒ ｏ ｗ ｓ ｋ Ｍ Ｃ Ｍ ｉ  ．  ｉ ｃｒｏ
ｐ
ｈ ｈａ ｍ ａｌ ： ｌ ｉ  ｔ ｒａｎ ｓ ｃｒｉ ｆ
ｐｔ ｏ ｎ ａ ｃ ｏ ｒ
ｉ 
  ｔ ；

ｉ ｓａ １ ： ａｒ
ｇ
ｅｔｏ ｆ  ｔ ｈｅ ｐ３ 
８ ＭＡ Ｐ Ｋ  ｐ
ａ ｔｈｗ ａ
ｙ ｉ ｎ  ｒｅ ｓ
ｐ ｏｎｓｅ  ｔ ｏｒ ｅ ｃ ｅ
ｐ １： ｏ ｒ ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｏ ｒ ｏ ｆ
 ｉ ｔ： ＮＦ －

ｋａ
ｐｐ ａ



Ｂ ｌ ｉ
ｇａ
ｎ ｄｓ ｉ
ｇｎ ａ ｌ ｉ ｎｇ ． Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ  Ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ２ ；
２ ７ ７ １ ： １ ０７７ －

８３ 

．

［
９ １
］ 
Ｍａ ｔｓ ｕ ｍ ｏ ｔ ｏＭ Ｓ ｕ ｄ ｏ Ｓ ａ ，
ｉ １： ｏＴ ，
Ｏ ｓ ａ ｄ ａＨ ，
Ｔ ｓ ｕｊ ｍ ｏ ｔ ｏ  Ｍ  Ｉ ｎ ｖ ｏｉ ． ｌ ｖ ｅ ｍ ｅ ｎｔｏ ｆ
ｐ
３ ８



ｐ 阳 ｋ ｎｋ ｎ ａ ｓ ｅｓ ｇ ｎａ
ｍ ｏ ｇ ｅ ｎ ａｃ ｔ ｖ ａｔ ｅ ｄ ｎ ｇ ｐ ａｔ ｈ ｗ ａ
 ｎｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ
－

ｔ 

ｓ
ｙ
ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ ｌ ｉ ｉ ｌ ｔ ； ｉ

ｍｅｄ ｂ ｄ ｂ ｙ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ  ａ ｃ ｔ ｖ ａｔ ｏ ｒ  ｏ ｆ  Ｎ Ｆ ｋａ ａ巨ｌ ａｎ ｄ （ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ） ＪＢ ｏ  Ｃ ｈ ｅ ｍ



－

ａ
ｐｐ
ｌ
ｇ
ｉ ｉ ｉ ． ｉ

２ ０００ ２７５ ３ ５ ５ ６
－

： １ １ １ 

．

［
９２
］ 
Ｌ ｅ ｅＺ Ｈ ，
Ｌ ｅ ｅＳ Ｅ ，
拉 化 ０ ＼￥ ，
１＾ ６ £ ８ ＆ 松〇 １ ８ ＼￥ ，
］ ＜： 诚３〇 １ ＾ 氏 ＼＼ 如５ １１ １＜：
，
拉 １１ １ 册 ． 忙 

－

１  ａｌ
ｐ ｈ ａｓ ｔ ｍ ｕ ｉ ｌ ａ ｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｓ ｕ ｒｖ
ｉ ｌ ｉ ｖ ａ ｔｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈｔｈ ｅＰ Ｉ３
ｌ
－

ｋ 打 ａ ｓ ｅ ／Ａ ｋｔ  ａ 打 ｄ  Ｅ Ｒ Ｋ
ｉ 

ａｔ ｈｗ ａ ＪＢ ｏ ｃ ｈｅ ｍ２ ０ ０ ２ ３ １ ６ ６
－

ｓ  １ １
ｐ ｙ １
． ｉ ； 

．
； 

［
９
＾Ｇ ｉ ｎｇ ｅ ｒｙＡ ． Ｂ ｒａｄ ｌ ｅ
ｙＥ  Ｓ ｈ ａｗ Ａ ，
，
Ｏ ｕｒｓ ｌ ｅｒ Ｍ Ｊ  Ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ． ｉ ｄ
ｙ ｌ ｉ ｎｏｓ ｉ ｔ ｏ ｌ ３ －

Ｉ ｄｎ ａ ｓｅ



ｏ ｏ ｒ ｄ ｎ ａｔｅ ｙａ ｃ ｖ ａｔ ｅ ｈ ｅ  Ｍ Ｅ Ｋ ／ Ｅ Ｒ Ｋ  ａ ｎ ｄ  ＡＫ Ｔ ／ Ｎ Ｆ ｋ ａ Ｂ ｐ ａｔｈ ｗ ａｙ ｓ ｏｍ ａ ｉ ｎ ａ ｎ



ｃ ｓｌ
ｐｐａ
ｉ ｌ ｔ ｉ ：
ｔ： ｌ； ｉ

ｏ ｓ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔｓ ｕｒｖ ｖ ａ Ｊ Ｃｅ Ｂ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ３ ８ ９ １ ６ ５ ７９

－

ｔ ｌ ｉ ｌ ． ｌ ｌ ｉ ： 

．
；

Ｗ ｕ  Ｌ Ｇ ｕ ｏ  Ｑ Ｙａ ｎ ｇ  Ｊ Ｎ Ｂ Ｔｕ ｍ ｏ ｒ Ｎ ｅ ｃ ｒｏ ｓ Ｆａｃｔｏｒ Ａ ｈ ａＰ ｏｍ ｏ Ｏｓ
．

巧 ４
］  ， ， ，
ｉ  ．   ｉ ｓ  ｌ
ｐ ｉ ｔ ：
ｅ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａｓｔ

 ｌ

Ｆ ｏ ｒｍ ａ ｔ ｏ ｎ  ｖ ｉ ｉ ａＰ Ｂ Ｋ／Ａ ｋ ｔ Ｐ ａ ｔｈ ｗ ａ ｙ －

Ｍｅｄ ｉ ａｔ ｅ ｄＢ ｌ ｉ ｍ
ｐ ｌＥ ｘｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎＵ ｐ ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ ｏ ｎ ｉ ｌ ｉ ． Ｊ



Ｃｅ ｌ ｌ  Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ １ ６ 

．

［
９５ ］ 
Ｍｏ ｏ ｎ 祀 Ｋ 
，
ｉ ｍ  Ｊ Ｈ Ｋ ， 
ｉ ｍ  Ｋ Ｙｏ ｕ ｎ Ｂ Ｕ Ｋ ｏ Ａ Ｌ ｅ ｅ
，

，

，
 Ｓ 乂Ｋ 
ｉ ｍ  Ｎ Ａｋ ．  ｔｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｓｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ

 ｌ

ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ  ｒ ｅ ｇ ｕ ａ ｔ ｎ ｇ  ｔ ｈ ｅ  Ｇ Ｓ Ｋ
ｉ ｌ ｉ Ｓ ｂ ｅ ｔ ａ ／ Ｎ ＦＡＴｃ ｌ ｓ ｇｎ ａ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇｃ ａ ｓ ｃ ａ ｄ ｅ ． Ｊ



Ｉ ｍｍ ｕｎｏ ｌ  ２０ １ ２ ；
１ ８ ８ １ ６ ３ ：
－

９ 

．

［
９ ６ ］Ｌ ｕ ｉ Ｗ Ｗａ ｎ ｇ ， 
Ｓ ，
Ｗｅ ｉ Ｓ
， 
Ｓ ｕｎ  Ｌ 
Ｆ ｅ ｎ ｇ ？ 民ｅｃ 巧 ｔ ： ｏ ｒａ ｃ ｔ ｖ ａｔｏ ｒｏ ｆ ｉ  ＮＦ －

ｋ ａ ｐ ｐ ａ Ｂ  （ Ｒ ＡＮ Ｉ Ｃ ）



ｃ
ｙｔ ｏ ｐ ａ ｓ
ｍ ｌ ｉ ｃｍ ｏ ｔ ｉ ｆ
，
３ ６９ ＰＦ Ｑ ＥＰ ３ ７３ ，
ｐ
ａｙ ｓａ ｐ ｒ ｅ ｄ ｏ ｍ ｎ ａ ｎ ｔ
ｌ

ｉ  ｒｏ ｌ ｅ ｉ ｎ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ｓ ｕ ｒｖ ｖ ａ ｌ ｉ 

ｌ

ｉ 打
 ｐ
ａ ｒｔ  ｂ
ｙａｃ ｔ ｖ ａ ｎ ｇ
ｔ ｉ ｉ Ａｋ ｔ／ Ｐ Ｋ Ｂ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｄ ｏ ｗｎ ｓ ｔｒｅ ａ ｍｅ ｆｅ ｃ １； ｏ ｒ  Ａ Ｆ Ｘ ／Ｆ Ｏ Ｘ ０ ４ ． Ｊ Ｂ ｉ ｏ 

ｌ

Ｃ ｈ ｅ ｍ２ ０ ０ ５ ；
２ ８０ ： ４ ３ ０６４
－

７２ 

．

［
９７
］ 
Ｏ ｋ ｕｍ ｕ ｒａＳ ，
Ｍ ｉ ｚｏ
ｇｕ ｃ ｈ ｉ  Ｔ ，
Ｓ ａｔ ｏ Ｎ  Ｙａ ｍ ａ ，
ｌ ｄ Ｍ ，
Ｋ ｏ ｂ 巧 ａ ｓ ｈ 乂 Ｙａ ｍ ａ ｉ
 
ｉｉ ｃ ｈ ｉ Ｈ ，
Ｏ ｚａｗａ



Ｈ ，
Ｕ ｄａ ｇ ａｗ ａ
Ｎ ，
Ｔａ ｋ ａ ｈ ａ ｓ ｈ  Ｎ  Ｃ ｏ ｏ ｒ ｄ ｎ ａ ｔ ｉ ． ｉ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆｍ ｉ ｃ ｒｏ ｕ ｂｕ １： ｌ ｅ ｓａ ｎ ｄ ｔ ｈｅａ ｃ ｔ ｎ

 ｉ

７２


 山 东 大学博古 学 位论文
 



ｃ
ｙｔｏ ｓ ｋ ｅ ｌ ｅ ｔ ｏ 打  ｉ ｓ  ｍ ｐ ｏ ｒ
ｉ ｔ ａ ｎｔ  。 支 ｏ ｓｔｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ  扣ｎｃ ｔｉ ｏｎ ，
ｂ ｕｔ  ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｔ ｏｎ ｉ ｎｄ ｉ ｓｒｕ
ｐｔ ｓ  ｓ ｅ ａｌ ｉ ｎ ｇ



ｚ ｏ ｎ ｅ ｓ  ｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｕ ｔ  ａ ｆ ｆｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ  ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｔ ｕｂ ｕ ｌ ｅ  ｎ ｅ ｔ ｗ ｏ ｒｋ ｓ ．  Ｂ ｏｎｅ  ２０ ０６ ３ ９
；
：  ６８４ ９ ３
－



．



巧
 山 东 大学 博壬学位论文
 



致谢


从第 次 到 李 敏 启 老 师 的 办 公 室会 见 导 师 Ｗ 来 已 经 整 整 四 年 了 这 四 年 来
一

自 ， 

，

国 家 和 我个 人 都 发 生 了 巨 大 的 变 化 。 国 内 落后 工业去 产 能任务依 旧 艰 巨 ， 房地产




经过两 年 的 沉寂 后 转而 路 高 歌猛 进 股 市 经 历 了 巧 年 的 牛 市后 又复 归 平静
一

， ２ ０ 

。

而 我 本 人从 四 年 前 对 于 科 研 的 知 半解到 如 今 的 登堂入 室 这其 中 的 点 滴进步和



一

成 长 无 不 渗 透 着 导 师 的 淳 淳 教 导 和 耐 也 培 养 在 此 向 我 的 导 师 李敏 启 教 授 表 示 诚

 ，

擎 的感谢 。 博± 在读期 间 ， 李老 师在 学 业 和 生 活 中 给 予 了 我 的 无 私 指 导 和 帮 助 

，

尤 其 令 我 感 动 的 是在 课题 设计和 实施 过 程 中 对 我 的 莫 大信 任 和 支 持 是 谏 题 得

 ，

顺利 完成 的 有力 保障 他的 细腻 的 为人之道 。 、 严 谨 的 治 学 理念 和 积 极 的 生 活 态 度



深 深影 响 了 我 ，
并 将 依 旧 指 引 我今 后 科 研 和 生 活 的 前 进 方 向 

。

＂ ＂
兰人 行 ， 必有我师焉 。 感谢 骨 代 谢 研 巧 团 队 ， 感谢改荣 、 文丽和 宝 师 妹



辛 勤 的 实 驗 室 管 理 是你 们 的 劳 动 使 得 实 验 室井 井 有 条 为 谏 题 的 实 施 保 驾 护 航
， ， 

。

感谢刘 红蕊 、 吕 愚 宇 博 ±在 实验初 期 的 设 汁 中 给予 的 无化 帮 助 ，
你们 的 聪 敏和 勤



奋 直 是 我 学 习 的 榜样 感谢孙静 杜娟 李娟 韩秀春 罗 婷 婷 几 位师 妹在 实


一

。 、 、 、 、

验 具 体操 作 中 的 帮 助 正 是 有 了 你 们 的 尽 也 协 助 和 不 断 鼓 励 才 使 得 实验 中 的 难 题
， 


被 攻克 感谢王威 师 弟 在 学 习 和 生 活 中 的 帮 助 和 扶持 你 的 到 来 为 实验 室増


一 一

。 ，

＂
添 了 新 的 活 力 你 认 真 的 学 习 态度 是 我 非 常 欣 赏 的 你 用 行 动 告 诉 了 我 什 么 叫 坚
， 
 ，

持 ，
不放弃 

。

感谢 郭 杰 、 崔剑 、 刘 迪和刘 博 几 位 老 师在 生 活 和 科研 中 对我 的 关 也 和 帮 助 

。

感 谢 牙体 牙 髓 科 王 锋 老 师 、 汪竹平老师在 临床上 的 指 导 和 教诲 ，
帮 我熟悉 了 放下



多 年 的 临床操作技能 ， 为 我将 来 要 从事 的 临 床 工 作 热 身 。 另外 ，
对于所有 曾 经给



予我帮助 的老师 朋 友们 在此 并表 示 感 谢
一

、 ， 

。

最后 衷 屯 感谢我 的 父母和岳父 岳母在我读 博期 间 在 经济和 生活上给 予 我 的

，
、



支持 ， 祝 愿 你 们福寿 安康 。 我尤 其 要 感 谢 的 是 我 的 爱 人 ， 你在我读 书 这 四 年 背 负



着 巨 大 的 生 活压 力 ，
并且还历 经艰 险 生 下 了 我们 可 爱 的 儿子 ， 你 的 理解 、 支 持和



陪 伴 是我遇 到 挫 折 时 的 温 馨 港湾 ， 是 激励 我 前 行 的 不 竭 动 力 

。

值此 毕 业之 际 ， 衷 也 祝愿 我 的 师 友和 亲 人 身 体健康 、 工作顺利 。 祝愿 骨代谢




研 巧 室 多 出 成果 出 好成果 科研平 台 发 展 更上 个新 台 阶
一

、 ， 

。

７４



山 东 大学博±学位论文




攻 读 学 位期 间 发 表 的 学 术 论文 目 录


１ ．  Ｆｅ ｎ ｇ Ｗ  ，
Ｌ ｕ ｉ  Ｈ Ｌｕｏ Ｔ ， 

，
ｅ ｔａ ｌ ．  Ｃ ｏ ｍ ｂ ｎ ａｔ ｉ ｉ ｏ ｎｏ ｆ  Ｉ Ｌ －

６ａ ｎ ｄｓ Ｉ Ｌ
－

６ 民 ｄ ｉ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ  ｉ ｌ ｌ
ｙ ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ ｅ

 ｌ

ｖａｒ
ｙ ｎ ｇ ｉ ｌ ｅ ｖｅ ｌ ｓｏ ｆＲ ＡＮ Ｋ Ｌ －

ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄｏ ｓ ｌ： ｅｏ ｃ ｌ ａｓ１ ｏ ；

ｇｅ ｎ ｅ ｓ
ｉ ｓｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇｈＮ Ｆ ｋＢ －

， Ｅ Ｒ Ｋａ ｎ ｄ



Ｊ ＮＫ ｓ ｉ
ｇｎａ ｌ ｉ ｎ ｇｐ ａｔｈｗ ａ ｙ ｓ ．  Ｓ ｃ ｉ Ｒ ｅｐ  ． ２ ０ １ ７ Ｊ ａ ｎ２ ７ ； 
７ ： ４ １ ４ １ １ ．  ｄｏ ｉ ： １ ０ ． １ ０ ３ ８／ ｓｒｅ
ｐ４ １ ４ １ １ 

．

（ Ｉ Ｆ ： ５ ． ２２ ） （ 第
一

作者 

）

２ ． Ｆ ｅ ｎ ｇＷ Ｌ ｖＳ ，
，
Ｃｕ ｉ Ｊ ，
ｅ ｔａ ｌ ．  Ｈ ｉ ｓｔｏ ｃ ｈ ｅｍ ｃ ａ ｅ ｘ ａ ｍ ｎ ａ ｔ ｏ 打ｏ ｆａ ｄ ｐ ｏ
ｉ ｌ ｉ ｉ ｉ ｓ ｅｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄｓ ｔ ｅ ｍ



ｃｅ ｌ ｌ ｓｃ ｏｍ ｂ ｎｅ ｄ ｉ  ｗ ｋｈ  Ｐ －

Ｔ Ｃ Ｐ  ｆｏ ｒ  ｂ ｏ 打 ｅ  ｄ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓ  ｒ ｅ ｓ ｔ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｎ  ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ  ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｉ ｉ 

ｃ

ａ ｄｍ 打 ｉ ｉ ｓ ｔ ｒａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｌ ａ ，
２５ （
ＯＨ ）
２ Ｄ ３ ．

 巧 Ｃ Ｍａ 
ｆ 肿 凤 ２０ １ ５ ； 
５ ４ １ ３ ３ ：


—

１ ４ １ ．
 （ Ｉ Ｆ ： 义 ３ ４） （ 第
一

作者 

）

３ ．
Ｆ ｅ ｎ ｇ Ｗ Ｌ  ， ｉ ｕＢ ， 
Ｌ ｉ ｕ Ｄ ，
ｅ ｔａｌ ．  Ｌ ｏ ｎ ｇ Ｔｅ ｒ ｍ －

 Ａ ｄｍ ｉ ｎ ｉ ｓ ｔｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ  Ｈ ｉ
ｇ
ｈ －

Ｆ ａ ｔＤ ｉ ｅ ｔＣ ｏ ｒｒｅ ｃ ｔ ｓ




Ａ ＾ ｂ 打 ｏ ｒｍ ａ ｌ  巨 ０ 打ｅ 民ｅ ｍ ｏ ｄ ｅ  ｌ ｉ ｎｇ

ｉ ｎ  ｔ ｈｅ  了 ｂ ｉ ｉ ａ ｅｏ ｆ  Ｉ 打ｔｅ ｒ ｌ ｅ ｕｋ ｉ 打 －

６ －

Ｄｅｆ
ｉｃ ｉ ｅ 打ｔ  Ｍ ｉ ｃｅ ．  ／ｏ ／ｚ ／ Ｔｚ ａ ／



作者
？

０／ ／ Ｔ／別 ０ ｃ７ｚ 如 ！ ／ 州 ；Ｖ  左 坏的 ２ ４２ ） 第
一

２０ ６ ６ ４ （ ４ ２ Ｆ
■

ｃ ／ｉ ｃｗｉ ／ｓ ／
。
＇

，
１
；
１
）
：
－

５３ ．
（ Ｉ ： ． （ 

）

４ ．

Ｑ ｉ  Ｙ Ｆｅ ｎｇ Ｗ ， ＿
， Ｃ ａ ｉ Ｊ ｅ ｔａ ，
ｌ ． Ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓｏ ｆ  ｃ ｏ ｎ ｓ ｅ ｒｖ ａ ｔ ｖ ｅ ｉ ｌ
ｙ
ｔ ｒ ｅ ａｔｅ ｄｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｄｃ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ｕ ｍ



ｗ ｉ ｔ ｈ  ｏ ｒ ｗ ｋ ｈ ｏ ｕ ｔ Ｅ Ｍ Ｄ  ｏ ｎ  ｎ  ｖ ｉ ｉ ｔｒ ｏ  ｃ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｂ ａ ｓ ｔ  ｄ ｆｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｏ 打  ａ ｎ ｄ  ｉ ｎ  ｖ ｉ ｖ ｏ

 ｌ ｉ ｉ

ｃ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔｕ ｍ
－

１  化 ｅ ｔ ｉ ｓｓ ｕ ｅ  ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｈ ｕ ｍ ａ ｎ

ｉ
ｐ
ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ 打 ｔ ａ ｌｌ ｉ
ｉ ；

ｇａ
ｍ ｅ ｎｔｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．  ０ ／／ ＿ ？／ 〇 ／ ／
？

／ 

？

２０ １ ４ ； 
４ ７ （４ ） ： ３ １ ０
－

３ １ ７ ．
（ Ｉ Ｆ ： ３ ． １ ０ ） （ 共同 第 一

作者 

）

日 ． Ｌ Ｊ ｉ
，
Ｆ ｅ ｎ ｇ Ｗ ， Ｌ ｕ Ｂ ｉ
，
ｅ ｔａ ｌ  ． Ａ ｌ ｔ ｅ ｒ ｅ ｄ  ｄ ｉ ｓ ｌｒ 化ｕ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｈ Ｍ ＧＢ  ｌ ｉ ｎｔ
ｉｈ ｅ
ｐ
ｅｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｒｔ
ｏ 

ｌ

ｄ  ｔ ｏ Ｗ ａ ｄ ｏ
，

ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆｐ ｅ ｒ ｏ ｓ ｔ ｎ ｄ ｅ ｆｌ ｃ ｅ ｎ ｔ  ｍ ｃ ｅ  ｓ ｕ ｂ ｅ ｃ ｓ  ｏ ｒｔ ｈ ｏ ｄｏ ｎ ｔ ｃ ｏ ｏ ｔ ｈ


ｇａ
ｅ
－

ｌ ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ １ ： ｌ ｉ １ ；

ｍ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅｎｔ ．  ２０ １ ５ ； 
４６（３ ）
： ３ ０３
－

３ １ １ ．
（ Ｉ Ｆ ：  １ ．  ７８ ） （ 共同 第 一

＾者 

）

６ ． Ｌ ｉ ｕＨ ， 
Ｆ ｅ ｎ ｇＷ ，  Ｙ ｉ ｍ ｎ ｉ
，
巧ａ ｌ ．  Ｈ ｉ ｓｔ ； ｏ ｌ ｏ
ｇ
ｉ ｃａ ｌ  巨ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅｏ ｆＩ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄＯ ｓｔｅｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔＣ ｅ ｌ ｌ



Ｍ ｉ ｉ ｍ ｂ ｅ ｒａ 打 ｄ ／ ｉ Ｌ ｓ
ｙｍｍ ｅ ｒ
ｔ ｉ ｃ技 ｏ ｎｅ民 ｅ ｓ ｏ ｒｐｔ ｏ ｎ ｉ  Ａｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ
ｙ
ｉ ｎ  ｔｈ ｅ  了 ｂ ｉ ａ ｅ  ｏ ｆ ｉ  Ｉ 打 ｔｅ ｒ Ｉ ｅ ｕｋ ｎ ｉ
－

６


－

Ｄｅｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ Ｍ ｉ ｃｅ ，  ／ｏ ｗ 巧 ｆ
ｌ／  ｏ ／ Ｊ ？ ／知 从 ｒ ｖ 乂  ＣＶ 化 ｃ  ／ｚ ｃ饥 ／Ｗ ｒｊ ，
２０ １ ４ ； 
６２ （ ８ ）
５ ５ ６
—

５ ６４ 

．

（ Ｉ Ｆ ； ２ ． ４２ ） （ 共同 第 一

作者 

）

７ ． Ｄ ｕＪ ，
Ｆ ｅ ｎ ｅＷ 、 Ｓ ｕ 打 Ｊ  ，
Ｋ ａ ｎ ｇＣ Ａ ｍ ，
ｉ ｚ ｕ ｋａ Ｎ ， Ｌ ｉ Ｍ ：  Ｏ ｖａｒ ｉ ｅ ｃ ｔｏ ｍ
ｙ ｕｐ ｒ ｅ ｇ ｕ ａｔ ｅ ｄｔ ｈ ｅ

 ｌ

ｅｘ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ  Ｐ ｅｒｏｘ ｉ ｒｅ ｄ ｏ ｘ ｎ１ ｉ ＆５ ｉ ｎｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ 巧 ｓｏ ｆ ｍ ｌ  ｉ ｃｅ ．  乂 ｃ／ ７． ２ ０ １ ６Ｏ ｃ ｔ２ ７ 

；

６ ３ ５ ９９５ ｄ ｏ １ ０ １ ０ ３ ８ ／ ｓ ｒｅ ３ ５９９５
ｐ
： ． ｉ ； ． 

．

８ ． Ｓ ｕｎ  Ｊ ， Ｄｕ  Ｊ ，
Ｆｅｎ ｇ  Ｗ 、 Ｌｕ Ｂ 
， 
Ｌ ｕ ｉ  Ｈ Ｇ ｕｏ ， 
 Ｊ ， 
Ａｍ ｉ ｚ ｕ ｋａ  Ｎ Ｌ Ｍ Ｈ ， 
ｉ  ；  ｉ ｓ ｔｏ ｌ ｏｇ ｃａ ｉ ｌ  ｅｖ ｉ ｄｅｎｃ ｅ



ｔ ｈ ａ ｔ  ｍ ｅ ｔ ｆｂ ｒ ｍ ｎ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ  ａ ｄ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｅ ｉ ｆｅ ｃ ｔ ｓｏ ｆｄ ａ ｂ ｅ ｂ ｉ ｓｏ ｎ ｏ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ｒ ｉ ｃｔ ｏ ｏ ｔ ｈ




ｍ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ  ｎ  ｒ ａｔ ｓ ｉ ．  ／ Ｍｏ ／ 巧 ／ｙ ／ ０／ ．  Ａ ｃ ｃ ｅｐ ｌ； ｅｄ ．  ２０ １ ６ 

．

９ ． Ｌ ｕｏ Ｔ Ｌ 
， 
ｉ ｕ Ｈ Ｆｅｎ ｇ Ｗ Ｌ 、  ， ｉ ｕＤ ， 
Ｄｕ Ｊ
， 
Ｓ ｕ ｎＪ ， 
Ｗａ ｎ ｇ Ｗ Ｈ ａ ｎ Ｘ Ｇ ｕ ｏ  ， 

， 
Ｊ
， 
Ａｍ ｉ ｚ ｕｋａ  Ｎ Ｌ ， 


ｉ

Ｘ ，
Ｌ  Ｍ  Ａ ｄ ｐ ｏ ｃ ｙｔ ｅ ｓ  ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ  ｔ ｈ ｅ  ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ
ｉ ： ｉ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｓ ｔ  ａ ｄ ｈ ｅ ｓ ｏ ｎ ｌ ｉ
－

ｒｅ ｌ ａｔ ｅ ｄ



ｈ ｒ ｏ ｕｇ ｈＣ Ｘ Ｃ Ｌ ２ ／Ｃ Ｘ Ｃ Ｒ４ ｓ ０／／ 巧 ０ 巧 Ｎｏ ｖ

‘

ｍｏ ｌ ｅｃｕ ｌ ｅ ｓｌ ： ］  ｉ
ｇｎａ
ｌ ｉ ｎ ｇ ｐ ａ ｌ Ｊｉ ｗａｙ ．  ； ２０ １ ６ ２ １ 

．

ｄｏ ｉ ： １ ０ ． １ １ １ １ ／ｃ
ｐ ｒ ． ｌ ２３ １ ７ ．

［
Ｅ ｐ ｕ ｂ ａ ｈｅ ａ ｄｏ ｆ ｐ ｒ ｎｔ 
ｉ


］

１ ０ Ｓ ｕ ｎＢ
．

，
Ｓ ｕ ｎＪ ，
Ｈａｎ  或 
Ｌ ｕ Ｈ ｉ
，
Ｌ ｉ Ｊ
，
Ｄｕ  Ｊ ，
Ｆ ｅ ｎ ｇＷ ，  Ｌ ｉ ｕＢ ，
Ｃｕ ｉ Ｊ
，
Ｇｕｏ Ｊ
，
Ａｍ ｉ ｚ ｕ ｋａ Ｎ 

，

Ｌ Ｍ ｉ ：  Ｉ ｍｍｕ ｎｏ ｏ ｃａ ｌ ｌ ｉ ｚ ａｔ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｉ Ｍ Ｍ Ｐ２ ，
９ ａｎ ｄ  １ ３  ｉ ｎｐ ｒｅ ｄ ｎ ｉ ｓ ｏ ｏｎｅ ｌ  ｉ ｎｄｕｃｅｄ



ｏ ｓｔｅｏ
ｐｏ
ｒｏ ｓ ｉ ｓｉ ｎｍ ｉ ｃｅ ．  Ｈ ｉｓ ｔ ｏｌ  Ｈ ｉｓ ｔ ｏ
ｐ ａ ｔｈ ｏ Ｌ３ １ ： ６ ４７ －

６５６ ， 
２０ １ ６ 

．

１ １ ． Ｓ ｕ ｎＪ ，
Ｓ ｕ ｎ Ｂ ，
Ｗａ ｎ ｇ Ｗ Ｈ ａ ｎ  Ｘ  ， ，
Ｌ ｕＨ ｉ
，
Ｄ ｕＪ ，
Ｆｅ ｎ ｇＷ ，
Ｌ ｕＢ ｉ
，
Ａｍ ｉ ｚ ｕｋ ａＮ ，
Ｌ ｉ  Ｍ 

：

Ｈ ｉ ｓ １ ： ｏｃｈｅｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｘ ａｍ ｉ ｎ ａ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ 比 ｅ  ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆｈ ｇｈ ｄ ｏ ｓ ｅ ｌ ２ ５ ｉ
－

， （
ＯＨ ）
２ Ｄ ３ ０ 打ｂ ｏ ｎ ｅ



ｒｅ ｍｏ ｄｅ ｌ ｉ ｎｇ

ｉ ｎ
ｙ
ｏ ｕ ｎ ｇｇ ｒ ｏ ｗ ｎ ｇｒａｔ ｓ ｉ ．  Ｊ Ｍｏ Ｈ ｌ ｉｓ ｔ ｏ Ｌ４ ７ （４ ） ： ３ ８９ －

９９ ， 
２０ １ ６ 

．

１ ２ Ｃ ｕ
． ｉ Ｊ
，
Ｌ ｉ Ｊ
： 
Ｗａ ｎ ｇ Ｗ Ｈ ａ ｎ Ｘ Ｄ ｕ 
，

，
 Ｊ ，
Ｓ ｕ ｎＪ ，
Ｆｅｎ ｇ Ｗ Ｌ ， ｉ ｕＢ ， 
Ｌ ｕＨ ｉ
， 
Ａｍ ｉ ｚ ｕ ｋａ Ｎ Ｌ Ｍ ， 
ｉ  

：

Ｔ ｈ ｅ  ｅ ｆｆｅ ｃ ｔ  ｏ ｆ  ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｔｒ ｉ ｏ ｏ ｎｈ ｌ ｉ
ｇ
ｈｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ
ｙｇ ｒｏ ｕ
ｐ
ｂ ｏ ｘ１ｅ ｘ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｎ ｉ
ｐ
ｅｒｉ ｏ ｄ ｏ ｒＵ ａ 

ｌ

ｌ ｉ
ｇ
ａ ｍ ｅ ｎｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｄｕｒ ｎ
ｇ
ｏ ｒ ｔｈ ｏ 过 ｏ ｎｔ ｃ  ｔ ｏ ｏ ｈ  ｍ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅ 打 ｔ  ｎ  ｒ ａ ｔ ｓ
ｉ ｉ ｔ ｉ ．  ／  Ｍｏ 巧 別 〇 ／ ／ ／？  ４７ ： ２ ２ １


－

２２ ８ ， 
２０ １ ６ 

．

１ ３ ．  Ｌ ｉ ｕＢ  Ｈ ａ ｎ Ｘ  Ｆ ｅ ｎ ｇＷ Ｃ ｕ  Ｊ ， ，
． ｉ
，
Ｈ ａ ｓ 巧 ａｗ ａＴ ，
Ａｍ ｉ ｚ ｕｋａ Ｎ Ｘ ｕ义Ｌ ，
ｉ  Ｍ Ａ ： ｌ ｔ ｅｗｄ



７己


 山 东 大学 博 古学 位 论文
 



ｄ ｉ ｓ ｔ ｒｉ ｂ ｕｔ ｉ ｏ 打 ｏ ｆ   Ｇ ｈ ｒｅ ｌ ｉ 打 ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｎ  ｎ ｍ ｃ ｅ  ｍ ｏ ａ ｒ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍ ｅ 打已

ｉ ｉ  ｉ ｌ   ＾ ｒｃ ／  ０ｒ ａ ／ 公 ／〇 ／  ６ ５
ｒ ？ ： ８２ 

－

８６ ， 
２０ １ ６ 

．

１ ４ ．  Ｌ ｕＨｉ
，  Ｃｕ ｉ  Ｊ ，  Ｓ ｕｎ  Ｊ ，  Ｄ ｕＪ Ｆ ｅ ｎ ｇＷ ，
．  Ｓ ｉｍ  Ｂ  ，
Ｌ ｉ Ｊ ， Ｈ ａｎＸ ，
Ｌ ｕ Ｂ
ｉ
，
巧化 ； 打 ，
Ｏｄａ Ｋ 


，

Ａｍ ｚ ｕｋ ａ  Ｎ ＵＭ Ｈ ｓ ｔ ｏ ｃ ｈｅｍ ｃ ａ ｌ  ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ  ｏ ｆ  ｚ ｏ ｌ ｅ ｄ ｒ ｏ 打 ａｔ ｅ  ｉ ｎ ｈ 化 ｎ ｇ ｃ ｓ ｒｃ


－

ｉ ： ｉ ｉ ｉ ｔｉ
，

Ｃ ０ ４４ ／ ０ ＰＮ ｍ ｅ ｄ
＊

ｅｘｐ ｉ 的 ｓ ｏ ｎ  ａ ｎ ｄ  ｎ ｔ ｅ ｒ ｆｅ ｒ ｎ ｇ  ｗ
ｉ ｉ ｉ ｉ ｔｈ 
－
ｉ ａｔ ｅ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ｌ ａ ｓ ｔ  ａ ｄｈ ｅ ｓ ｉ ｏ ｎ  ｉ ｎ  ｔ ｈ ｅ



ｔｉ ｂ ａ ｅｏｆ ｍ
ｉ 
ｉ ｃｅ ．  Ｊ Ｍｏｌ Ｈｉｓ ｔｏ ｌ  ４ ６ （ ３ ） ： ３ １ ３ －

３ ２３ ，
２０ １ ５ 

．

１ ５ ．  Ｌ ｕ Ｈ
ｉ
，  Ｃ ｕ  Ｊ  Ｆ ｅｎ ｇ 
ｉ
，
Ｗ ＊  ＬｖＳ ，
Ｄ ｕ Ｊ ，
Ｓ ｕｎ  Ｊ ， 
Ｈ ａｎ  Ｘ ，
Ｗａ ｎ ｇ 
Ｚ ，
Ｌｕ Ｘ ，
Ｙ ｉ ｍ ｎ ｉ
，
Ｏｄａ Ｋ 


，

Ａｍ ｉ ｚｕ ｋ ａ  Ｎ ，
ＵＭ ：  Ｌ ｏ ｃ ａ ｌ  ａ ｄｍ ｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ａｔ ｉ ｏ 打  ｏ ｆ  ｅ ａ ｌ ｃ ｉ ｔ ｒ ｉ ｏ ｌ
 ｐ ｏ ｓ ｉ ｔｉ ｖ ｅ ｌ ｙ 
ｉ ｎｆ
ｌ ｕ ｅ打ｃ ｅ ｓ  ｂ ｏ ｎ ｅ



ｉｒ ｅ ｍｏｄｅ ｉ ｉｎ
ｇ
ａ 打 ｄ  ｍ ａ ｔ ｕ ｒ ａｔ
ｉ ｏ 打  ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ  Ｋ ｓ ｔ ｏ ｒ ａｔ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ ｍ ａ ｎｄ  化ｕ ｌ ａｒ  ｂ ｏ 口 ｅ  ｄ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｓ  ｉ ｎ  ｒ ａｔ ｓ 

．

Ｍａ ｔ ｅｒ  Ｓｃ ｉ Ｅｎｇ Ｃ Ｍａ ｔ ｅｒ Ｂ ｉｏ ｌ Ａｐｐ Ｌ  ４ ９



 ： １ ４ ２４
－

，
２０ １ ５ 

．

１ ６ ．  Ｌ ｖＳ ， 
Ｌ ｉ Ｊ， Ｆｅ ｎ 巧  Ｗ ，  Ｌ ｕＨｉ
，
Ｄｕ  Ｊ ，
Ｓ ｕｎＪ ，
Ｃｕ ； Ｊ ，
Ｓ ｕｎ  Ｂ ，
Ｈ ａｎ  义 
Ｏ ｄａ Ｋ Ａｍ 
，
ｉ ｚ ｕ ｋａ  Ｎ 

，

Ｘ ｕＸ Ｌ ，
ｉ  Ｍ  Ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ＨＭ Ｇ Ｂ
： ｉ ｌ  ｉ ｎ  ｔ ｈ ｅ  ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ  ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ  ｓ ｕｂｊ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｏ
ｉ 
 ｌ ｔ：

Ｗａ 化ｏ ｄ ／ 放〇 ／ 巧奴〇 ／  ４ ６ （ １ ）
’

ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ｉ ｃ  ｆｏ ｒ ｃ ｅ  ａｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｂ ｙ 
ｌ ｄｏ ｓｍ ｅ ｉ ｎｍ ｃｅ ｉ ？ ？ ：  １ ０７ 

－

１ １ ４ ，
２０ １ ５ 

．

１ ７ ．  Ｌ ｕＨｉ
，
Ｇｕ ｏ Ｊ
，
Ｗｅ ｉ  Ｓ ，
Ｌｖ  Ｓ ，
Ｆｅｎ ｇ Ｗ  ．  Ｃｕ ｉ Ｊ， Ｈ ａ ｓ ｅ ｇ ａｗ ａ Ｔ Ｋ ｏ ｎ ｇ ｏ Ｈ Ｙａ ｎ ｇ 义 Ｌ Ｘ 
，

，  
ｉ


，

Ｏ ｄａ Ｋ Ａｍ 
，
ｉ ｚ ｕｋ ａ  Ｎ Ｌ Ｍ Ｅｘｐ ｒ ｅ ｓ ｓ
，
ｉ  ：  ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ ｍ ａｔ ｒ ｉ ｘ  Ｇ ｌ ａ ｐ ｒｏ ｔ ｅ ｉ ｎ  ａ ｎ ｄ  ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｃ ｉ 打  ｎ  ｔ ｈ ｅ
 


ｌ ｉ

ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏｐ ｎ ｇ ｉ

ｔｉ ｂｉ ａｌｅ
ｐ ｐｈ ｙ ｓｉ ｉ ｓｏｆ  ｍ ｉｃｅ ．  Ｈｉｓｔｏ ｌ Ｈｉｓｔｏｐ ａｔｈ ｏ Ｌ  ３ ０ （  １
）
：  ７７ ８ ５ －

，
２０ １ ５ 

．

１ ８ ．  Ｌｖ Ｓ Ｌ ｕ 
，
ｉ  Ｈ ，
Ｃ ｕｉ  Ｊ ，
Ｈ ａ ｓ ｅ ｇ ａｗ ａ Ｔ Ｈ ｏ ｎ ｇ ｏ Ｈ Ｆ ｅ ｎ ｇ Ｗ Ｌ 
，
 ，   ．  ｉ Ｊ ， 
Ｓ ｕｎ  Ｂ Ｋｕ ｄ ｏ Ａ Ａ ｍ
，

，
ｉ ｚ ｕ ｋａ



Ｎ Ｌ ，
ｉ Ｍ Ｈ ： ｉ ｓｔｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ  ｅ ｘ ａｍ ｎ ａｔ ｉ ｉ ｏ ｎ  ｏ ｆ  ｃ ａｔｈ ｅ ｐ ｓ ｉ ｎ Ｋ ，  ＭＭ Ｐ  ａ ｎ ｄ  Ｍ Ｍ Ｐ ２  ｌ ｉ 

ｎ

ｃ ｏｍ
ｐ ｒｅ ｓ ｓ ｅ ｄ  ｐ ｅ ｒ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｌ ｌ ｉ
ｇ ａ ｍ ｅ ｎ ｔ  ｄｕ ｒ ｉ ｎ ｇ  ｏ ｒ
ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ｉ ｃ  ｏ ｏ ｔ ｈ  ｍ ｏ ｖ ｅ ｍ ｅ ｎｔ  ｉ ｎ  ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｓ ｔ ｎ

 ｔ ： ｉ

ｄｅ ｆ
ｉ ｃ ｉ ｅ ｎｔ  ｍ ｉ ｃ ｅ ．  ／ Ａ Ｔｏ／ ｌ Ｔ／ ｙ 如 Ａ  ４ ５ 口 ）
： ３ ０３ －

３ ０９， ２０ １ ４ 

．

７６


 山 东 大学 博± 学 位论文





Ｓ Ｃ Ｅ ＮＴ Ｃ Ｒ Ｅ Ｐ ＲＴ Ｓ


ｐ
Ｉ Ｉ Ｆ Ｉ

Ｏ Ｐ ＥＮ
 Ｉ
Ｃ ｏ ｍ ｂ ｎ ａ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｉ Ｉ Ｌ ６ ａ ｎ ｄ ｓ Ｌ ６ －
ｌ
－


Ｒ

ｄ ｎｔ ａ
ｙｒ ｅ ｇ ｕ ａ ｔ ｅ ｖ ａ ｒｙ ｎ ｇ
ｆｆｅ ｒ ｅ



ｉ ｉ ｌ ｌ ｌ  ｉ
ｉ

ｊ 
ｌ ｅ ｖ ｅ ｓｏ ｆ ｌ  ＲＡ Ｎ ＫＬ －
ｉ ｎｄ ｕ ｃ ｅｄ



三 ！  ！
ｏ ｓｔ ｅ ｏｄ ａ ｓｔ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓｌ ｈ ｒ ｏ ｉ ｕ ｇ ｈＮ Ｆ －
ｋ Ｂ ，

Ｅ Ｒ Ｋａ ｎ ｄＪ ＮＫ  Ｓ ｉ

ｇ
ｎａ ｌ ｉ ｎ ｇｐ ａ １ ｈ ｗ ａ ｙ ｓ

 ：

、 王
Ｕ ２
ｉ ｉ ｉ ｉ ｉ
：
Ｗｅ ｉ  Ｆｅ ｎ
ｇ ， 
Ｈ ｏ ｎ ｇ ｒｕ ｉ  ｔｊ
，
Ｔｍ
ｇ
ｔ ： ｎ
ｇ
Ｌｕ ｏ
， 
Ｄ ；  Ｌ ｉ ｉ ｊ
， 
Ｊ ｕ ａ ｎＤ ｕ
＇
Ｊ ｉ ｎ
ｇ
Ｓｕｎ
， 
Ｗｅ Ｗ ａ ｎ ｇ ｉ 



，

＾ ＾ ＾ ＊ 

＾
Ｘ ｕ ｃ ｈ ｕ ｎＨ ａ ｎ ｉ
，
Ｋａ ｉ

ｙ
ｕｎ Ｙａ ｎ ｇ ， 
Ｊ ｉ ｅ Ｇｕｏ ，
Ｎ ｏｎｏ Ａｍ  ｉ ｚｕ ｋ ａ  ＆Ｍ ｉ ｎ
ｑ
ｌ  Ｌ ｌ

Ｉ ｎ ｔ ｅ Ｈｅｕ ｋ ｉ 打 ｉ ｓ  ｋｎ ｏｗ ｎ  ｔ ｏ  ｉ ｎ 出 ｒｅｃｔ ｌ

ｙ 
ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｃ ｉ ａ ｓ ｔ   ｆｏ ｒ ｍ ａ ｔｉ ｏｎ ｂ 
ｙ ｐ 
ｒｏ ｍ ｏｔ ｎ ｉ

ｇ 
ｒｅ ｃ ｅ
ｐ
ｔｏ ｒ  ａ幻 如ｔ
ｏｒ


ｏｆ ｎ ｕ ｃ ｅ ａ ｒ ｆａ ｃｔ ｏ ｒ ｋａ ａ
－

Ｂ ｎ ａ ｎｄ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ） ｒ ｏｄ ｕ ｃ ｔ ｏ ｎ ｂ ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｂ Ｕ ｓｔ ｉ ｃ ／ ｓ ｔ ｒ ｏ ｍａ ｃ ｅＫ ｓ Ｈ ｏｗｅｖｅ ｒ ｔｔ ｌ ｅ 

ｓ
 ｌ  

ｐｐ

ｇ （  ｐ
ｉ 
ｙ 
ｉ ｌ  ． 
， 
ｉ ｉ ｉ

ｋｎ ｏ ｗｎ ａ ｂｏ Ａ ｔｈ ｅｄ ｅｃ ｔ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｈ ６  ｏ ｎ ｏ ｓ ｔ ｅｏ ｃ ａ ｓｔ ｏ ｅｎ ｅ Ｈｅ ｗ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒｍ ｎ ｅ ｄ ｈｅ ｄ ｒｅ ｃｔ ｅ 衔 ｏｆ
－

 ｉ ｒ  ＿
 ｌ ｓ ｉ ｓ ．  ｒｅ ｔ   ｃｔ ｓ  

ｇ
 ｉ    ｉ  ｉ
， 

：
比 －

６ ａ ｎ ｄ ｔ ｓ
 ｉ  ｓ ｏ ｕｂ ｅ ｌ ｌ  ｒ ｅｃ ｅ
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ｔｏ ｒ （ ｓ

！ ｔ －
－

６ Ｒ） ｏ ｎ ＲＡ Ｎ Ｋ 
 Ｉ ｏ
－

ｍ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｏｓｔ  ｅｏ ｃ Ｕｓ ｔ  ｆｏ ｒ ｍａ ｔ ｏ ｎ ｂ ｙ ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｉ 


ｄ ａ ｓｔ  ｐ
ｒ ｅ ｃ ｕ ｒｓ ｏ ｒｓ


？

＇ ／＞  Ｖ进 用 ． Ｗｅ ｆｏ ｕｎｄ  ｌ Ｌ６ ／ｓ ｌ Ｌ ６Ｒ ＞
 ｓ ｉ

ｇ
ｎ 巧ｃａ ｎｔ ！

ｙ ｐ 
ｒｏ ｍ ｏｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ   ｓ ｕ
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ｒｅ ｓ ｓｅ ｄ ｏ ｓ ｔｅ ｏ
 ｄａｓｔ ｄ  ｉ 衔 ｒ ｅ ｎｔ
ｉ ａｔ ｉ ｏｎ  ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ
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 ｉ

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反 ＡＮ Ｋ Ｌ ， 
ｒ ｅｓ
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ｅ ｃｔ Ｋｒｅ ！
ｙ
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ｇ 
ａｂｏ ｎ ｅ  ｒｅ ｓｏ ｒ
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ｉ ｔ ｆｂ ｒ  ｍａｔ ｏ ｎ
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ａ ｓｓ ａ ｅｘ ｒ ｅｓｓ ｏ ｎｏｆ ｏ ｓ ｔｅ ｏ ｃ ａｓｔ ｃ ｍ ａｒｋｅ ｒ ｅｎｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｒａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆａ ｃ ｔ ｏ ？ ｃ ｏ ｎ ｆ

ｉ ｒ ｍ ｅ ｄ ｄ ｉ ｆ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ
ｇ
ｉ ｉ 

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
ｌ

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ｌ  ｉ

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  

， 

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ｇ
ｕ ａｔ ｌ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＲＡ   Ｎ Ｋ Ｌ ｂｄ ｕ ｃｅｄ －
 ｏ ｓｔ ｅ ｏ ｄ ａ ｓ ｔｏｇ ｅ ｎｅｓ ｓ ｂ ｉ 
ｙ 
！ Ｌ －

６／ｓ ｌ Ｌ６ Ｒ ． ！ ｎｔ ｒａ ｃ ｅＨ ｕ ａ ｉ ｆ 
ｓ ｉ

ｇ
ｎａ ｌ ｉ ｎ
ｇ 
ｔ 巧 ｎ ｓ ｄ ｕ ｅｄ ｏ ｎ



ａ ｎ ａ ｌ
ｙ ｓ ｉ ｓ ｒｅ ｖ  ｅ ａ ｅ ｄ Ｌ ｌ （
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６／ｓ ｌ Ｌ ６ Ｒ ＊
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ｕ ａｔ ｅ ｄ ａ ｎｄ ｄ ｏ ｗ 只
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ｇ
ｕ ａ ｌ ｔｅｄ ｔ  ｈｅ
 ｐ
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ｈｏ ｒ
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ｌ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ   ＮＦ －

ｋ 

Ｂ
ｎ ｕｄ ｅ ａ ｆａ ｃｔ ｏ ｒ ｋａ ａ ｈ ｔ ｃｈ ａ ｍ ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｅ ｒ ｏ ｆ ａ ｃｔ ｖ ａｔ ｅ ｄ  Ｂ ｃ ｅ Ｅ Ｒ Ｋ  （ ｅ ｘ ｔ ｒａ ｃ ｅ ｕ ａ ｒ ｓ ｎａ ｅ ｕ ａ ｔ ｅｃ
－ －

ｓ
－ －
ｒ ｃ
ｐｐ ｇ ｇ ｒ
！  ｌ ｌ ｉ ｌ
ｇ
 ； ｉ ｌ ｌ ｌ ｌ 

ｌ
： （ ）， 

ｋ ｎ ａ ｓ ｅ） ａ ｎ ｄ ＮＫ ｃ Ｊ ｕ ｎ Ｎ ｍ ｎａ ｋ ｎ ａ ｓ ｅ） ｍ ｄ ｕ ｏｗ ａ ｎ ｄｈ ｈ ｅｖ ｄ  Ｒ ＡＮ Ｋ Ｔａ
ｔｅ ｃｅ ｄ ｂ Ｌ ｒｅ
巧 ａｃｔ ｖｅ ｋｅ ｎ


－ － －
：

Ｊ ｒ 
ｇ ｙ
ｉ  ｉ ！   ．

ｙ
ｉ  ！ ｉ ！ ｉ ｌ
  （ 
 ， 

ｔｏ ｅｔｈ ｅ ｒ ｏｕ ｒ Ａｎ出 ｎ ｓ ｄｅｍｏｎ ｓ ｔ ｒａ ｔｅ ｔｈ ａｔ  ｉ ｌ

－

６ ｓ Ｌ －
６ Ｒ ｄ  斯 化ｎｔ ； ａＨ 化 ｕ ａｔ ｅＲ Ａ Ｎ ＫＬ －

ｎｄ ｕ ｃ ｅｄ ｏ ｓ ｔ ｅｏ ｃ ａ ｓｔ


／ ｙ ｇ
！ ｌ ｉ  ｌ

ｇ
  ＿ ｉ

ｇ ，  

出 Ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ Ｕｒｔ ｆ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ  ａ ｃｔ ｖ ｈ  ｉ
ｙ 
ｔ ｈ ｒｏ ｕ
ｇ
ｈ ｍ ｏ ｄ ｕ ａｔ ｏ ｎ ｏ ｆ
 ｌ ｉ   ＮＦ ．

ｋＢ ， 
ＥＲＫ ａｎｄ   Ｊ ＮＫ  ｓ ｉ
ｇ
ｎａ ｌ ｉ ｎ
ｇｐ
ａ ｔ ｈ ｗａ
ｙ
ｓ ． Ｔｈｕ ｓ ， 
Ｉ Ｌ
－



６

ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｄ ａ ｓｔ ｏ ｅ ｎ ｅｓ ｂ ｅ
＾

ｋｅ ａ ｄｕａ ｏ ｅ ｈ ｅｒ ａ ｒｏ ｅｓ ｏ ｒ ｏｎ ｆ ａ ｃｔ ｏ ｒ ｏ ａｓ ａ ｏ ｌ ｂｏ ｎ ｅ ，
ａ ｎ ｓａ
护 ｏ ｔ ｅｃ ｔ ｏ
．
ｓ ｒ ｔ ｒ ｔ ｒ ｒ
ｙ ｐ
ｌ  ｌ   ｉ  

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ｌ ｉ ｌ   ｉ 

ｙ ｐ
ｌ ；

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 ｔ  


  



ｄｅ ｅ ｎｄ ｎ ｏｎ  ｔｈ ｅ  ｌ ｅｖｅ ｌ  ｏｆ ＲＡ Ｎ Ｋ Ｌ ｗ ｔｈ ｎ ｔ ｈｅ  ｆ ｏｃ ａ ｌ  ｍ ｋ ｒｏ ｅ ｎ ｖ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ 

，
ｐ ｇ
： ｉ   ｉ ｉ  ｉ

；
Ｂ ｏ ｎ ｅ  ｒ 幻Ｔ ｏ ｄ ｅ ｍ ｊ ｌ
ｇ
Ｕ  ａ ｃｈ ｉ ｅ ｖｅｄ  ｂ
ｙ 
ｃｏ ｕ
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ｌ ｉ ｎ
ｇ 
ｂ ｅ ： ｗｃ ｅ 打 ｏ 巧  ｅｏ Ｍａｓ ｔ ｓ  ａｎ ｄ ｏ  ｓｔ ｃｏ ｄａ ｓ ｔｓ ．
 Ｏｓ ｔ ｅ ｏ ｂ ａｓ ｔ ｌ ｓ  ａｒｅ  ｂｏ ｎ ｅ
－

ｆｏ ｒｍ ｉ ｎ
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ｇ
：
ｃ ｅｉｌ ｓ ｔ ｈ ａｔ  ａ ｌ ｓ ｏ  ｓｕ
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ｏ ｒｔ  ｔ ｈ ｅ  ｂ ｏ ｏ ｉ ｌ
ｇ
ｉ ｃ ａ ｌ  ｆｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ａ ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａｓ ｔ ｓ
  ｌ ，  ｕｌ ｉ ｌ ｃ ｈ  ａｒｅ  ｈｉ
ｇ
ｈｌ
ｙ 
ｓ
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ｅｃ ｉ ａｌ ｉ ｚ ｅ ｄ  ｎｉ ｕ ｌ ｔｉ ｎｕ ｄ ｅａｔ ｅ ｄ  ｃｅ ｉｌ 

ｓ

ｄ ｅ ｒ
ｉ ｖｅ ｄ  ｆｒ ｏｍ ｈ ｅ ｍ  ａ Ｕ ｉ

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ｏ ｉ ｅ ｔｉ ｃ
 ｐ
ｒｅ ｃ ｕ ｒ ｓｏ ｒ  ａ ｎ Ｊ  ａ ｒｅ ｕ ｎ
ｑ
ｕ ｅ ｙ ｃａ
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
ｌ  Ｈ ａａ ｉ ｎ ａ ｒｂ ｏ ｎ ｅ ｒｅ  ｓ ｏｒ
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ｔ ｉ ｏｎ
三
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
－

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■

ｍ ｅｎｔ ｏｆ ｏｓ ｄａ ｄ 獻ｅ ｎ 化 ｒａ ｃ ｄ ｏ 打 ｗ
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ｔ ｅｏ ｓ ｔ ｃ ｉ 從 ｕ ｒｓ ｏ ｆｓ  ｔ ｏ ｍ ａ ｔｕ  ｒ ｅ  （ ＞ｓ ｔ ｓ  ｒｅ
ｑ
ｕｉ ｒｅｓ  ｉ  ｉ ｔ ｈｏｓ ｔ ｅ ｏｂ ｉ ａ ｓ ｒ
ｉ ｃ／ ｓ ｔ 你ｍａ  ｃ ！
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￥
ｐ
 
ｉ ｌ

ｔ ｈｒ ｏ ｕｇ ｈ  ｃ ｅｌ ｌ  化  ｃ ｄ Ｈ 打ｔ ｅ ｒａ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｓ ａ  ｎ ｄ 说 化ｏ  ｄａ ｓ ｈ ｃ  ｆａ ｃ ｔ ｏｒｓ  ｓ
ｙ
ｎｔ ｈ ｅ ｓ ｚ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｉ 
 ｓ ｅｃ ｅ ｔｅｄ ｂ
ｒ 

ｙ 
ｏ ｓｔｅ ｏ ｂ ａｓｔ ｓ ｌ
＾  ｓ ｕｃｈ ａ ｓ   ｒ ｅ ｃｅ
ｐ
ｔ ｏ 

ｒ

玉
ＲＡ Ｎ ＫＬ ） ＲＡ ｈ Ｋ Ｌ ｂ ｎｄ ｓ ｔ
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ａｃ ｔ ｉｖ ａｔ ｏ ｒ ｏ ｆ ｎ ｕ ｃｌ   ｅ ａ ｒ ｆａ ｃ  ｔ ｏ ｒ
－

Ｋ 邑 ｌ ｉ
ｇ
ａｎ ｄ（ ，
ａ ｋｅ 

ｙ 
ｓ ｔｉ ｍ ｕｌ ａｎ ｔ ｏ  ｆ ｏｓ ｔ ｅｏ ｄ ａｓ ｔ ｏ
ｇ
ｅ ｎ ｅｓ ｉ ｓ ｏ  ｉ   ｔ ｈｅ

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ｒ ｃｃｅ
ｐ
ｌ ｏｒ  ａ ｃｔ ｉ ｖａ ｔ ｏ ｒ ｏ ｆ ｎ ｕ   ｄ ｅ这ｒ  ｆａ ｃ ｌ ｏｒ －

ＫＢ  （ ＲＡ ＮＫ ） 
ｒｅ ｃ ｅ
ｐ
ｔ ｏｒ ｅｘ 

ｐ
ｅ ｓ ｓｅ ｄ ｏ ｎ  出
ｒ  ｅ  ｓｕ ｒ 拉ｃｅ  ｏ ｆ ｏ ｓ 化ｏ ｃ ｌ ａ ｓｔ
 ｐ
ｒ ｃ ｃ ｕ ｒｓ ｏ 技 ，
ａ ｎ 

ｄ

旅化 Ｏ巧
Ｔ
化ｓ 姐ｎ ｏ ｒ ａｓ以
货ｒ ＾ ｏｒ 化ｃ
巧带 於 ａ 巧 ｏ ｄ ａ ｅ ｄ ｆａ ｃ ｏ ６ ａ ｎ ｄ  ｄ ｏ、 、 打 巧 ｒｅ ａ ｎ ｎ 这Ｕ 打 ｎｓ
＇
ｕ ｂｓｅ ｕｅ ｎｔ
＇

ｆａ ａ
－ 

－
ｓ ａ ｔ ！ ！ ｒ ｉ  ｓ ｔｒ
ｑ
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ｇ
 ，
  ｉ

ｙ


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ｇ 

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ｄ ｉ ｉｃ ｔ ｉ ｏｎ
 ｐａ
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ｙ
＇

， 
ｓ ｕ ｃｈ  ａ ｓ  ｔ ｈｅ  拟 ｈ ｏ
ｇ
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．

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 ｐ
ｒ ｏ ｔ ｅ ｎ ｋｍａ ｃ
ｉ ＭＡＰ Ｋ  ｓ
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 ｐ
ａ ｔｈ ｗａ
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：  Ｔｈ ｉ ｓｉ 打ｍ ｍ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅｓ  ａ ｃ ｔ ｖ ａ ｉ
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＊

、
ｔ  ｉ ｏｎ ｏｆ  ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｃｒ
ｉ ｐ
ｔ ｉ ｏｎ拉ｃ ｏｒ ｎｕ ｄ 拘 ｒ ｔ  ｅ ｃ ｔｏ
ｆ ｒ
－

Ｋ良 （ ＮＦ －

ｋ Ｂ） ， 
ｌ ｅａｄ ｉ ｎ
ｇ 
化 化ｃ ｆ
ｏ  ｒ ｍ ａｔ ｏ ｎ ａ 只 ｄ ｍ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ ｏ ｓ ｔ
ｉ   ｉ  ｅｏ ｃｌ ａ ｓ ｔ ｓ 

气

Ｒ ＼Ｎ Ｋ Ｌ ｄｅ ｐ ｅｎ ｄ ｅ ｎ －

ｔ  ｏ ｓ ｃ ｏｄａ ｔ ｓ ｔ ｏ ｅ ｎ ｅｓ ｓ ｒｅ ｒｅ ｓ ｅ ｎｔ ｓ ｔ ｈｅ ｍａ ｏｒ ａｔ ｈ ｗ ａ ｗｈ ｅ ｒｅ ｂ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏｄ ａ ｓｔ ｏ ｅ ｎ ｅｓ ｓ  ｏｃ ｃｕ ｒ ｓ  ａｎ ｄ  ｉ ｓ

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ｐ ｙ ｇ
． ｉ ｉ
ｐ
  

ｇ ｙ
，
ｊ
：

  

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ｋ ｎ ｏｗｎ ａ ｓ   ｃ 加 扫ｎ 知 ｉ ） ｏ ｓ ｔ ｅ ｏｄ ａ ｓ ｔ  ｆｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏｎ ．  Ｈ ｏｗｅ ｖ ｅ ｒ ， 
ａ ｎ ｕ ｍ ｉｉ ｅ ｒ ｏ ｆ ｏ ｈ ｅ ｒ ｃ  ｔ 

ｙ
ｔ ｏ ｋ ｎ 货 ｈ 幻 ｖ ｅ ｂｅ ｅｎ
ｉ ｉ
   ｓ ｈ ｏ ｗｎ  ｃ ａ
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這ｂ ｋ  ｏｆ ｓ ｕｂ 

－

ｓ Ｕ ｕ ｄｎ ｔ
ｇ 
民 ＡＮ Ｋ Ｌ  ｔ ｏ  ； ｎｄ ｕ ｃ ｅ ｏ ｓｔ  ｅ ｏｄ ａｓ ｔ  ｏｒ ｍ ａ
ｆ ｔ ！ 饼１  ｆｒｏ ｍ  ｍ ａ ｒｒ ｏ ｗ
－

ｄｅ ｒ ｉ ｖ 货ｔ ｏ ｓ 化 ｏｄ ａｓ ｔ 
 ｐ
ｒｅ幻 ｉ ｒ ｓ ｏ ｒｓ ， 
ｉ ｎｃ ｕ ！ 击 曰 ｇ ＴＮ Ｆ －

ｏ ，
＂
比 ？
ｅ ｅ 份ｒ ｓ
ｆ ｋ化ｄ 仿
－

ａ ｎ ｄＩＬ ｌ ｈ ｅｓ ｅ ｎ ｏ ｎ
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＇
Ｌ ６ ｃ ａｎｏ ｎ ｃａ ｅ ｏ ｃ ａ ｓｔｏ ｅ 打ｅｓ ａｒ
ｅ ｏｓｔ ｕ ａ ｃ ｒ Ｕ ｉｃ ａ ｌ  ｒ ｏ ｌ ｅ
ｏ 巧 

－ － －
－

！ ｉ １ ｌ  ｉ ｓｔ ｓ   ！
ｐ
 ｉ  

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ｌ ｌ

ｇ
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， ＞  
 

ａｔ ｈｏ ｌｏ ｉ ｃａ ｌ ｂ ｏ 円 ｅ ｒ
ｅｓ ｏｒ ｔ ｉ ｏｎ ｈ ｏ ｗｅ ｖ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｕ ｎ ｄｅ ｒｌ ｉ ｎ ｍｅ ｄ ａ 打 ｉ ｓ ｍｓ ｒｅ ｍ ａ ｉ ｎ  ｕ ｎ ｄｅ ａｒ
ｐ ｐ
  ｉ 

．

ｙ ｇ
  

ｇ
， 


ｅｎ ｔｏｆＢ ｏ ｎ ｅＭｅ ｈ
ｉ
Ｄ ｃｐ ａ ｔｍ ｔ ａ ｂｏ ｓ ｍ Ｓｃ ｈｏ ｏ  ｏｆ Ｓ ｔ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｏ Ｓ ｈ ａｎ ｄ ｏｎ Ｕ ｎ ｖｅ 巧 汪 ｙ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏｎ Ｐ ｒ ｏｖ ｅ ａ  Ｋｅ


ｙ
ｒ
ｇ ｙ 弓

ｇ
ｌ ｉ ｌ ｌ ｉ ｉ ｌ
，  ， 

 Ｌ ａ ｂｏ Ｏ Ｃ ｈｈ Ｍ ｅ ｄ ｋ ａ Ｕ打
２ ＊

Ｃｈ
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ｒ ａｔ ｏ ｒ ｏｆ ｒ ａ Ｔ 巧ｕ ｅＲ ｅ ｗ巧 ｒ ａｔ ｏ ｎ Ｊ ｎ ａｎ ａ ５ ｈａ ｎ ｘ ｖｅ 朽 ｔ Ｔａ ｕ进 打ａ  Ｄ ｅ 进ｉｍ ｅｎ ｔ ｏ ｆ


ｙ ｇ ｙ
 ｉ ，
ｐ
ｉ ｉ ｉ 
ｙ
 ｌ ｉ ， ！ Ｉ ； ｉ ．


，  ， ，  ，

；
Ｓ ｔｗｉ ａ ｔ ｏ ｏ ｉ

ｇｙ ，
曰 
ｉ ｆ ｕＨｏ ｓ
ｐ ｉ ｔ ａ ｌ  ｏｆ 斯 ｄ ｏｎｇ 
Ｕ ｎ ｖｅ 巧 ｉ ｉ ｔ
ｙ ， 
Ｊ ｉ ｎ ａｎ ， 
Ｃ ｈ ｎａ ｉ
．  Ｄ ｅ ｐａ ｒｔ ｍ 饥 ｔ ｏ ｆ Ｄ ｅ ｖ ｅ ｏ ｐｍ 饼  
！ 、 ｔ ａ ！
 Ｂ 沁 ｂ ｇｙ ｏ ｆ 
Ｈ ａｒ ｄ


？

Ｔ ｉ ｓｓ ｕｅ
， 
６ｒａ ＾ ｉ ｕａ 掉 Ｓ ｃ ｈｏｏ ！  ｏｆ ＤＭ 
ｉ ｔｄ ｌ  Ｍ ｅｄ ｉ ｃ ａｗ
， 
Ｈ ｏ ｋｋａ ｄ ｏ Ｕ ｎ ｉ  ｉ ｖｅｒ ｓ ｉ ｔ
ｙ ， 
Ｓａ
ｐｐ
ｏｒｏ
，
］
啤觀 ．
Ｃ ｏｒｒ Ｍ ｐ Ｏ
Ｔ ｆｉ ｅ ｎ ｏ？ ？ ｄ  ？ 、 ｒ ｅ
ｑ
ｕｅ ｓｔ＊  ｆ ｏ 

ｒ

： ｍａ ｔ 试 ｉ ｄ ｋ  ＆ ｈｏ ｕ ｋ！ ｂ ｅ ａ ｄ   ｃ ＾ ｃ ｓ ｓ ｅｄ  ｔ ｏ  Ｍ丄 ？

（
ｅ ｒ ｒｗ ｄ ｓ 

：

Ｓ ｔ  接 Ｎ Ｔ 皆 把 ｇ接 Ｐ Ｏ 持 Ｔ Ｓ  ｜
７ 泌ｌ 々 ｎ  ；
Ｄ Ｏｋ Ｉ Ｏ ｉ ． ａ ３ ８／ ｓｒ
巧Ａ １ ４ １ １  
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玉

７７


 山 东 大学博壬学 位论文
 
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

Ｕ ＜
，

６ｂ ａ
 ｐ
ｒ ｍ ｎ 巧 ａ 衍 ｍ ａ ｔｏ ｒ
ｙ 
ｃ
ｙ
ｔ ｏ ｌ ｃ ｉ 打 ｅ  ｂｅ ｌ
切）
ｇ
ｉ ｎ
ｇ 
化  ｔ ｈｅ
 斜
＞ １ ３ ０  ｆａ ｍ ｄ
ｙ ， 
ｔ 冰ｋｈ  ｉ ｓａ ｌ ｓｏｃ ｏｍ
ｐ
ｏ ｓ ｅｄｏ ＨＬ －

！ ｝ ， 
ｌｅ ｕ 

－

ｃｅ ｍ
ｆ ａ  ｍ ｈｉ ｂ訂 前 ｙ ｅｃ 於ｒ ｙｊ Ｆ
ｆ ｏ 打幻＞ ｓ ｔ ａｔ 化 Ｍ ＯＳＭ ｃ ａｒｄ ｏ ｔ ｒ
巧油 ｍ ａ ｎ ｄｎ ｏｖ ｄ ｎ ｃ ｕ 泣ｏ
ｐｈｉ
ｎ Ｂ ｃ ｅＵ ｓ ｔ ｍｕ ａｔ 如


ｙ
－ － －

ｉ  ｉ ｌ  ｌ ／ ｉ ｌ
 ） ，  《 ） ，  ，

。
ｉｌ ｅ 化 ｒ ３
ｆ －

， ａｌ ｌ  ｏｆ 、 浊 ｋ ｈ ｈ 站ｅ ｇ ｓ ｉ
ｙｃ ｏ ｐ ｒ
ｏｔ ｅ ｍ －

１ 游 《
ｇｐ
ｌ ３０ ） 
ａ ｓ  ａ ｃ 幻 打ｉ ｍ 谷 ｎ  ｓ ｉ
ｇ
ｎａ ｌ  ｔ ｒａ ｎ ｓｄ ｕ ｃｅ ｒ ．  Ｂ ｉ ｎｄ ｍ
ｇ
ｏｆ Ｉ Ｌ －

６  ｔｏ  巧 ｓ



ｒ货ｅ
ｐｔ 游 ， ｎ ．
－

級 ，

ｐ
ｒ ｏ说 说ｅ ｓ  ｈ ｏ 描ｏ 述 扣 ｅｒ ｉ 樹 化ｍ ｏ户 

ｇｐ
－

ｉ  撕 也ｅ ，
ｒ但
吟ａ 
ｃｔ ｉ ｖａｔ ｉ
嚷 
Ｊ ａ ｎ ｕ ｓ ｋｉ ｎ ａ ｓ ｅ 
 （ 矜Ｋ 
） ／ｓ ｉ
复
打ａ Ｕ ｒ ａｎ ｓ ｄ ｕ ｃ ｅｒ



这 ｎ ｄ ａ ｃ Ｕ ｖ 汹 佛 〇ｆ ｔ   ｒ ａｎ ｓｃ ｒｌ
ｐＵ
＜ ３ ｎ 巧 ＴＡＴ ） 
ａｎｄ 
ｔ ｈｅ  ＭＡＦ Ｋ  ｐ
ａｔ ｈ ｗ ａｙ ． 至 １ ６ ｈ
－

 ａｓ  ｔ ＞ ｅ ｅ ｎ ｓ ｈ  ｏｗ ｎ  ｏ ｂｅ  ｍ ｐ ｔ 
＾ ！ ｋ 知 公 （ ｈ ｒ ｕＵ ｓ ｅ ａ ｓ 纷


口
’

巧 ｏｄ ａ 化 ＜ ｄ ２
ｈ 过ｓ Ａ
；

ｗ ｈ  ｂ ｏ 打ｅ ｏｓ ｓ ｓｕ ｃ ｏ ｓ ｔｍ ｅ ｎ ｏ 过ｕｓ 公 ｓｔ ｅ ｏ ｒ 〇ｓ ｕ 拟 ａｔ ｏ ｄ  ａ ｒ ｔ ｈ ｒ Ｒ Ｐａ ｅ过 强
ｐ〇 ｒｈ ｅ
这 ｓ ｓ ｅ ｓ ｄ ｓ
ｐ
１  ｉ ｔ ｔ
ｐ
ｌ  ｊ ｉ ｉ ｉ ｔ ｉ



ｇ
：

，
《 ） ，  

，

４
ａｎ ｄ  成 ｕ ｌ ｔ
ｉ ｐｌ
ｅ 妨 
ｙ
ｅｌｏ ｍａ
！

， 
ｉ ｎ ｗｈ ｉ ｄｉ   ｅ ｎ ｈ ａ口 ｃ ｅ ｉ ｉ  化 －

６  ｅ ｖｅ ｉ ｉ ｓ ｏｃ ｃｕ ｒ － 比 －

自 ， 沿 ｇ ｍ ｉ ｃ ｅ ａ ｒｅ 
 ｐ
ｒｏ ｔ ｅ ｃ 化 ｄ  ｆｒ
ｏｍ  ｄ ｅ ｖｅ ｌ ｏ
ｐ
ｉ ｎ


ｇ
＂ ６
ｈ ｅ ｄ ｅ 油 ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ  ｃ ｏ Ｕ ａ ｇｅ ｎ ｏｒ ａ 化 ａｌ  ａ ｒ
ｔｈ ｎ Ｕ ｓ ｂ链
！

ｏｉｎ ｔ 只 ａｍ 讯 ａ ｔｉｏ ｎ ａｎｄ ｎｄｕ

唉ｅ 打 ｗｅ ｏ ｆ ｂ ｏｎ ｅ
．

ｃ ａｓ  ａｓｔ ｈｅ 

－ －

 ｉ ！ ！ ｔ  
，   

ｉ ，  ｌ ｌ 
ｊ

如 １知 ｓ 化 知
７
ｃ 朋 ｓｅ ｄ ｂ 巧 只 巧 ｍ ｄ ｅｐ ｋ ｔ ｋｍ ｖ ｅ Ｊ ｉ 化 ｄ  ｉ ｎ ｍ ｋ乂 ｂ
？

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