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135 배지및시약 PDF
135 배지및시약 PDF
██ 배지
1. A7 고형배지
배지성분
1) 기본배지
2) 완전배지
제조
상품화된 기본배지를 증류수 830 ㎖에 넣고 가온하여 잘 녹인 후 2N NCl로 pH 5.5~
6.0되게 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 냉각시킨 후 완전배지를 무균적
으로 첨가하여 적당한 용기에 분주하여 사용한다.
배지성분
Polypeptone 10.0 g
Yeast extract 10.0 g
배지 및 시약 459
Na2HPO4 4.36 g
KH2PO4 0.25 g
Ammonium acetate 1.5 g
MgSO4‧7H2O 0.2 g
D.W. 1ℓ
제조
각 배지 및 시약 성분을 녹여서, 2M Sodium carbonate을 이용하여 pH 7.5±0.1되게
조정한다. 20 × 150 ㎜ 크기의 나사마개가 달린 시험관에 15 ㎖ 씩 분주하여, 121℃에
서 15분간 고압멸균 한다. 여과 멸균한 10% raffinose 0.6 ㎖와 0.66M sodium
carbonate와 0.32% Cobalt chloride (CoCl2․6H2O)을 각각 0.2 ㎖씩 떨어뜨린다. 시
험관 한개 내지 두개의 시험관 pH을 확인하여 최종 pH가 7.8± 0.1이 되어야한다. 배지
를 사용하기 직전에 10분 동안 중탕하여 열을 가한 후 식힌 다음 여과 멸균한 1.5%
sodium ascorbate (당일 날 만든 것)을 0.2 ㎖을 각 시험관에 첨가하여 사용한다.
3. Baird-Parker agar
배지성분
Base
Tryptone 10 g
Beef extract 5g
Yeast extract 1g
Glycine 12 g
Sodium pyruvate 10 g
Lithium chloride 5g
Agar 20 g
D.W. 950 ㎖
제조
혼합 상품화된 base와 증류수를 정량하여 잘 혼합한 후 가온하여 녹인 다음 pH
7.0±0.2로 조정한다. 121℃에서 15분 고압 멸균한 후 40~50℃로 식혀 EY Tellurite
Enrichment 50 ㎖을 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Base
Yeast extract 11.5 g
Charcoal activated 1.5 g
ACES buffer 6.0 g
α-ketoglutarate Monopotassium 1.0 g
Agar 17.0 g
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 Legionella agar base와 증류수를 매뉴얼에 따라 정량하고 가온하
여 잘 녹인 후 (pH 7.2), 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 45℃로 식혀 Legionella
supplement [L-cysteine (0.4 g/ℓ)․HCl, Ferric pyrophosphate (0.25 g/ℓ)]를 각각 여
과멸균하고 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
-
※ BCYEα-Cys 배지는 BCYEα 배지 제조시 Legionella supplement중 L-cysteine
(0.4 g/ℓ)을 첨가하지 않고 제조하여 사용한다.
5. Bicarbonate 한천배지
배지성분
제조
상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 열을가해 녹인다음 121℃에서
15분 고압멸균한다. 실온에서 50℃로 식힌 다음 sodium bicarbonate (7% solution)를
10 ㎖을 넣고 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 461
6. Bismuth Sulfate Agar
배지성분
Beef extract 5g
Peptone 10 g
Dextrose 5g
Disodium phosphate 4g
Ferrous sulfate 0.3 g
Bismuth sulfate indicator 8g
Agar 20 g
Brilliant green 0.025 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.7± 0.2)
제조
상품화된 혼합배지를 매뉴얼에 따라 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합하여 가열한다
(1~2분 이상 끊이거나 멸균해서는 안 된다). 페트리디쉬에 붓기 전에 침전이 생길 수
있으므로 잘 섞어가며 분주한다.
배지성분
1) Columbia Agar Base
Vancomycin 5.0 g
Trimethoprim 2.5 g
Cephalothin 7.5 g
Amphotericin B 1.0 g
Polymyxin B 1,250 I.U.
제조
Columbia Agar Base (19.5 g/500 ㎖) 또는 Blood Agar Base No.2 (20.0 g/500 ㎖)
을 매뉴얼에 따라 정량하고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균
한 후 50℃ 정도되게 식혀 멸균된 증류수 2 ㎖에 녹인 Campylobacter Selective
Supplement를 첨가한다. 여기에 5~10% 탈섬유한 면양혈액 또는 5~7% lysed 말 혈
액을 첨가하여 거품이 생기지 않게 잘 혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
8. Blood agar
배지성분
제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수 950 ㎖에 넣고 혼합하여 열을
가해 잘 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 다음 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨 면양
혈액 50 ㎖을 무균적으로 넣어 기포가 안 생기게 잘 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여
사용한다.
배지 및 시약 463
9. Bolton Selective Enrichment Broth
배지성분
1) Bolton broth base
Cefoperazone 10.0 ㎎
Vancomycin 20.0 ㎎
Trimethoprim 10 ㎎
Cycloheximide 25.0 ㎎
제조
증류수 500 ㎖에 Bolton Broth 13.8 g 정량하여 열을 가해 녹인다. 121℃에서 15분
간 고압멸균한 후 50℃ 로 식혀 25 ㎖의 lysed 말 혈액과 Bolton Broth Selective
Supplement를 무균적으로 첨가한다. Bolton Broth Selective Supplement를 녹이기
위해, 5 ㎖의 에탄올/ 증류수 (50/50)를 첨가한 것을 1병 넣는다. 용해시키기 위해 천천
히 혼합하여 잘 섞은 다음 멸균된 나사 마개가 있는 용기에 분주한다.
배지성분
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지제조
Proteose peptone 10 g
Yeast extract 3g
Lactose 10 g
Saccharose 10 g
Sodium chloride 5g
Agar 20 g
Brilliant green 0.0125 g
Phenol red 0.05 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 6.9 ± 0.2)
배지 및 시약 465
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
1) Columbia Agar Base
Novobiocin 2.5 g
Cephazolin sodium 7.5 g
Cycloheximide 25.0 g
Bacitracin 12,500 I.U.
Colistin sulphate 5,000 I.U.
제조
혼합 상품화된 Columbia Blood Agar Base 19.5 g을 정량하여 증류수 500 ㎖ 에
넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹이고 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50~55℃로
식힌다. 탈 섬유시킨 말 혈액을 5~7%되게 첨가하고 여기에 에탄올/ 증류수 (50/50)
혼합물 3 ㎖로 녹인 (Supplement는 반복해서 병을 뒤집으면서 녹이며, 용액에 거품이
생기는 것을 피한다). Supplement를 첨가하여 잘 혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사
용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 매뉴얼에 따라 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여
녹인 다음 100 ㎖씩 적당한 용기에 분주하여 121℃에서 15분 고압멸균 한다. 각 용기에
첨가할 탄수화물을 표기하고 glucose, lactose, sucrose, mannitol 등은 최종농도가
1%되게, 그 외 dulcitol, salicin, xylose, maltose, rhamnose와 같은 당은 최종농도가
0.5%되게 첨가하여 잘 녹인 후 4부 시험관에 2 ㎖씩 분주하여 121℃에서 10분간 멸균
하여 사용한다.
※ lactose, sucrose, cellobiose 등과 같은 이탄당은 0.45 ㎛ 막 여과지로 여과 멸균하
여 purple broth base에 첨가하여 사용한다.
배지성분
제조
각 배지 및 시약들을 991 ㎖ 증류수에 순서대로 첨가하고 한천을 5 g을 넣은 다음
배지가 투명해질 때가지 가열한다. 50℃정도로 식한다음 calcium chloride 1%용액을
9 ㎖첨가하여 pH 8.4 로 조정하고 멸균된 나사마개 시험관에 7 ㎖씩 분주한다. 이를
15분간 증기탕 시킨 다음 식혀서 마개를 꼭 막는다. 면봉은 미리 끊인 Sorenson’s
배지 및 시약 467
buffer (pH 8.1)에 담근 다음 짜서 유리용기에 넣어 121℃에서 15분간 멸균하고 실온
에서 건조하지 않게 보관한다.
배지성분
Casamino acid 20 g
Yeast extract 6g
NaCl 2.5 g
K2HPO4 8.71 g
Salt solution 1㎖
D. W. 1ℓ
(MgSO4 5w/v%, MnCl2 0.5w/v%, FeCl3 0.5w/v%,
Dissolve into 0.5 mmol/ℓsulfuric acid) pH 8.5
제조
혼합 상품화된 배지를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 적당한 용기에 분주하여 사용한다.
배지성분
1) Campylobacter Blood-Free Agar Base
Cefoperzone 4.0 g
Amphotericin B 2.0 g
Teicoplanin 5.0 g
배지성분
1) Campylobacter Blood-Free Agar Base (22.75 g/500 ㎖ D.W.) CM0739B
제조
Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base 22.75 g을 정량하여 증류수 500 ㎖
에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여 녹여 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 멸균된 배지는
50℃까지 식힌 후 여기에 2 ㎖의 멸균된 증류수로 녹인 CCDA Selective Supplement
1병을 첨가하여 잘 섞고 멸균된 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 469
19. CDC anaerobe blood agar
배지성분
1) base
Casein peptone 15 g
Soy peptone 5g
Yeast extract 5g
NaCl 5g
Agar 15 g
2) 첨가제
Hemin 0.005 g
Vitamine K 0.01 g
Sheep blood 50 ㎖
제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 950 ㎖ 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 녹인 다음
pH를 7.2로 조정하고 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 50℃로 식힌 후 각각의 첨가제
를 넣어 잘 혼합하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
20. CH 배지
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣로 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다음 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합한 후 가온하여 녹인 후 121℃에
서 15분간 고압멸균 한다. 50℃로 식힌 다음 탈 섬유소된 양 혈액 18 ㎖ (9%)을 넣고
잘 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
1) 기본 배지
■ Glucose 배지
PPLO agar w/o CV 21 g
Glucose 5g
D. W. 700 ㎖
pH 7.3
■ Arginine 배지
PPLO agar w/o CV 21 g
Arginine 2g
D. W. 700 ㎖
pH 6.5- 7.0
2) 완전배지
배지 및 시약 471
제조
각 기본배지를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수 700 ㎖에 넣고 혼합하고 가온하여 잘
녹인 다음 glucose 배지는 pH 7.3, arginine 배지는 pH 5.6~7.0으로 조정하여 121℃
에서 15분간 고압 멸균한다. 멸균된 기본배지를 50℃로 식힌 다음 완전배지의 각 성분
들을 무균적으로 첨가한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
기본배지는 Chanock 고체배지 성분 중 PPLO broth w/o 21 g을 사용하는 것 만
제외하고는 동일하며, 완전배지를 위한 첨가 성분도 고체배지와 동일하다.
제조
Chanock 고체배지 제조법과 동일하며, 배지 분주 시 액체배지임으로 시험관에 분주
하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 900 ㎖증류수에 넣고 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다
음 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 50℃ 정도로 식힌 다음 탈 섬유소한 말 혈액 100 ㎖
(최종농도 10%)을 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Tryptose 20 g
Cystine 0.5 g
Sodium chloride 5g
Sodium sulfate 0.5 g
Agar 3.5 g
Phenol Red 0.017 g
D. W. 1ℓ
제조
각각의 glucose, sucrose, maltose, lactose 10 g을 100 ㎖ 증류수에 용해한 후 0.22 ㎛
로 멸균여과하여 10% 당 보존용액을 제조한다. 혼합 상품화된 Cystine tryptic agar
(CTA) 29.5 g을 증류수 900 ㎖에 첨가하여 완전히 용해하여 121℃에서 15분 동안 멸
균한 후 50℃로 식힌다. 무균적으로 10% glucose 용액 100 ㎖을 CTA 배지 900 ㎖에
첨가한 후 잘 혼합하여 나사마개 시험관에 7 ㎖씩 분주하여 4℃에 보관한다.
배지성분
GC medium base
Pancreatic digest of casein 7.5 g
Selected meat peptone 7.5 g
Corn starch 1g
Dipotassium phosphate 4g
Monopotassium phosphate 1g
Sodium chloride 5g
Agar 15 g
(최종 pH 7.2 ± 0.2)
제조
GC medium base 36 g을 증류수 950 ㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한 후 90~
100℃일 때 바로 꺼내어 양혈액이 5%가 되도록 무균적으로 가한 후 잘 섞어준다. 50℃
로 식힌 다음 IsoVital X (BBL) 10 ㎖을 넣고 잘 혼합한 다음 페트리다쉬에 20 ㎖씩
배지 및 시약 473
분주하여 사용한다.
MEM 500 ㎖
200 mM L-glutamine solution 5㎖
7.5% Sodium bicarbonate 8㎖
FBS 50 ㎖
Cycloheximde 1 ㎍/㎖
제조
혼합 상품화된 MEM 배지 500 ㎖에 각 배지 및 시약 성분을 무균적으로 정량하여
넣고 잘 혼합하여 사용한다.
배지성분
제조
Ground beef를 정량하여 증류수에 넣고 저으면서 끓인 뒤 상온으로 식혀 표면의 기
름을 제거하고 여과 한다. 전체 부피가 1 ℓ가 되도록 증류수를 맞추고 Peptone 30 g,
yeast extract 5 g, K2HPO4 5 g, 0.025% Resazurin 용액 4 ㎖, Dextrose 5 g을 정량
하여 놓고 끓인다. 식힌 후 0.5 g L-cysteine을 첨가하고 HCl을 넣어 pH 7.0으로 조정
한 다음 97% 질소, 3% 수소가 있는 상태에서 7 ㎖ 씩 나사마개 시험관에 분주하되
meat가 전체의 1/5 부피가 되도록 넣어준다. 121℃에서 15분간 멸균한다.
Special pepton 20 g
Yeast extract 2g
Mannitol 20 g
Sodium pyruvate 2g
Sodium chloride 1g
Magnesium sulphate 0.01 g
Sodium desoxycholate 0.5 g
Neutral red 0.03 g
Crystal violet 0.001 g
D.W 1ℓ
2) Supplement
Cefsulodin 7.5 ㎎
Irgasan 2.0 ㎎
Novobiocin 1.25 ㎎
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 완전히 녹인
다. pH 7.4±0.2로 조정한 다음 121℃에서 15 분간 멸균하고 50℃ 정도로 식혀 2 병의
supplement를 무균적으로 첨가하여 넣고 잘 섞어준 후 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.
배지성분
Pantone 10 g
Bitone 10 g
Tryptic digest of beef heart 3g
Corn starch 1g
Sodium chloride 5g
Agar 15 g
배지 및 시약 475
제조
혼합 상품화된 배지 44 g을 증류수 950 ㎖을 정량하여 넣고 열을 가해 잘 녹인 후
121℃에서 15 분간 고압 멸균한다. 멸균된 base를 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨
면양 혈액 50 ㎖를 무균적으로 넣고 기포가 안 생기게 잘 혼합 한 후 페트리디쉬에 분
주하여 사용한다.
배지성분
Pantone 10 g
Bitone 10 g
Tryptic digest of beef heart 3g
Corn starch 1g
Sodium chloride 5g
Colistin sulfate 10 ㎎
Nalidixic acid 10 ㎎
Agar 15 g
제조
혼합 상품화된 배지 44 g을 증류수 950 ㎖을 정량하여 넣고 열을 가해 잘 녹인 후
121℃에서 15 분간 고압 멸균한다. 멸균된 base를 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨
면양 혈액 50 ㎖를 무균적으로 넣고 기포가 안 생기게 잘 혼합 한 후 페트리디쉬에 분
주하여 사용한다.
배지성분
배지성분
1) Cooked meat medium (혼합상품배지가 있음)
Trypyone 10 g
Sodium thioglycollate 1g
Soluble starch 1g
Dextrose 2g
Neutral red(1% aqueous) 5㎖
D.W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 Cooked meat medium 1 g과 희석액 15 ㎖를 시험관 20×150 ㎖에
넣고 고기알갱이가 물에 젖도록 방치한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용
한다.
배지 및 시약 477
34. Corn meal-Tween 80 agar
배지성분
Corn meal 50 g
Agar 5g
D. W. 1ℓ
Tween 80 3㎖
제조
Corn meal를 정량하여 500 ㎖ 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다음 1%
Tween 80을 첨가하여 총량이 1 ℓ 되도록 증류수로 채운다. 여기에 한천을 첨가하고
완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Decarboxylase base
Peptone 5g
Beef extract 5g
Brom cresol purple 0.01 g
Cresol red 0.005 g
Glucose 0.5 g
Phridoxal 0.005 g
D.W 1ℓ
(최종 pH 6.8±0.2)
제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 열을
가해 완전히 녹인 후 base를 각각 250 ㎖ 씩 적당한 용기에 분주하여 4등분 한다. 각
용기에 lysin, arginine, ornithine 및 음성 대조용이라고 표시하고 각 해당되는 시약을
1%되게 첨가한다. 즉, L-lysine dihydrochloride, L-arginine monohydrochloride,
L-ornithine dihydrochloride를 첨가하고 음성대조에는 아미노산을 첨가하지 않는다.
첨가된 시약을 가온하여 녹인 후 나사마개 시험관에 3~4 ㎖씩 분주하고 여기에
paraffin oil 1 ㎖을 첨가하여 121℃에서 10분간 고압 멸균하여 사용한다.
배지성분
Peptone 10 g
Lactose 10 g
Sodium despxycholate 1g
Sodium chloride 5g
Dipotassium phosphate 2g
Ferric citrate 1g
Sodium citrate 1g
Agar 15 g
Neutral red 0.03 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 7.3 ± 0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 성분들이 완전히 녹을
수 있도록 가온하여 1분간 끓인 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용 한다 (이 배지는 고
압멸균을 해서는 안 되며 다시 녹여 사용 할 수 없다).
배지성분
배지 및 시약 479
Ferric ammonium citrate 2g
Sodium Desoxycholate 5g
Agar 13.5 g
Neutral red 0.02 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.5 ± 0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 성분들이 완전히 녹을
수 있도록 가온하여 1분간 끓인 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용 한다 (이 배지는 고
압멸균을 해서는 안 되며 다시 녹여 사용 할 수 없다).
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 후 pH를
7.3±0.2로 조정한다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균하여 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.
39. DPBS
배지성분
DPBS 분말
제조
상품화된 DPBS 분말을 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 1시간 정도 교반 후
배지성분
DMEM 분말
sodium bicarbonate (NaHCO3) 3.7 g
D.W. 1ℓ
제조
상품화된 DMEM powder와 sodium bicarbonate를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수
에 넣고 2~3시간 정도 교반한다. 염산으로 pH 7.4로 조정하고 막 여과지 (0.22 ㎛)
로 여과 멸균하여 사용한다.
Proteose peptone 15 g
Yeast extract 4g
Sodium thioglycollate 1g
Na2HPO4 10 g
Raffinose 4g
D.W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한다. 가온하여 녹인 다음 121℃
에서 15분간 고압 멸균하고 50℃정도로 식혀 멸균한 0.66 M sodium carbonate을 사
용하여 pH를 7.8±0.1로 조정하여 적당한 용기에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 481
42. EMJH medium
배지성분
Base
Sod. Phosphate dibasic 1.0 g
Potassium phosphate monobasic 0.3 g
Sod. chloride 1.0 g
Ammonium chloride 0.25 g
Thiamine 0.005 g
(최종 pH : 7.5)
제조
혼합 상품화된 base 2.3 g을 정량하여 증류수 900 ㎖에 넣고 가온하여 완전히 녹인
후 121℃에서 15분간 고압멸균한다. 50℃정도로 식힌 후 Leptospira Enrichment
EMJH 100 ㎖을 첨가하여 잘 섞어 멸균된 마개 시험관에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
배지성분
제조
상품화되어 있는 DMEM 배지에 FBS 와 L-glutamine을 첨가하여 100 ㎖로 조정하
고 막 여과지 (0.22 ㎛) 로 여과 멸균하여 사용한다
배지성분
제조
상품화되어 있는 RPMI 1640 배지에 FBS 와 L-glutamine을 첨가하여 100 ㎖로 조
정하고 0.2 ㎛ 크기의 막 여과지로 여과멸균 하여 사용한다.
46. Fletcher’s 배지
배지성분
base
Peptone 0.3 g
Beef extract 0.2 g
Sod. chloride 0.5 g
Agar 1.5 g
D.W. 920 ㎖
배지 및 시약 483
제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 920 ㎖에 넣고 잘 혼합하여 가온하여 완전히
녹인다. 121℃에서 15분 동안 멸균한다음 50℃ 정도로 식혀 멸균된 토끼 혈청을 8~
10%되게 첨가하여 잘 섞은 후 무균적으로 시험관에 분주한다. 56℃ 수조에서 1시간정
도 방치하고 그 다음 날 다시 1시간정도 둔 후에 꺼내어 사용한다.
47. GN broth
배지성분
Tryptone 20 g
Dextrose 1g
D-mannitol 2g
Sodium citrate 5g
Sodium desoxycholate 0.5 g
K2HPO4 4g
KH2PO4 1.5 g
Sodium chloride 5g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.0 ± 0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인다. 적당한
용기에 분주하고 121℃에서 15분간 고압멸균 하여 사용한다.
48. GVPC 배지
배지성분
제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 가온하여
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균 한 후 45℃로 식혀 Legionella supplement [L-
cysteine (0.4 g/ℓ)․HCl, Ferric pyrophosphate (0.25 g/ℓ)]를 각각 여과멸균 하여 첨가하
배지성분
proteose peptone 12 g
Yeast extract 3g
Lactose 12 g
Sucrose 12 g
Salicin 2g
Bile salt 20 g
Sodium chloride 5g
Sodium thiosulfate 5g
Ferric ammonium citrate 1.5 g
Brom thymol blue 0.065 g
Acid fuchsin 0.1 g
Agar 14 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 7.5 ± 0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 가열하여 완전히 녹인
다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다. 이 배지는 고압멸균하지 않는다.
배지성분
제조
혼합 상품화되어 있는 base 40 g을 증류수에 넣고 가온하여 완전히 녹인 후 121°C에
서 15분 동안 고압멸균 한다. 55°C로 식힌 후 50 ㎖의 Laked horse blood (SR0048)와
10 ㎖의 3.5% Potassium Tellurite 용액 (SR0030)을 넣고 혼합한 후 분주한다.
배지 및 시약 485
※ Hoyle medium은 Neill’s medium을 변형시킨 배지로 mitis types에 성장 억제 효
과가 없으며 모든 type의 C. diphtheriae 들이 매우 신속하게 성장할 수 있도록 하
여 배양 후 18시간 이내에 진단이 가능하도록 한다.
배지성분
Peptone 20 g
Sodium chloride 5g
D.W 1ℓ
제조
증류수에 배지를 정량하여 넣고 가온하여 잘 녹인 다음 4부 시험관에 2 ㎖ 씩 분주하
여 121℃에서 15분간 고압멸균한다. 2% peptone대신에, 1% tryptose 또는 1.5%
casitone, 1.5% trypticase등을 peptone원료로 사용 할 수 있다.
배지성분
1) Campylobacter Agar Base
Sodium pyruvate 50 g
Cefoperazone 16 g
Vancomycin 10 g
Cycloheximide 50 g
배지성분
Beef extract 3g
yeast extract 3g
peptone 15 g
Proteose peptone 5g
Lactose 10 g
Glucose 1g
Ferrous sulfate 0.2 g
Sodium chloride 5g
Sodium thiosulfate 0.3 g
Agar 15 g
Phenol red 0.024 g
D.W 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 표시된 매뉴얼에 따라 배지를 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온
하여 완전히 녹인다. 4부 시험관에 약 3 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압멸균한
후 밑둥을 깊게 (밑둥: 2.5 ㎝, 사면: 4 ㎝)하여 사면배지를 만든다.
배지성분
Tryptose 15 g
Yeast extract 10 g
Lactose 10 g
Phenol red (1% solution in 95% ethanol) 5.0 ㎖
Gelatin 120 g
D. W 1ℓ
배지 및 시약 487
제조
400 ㎖의 증류수에 tryptose와 yeast extract, lactose를 넣은 후 가열하여 녹인다.
한편 600 ㎖의 증류수에 gelatin을 잘 섞어 넣은 후, 교반기를 이용하여 50~60℃의
열을 가하여 잘 녹인 다음 두 가지 용액을 섞어 pH가 7.3~7.7이 되도록 조정한다. 여
기에 1% phenol red를 첨가하여 16 × 150 ㎜ 규격의 마개 시험관에 10 ㎖씩 분주한
후, 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다. 제조한지 8시간 이상된 배지는, 사용하
기 2~3시간 전에 50~70℃로 재 가열하여 사용하여야 한다.
배지성분
Moxalactam 용액
Moxalactam 0.1 g
D. W. 10 ㎖
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수 998 ㎖에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 완전
히 녹인다. 121℃에서 12분간 고압멸균 한 후 45~50℃로 식혀 여과 멸균한 Moxalactam
2 ㎖을 무균적으로 첨가하여 잘 혼합한 다음 페트리디쉬 또는 시험관에 분주하여 사용
한다.
배지성분
제조
각 배지 및 시약성분을 정량하여 1 ℓ의 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 45~55℃로 식혀 vancomycin 10 ㎎/ℓ,
cefsulodin 15㎎/ℓ, cephradine 50 ㎎/ℓ을 첨가하여 잘 혼합시킨 후 페트리디쉬에
분주한다. 신선한 배지는 오렌지색을 나타내며 4±2℃에서 2주간 사용이 가능하다.
57. Lowenstein-Jensen 배지
배지성분
1) Mineral salt solution
배지 및 시약 489
2) Malachite green solution, 2%
제조
각 제조한 시약 mineral salt 용액 600 ㎖, Malachite green 용액 20 ㎖, 전란액 (계
란 약 20~25개에 해당) 1,000 ㎖를 적당한 용기에 넣어 잘 혼합한 후 나사마개 시험관
또는 McCartney 병 등에 6~8 ㎖씩 분주한 후, 응고기에서 사면으로 80~85℃에서
약 45분간 응고시켜서 사용한다.
배지성분
Peptone 5g
Yeast extract 1g
Dextrose 10 g
L-lysine 10 g
Ferric ammonium citrate 0.5 g
Sodium thiosulfate 0.04 g
Brom cresol purple 0.02 g
Agar 15 g
D. W 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
4부 시험관에 4 ㎖ 씩 분주하여 121℃에서 12분간 고압 멸균한다. 밑면은 깊고, 사면은
짧은 사면배지를 만든다.
배지성분
Peptone 17 g
Proteose peptone 3g
Lactose 10 g
Bile Salts, No. 3 1.5 g
Sodium Chloride 5g
Agar 13.5 g
Neural Red 0.03 g
Crystal Violet 0.001 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.1 ± 0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 491
61. Minimal-Salts Agar (MSA)
배지성분
1) Salt solution
NH4Cl 20 g
NH4NO3 4g
Na2SO4 8g
K2HPO4 12 g
KH2PO4 4g
MgSO4‧7H2O 0.4 g
D. W. 1ℓ
2) Agar base
Agar NO. 3 20 g
D. W. 1ℓ
제조
각 시약 및 배지를 정량하여 증류수에 잘녹인 다음 Salt 용액 250 ㎖을 agar base
750 ㎖와 혼합한다. 20% glucose 10 ㎖와 최종 농도가 1%가 되도록 sodium acetate
를 첨가하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
GC Agar base
Proteose peptone No. 3 15 g
Corn starch 1g
Potassium phosphate, dibasic 4g
Potassium phosphate monobasic 1g
Sodium chloride 5g
Agar 10 g
재조
혼합 상품화된 base 7.2 g을 증류수 100 ㎖에 넣어 녹인 후 pH 7.2±0.2로 조정한다
음 가열하여 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 45~50℃로 식히고
배지성분
Tryptone 10 g
Sodium Chloride 5g
Agar 5g
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합하과 가온하여 완전히 녹인다
음 pH 7.2±0.2로 조정한다. 4부 시험관에 3 ㎖ 씩 분주하여 121℃에서 15분 동안 고압
멸균하여 사용한다.
배지성분
Beef extract 3g
pepton 5g
KNO3 1g
Na2HPO3 2.5 g
Agar 3g
Glactose 5g
Glycerin (reagent grade) 5㎖
D. W. 1ℓ
제조
각각의 시약 및 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다음 pH
7.3±0.1로 조정한다. 이 용액을 16 x 150 ㎜ 시험관에 11 ㎖씩 배지를 분주하고 121℃
에서 15분 동안 고압 멸균하여 사용한다. 4시간 이후에 사용 할 경우에는 끊는 물에
중탕하여 사용하거나, 고온을 이용하여 한번 녹인 다음 식혀서 사용한다.
배지 및 시약 493
65. Mueller Hinton배지 (MH)
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인
후 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
Seed 분말은 정량하여 증류수에 넣고 30분간 끓인 후 찌꺼기를 여과한 후 식혀서
나머지 배지 및 시약성분을 넣고 가온하여 녹인후 121℃에서 15분 동안 고압멸균한 다
음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Beef extract 3g
Peptone 5g
Potassium nitrate 1g
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인다. 5.5부
시험관에 여과관을 넣고 5 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 완전히 녹인
다. pH 6.8±0.2로 조정하고 121℃에서 15분 동안 고압멸균하여 페트리디쉬에 분주하여
사용한다.
배지성분
Base
Tryptone 2g
Sodium Chloride 5g
K2HPO4 0.3 g
Bromo thymol blue 0.08 g
Agar 2g
D. W. 1ℓ
배지 및 시약 495
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 혼합한 후 가온하여 성분을 완전히
녹인다. pH 6.8±0.2로 조정한 다음 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한다. 여기에 0.45 ㎕
로 여과멸균한 포도당 용액을 최종 농도가 1%되게 첨가후 멸균된 4부 시험관에 분주하
여 사용한다.
※ 분주한 시험관 1/2은 파라핀 오일 1 ㎖ 정도를 첨가하고 나머지 시험관에는 파라핀
오일을 첨가하지 않는다.
70. Ogawa 배지
배지성분
1) Mineral salt 용액
2) 2% Malachite green 용액
제조
각 제조한 시약 mineral salt 용액 300 ㎖, Malachite green 용액 18 ㎖, 전란액 (계
란 약 12~16개에 해당) 600 ㎖를 적당한 용기에 넣어 잘 혼합한 후 나사마개 시험관
또는 McCartney 병 등에 6~8 ㎖ 씩 분주한 후, 응고기에서 사면으로 80~85℃에서
약 45분간 응고시켜서 사용한다. 응고 후 배지의 pH는 6.8이다.
배지성분
Peptone 10.0 g
NaCl 5.0 g
Yesat extract 5.0 g
Glucose 1.0 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.5±0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배지성분을
완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 497
2) PALCAM antibiotic supplement
Ceftazidime 40.0 ㎎
D. W. 10 ㎖
제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 990 ㎖에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 50℃로 식혀 supplement 10 ㎖를
무균적으로 배지에 혼합하여 페트리디쉬나 시험관에 분주하여 사용한다.
73. PEA 배지
배지성분
Heart Infusion agar 40 g
2-phenylethanol 3㎖
D. W. 1㎖
제조
각 배지 및 시약 성분을 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배지성분
을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 Tryptose agar 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온
하여 배지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한 후 50℃로 식힌 다
음 penicillin-G를 10 U/㎖로 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Base
Pancreatic digest of casein 15.0 g
NaCl 5.0 g
Papaic digest of soybean meal 5.0 g
β-Phenethyl alcohol 2.5 g
Agar 15.0 g
(최종 pH 7.3±0.2)
제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 950 ㎖에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배
지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한 후 50℃로 식혀 탈 섬유시
킨 면양혈액 50 ㎖를 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
각 배지 및 시약성분을 정량하여 증류수에 넣고 혼합한 다음 가온하여 배지성분들을 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50℃로 식혀 polymyxin B는 30,000 U/ℓ,
lysozyme은 300,000 U/ℓ 농도되게 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 499
77. Phenylalanine malonate Broth 배지
배지성분
Yeast extract 1g
Sodium malonate 3g
DL-Phenylalanine 2g
Ammonium sulfate 2g
Dipotassium phosphate 0.6 g
Monopotassium phosphate 0.4 g
Sodium chloride 2g
Brom thymol blue 0.025 g
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 녹인다. 4부 시험관에
2 ㎖ 씩 분주하여 115℃에서 10분간 고압멸균 한다.
배지성분
1) Nutrient Broth No.2
제조
Nutrient broth No.2 12.5 g을 정량하여 475 ㎖ 증류수에 녹이고 121℃에서 15분간
고압멸균한다. 50℃ 정도로 식혀 Lysed horse blood 25 ㎖ 와 Preston selective
supplement 아세톤/물 (50:50)을 2 ㎖ 첨가하여 녹인 것과 Campylobacter growth
supplement 2 ㎖의 멸균된 물에 녹인 것 각 1병씩을 첨가한 후 골고루 잘 혼합한다.
멸균된 나사 마개가 있는 작은 병에 5 ㎖ 씩 분주한다. 제조한 배지는 4℃에서 7일간
보관할 수 있다.
배지성분
1) Campylobacter Agar Base
배지 및 시약 501
제조
Campylobacter agar Base 18.5 g을 증류수 475 ㎖에 잘 혼합하고 가온하여 배지성
분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50℃ 정도 식혀 Laked Horse
Blood 25 ㎖과 아세톤/증류수 (50:50) 2 ㎖로 녹인 Preston Campylobacter Selective
Supplement를 첨가하여 잘 혼합하고 멸균된 페트리 접시에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 base 6.5 g을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한다. 여기에 0.1 g의
pyrazinamide, 2.0 g의 sodium pyruvate, 15 g의 agar를 넣고 가온하여 완전히 배지
성분을 녹인다. 16x125 ㎜ 나사마개 시험관에 5 ㎖ 씩 분주하고 121℃에서 15분간 고압
멸균 한다. 직립 상태에서 굳힌 다음 사용하며, 냉장 보관 시 수개월간 사용 가능하다.
배지성분
Dextrose 40 g
Neopeptone 10 g
Agar 15 g
D. W. 1ℓ
배지성분
1)
Glycerol 10.0 g
sodium pyruvate 10.0 g
Pancreatic digest of casein 10.0 g
Beef extract 5.0 g
Yeast extract 3.0 g
Potassium isothicoyanate 2.25 g
LiCl 2.0 g
Na2HPO4⋅2H2O 0.9 g
NaH2PO4⋅H2O 0.6 g
NaN3 solution 10.0 ㎖
Agar 13.0 g
D.W. 1ℓ
(최종 pH7.2±0.2)
2) NaN3 용액
NaN3 0.045 g
D. W. 10 ㎖
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 990 ㎖ 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 배지성
분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 45~50℃로 식혀 여과 멸균한
NaN3 용액 10 ㎖를 무균적으로 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지 및 시약 503
83. Selenite Broth
배지성분
Tryptone 또는 Polypeptone 5g
Lactose 4g
Sodium phosphate 10 g
Sodium selenite 4g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.0)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 배지성분을 완전
히 녹인다. 멸균된 5.5부 시험관에 10 ㎖ 씩 (5 ㎝정도 깊이) 분주하여 사용한다. 이
배지는 고압멸균하지 않고 수증기에 30분간 쏘여 사용하며, 즉시 사용할 경우는 그대
로 사용 가능하다.
배지성분
Tryptone 20 g
K2HPO4 2g
KH2PO4 2g
Sodium chloride 5g
Glucose 1g
Tween 80 1.5 ㎖
※ Novobiocin 용액
Novobiocin 0.50 g
D. W. 100 ㎖
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수 988.9 ㎖ 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히
녹인다. pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 다음 45~50℃로
식혀 여과 멸균한 novobiocin 용액 11. 1 ㎖를 무균적으로 첨가하고 혼합하여 적당한
배지성분
Beef extract 5g
Proteose Peptone 5g
Lactose 10 g
Bile salts No. 3 8.5 g
Sodium citrate 8.5 g
Ferric citrate 1g
Sodium Thiosulfate 8.5 g
Agar 13.5 g
Brilliant green 0.33 ㎎
Neutral red 0.025 g
D. W 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한다. 가열하여 배지성분이
완전히 녹인 다음 55~60℃로 식혀 페트리디쉬에 분주하여 사용하며, 고압 멸균 하지
않는다.
배지성분
1) Columbia Agar Base
배지 및 시약 505
2) Blood Agar Base No. 2
Vancomycin 5.0 ㎎
Trimethoprim 2.5 ㎎
Polymyxin 12,500 I.U.
제조
Base로는 혼합 상품화된 Columbia Agar base 나 또는 Blood Agar base No 2를
사용한다. 매뉴얼에 따라 agar base를 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하
여 배지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균하여 50~55℃로 식히고
5~7%되게 Laked horse blood를 첨가하고 여기에 Campylobacter Selective
Supplement (멸균된 증류수 2 ㎖에 녹인 것)도 첨가한다. 거품이 나지 않도록 천천히
혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Sodium chloride 5g
Magnesium sulfate 0.2 g
Dipotassium phosphate 1g
Sodium citrate 2g
Agar 15 g
Brom thymol blue 0.08 g
D.W 1ℓ
배지성분
Peptone 6.0 g
Pancreatic digest of casein 4.0 g
Yesat extract 3.0 g
Beef extract 1.5 g
Glucose 1.0 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 6.6±0.2)
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 배지성분을 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
89. Stuart’s 배지
배지성분
Asparagine 0.132 g
Ammonium chloride 0.25 g
Magnesium chloride‧6H2O 0.406 g
Sod. chloride 1.808 g
Disodium phosphate 0.087 g
Phenol red 0.01 g
D.W. 995 ㎖
Sterile rabbit serum 8~10%
Glycerine 5.0 ㎖
(최종 pH ; 7.4-7.5)
배지 및 시약 507
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 후 121℃
에서 15분간 고압 멸균한다. 50℃로 식힌 후 가토 혈청을 8~10% 되게 첨가하고 혼합
하여 멸균된 적당한 용기에 분주하여 사용한다. 필요시에는 이 배지에 1% 한천을 첨가
하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
Sucrose 75 g
KH2PO4 0.52 g
Na2HPO4 1.22 g
L-Glutamic acid 0.72 g
Bovine serum 50.0 ㎖
Antibiotic inhibitor 10.0 ㎖
(최종 pH7.4~7.6)
Antibiotic inhibitor
Vancomycin 0.1 g
Streptomycin 0.050 g
Nystatin 25,000 U
D. W. 10 ㎖
제조
Bovine serum과 항균제를 제외한 각 배지 및 시약 성분을 정량하여 증류수 940 ㎖
에 넣어 잘 혼합 후 가온하여 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 45~50℃로 식
힌 후 무균적으로 bovine serum 50 ㎖과 여과 멸균한 항균제 10㎖를 첨가하고 혼합하
여 무균적으로 멸균된 나사마개 시험관에 분주하여 사용한다.
배지성분
Casamino acid 10 g
Sucrose 5g
Na2HPO4 5g
K2HPO4 5g
NH4Cl 1.18 g
Na2SO4 0.089 g
MgCl2․6H2O 0.042 g
MnCl2․4H2O 0.004 g
FeCl3․6H2O 0.005 g
D. W. 1ℓ
제조
각 배지 및 시약을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인다. pH를
7.2로 조정하고 나사마개 시험관에 5 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용
한다.
배지성분
1) Basal medium
2) Iodine 용액
Iodine 6g
Potassium iodide 5g
D. W. 20 ㎖
배지 및 시약 509
제조
혼합 상품화된 Basal medium 4.6 g을 정량하여 증류수 100 ㎖에 넣어 잘 혼합한
다음 가열하여 완전히 녹인다. 60℃ 로 식혀 2 ㎖의 iodine 용액을 첨가하고 brilliant
green 을 Kauffman’s Combined Enrichment Medium에 표시된 매뉴얼 대로 첨가한
다 (basal medium 100 ㎖ 당 1:1,000용액 1 ㎖). 이들을 멸균된 나사마개 시험관에
10~12 ㎖씩 분주하여 제조한 날에 사용한다 (배지를 저장해서 사용할 경우는 iodine
을 첨가하지 않고 사용직전에 첨가하여 사용한다).
※ Proteus가 과다하게 자라는 것을 막기 위하여 sulfathiazol (100 ㎖ 배지당 0.125 g)
을 첨가 할 수도 있다.
배지성분
Bile 용액
Oxgall 40.0 g
Sodium deoxycholate 2.0 g
D. W. 100 ㎖
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류에 넣어 잘 혼합한 다음 가열하여 완전히 녹인
다. 5.5부 시험관에 10 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균한 후 45~50℃로
L-Cystine 0.5 g
Agar (granulated) 0.75 g
NaCl 2.5 g
Dextrose 5g
Yeast extract 5g
Tryptone 15 g
Sodium thioglycollate or 0.5 g
thioglycollic acid
Resazurin, sodium 용액 (1:1,000), 1㎖
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여 완전히 녹인
다. 5.5부 시험관에 15 ㎖씩 분주하고 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.
배지제조
Yeast extract 5g
Peptone 10 g
Sodium citrate 10 g
Sodium thiosulfate 10 g
OX gall 5g
Sodium cholate 3g
Sucrose 20 g
Sodium chloride 10 g
Ferrous citrate 1g
Brom thymol blue 0.04 g
Thymol blue 0.04 g
Agar 15 g
D. W. 1ℓ
배지 및 시약 511
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣로 잘 혼합한 후 가온하여 배지성분을
완전히 녹인다음 50℃정도로 식혀 페트리디쉬에 부어 사용한다. 최적 pH는 8.6이며 고
압 멸균을 하지 말고 제조 후 48시간 이내에 사용하도록 한다.
배지성분
1) Tinsdale agar base
2) Tinsdale Supplement
제조
Agar base 9 g을 200 ㎖ 증류수에 넣고 잘 혼합 한 후 가열하여 완전히 녹인다.
50℃로 식힌 다음 Tinsdale Supplement 15 ㎖을 넣어 혼합하고 페트리디쉬에 분주하
여 사용한다. 이 배지는 고압멸균하지 않는다.
배지성분
제조
① 두개의 1 ℓ 플라스크에 증류수 250 ㎖씩을 넣고 각각에 Hemoglobin 5.0 g을 가
하고 진탕하여 용해 한 후 가열하여 완전히 용해한다. 멸균된 거즈 (3∼4겹)를 놓고
hemoglobin 용액을 여과하여 121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 45~50℃로 식힌다.
② 1ℓ 플라스크에 36 g의 GC agar를 정량하고 500 ㎖ 증류수에 넣어 혼합 한 후 가
열하여 완전히 녹인 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 50℃ 항온수조 내에서
배지를 식힌다.
③ GC 배지가 든 플라스크에 멸균된 hemoglobin용액 첨가하여 혼합하고 (이때 거품
이 생기지 않도록 주의), 10 ㎖ 의 Isovitale X, 10 ㎖의 VCN을 무균적으로 첨가하
여 천천히 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 잘 녹인다. 5.5부
시험관에 5 ㎖ 씩 분주한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.
배지 및 시약 513
99. Todd Hewitt broth+Yeast extract 배지 (THY)
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 잘 녹인다. 5.5부
시험관에 5 ㎖ 씩 분주한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.
제조
혼합 상품화된 Columbia agar base를 정량하고 증류수 950 ㎖ 에 넣어 혼합 한 다
음 가온하여 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균 한 다음 50℃로 식혀 탈 섬유
시킨 면양혈액 50 ㎖ (5%) 과 3.2 ㎎ 의 Trimethoprim, 16 ㎎ 의 Sulfamethoxazole,
30,000 unit Polymyxin B sulfate를 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
Trypticase 50 g
Peptone 5g
Yeast extract 20 g
Dextrose 4g
Sodium thioglycollate 1g
D. W. 1ℓ
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가열하여 녹인다. 나사
마개 시험관에 15 ㎖씩 분주하여 121℃에서 10분 동안 고압멸균한 후 식혀 냉장보관
하였다가 필요시 꺼내어 사용한다.
배지성분
1) Urea Agar base
배지 및 시약 515
제조
900 ㎖의 증류수에 agar 15 g을 잘 혼합하고 가열하여 녹인 다음 121℃에서 15분간
멸균한 후 50~55℃로 식힌다. 한편, 혼합 상품화되어 있는 urea agar base를 표시된
매뉴얼대로 정량하여 증류수 100 ㎖ 넣어 잘 혼합한 후 0.45 ㎛ 막 여과지를 사용하여
여과멸균 한다. 앞서 고압 멸균하여 식힌 agar와 여과 멸균한 urea agar base를 잘
혼합하여 4부 시험관에 3 ㎖ 씩 무균적으로 분주한다. 밑면이 깊은 사면 배지를 만드는
것이 좋으며 필요에 따라 액체배지를 만들어 사용할 수도 있다.
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가열하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.
배지성분
GC medium base 36 g
D. W. 950 ㎖
배지성분
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인 후 pH
를 7.4±0.2로 조정한다. 고압 멸균하지 않으며 배지가 50℃정도로 식으면 페트리디쉬에
분주하여 사용한다.
배지 및 시약 517
██ 시약
제조
시약을 정량하여 증류수에 넣어 잘 녹인다음 pH 7.0으로 조정한다. 멸균된 갈색병에
넣어 냉장보관한 후 필요시 꺼내어 사용한다.
2. 1% Formalin 용액
※ 대변검체의 보존을 위해 사용
3. 3% Acid alcohol
제조
70% alcohol에 Hcl을 조금 씩 가하여 녹여 갈색병에 보관한다.
시약성분
5. 3% Catalase
H2O2 0.3 ㎖
D.W. 10 ㎖
제조
멸균된 나사마개 시험관에 증류수와 30% H2O2를 넣어 잘 혼합 한 다음 냉장보관하
고, 필요시 꺼내어 사용한다.
6. Gel-Phosphate Buffer
시약성분
Gelatin 2g
Na2HPO4 4g
D. W. 1ℓ
제조
각 시약을 정량하여 증류수에 넣어 혼합한 다음 가열하여 녹인 후 pH를 6.2로 조정
한다. 121℃에서 20분 동안 고압멸균한다.
2) 용액 2
배지 및 시약 519
제조
pH 7인 완충용액은 용액 1, 61.1 ㎖과 용액 2, 38.9㎖를 잘 혼합하고 pH를 7.0으로
조정한다.
제조
10㎖ Tween 80을 정량하여 증류수 90 ㎖에 넣어 잘 혼합한 후 적당한 용기에 넣어
121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 냉장 보관하였다가 시험 직전에 Hydrogen peroxide
와 혼합하여 사용한다.
시약성분
제조
Aldehyde를 알코올에 녹인 다음 천천히 산을 첨가하여 잘 혼합한다. Kovac’s 시약
은 소량씩 만들어 사용하며 냉장고에 보관한다. 건조된 aldehyde는 색이 연해야 한다.
9. Niacin 시험 시약
1) 4% aniline 용액
10. MR-VP 시험 시약
시약성분
1) MR
Methyl-red 0.1 g
Ethyl alcohol (95~96%) 300 ㎖
2) VP
Potassium hydroxide 40 g
Creatine 0.3 g
D.W 100 ㎖
제조
1) MR
알코올에 methyl-red를 넣어 잘 혼합하여 녹인다음 증류수를 가한 후 500 ㎖가 되
게 한다.
2) VP
Potassium hydroxide를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 녹이고 Creatine을
첨가한다.
※ 사용 직전 만드는 것이 좋으며, -20℃에서 2-3 주까지 보존이 가능하다.
배지 및 시약 521
11. Nitrite 시험 시약
1) 용액 1; Sulfanilic acid 시약
Sulfanilic acid 1g
5 N acetic acid 125 ㎖
2) 용액 2; N-(1-naphthyl)ethylenediamine 시약
dihydrochloride 0.25 g
5 N acetic acid 200 ㎖
12. Oxidase 시험 시약
Tetramethyl-P-phenylenediamine-dihydrochloride 1g
또는 Dimethyl-P-phenylendiamine-oxalate
D. W. 100 ㎖
제조
시약을 정량하여 증류수에 넣고 마그네틱 바를 이용하여 완전히 용해시킨 후 갈색병
에 넣어 냉장보관한다. 제조하여 즉시 사용하는 것이 바람직하며, 1주일 이상 된 것은
버린다.
제조
완전히 용해시킨 후 즉시 사용하는 것이 바람직하다
시약성분
Phenolsulfothalein 0.1 g
0.01N sodium hydorxide (NaOH) 22 ㎖
D.W 200 ㎖
제조
유발에 phenolsulfothalein 분말을 0.1 g 정량하여 넣고 여기에 0.01N NaOH 22 ㎖
을 가해 유봉으로 잘 간다. 이것을 200 ㎖ 들이 실린더에 넣고 다시 적당량의 증류수로
유발을 헹구어 실린더에 넣은 다음 200 ㎖이 되도록 증류수로 채운다.
시약성분
sucrose 68.46 g
K2HPO4 2.01 g
KH2PO4 1.01 g
D. W. 1ℓ
제조
각각의 시약을 따로 소량의 증류수에 녹인다음 최종 1,000 ㎖ 로 맞춘다. 121℃에
서 15분간 고압멸균하여 항생제를 첨가하여 사용한다.
■ 항생제
배지 및 시약 523
16. 4SP (0.4M Sucrose - 0.02M Phosphate)
시약성분
sucrose 136.92 g
Na2HPO4 2.268 g
D. W. 1ℓ
제조
각 시약성분을 정량하여 소량의 중류수에 넣고 잘 녹인 후 증류수 1,000 ㎖로 맞춘
다. 1N HCl로 pH를 7.0~7.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 고압멸균하여 사용한다.
17. 5% trypsin
Trypsin 1: 250 1g
Phosphate buffer (pH 8.2) 20 ㎖
제조
플라스크에 phosphate buffer 20 ㎖ 를 정량하여 넣고 여기에 trypsin (1: 250) 1 g을
가해 30분동안 실온에서 방치한다 (이따금씩 자주 흔들어 준다). 1500rpm에서 15분간
원심하여 비용해성 물질을 제거한 다음 상청액을 취해서 0.45 ㎛막 여과지로 여과 멸균
하여 0.5 ㎖씩 소분하여 4℃ 냉장고에 보관 하였다가 필요시 꺼내여 사용한다.
시약성분
Tris base 54 g
Boric acid 27.5 g
0.5 mM EDTA 20 ㎖
D. W. 1ℓ
제조
각 시약을 정량하여 증류수 800 ㎖에 넣어 녹인다음 pH 8.0로 조정하여 최종 양이
1ℓ가 되도록 한다. 사용할 때에는 10배 희석하여 0.5× TBE를 만들어 사용한다.
1. Counter 염색약
제조
Evan’s blue 5 ㎍을 정량하여 PBS에 넣어 잘 녹인 후 갈색병에 넣어 보관한다.
2. Giemsa 염색약
시약성분
1) 보관용 원액
제조
김자염색 분말을 유발에 갈고 무게를 정량한 다음 글리세린을 첨가하여 염색분말을
완전히 간다. 완전히 갈은 염색분말액을 플라스크에 넣고 55℃에서 2시간 항온 시킨다
(이때 30분마다 한번씩 흔들어 준다). 사용한 유발에 붙은 염색분말은 일정량의 알코올
을 취해 잘 씻어낸 후 동일한 플라스크에 부어 항온 시킨다. 항온이 끝난 후 나머지
알코올을 첨가하고 잘 혼합하여 2주일간 방치한다 (가끔씩 흔들어 준다).
3. Gimenez 염색약
시약성분
1) carbol basic fuchsin 보관용 원액
배지 및 시약 525
■ 4% Phenol 250 ㎖
Phenol 10 ㎖
D. W. 250 ㎖
제조
10% basic fuchcin 100 ㎖, 4% phenol 250 ㎖을 정량하여 증류수 650 ㎖에 넣어
잘 혼합한 후 37℃에서 48시간 동안 반응시킨다.
2) 보관용 완충 용액
■ 0.2M NaH2PO4
NaH2PO4 2.84 g
D. W. 100 ㎖
■ 0.2M NaH2PO4
Na2HPO4 2.7 g
D. W. 100 ㎖
4. Iodine 염색약
제조
Iodine과 potassium iodide를 정량하여 유발로 갈아 잘 녹인 다음 소량의 증류수를
가해 완전히 녹을 때까지 간다. 충분히 녹인 용액을 적당한 용량의 갈색병에 넣고 메탄
올과 나머지 증류수를 정량하여 잘 혼합한 다음 여과하여 사용한다.
제조
Iodine과 potassium iodide를 정량하여 유발로 갈아 잘 녹인 다음 소량의 증류수를
가해 완전히 녹을 때까지 간다. 충분히 녹인 용액을 적당한 용량의 갈색병에 넣고 나머
지 증류수를 정량하여 잘 혼합한 다음 여과하여 사용한다.
제조
5% Lugol’s 보관용액 5 ㎖을 식염수 20 ㎖에 희석하여 사용한다.
시약성분
제조
각 시약을 정량하여 혼합한 다음 잘 녹여서 사용한다.
배지 및 시약 527
8. Methylene blue 염색약
1) 보존용액
Methylen blue 14 g
95% 알코올 100 ㎖
2) 실험용액
보존용액 20 ㎖
증류수 180 ㎖
제조
보존용액 20 ㎖을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 사용한다.
9. Mounting 용액
시약성분
0.1 M PBS 10 ㎖
p-phenylenediamine 100 ㎎
Glycerol 90 ㎖
제조
각 시약을 정량하여 충분하게 용해시킨 다음 적당한 용기에 소분하여 -20℃에서 냉
동 보관한다.
10. Wayson염색약
1) 염색약 1
2) 염색약 2
제조
각 염색약 1과 2를 혼합하고 갈색병에 담아 실온에 보관하여 사용한다 (5년간 유효).
1) 염색약
Fuchsin액 (용액 1)
Basic fuchsin 3.0 g
95% ethanol 100 ㎖
Phenol 액 (용액 2)
Phenol crystals 5.0 g
D. W. 100 ㎖
제조
사용 염색약은 용액 1:10 ㎖과 용액 2:90 ㎖을 혼합한 다음 갈색병에 넣어 실온에
보관한다. 6~12 개월간 사용이 가능하며, 사용 시 여과하여 사용한다.
배지 및 시약 529
제조
Hydrochloric acid를 정량하고 ethanol을 조심스럽게 가하여 잘 혼합한다. 실온에서
6~12개월간 사용 가능하다.
3) 대비염색액
제조
Methylene blue를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 녹인다음 갈색병에 보관하
면 6~12개월간 사용 가능하다.