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배지 및 시약

██ 배지

1. A7 고형배지

배지성분
1) 기본배지

Ureaplasma agar medium 33 g


D. W. 830 ㎖

2) 완전배지

Horse serum (비가열) 200 ㎖


25% Yeast extract 100 ㎖
10% Urea 5㎖
2% L-cysteine 5㎖
1% Phenol red 2㎖
100만 penicillin 1㎖
CVA enrichment 5㎖

제조
상품화된 기본배지를 증류수 830 ㎖에 넣고 가온하여 잘 녹인 후 2N NCl로 pH 5.5~
6.0되게 조정한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 냉각시킨 후 완전배지를 무균적
으로 첨가하여 적당한 용기에 분주하여 사용한다.

2. AE Sporulation Medium, Modified (for C. perfringens)

배지성분

Polypeptone 10.0 g
Yeast extract 10.0 g

배지 및 시약 459
Na2HPO4 4.36 g
KH2PO4 0.25 g
Ammonium acetate 1.5 g
MgSO4‧7H2O 0.2 g
D.W. 1ℓ

제조
각 배지 및 시약 성분을 녹여서, 2M Sodium carbonate을 이용하여 pH 7.5±0.1되게
조정한다. 20 × 150 ㎜ 크기의 나사마개가 달린 시험관에 15 ㎖ 씩 분주하여, 121℃에
서 15분간 고압멸균 한다. 여과 멸균한 10% raffinose 0.6 ㎖와 0.66M sodium
carbonate와 0.32% Cobalt chloride (CoCl2․6H2O)을 각각 0.2 ㎖씩 떨어뜨린다. 시
험관 한개 내지 두개의 시험관 pH을 확인하여 최종 pH가 7.8± 0.1이 되어야한다. 배지
를 사용하기 직전에 10분 동안 중탕하여 열을 가한 후 식힌 다음 여과 멸균한 1.5%
sodium ascorbate (당일 날 만든 것)을 0.2 ㎖을 각 시험관에 첨가하여 사용한다.

3. Baird-Parker agar

배지성분

Base
Tryptone 10 g
Beef extract 5g
Yeast extract 1g
Glycine 12 g
Sodium pyruvate 10 g
Lithium chloride 5g
Agar 20 g
D.W. 950 ㎖

제조
혼합 상품화된 base와 증류수를 정량하여 잘 혼합한 후 가온하여 녹인 다음 pH
7.0±0.2로 조정한다. 121℃에서 15분 고압 멸균한 후 40~50℃로 식혀 EY Tellurite
Enrichment 50 ㎖을 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

460 감염병실험실진단 제1부 세균질환


4. BCYEα

배지성분

Base
Yeast extract 11.5 g
Charcoal activated 1.5 g
ACES buffer 6.0 g
α-ketoglutarate Monopotassium 1.0 g
Agar 17.0 g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 Legionella agar base와 증류수를 매뉴얼에 따라 정량하고 가온하
여 잘 녹인 후 (pH 7.2), 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 45℃로 식혀 Legionella
supplement [L-cysteine (0.4 g/ℓ)․HCl, Ferric pyrophosphate (0.25 g/ℓ)]를 각각 여
과멸균하고 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

-
※ BCYEα-Cys 배지는 BCYEα 배지 제조시 Legionella supplement중 L-cysteine
(0.4 g/ℓ)을 첨가하지 않고 제조하여 사용한다.

5. Bicarbonate 한천배지

배지성분

Heart Infusion agar 4.0 g


D.W. 90 ㎖

제조
상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 열을가해 녹인다음 121℃에서
15분 고압멸균한다. 실온에서 50℃로 식힌 다음 sodium bicarbonate (7% solution)를
10 ㎖을 넣고 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 461
6. Bismuth Sulfate Agar

배지성분

Beef extract 5g
Peptone 10 g
Dextrose 5g
Disodium phosphate 4g
Ferrous sulfate 0.3 g
Bismuth sulfate indicator 8g
Agar 20 g
Brilliant green 0.025 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.7± 0.2)

제조
상품화된 혼합배지를 매뉴얼에 따라 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합하여 가열한다
(1~2분 이상 끊이거나 멸균해서는 안 된다). 페트리디쉬에 붓기 전에 침전이 생길 수
있으므로 잘 섞어가며 분주한다.

7. Blaser-Wang Selective Medium

배지성분
1) Columbia Agar Base

Special peptone 12.5 g


Starch 0.5 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 5g
D.W. 500 ㎖
(최종 pH 7.3±0.2)

2) Blood Agar Base No.2

Proteose peptone 7.5 g


Liver digest 1.25 g
Yeast extract 2.5 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 6.0 g

462 감염병실험실진단 제1부 세균질환


D. W. 500 ㎖
(최종 pH 7.4±0.2)

3) Campylobacter Selective Supplement (Blaser-Wang)

Vancomycin 5.0 g
Trimethoprim 2.5 g
Cephalothin 7.5 g
Amphotericin B 1.0 g
Polymyxin B 1,250 I.U.

제조
Columbia Agar Base (19.5 g/500 ㎖) 또는 Blood Agar Base No.2 (20.0 g/500 ㎖)
을 매뉴얼에 따라 정량하고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균
한 후 50℃ 정도되게 식혀 멸균된 증류수 2 ㎖에 녹인 Campylobacter Selective
Supplement를 첨가한다. 여기에 5~10% 탈섬유한 면양혈액 또는 5~7% lysed 말 혈
액을 첨가하여 거품이 생기지 않게 잘 혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

8. Blood agar

배지성분

Blood agar base


Beef heart infusion 500 g
Tryptose 10 g
Sodium chloride 5g

제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수 950 ㎖에 넣고 혼합하여 열을
가해 잘 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 다음 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨 면양
혈액 50 ㎖을 무균적으로 넣어 기포가 안 생기게 잘 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여
사용한다.

배지 및 시약 463
9. Bolton Selective Enrichment Broth

배지성분
1) Bolton broth base

Meat peptone                 5.0 g


Lactalbumin hydrolysate           2.5 g
Yeast Extract                2.5 g
Sodium chloride               2.5 g
Haemin                  0.005 g
α ketoglutaric acid             0.5 g
Sodium pyruvate             0.25 g
Sodium metabisulphite           0.25 g
Sodium carbonate              0.3 g
D. W. 500 ㎖

2) Modified Bolton Selective Supplement (500 ㎖용, 1 vial)

Cefoperazone 10.0 ㎎
Vancomycin 20.0 ㎎
Trimethoprim 10 ㎎
Cycloheximide 25.0 ㎎

제조
증류수 500 ㎖에 Bolton Broth 13.8 g 정량하여 열을 가해 녹인다. 121℃에서 15분
간 고압멸균한 후 50℃ 로 식혀 25 ㎖의 lysed 말 혈액과 Bolton Broth Selective
Supplement를 무균적으로 첨가한다. Bolton Broth Selective Supplement를 녹이기
위해, 5 ㎖의 에탄올/ 증류수 (50/50)를 첨가한 것을 1병 넣는다. 용해시키기 위해 천천
히 혼합하여 잘 섞은 다음 멸균된 나사 마개가 있는 용기에 분주한다.

10. Bordet-Gengou agar

배지성분

Potato Insusion 125 g


Sodium chloride 5.5 g
Agar 20 g
D. W. 1ℓ

464 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
혼합 상품화된 배지를 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인다. 121℃
에서 15분간 고압멸균한 후 50℃로 식혀 면양혈액을 최종 농도가 10%~15%되게 첨가
하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

11. Brain Heart Infusion agar 배지 (BHI)

배지성분

Pancreatic digest of casein 16.0 g


Agar 13.5 g
Brain heart, solids from infusion 8.0 g
Peptic digest of animal tissue 5.0 g
Sodium chloride 5.0 g
Glucose 2.0 g
Na2HPO4 2.5 g
D.W. 1ℓ
(최종 pH 7.4±0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

12. Brilliant green agar

배지제조

Proteose peptone 10 g
Yeast extract 3g
Lactose 10 g
Saccharose 10 g
Sodium chloride 5g
Agar 20 g
Brilliant green 0.0125 g
Phenol red 0.05 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 6.9 ± 0.2)

배지 및 시약 465
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다. 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

13. Butzler Selective Medium

배지성분
1) Columbia Agar Base

Special peptone 12.5 g


Starch 0.5 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 5.0 g
D. W. 500 ㎖
(최종 pH 7.3±0.2)

2) Modified Campylobacter Selective Supplement (Butzler)

Novobiocin 2.5 g
Cephazolin sodium 7.5 g
Cycloheximide 25.0 g
Bacitracin 12,500 I.U.
Colistin sulphate 5,000 I.U.

제조
혼합 상품화된 Columbia Blood Agar Base 19.5 g을 정량하여 증류수 500 ㎖ 에
넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹이고 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50~55℃로
식힌다. 탈 섬유시킨 말 혈액을 5~7%되게 첨가하고 여기에 에탄올/ 증류수 (50/50)
혼합물 3 ㎖로 녹인 (Supplement는 반복해서 병을 뒤집으면서 녹이며, 용액에 거품이
생기는 것을 피한다). Supplement를 첨가하여 잘 혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사
용한다.

466 감염병실험실진단 제1부 세균질환


14. Carbohydrate fermentation broth

배지성분

purple broth base


Proteose peptone No.3 10 g
Beef extract 1g
NaCl 5g
Bromo cresol purple 0.015 g
D.W. 1ℓ
(최종 pH 6.8±0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 매뉴얼에 따라 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여
녹인 다음 100 ㎖씩 적당한 용기에 분주하여 121℃에서 15분 고압멸균 한다. 각 용기에
첨가할 탄수화물을 표기하고 glucose, lactose, sucrose, mannitol 등은 최종농도가
1%되게, 그 외 dulcitol, salicin, xylose, maltose, rhamnose와 같은 당은 최종농도가
0.5%되게 첨가하여 잘 녹인 후 4부 시험관에 2 ㎖씩 분주하여 121℃에서 10분간 멸균
하여 사용한다.
※ lactose, sucrose, cellobiose 등과 같은 이탄당은 0.45 ㎛ 막 여과지로 여과 멸균하
여 purple broth base에 첨가하여 사용한다.

15. Cary and Blair Transport Medium

배지성분

Sodium thioglycollate 1.5 g


Disodium phosphate 1.1 g
Sodium chloride 5g

제조
각 배지 및 시약들을 991 ㎖ 증류수에 순서대로 첨가하고 한천을 5 g을 넣은 다음
배지가 투명해질 때가지 가열한다. 50℃정도로 식한다음 calcium chloride 1%용액을
9 ㎖첨가하여 pH 8.4 로 조정하고 멸균된 나사마개 시험관에 7 ㎖씩 분주한다. 이를
15분간 증기탕 시킨 다음 식혀서 마개를 꼭 막는다. 면봉은 미리 끊인 Sorenson’s

배지 및 시약 467
buffer (pH 8.1)에 담근 다음 짜서 유리용기에 넣어 121℃에서 15분간 멸균하고 실온
에서 건조하지 않게 보관한다.

16. Casamino Acid Yeast Extract (CAYE 배지)

배지성분

Casamino acid 20 g
Yeast extract 6g
NaCl 2.5 g
K2HPO4 8.71 g
Salt solution 1㎖
D. W. 1ℓ
(MgSO4 5w/v%, MnCl2 0.5w/v%, FeCl3 0.5w/v%,
Dissolve into 0.5 mmol/ℓsulfuric acid) pH 8.5

제조
혼합 상품화된 배지를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 적당한 용기에 분주하여 사용한다.

17. CAT Selective Medium

배지성분
1) Campylobacter Blood-Free Agar Base

Nutrient Broth No.2 12.5 g


Bacteriological charcoal 2.0 g
Casein hydrolysate 1.5 g
Sodium desoxycholate 0.5 g
Ferrous sulphate 0.125 g
Sodium pyruvate 0.125 g
Agar 6.0 g
D. W. 500 ㎖
(최종 pH 7.4±0.2)

2) Cefoperzone, Amphotericin B, Teicoplanin Supplement (CAT)

Cefoperzone 4.0 g
Amphotericin B 2.0 g
Teicoplanin 5.0 g

468 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
Blood-Free Campylobacter Agar Base 22.75 g을 정량하여 증류수 500 ㎖에 넣어
잘 혼합한 후 가온하여 녹여 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 멸균된 배지는 50℃까
지 식힌 후 여기에 4 ㎖의 멸균된 증류수로 녹인 CAT supplement 1병을 첨가한다.
잘 혼합하고 최종적으로 만들어진 CAT 배지를 멸균된 페트리디쉬에 분주한다. 이 배지
는 어두운 곳에서 보관하고 비닐로 감싸거나 밀폐된 용기에 보관하는 것이 바람직하다.

18. CCDA Selective Medium

배지성분
1) Campylobacter Blood-Free Agar Base (22.75 g/500 ㎖ D.W.) CM0739B

Nutrient Broth No.2 12.5 g


Bacteriological charcoal 2.0 g
Casein hydrolysate 1.5 g
Sodium desoxycholate 0.5 g
Ferrous sulphate 0.125 g
Sodium pyruvate 0.125 g
Agar 6.0 g
D. W. 500 ㎖
(최종 pH 7.4±0.2)

2) CCDA Selective Supplement (1 vial/agar)

※ Blood-Free Campylobacter Agar를 위한 향상된 선택성 첨가제


Cefoperazone 16 ㎎
Amphotericin B 5㎎

제조
Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base 22.75 g을 정량하여 증류수 500 ㎖
에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여 녹여 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 멸균된 배지는
50℃까지 식힌 후 여기에 2 ㎖의 멸균된 증류수로 녹인 CCDA Selective Supplement
1병을 첨가하여 잘 섞고 멸균된 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 469
19. CDC anaerobe blood agar

배지성분
1) base

Casein peptone 15 g
Soy peptone 5g
Yeast extract 5g
NaCl 5g
Agar 15 g

2) 첨가제

Hemin 0.005 g
Vitamine K 0.01 g
Sheep blood 50 ㎖

제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 950 ㎖ 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 녹인 다음
pH를 7.2로 조정하고 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 50℃로 식힌 후 각각의 첨가제
를 넣어 잘 혼합하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

20. CH 배지

배지성분

Heart Infusion agar 40 g


Chloral hydrate 2.5 g
D.W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣로 잘 혼합한 후 가온하여 녹인다음 121℃
에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

470 감염병실험실진단 제1부 세균질환


21. Cysteine heart agar bood (CHAB)

배지성분

Cystine Heart Agar 5.1 g


D. W. 82 ㎖

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합한 후 가온하여 녹인 후 121℃에
서 15분간 고압멸균 한다. 50℃로 식힌 다음 탈 섬유소된 양 혈액 18 ㎖ (9%)을 넣고
잘 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

22. Chanock 고체배지

배지성분
1) 기본 배지

■ Glucose 배지
PPLO agar w/o CV 21 g
Glucose 5g
D. W. 700 ㎖
pH 7.3
■ Arginine 배지
PPLO agar w/o CV 21 g
Arginine 2g
D. W. 700 ㎖
pH 6.5- 7.0

2) 완전배지

Horse serum (비가열) 200 ㎖


25% Yeast extract (fresh) 100 ㎖
2.5% Thallium acetate 10 ㎖
100만 단위 Penicillin G 1㎖
1% phenol red 2㎖

배지 및 시약 471
제조
각 기본배지를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수 700 ㎖에 넣고 혼합하고 가온하여 잘
녹인 다음 glucose 배지는 pH 7.3, arginine 배지는 pH 5.6~7.0으로 조정하여 121℃
에서 15분간 고압 멸균한다. 멸균된 기본배지를 50℃로 식힌 다음 완전배지의 각 성분
들을 무균적으로 첨가한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

23. Chanock 액체배지

배지성분
기본배지는 Chanock 고체배지 성분 중 PPLO broth w/o 21 g을 사용하는 것 만
제외하고는 동일하며, 완전배지를 위한 첨가 성분도 고체배지와 동일하다.

제조
Chanock 고체배지 제조법과 동일하며, 배지 분주 시 액체배지임으로 시험관에 분주
하여 사용한다.

24. Charcoal Horse blood agar (Regan-Lowe agar)

배지성분

Lab-Lemco’ poweder 10.0 g


Peptone 10.0 g
Starch 10.0 g
Charcoal 4.0 g
NaCl 5.0 g
Nicotinic acid 0.001 g
Agar 12 g

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 900 ㎖증류수에 넣고 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다
음 121℃에서 15분간 고압멸균 한다. 50℃ 정도로 식힌 다음 탈 섬유소한 말 혈액 100 ㎖
(최종농도 10%)을 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

472 감염병실험실진단 제1부 세균질환


25. Cystine tryptic agar

배지성분

Tryptose 20 g
Cystine 0.5 g
Sodium chloride 5g
Sodium sulfate 0.5 g
Agar 3.5 g
Phenol Red 0.017 g
D. W. 1ℓ

제조
각각의 glucose, sucrose, maltose, lactose 10 g을 100 ㎖ 증류수에 용해한 후 0.22 ㎛
로 멸균여과하여 10% 당 보존용액을 제조한다. 혼합 상품화된 Cystine tryptic agar
(CTA) 29.5 g을 증류수 900 ㎖에 첨가하여 완전히 용해하여 121℃에서 15분 동안 멸
균한 후 50℃로 식힌다. 무균적으로 10% glucose 용액 100 ㎖을 CTA 배지 900 ㎖에
첨가한 후 잘 혼합하여 나사마개 시험관에 7 ㎖씩 분주하여 4℃에 보관한다.

26. chocolate agar

배지성분

GC medium base
Pancreatic digest of casein 7.5 g
Selected meat peptone 7.5 g
Corn starch 1g
Dipotassium phosphate 4g
Monopotassium phosphate 1g
Sodium chloride 5g
Agar 15 g
(최종 pH 7.2 ± 0.2)

제조
GC medium base 36 g을 증류수 950 ㎖에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한 후 90~
100℃일 때 바로 꺼내어 양혈액이 5%가 되도록 무균적으로 가한 후 잘 섞어준다. 50℃
로 식힌 다음 IsoVital X (BBL) 10 ㎖을 넣고 잘 혼합한 다음 페트리다쉬에 20 ㎖씩

배지 및 시약 473
분주하여 사용한다.

27. Chlamydia pneumoniae 배양배지


배지성분

MEM 500 ㎖
200 mM L-glutamine solution 5㎖
7.5% Sodium bicarbonate 8㎖
FBS 50 ㎖
Cycloheximde 1 ㎍/㎖

제조
혼합 상품화된 MEM 배지 500 ㎖에 각 배지 및 시약 성분을 무균적으로 정량하여
넣고 잘 혼합하여 사용한다.

28. Chopped meat dextrose medium

배지성분

Ground beef (free of fat) 500 g


1N NaOH 25 ㎖
D.W 1ℓ

제조
Ground beef를 정량하여 증류수에 넣고 저으면서 끓인 뒤 상온으로 식혀 표면의 기
름을 제거하고 여과 한다. 전체 부피가 1 ℓ가 되도록 증류수를 맞추고 Peptone 30 g,
yeast extract 5 g, K2HPO4 5 g, 0.025% Resazurin 용액 4 ㎖, Dextrose 5 g을 정량
하여 놓고 끓인다. 식힌 후 0.5 g L-cysteine을 첨가하고 HCl을 넣어 pH 7.0으로 조정
한 다음 97% 질소, 3% 수소가 있는 상태에서 7 ㎖ 씩 나사마개 시험관에 분주하되
meat가 전체의 1/5 부피가 되도록 넣어준다. 121℃에서 15분간 멸균한다.

474 감염병실험실진단 제1부 세균질환


29. CIN agar
배지성분
1) base

Special pepton 20 g
Yeast extract 2g
Mannitol 20 g
Sodium pyruvate 2g
Sodium chloride 1g
Magnesium sulphate 0.01 g
Sodium desoxycholate 0.5 g
Neutral red 0.03 g
Crystal violet 0.001 g
D.W 1ℓ

2) Supplement

Cefsulodin 7.5 ㎎
Irgasan 2.0 ㎎
Novobiocin 1.25 ㎎

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 완전히 녹인
다. pH 7.4±0.2로 조정한 다음 121℃에서 15 분간 멸균하고 50℃ 정도로 식혀 2 병의
supplement를 무균적으로 첨가하여 넣고 잘 섞어준 후 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.

30. Columbia blood agar

배지성분
Pantone 10 g
Bitone 10 g
Tryptic digest of beef heart 3g
Corn starch 1g
Sodium chloride 5g
Agar 15 g

배지 및 시약 475
제조
혼합 상품화된 배지 44 g을 증류수 950 ㎖을 정량하여 넣고 열을 가해 잘 녹인 후
121℃에서 15 분간 고압 멸균한다. 멸균된 base를 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨
면양 혈액 50 ㎖를 무균적으로 넣고 기포가 안 생기게 잘 혼합 한 후 페트리디쉬에 분
주하여 사용한다.

31. Columbia CNA blood agar

배지성분

Pantone 10 g
Bitone 10 g
Tryptic digest of beef heart 3g
Corn starch 1g
Sodium chloride 5g
Colistin sulfate 10 ㎎
Nalidixic acid 10 ㎎
Agar 15 g

제조
혼합 상품화된 배지 44 g을 증류수 950 ㎖을 정량하여 넣고 열을 가해 잘 녹인 후
121℃에서 15 분간 고압 멸균한다. 멸균된 base를 45~50℃로 식혀 탈 섬유소 시킨
면양 혈액 50 ㎖를 무균적으로 넣고 기포가 안 생기게 잘 혼합 한 후 페트리디쉬에 분
주하여 사용한다.

32. Cooked meat medium (CMM)

배지성분

Beef heart 454 g


Proteose peptone 20 g
Dextrose 2g
NaCl 1ℓ

476 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
혼합 상품배지 12.5 g을 찬 증류수 100 ㎖에 부유시킨다. 혼합시킨 후 알갱이가 충분
히 젖도록 15분정도 놓아둔다. 혹은 배지 1.25 g을 20 × 150 ㎖ 시험관에 넣고 찬 증류
수 10 ㎖을 넣고 혼합하여 모든 알갱이가 젖도록 놓아둔다. 121℃, 15분간 고압 멸균한
다 (최종 pH는 7.2 ± 0.2). 사용하기 바로 전에 고압 멸균된 배지를 물 중탕하여, 흔들
지 않고, 식혀서 사용한다.

33. Cooked Meat Medium (Modified)

배지성분
1) Cooked meat medium (혼합상품배지가 있음)

Beef heart 454 g


Proteose peptone 20 g
Dextrose 2g
NaCl 5g

2) 희석액 (상품배지가 없음)

Trypyone 10 g
Sodium thioglycollate 1g
Soluble starch 1g
Dextrose 2g
Neutral red(1% aqueous) 5㎖
D.W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 Cooked meat medium 1 g과 희석액 15 ㎖를 시험관 20×150 ㎖에
넣고 고기알갱이가 물에 젖도록 방치한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용
한다.

배지 및 시약 477
34. Corn meal-Tween 80 agar

배지성분

Corn meal 50 g
Agar 5g
D. W. 1ℓ
Tween 80 3㎖

제조
Corn meal를 정량하여 500 ㎖ 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다음 1%
Tween 80을 첨가하여 총량이 1 ℓ 되도록 증류수로 채운다. 여기에 한천을 첨가하고
완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 고압멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

35. Decarboxylase 시험 배지 (Moeller method)

배지성분

Decarboxylase base
Peptone 5g
Beef extract 5g
Brom cresol purple 0.01 g
Cresol red 0.005 g
Glucose 0.5 g
Phridoxal 0.005 g
D.W 1ℓ
(최종 pH 6.8±0.2)

제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 열을
가해 완전히 녹인 후 base를 각각 250 ㎖ 씩 적당한 용기에 분주하여 4등분 한다. 각
용기에 lysin, arginine, ornithine 및 음성 대조용이라고 표시하고 각 해당되는 시약을
1%되게 첨가한다. 즉, L-lysine dihydrochloride, L-arginine monohydrochloride,
L-ornithine dihydrochloride를 첨가하고 음성대조에는 아미노산을 첨가하지 않는다.
첨가된 시약을 가온하여 녹인 후 나사마개 시험관에 3~4 ㎖씩 분주하고 여기에
paraffin oil 1 ㎖을 첨가하여 121℃에서 10분간 고압 멸균하여 사용한다.

478 감염병실험실진단 제1부 세균질환


※ 미생물은 L-form의 아미노산에만 활성을 나타내므로 만일 DL-form인 아미노산을
사용할 경우에는 2%의 농도를 첨가해야 한다. Arginine과 lysine이 첨가된 배지는
pH를 조정하지 않아도 되지만 Ornithine이 첨가된 배지는 멸균하기 전에 pH를 6.0으
로 조정한다.

Ornithine배지에서는 소량의 섬유성 침전물이 생기는 수도 있는데 사용에는 지장이


없다.

36. Desoxycholate agar

배지성분

Peptone 10 g
Lactose 10 g
Sodium despxycholate 1g
Sodium chloride 5g
Dipotassium phosphate 2g
Ferric citrate 1g
Sodium citrate 1g
Agar 15 g
Neutral red 0.03 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 7.3 ± 0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 성분들이 완전히 녹을
수 있도록 가온하여 1분간 끓인 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용 한다 (이 배지는 고
압멸균을 해서는 안 되며 다시 녹여 사용 할 수 없다).

37. Desoxycholate Citrate agar

배지성분

Pork, Infusion 330 g


Proteose peptone 10 g
Lactose 10 g
Citrate 20 g

배지 및 시약 479
Ferric ammonium citrate 2g
Sodium Desoxycholate 5g
Agar 13.5 g
Neutral red 0.02 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.5 ± 0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 성분들이 완전히 녹을
수 있도록 가온하여 1분간 끓인 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용 한다 (이 배지는 고
압멸균을 해서는 안 되며 다시 녹여 사용 할 수 없다).

38. DNase medium

배지성분

Pancreatic digest of casein 15.0 g


Papaic digest of soybean meal 5.0 g
Sodium chloride 5.0 g
Desoxyribonucleic acid 2.0 g
Agar 15.0 g
D.W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 후 pH를
7.3±0.2로 조정한다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균하여 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.

39. DPBS

배지성분

DPBS 분말

제조
상품화된 DPBS 분말을 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 1시간 정도 교반 후

480 감염병실험실진단 제1부 세균질환


염산을 이용하여 pH 7.4로 조정하고 0.22 ㎛ 막 여과지로 여과 멸균하여 사용한다.

40. Dulbecco’s modification of Eagle’s MEM (DMEM)

배지성분

DMEM 분말
sodium bicarbonate (NaHCO3) 3.7 g
D.W. 1ℓ

제조
상품화된 DMEM powder와 sodium bicarbonate를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수
에 넣고 2~3시간 정도 교반한다. 염산으로 pH 7.4로 조정하고 막 여과지 (0.22 ㎛)
로 여과 멸균하여 사용한다.

41. Duncan-Strong (DS) Sporulation Medium, Modified (for C.


perfringens)
배지성분

Proteose peptone 15 g
Yeast extract 4g
Sodium thioglycollate 1g
Na2HPO4 10 g
Raffinose 4g
D.W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한다. 가온하여 녹인 다음 121℃
에서 15분간 고압 멸균하고 50℃정도로 식혀 멸균한 0.66 M sodium carbonate을 사
용하여 pH를 7.8±0.1로 조정하여 적당한 용기에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 481
42. EMJH medium

배지성분

Base
Sod. Phosphate dibasic 1.0 g
Potassium phosphate monobasic 0.3 g
Sod. chloride 1.0 g
Ammonium chloride 0.25 g
Thiamine 0.005 g
(최종 pH : 7.5)

제조
혼합 상품화된 base 2.3 g을 정량하여 증류수 900 ㎖에 넣고 가온하여 완전히 녹인
후 121℃에서 15분간 고압멸균한다. 50℃정도로 식힌 후 Leptospira Enrichment
EMJH 100 ㎖을 첨가하여 잘 섞어 멸균된 마개 시험관에 분주하여 사용한다.

43. Enterococcosel agar

배지성분

Pancreatic digest of casein 17.0 g


Peptic digest of animal tissue 3.0 g
Yeast extract 5.0 g
Oxgall, dehydrated 10.0 g
Sodium chloride 5.0 g
Sodium citrate 1.0 g
Esculin 1.0 g
Ferric ammonium (HI) citrate 0.5 g
Sodium Azide 0.25 g
Agar 13.5 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.1±0.2)

제조

혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 가온하여 녹인 다음


121℃에서 15분간 고압멸균하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

482 감염병실험실진단 제1부 세균질환


44. FBS 함유 DMEM 배지
※ E. chaffeensis 증식을 위한 DH-82 세포 배양 배지

배지성분

FBS 5~10 ㎖ (5~10% FBS)


100 mM L-glutamine 1㎖

제조
상품화되어 있는 DMEM 배지에 FBS 와 L-glutamine을 첨가하여 100 ㎖로 조정하
고 막 여과지 (0.22 ㎛) 로 여과 멸균하여 사용한다

45. FBS 함유 RPMI 1640 배지


※ A. phagocytophilum 증식을 위한 HL-60 세포 배양배지

배지성분

FBS 5~10 ㎖ (5~10%)


100 mM L-glutamine 1㎖

제조
상품화되어 있는 RPMI 1640 배지에 FBS 와 L-glutamine을 첨가하여 100 ㎖로 조
정하고 0.2 ㎛ 크기의 막 여과지로 여과멸균 하여 사용한다.

46. Fletcher’s 배지

배지성분

base
Peptone 0.3 g
Beef extract 0.2 g
Sod. chloride 0.5 g
Agar 1.5 g
D.W. 920 ㎖

배지 및 시약 483
제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 920 ㎖에 넣고 잘 혼합하여 가온하여 완전히
녹인다. 121℃에서 15분 동안 멸균한다음 50℃ 정도로 식혀 멸균된 토끼 혈청을 8~
10%되게 첨가하여 잘 섞은 후 무균적으로 시험관에 분주한다. 56℃ 수조에서 1시간정
도 방치하고 그 다음 날 다시 1시간정도 둔 후에 꺼내어 사용한다.

47. GN broth

배지성분

Tryptone 20 g
Dextrose 1g
D-mannitol 2g
Sodium citrate 5g
Sodium desoxycholate 0.5 g
K2HPO4 4g
KH2PO4 1.5 g
Sodium chloride 5g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.0 ± 0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인다. 적당한
용기에 분주하고 121℃에서 15분간 고압멸균 하여 사용한다.

48. GVPC 배지

배지성분

Legionella agar base


D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 base를 매뉴얼에 따라 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 가온하여
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균 한 후 45℃로 식혀 Legionella supplement [L-
cysteine (0.4 g/ℓ)․HCl, Ferric pyrophosphate (0.25 g/ℓ)]를 각각 여과멸균 하여 첨가하

484 감염병실험실진단 제1부 세균질환


고 glycine (3 g/ℓ), vancomycin (5 ㎎/ℓ), polymyxin (79,200 U/ℓ), cyclohexamide
(80 ㎎/ℓ)를 첨가하여 잘 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

49. Hektoen Enteric Medium

배지성분

proteose peptone 12 g
Yeast extract 3g
Lactose 12 g
Sucrose 12 g
Salicin 2g
Bile salt 20 g
Sodium chloride 5g
Sodium thiosulfate 5g
Ferric ammonium citrate 1.5 g
Brom thymol blue 0.065 g
Acid fuchsin 0.1 g
Agar 14 g
D. W 1ℓ
(최종 pH 7.5 ± 0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합하여 가열하여 완전히 녹인
다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다. 이 배지는 고압멸균하지 않는다.

50. Hoyle medium

배지성분

Hoyle medium base


D. W 1ℓ

제조
혼합 상품화되어 있는 base 40 g을 증류수에 넣고 가온하여 완전히 녹인 후 121°C에
서 15분 동안 고압멸균 한다. 55°C로 식힌 후 50 ㎖의 Laked horse blood (SR0048)와
10 ㎖의 3.5% Potassium Tellurite 용액 (SR0030)을 넣고 혼합한 후 분주한다.

배지 및 시약 485
※ Hoyle medium은 Neill’s medium을 변형시킨 배지로 mitis types에 성장 억제 효
과가 없으며 모든 type의 C. diphtheriae 들이 매우 신속하게 성장할 수 있도록 하
여 배양 후 18시간 이내에 진단이 가능하도록 한다.

51. Indole Test배지

배지성분

Peptone 20 g
Sodium chloride 5g
D.W 1ℓ

제조
증류수에 배지를 정량하여 넣고 가온하여 잘 녹인 다음 4부 시험관에 2 ㎖ 씩 분주하
여 121℃에서 15분간 고압멸균한다. 2% peptone대신에, 1% tryptose 또는 1.5%
casitone, 1.5% trypticase등을 peptone원료로 사용 할 수 있다.

52. Karmail Selective Medium

배지성분
1) Campylobacter Agar Base

Columbia Agar Base 18.0 g


Activated charcoal 2.0 g
Haematin 0.016 g
D. W. 500 ㎖
(pH 7.4±0.2)

2) Campylobacter Selective Supplement

Sodium pyruvate 50 g
Cefoperazone 16 g
Vancomycin 10 g
Cycloheximide 50 g

486 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
500 ㎖의 증류수에 Campylobacter agar base 21.5 g을 넣고 가열하여 녹인 후, 121℃
에서 15분간 고압멸균 한다. 50℃ 정도 식힌 배지에 멸균된 증류수 2 ㎖에 녹인
supplement 1병을 첨가하여 잘 혼합한 후 멸균된 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

53. Kligler’s Iron Agar (KIA)

배지성분

Beef extract 3g
yeast extract 3g
peptone 15 g
Proteose peptone 5g
Lactose 10 g
Glucose 1g
Ferrous sulfate 0.2 g
Sodium chloride 5g
Sodium thiosulfate 0.3 g
Agar 15 g
Phenol red 0.024 g
D.W 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 표시된 매뉴얼에 따라 배지를 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온
하여 완전히 녹인다. 4부 시험관에 약 3 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압멸균한
후 밑둥을 깊게 (밑둥: 2.5 ㎝, 사면: 4 ㎝)하여 사면배지를 만든다.

54. Lactose-Gelatin배지 (for C. perfrignens)

배지성분

Tryptose 15 g
Yeast extract 10 g
Lactose 10 g
Phenol red (1% solution in 95% ethanol) 5.0 ㎖
Gelatin 120 g
D. W 1ℓ

배지 및 시약 487
제조
400 ㎖의 증류수에 tryptose와 yeast extract, lactose를 넣은 후 가열하여 녹인다.
한편 600 ㎖의 증류수에 gelatin을 잘 섞어 넣은 후, 교반기를 이용하여 50~60℃의
열을 가하여 잘 녹인 다음 두 가지 용액을 섞어 pH가 7.3~7.7이 되도록 조정한다. 여
기에 1% phenol red를 첨가하여 16 × 150 ㎜ 규격의 마개 시험관에 10 ㎖씩 분주한
후, 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다. 제조한지 8시간 이상된 배지는, 사용하
기 2~3시간 전에 50~70℃로 재 가열하여 사용하여야 한다.

55. LPM Agar

배지성분

Glycine anhydride 10.0 g


Sodium chloride 5.0 g
LiCl 5g
Pancreatic digest of casein 5.0 g
Proteose peptone No.3 5.0 g
Beef extract 3.0 g
Phenylethyl alcohol 2.5 g
Moxalactam Solution 2.0 ㎖
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.3±0.2)

Moxalactam 용액
Moxalactam 0.1 g
D. W. 10 ㎖

※ Moxalactam 0.1 g을 10 ㎖ 증류수에 용해하여 여과지로 여과 멸균한다.

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수 998 ㎖에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 완전
히 녹인다. 121℃에서 12분간 고압멸균 한 후 45~50℃로 식혀 여과 멸균한 Moxalactam
2 ㎖을 무균적으로 첨가하여 잘 혼합한 다음 페트리디쉬 또는 시험관에 분주하여 사용
한다.

488 감염병실험실진단 제1부 세균질환


56. Leeds Acinetobacter Medium (LAM)

배지성분

Bacterological agar No. 1 10 g


Acid casein hydrolysate 15 g
Neutralized soy peptone 5g
Sodium Chloride 5g
D-Fructose 5g
Sucrose 5g
D-Mannitol 5g
L-Phenylalanine 1g
Ferric Ammonium Citrate 0.4 g
Phenol Red 0.02 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.0 ± 0.2)

제조
각 배지 및 시약성분을 정량하여 1 ℓ의 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히
녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 45~55℃로 식혀 vancomycin 10 ㎎/ℓ,
cefsulodin 15㎎/ℓ, cephradine 50 ㎎/ℓ을 첨가하여 잘 혼합시킨 후 페트리디쉬에
분주한다. 신선한 배지는 오렌지색을 나타내며 4±2℃에서 2주간 사용이 가능하다.

57. Lowenstein-Jensen 배지

배지성분
1) Mineral salt solution

Potassium dihydrogen phosphate anhydrous (KH2PO4) 2.4 g


Magnesium sulfate (MgSO4‧7H2O) 0.24 g
Magnesium citrate 0.6 g
Asparagine 3.6 g
Glycerol(reagent grade) 12 ㎖
D. W. 600 ㎖

※ 각 시약을 정량하여 증류수 600 ㎖에 넣고 잘 혼합하여 녹인 다음 121℃에서 30분


간 고압멸균 후 냉장고 보관시 장기간 사용 가능하다.

배지 및 시약 489
2) Malachite green solution, 2%

Malachite green dye 2.0 g


D. W. 100 ㎖

※ 침전물이 생기거나 색상변화가 있으면 버리고 다시 만들어 쓴다.

3) 전란액 (Homogenized whole eggs)

제조
각 제조한 시약 mineral salt 용액 600 ㎖, Malachite green 용액 20 ㎖, 전란액 (계
란 약 20~25개에 해당) 1,000 ㎖를 적당한 용기에 넣어 잘 혼합한 후 나사마개 시험관
또는 McCartney 병 등에 6~8 ㎖씩 분주한 후, 응고기에서 사면으로 80~85℃에서
약 45분간 응고시켜서 사용한다.

58. Lysine Iron Agar

배지성분

Peptone 5g
Yeast extract 1g
Dextrose 10 g
L-lysine 10 g
Ferric ammonium citrate 0.5 g
Sodium thiosulfate 0.04 g
Brom cresol purple 0.02 g
Agar 15 g
D. W 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
4부 시험관에 4 ㎖ 씩 분주하여 121℃에서 12분간 고압 멸균한다. 밑면은 깊고, 사면은
짧은 사면배지를 만든다.

490 감염병실험실진단 제1부 세균질환


59. MacConkey Agar

배지성분

Peptone 17 g
Proteose peptone 3g
Lactose 10 g
Bile Salts, No. 3 1.5 g
Sodium Chloride 5g
Agar 13.5 g
Neural Red 0.03 g
Crystal Violet 0.001 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.1 ± 0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

60. Mannitol Salt Agar

배지성분

Sodium chloride 0.75 g


Agar 15.0 g
D-Mannitol 10.0 g
Pancreatic digest of casein 5.0 g
Peptic digest of animal tissue 5.0 g
Beef extract 1.0 g
Phenol Red 0.025 g
D. W. 1ℓ
(pH7.4±0.2 at 25℃)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 491
61. Minimal-Salts Agar (MSA)

배지성분
1) Salt solution

NH4Cl 20 g
NH4NO3 4g
Na2SO4 8g
K2HPO4 12 g
KH2PO4 4g
MgSO4‧7H2O 0.4 g
D. W. 1ℓ

2) Agar base

Agar NO. 3 20 g
D. W. 1ℓ

제조
각 시약 및 배지를 정량하여 증류수에 잘녹인 다음 Salt 용액 250 ㎖을 agar base
750 ㎖와 혼합한다. 20% glucose 10 ㎖와 최종 농도가 1%가 되도록 sodium acetate
를 첨가하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

62. Modified Thayer-Martin (MTM)

배지성분

GC Agar base
Proteose peptone No. 3 15 g
Corn starch 1g
Potassium phosphate, dibasic 4g
Potassium phosphate monobasic 1g
Sodium chloride 5g
Agar 10 g

재조
혼합 상품화된 base 7.2 g을 증류수 100 ㎖에 넣어 녹인 후 pH 7.2±0.2로 조정한다
음 가열하여 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 45~50℃로 식히고

492 감염병실험실진단 제1부 세균질환


2% hemoglobin 용액 100 ㎖과 IsoVitale X 2 ㎖을 넣고 잘 혼합한 후 페트리디쉬에
분주하여 사용한다.

63. Motility Test Medium

배지성분

Tryptone 10 g
Sodium Chloride 5g
Agar 5g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합하과 가온하여 완전히 녹인다
음 pH 7.2±0.2로 조정한다. 4부 시험관에 3 ㎖ 씩 분주하여 121℃에서 15분 동안 고압
멸균하여 사용한다.

64. Motility-Nitrate 배지 (for C. perfrignens)

배지성분

Beef extract 3g
pepton 5g
KNO3 1g
Na2HPO3 2.5 g
Agar 3g
Glactose 5g
Glycerin (reagent grade) 5㎖
D. W. 1ℓ

제조
각각의 시약 및 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 다음 pH
7.3±0.1로 조정한다. 이 용액을 16 x 150 ㎜ 시험관에 11 ㎖씩 배지를 분주하고 121℃
에서 15분 동안 고압 멸균하여 사용한다. 4시간 이후에 사용 할 경우에는 끊는 물에
중탕하여 사용하거나, 고온을 이용하여 한번 녹인 다음 식혀서 사용한다.

배지 및 시약 493
65. Mueller Hinton배지 (MH)

배지성분

Beaf infusion 300 g


Casamino acid 17.5 g
Starch 1.5 g
D.W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히 녹인
후 121℃에서 15분간 고압멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

66. Niger seed (Birdseed agar)

배지성분

Guizotia abyssinicia seed 분말 50 g


Dextrose 1g
KH2PO4 1g
Creatinine 1g
Agar 15 g
D. W. 1ℓ

제조
Seed 분말은 정량하여 증류수에 넣고 30분간 끓인 후 찌꺼기를 여과한 후 식혀서
나머지 배지 및 시약성분을 넣고 가온하여 녹인후 121℃에서 15분 동안 고압멸균한 다
음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

494 감염병실험실진단 제1부 세균질환


67. Nitrate broth

배지성분

Beef extract 3g
Peptone 5g
Potassium nitrate 1g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인다. 5.5부
시험관에 여과관을 넣고 5 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.

68. Nutrient agar

배지성분

Beef extract 3.0 g


Peptone 5.0 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 완전히 녹인
다. pH 6.8±0.2로 조정하고 121℃에서 15분 동안 고압멸균하여 페트리디쉬에 분주하여
사용한다.

69. O/F basal medium

배지성분

Base
Tryptone 2g
Sodium Chloride 5g
K2HPO4 0.3 g
Bromo thymol blue 0.08 g
Agar 2g
D. W. 1ℓ

배지 및 시약 495
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 혼합한 후 가온하여 성분을 완전히
녹인다. pH 6.8±0.2로 조정한 다음 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한다. 여기에 0.45 ㎕
로 여과멸균한 포도당 용액을 최종 농도가 1%되게 첨가후 멸균된 4부 시험관에 분주하
여 사용한다.
※ 분주한 시험관 1/2은 파라핀 오일 1 ㎖ 정도를 첨가하고 나머지 시험관에는 파라핀
오일을 첨가하지 않는다.

70. Ogawa 배지

배지성분
1) Mineral salt 용액

Potassium dihydrogen phosphate anhydrous


(KH2PO4) 2.4 g
Sodium glutamate 3.0 g
D. W. 300 ㎖

2) 2% Malachite green 용액

Malachite green dye 2.0 g


D. W. 100 ㎖

3) 전란액 (Homogenized whole eggs)

제조
각 제조한 시약 mineral salt 용액 300 ㎖, Malachite green 용액 18 ㎖, 전란액 (계
란 약 12~16개에 해당) 600 ㎖를 적당한 용기에 넣어 잘 혼합한 후 나사마개 시험관
또는 McCartney 병 등에 6~8 ㎖ 씩 분주한 후, 응고기에서 사면으로 80~85℃에서
약 45분간 응고시켜서 사용한다. 응고 후 배지의 pH는 6.8이다.

496 감염병실험실진단 제1부 세균질환


71. P Agar

배지성분

Peptone 10.0 g
NaCl 5.0 g
Yesat extract 5.0 g
Glucose 1.0 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.5±0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배지성분을
완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

72. PALCAM (Polymycin-acriflavin-lithium chloride-ceftazidime


esculin-mannitol)
배지성분
1) base

Tryptic digest beef harar 2.7 g


Pancreatic digest of casein 8.9 g
Peptone 4.4 g
LiCl 15.0 g
Mannitol 10.0 g
Sodium chloride 4.4 g
Yease extract 4.4 g
Starch 0.9 g
Esculin 1.0 g
Ferric ammonium citrate 0.5 g
Glucose 0.5 g
Phenol Red 0.08 g
Acryflavine․HCl 5.0 ㎎
Polymixin B 0.01 g
PALCAM selective supplement 10.0 ㎖
Agar 15.3 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.2±0.2)

배지 및 시약 497
2) PALCAM antibiotic supplement

Ceftazidime 40.0 ㎎
D. W. 10 ㎖

제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 990 ㎖에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 50℃로 식혀 supplement 10 ㎖를
무균적으로 배지에 혼합하여 페트리디쉬나 시험관에 분주하여 사용한다.

73. PEA 배지

배지성분
Heart Infusion agar 40 g
2-phenylethanol 3㎖
D. W. 1㎖

제조
각 배지 및 시약 성분을 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배지성분
을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용
한다.

74. Penicillin-G 한천배지

배지성분

Tryptose agar 4.1 g


D.W. 100 ㎖

제조
혼합 상품화된 Tryptose agar 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온
하여 배지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한 후 50℃로 식힌 다
음 penicillin-G를 10 U/㎖로 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

498 감염병실험실진단 제1부 세균질환


75. Phenethyl Alcohol blood Agar

배지성분

Base
Pancreatic digest of casein 15.0 g
NaCl 5.0 g
Papaic digest of soybean meal 5.0 g
β-Phenethyl alcohol 2.5 g
Agar 15.0 g
(최종 pH 7.3±0.2)

제조
혼합 상품화된 base를 정량하여 증류수 950 ㎖에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 배
지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분 동안 고압멸균 한 후 50℃로 식혀 탈 섬유시
킨 면양혈액 50 ㎖를 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

76. Polymyxin B-Lysozyme-EDTA-Thallous

배지성분

Acetate (PLET) 한천배지


Heart Infusion agar 40 g
EDTA 0.3 g
Thallous acetate 0.04 g
D. W. 1ℓ

제조
각 배지 및 시약성분을 정량하여 증류수에 넣고 혼합한 다음 가온하여 배지성분들을 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50℃로 식혀 polymyxin B는 30,000 U/ℓ,
lysozyme은 300,000 U/ℓ 농도되게 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 499
77. Phenylalanine malonate Broth 배지

배지성분

Yeast extract 1g
Sodium malonate 3g
DL-Phenylalanine 2g
Ammonium sulfate 2g
Dipotassium phosphate 0.6 g
Monopotassium phosphate 0.4 g
Sodium chloride 2g
Brom thymol blue 0.025 g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 후 녹인다. 4부 시험관에
2 ㎖ 씩 분주하여 115℃에서 10분간 고압멸균 한다.

78. Preston Broth

배지성분
1) Nutrient Broth No.2

‘Lab-Lemco’ powder 5.0 g


Peptone 5.0 g
Sodium chloride 2.5 g
D. W. 500 ㎖
pH 7.5 ± 0.2

2) Modified Preston Selective Supplement (500ml용, 1vial)

Polymyxin B 2,500 I.U


Trimethoprim 5㎎
Rifampicin 5㎎
Cycloheximide 50 ㎎

500 감염병실험실진단 제1부 세균질환


3) Campylobacter Growth Supplement (500 ㎖용, 1 vial)

Sodium pyruvate 0.125 g


Sodium metabisulphite 0.125 g
Ferrous sulphate 0.125 g

4) Lysed Horse Blood

제조
Nutrient broth No.2 12.5 g을 정량하여 475 ㎖ 증류수에 녹이고 121℃에서 15분간
고압멸균한다. 50℃ 정도로 식혀 Lysed horse blood 25 ㎖ 와 Preston selective
supplement 아세톤/물 (50:50)을 2 ㎖ 첨가하여 녹인 것과 Campylobacter growth
supplement 2 ㎖의 멸균된 물에 녹인 것 각 1병씩을 첨가한 후 골고루 잘 혼합한다.
멸균된 나사 마개가 있는 작은 병에 5 ㎖ 씩 분주한다. 제조한 배지는 4℃에서 7일간
보관할 수 있다.

79. Preston Selective Medium

배지성분
1) Campylobacter Agar Base

Lab-Lemco powder 5.0 g


Peptone 5.0 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 6.0 g
D. W. 500 ㎖
(pH 7.5±0.2)

2) Campylobacter Selective Supplement (preston)

Polynyxin B 2,500 I.U.


Rifampicin 5.0 g
Trimethoprim 5.0 g
Cycloheximide 50 g

3) Laked Horse Blood

배지 및 시약 501
제조
Campylobacter agar Base 18.5 g을 증류수 475 ㎖에 잘 혼합하고 가온하여 배지성
분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균한 후 50℃ 정도 식혀 Laked Horse
Blood 25 ㎖과 아세톤/증류수 (50:50) 2 ㎖로 녹인 Preston Campylobacter Selective
Supplement를 첨가하여 잘 혼합하고 멸균된 페트리 접시에 분주하여 사용한다.

80. Pyrazinamidase 시험용 배지

배지성분

Dubos broth base


Casitone 0.5 g
Asparagine 2g
Tween 80 0.2 g
Monopotassium phosphate 1g
Disodium phosphate (anhyd.) 2.5 g
Ferric Ammonium citrate 50 ㎎
Magnesium sulfate 10 ㎎
Calcium chloride 0.5 ㎎
Zinc sulfate 0.1 ㎎
Copper sulfate 0.1 ㎎
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 base 6.5 g을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한다. 여기에 0.1 g의
pyrazinamide, 2.0 g의 sodium pyruvate, 15 g의 agar를 넣고 가온하여 완전히 배지
성분을 녹인다. 16x125 ㎜ 나사마개 시험관에 5 ㎖ 씩 분주하고 121℃에서 15분간 고압
멸균 한다. 직립 상태에서 굳힌 다음 사용하며, 냉장 보관 시 수개월간 사용 가능하다.

81. Sabouraud dextrose agar (SDA)

배지성분

Dextrose 40 g
Neopeptone 10 g
Agar 15 g
D. W. 1ℓ

502 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인다. 121℃
에서 10분간 고압 멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

82. Schleifer-Krämer Agar (SK Agar)

배지성분
1)

Glycerol 10.0 g
sodium pyruvate 10.0 g
Pancreatic digest of casein 10.0 g
Beef extract 5.0 g
Yeast extract 3.0 g
Potassium isothicoyanate 2.25 g
LiCl 2.0 g
Na2HPO4⋅2H2O 0.9 g
NaH2PO4⋅H2O 0.6 g
NaN3 solution 10.0 ㎖
Agar 13.0 g
D.W. 1ℓ
(최종 pH7.2±0.2)

2) NaN3 용액

NaN3 0.045 g
D. W. 10 ㎖

※ NaN3 를 정량하여 증류수 10 ㎖에 넣어 잘 혼합한 후 0.22 ㎛ 여과지로 여과멸균


한다.

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 990 ㎖ 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 배지성
분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 45~50℃로 식혀 여과 멸균한
NaN3 용액 10 ㎖를 무균적으로 첨가하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

배지 및 시약 503
83. Selenite Broth

배지성분

Tryptone 또는 Polypeptone 5g
Lactose 4g
Sodium phosphate 10 g
Sodium selenite 4g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.0)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 배지성분을 완전
히 녹인다. 멸균된 5.5부 시험관에 10 ㎖ 씩 (5 ㎝정도 깊이) 분주하여 사용한다. 이
배지는 고압멸균하지 않고 수증기에 30분간 쏘여 사용하며, 즉시 사용할 경우는 그대
로 사용 가능하다.

84. Shigella broth

배지성분

Tryptone 20 g
K2HPO4 2g
KH2PO4 2g
Sodium chloride 5g
Glucose 1g
Tween 80 1.5 ㎖
※ Novobiocin 용액
Novobiocin 0.50 g
D. W. 100 ㎖

Novobiocin을 정량하여 증류수 100 ㎖에 넣어 잘 혼합 한 후 여과 멸균한다.

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수 988.9 ㎖ 넣어 잘 혼합하고 가온하여 완전히
녹인다. pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분 동안 고압 멸균한 다음 45~50℃로
식혀 여과 멸균한 novobiocin 용액 11. 1 ㎖를 무균적으로 첨가하고 혼합하여 적당한

504 감염병실험실진단 제1부 세균질환


나사마개 시험관에 분주하여 사용한다.

85. Shigella-Salmonella Agar (SS Agar)

배지성분

Beef extract 5g
Proteose Peptone 5g
Lactose 10 g
Bile salts No. 3 8.5 g
Sodium citrate 8.5 g
Ferric citrate 1g
Sodium Thiosulfate 8.5 g
Agar 13.5 g
Brilliant green 0.33 ㎎
Neutral red 0.025 g
D. W 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한다. 가열하여 배지성분이
완전히 녹인 다음 55~60℃로 식혀 페트리디쉬에 분주하여 사용하며, 고압 멸균 하지
않는다.

86. Skirrow Selective Medium

배지성분
1) Columbia Agar Base

Special peptone 12.5 g


Starch 0.5 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 5g
D. W. 500 ㎖
(pH 7.3±0.2)

배지 및 시약 505
2) Blood Agar Base No. 2

Proteose peptone 7.5 g


Liver digest 1.25 g
Yeast extract 2.5 g
Sodium chloride 2.5 g
Agar 6.0 g
D. W. 500 ㎖
(pH 7.4±0.2)

3) Campylobacter Selective Supplement (Skirrow)

Vancomycin 5.0 ㎎
Trimethoprim 2.5 ㎎
Polymyxin 12,500 I.U.

4) Laked Horse Blood

제조
Base로는 혼합 상품화된 Columbia Agar base 나 또는 Blood Agar base No 2를
사용한다. 매뉴얼에 따라 agar base를 정량하고 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하
여 배지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압멸균하여 50~55℃로 식히고
5~7%되게 Laked horse blood를 첨가하고 여기에 Campylobacter Selective
Supplement (멸균된 증류수 2 ㎖에 녹인 것)도 첨가한다. 거품이 나지 않도록 천천히
혼합하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

87. Simmon’s Citrate agar

배지성분

Sodium chloride 5g
Magnesium sulfate 0.2 g
Dipotassium phosphate 1g
Sodium citrate 2g
Agar 15 g
Brom thymol blue 0.08 g
D.W 1ℓ

506 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣고 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인다. 4부
시험관에 3 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압멸균하여 사면배지를 만든다 (밑둥
2.5 ㎝, 사면 4 ㎝).

88. Staphylococcus Medium

배지성분

Peptone 6.0 g
Pancreatic digest of casein 4.0 g
Yesat extract 3.0 g
Beef extract 1.5 g
Glucose 1.0 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ
(최종 pH 6.6±0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 배지성분을 완
전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하고 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

89. Stuart’s 배지

배지성분
Asparagine 0.132 g
Ammonium chloride 0.25 g
Magnesium chloride‧6H2O 0.406 g
Sod. chloride 1.808 g
Disodium phosphate 0.087 g
Phenol red 0.01 g
D.W. 995 ㎖
Sterile rabbit serum 8~10%
Glycerine 5.0 ㎖
(최종 pH ; 7.4-7.5)

배지 및 시약 507
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가온하여 녹인 후 121℃
에서 15분간 고압 멸균한다. 50℃로 식힌 후 가토 혈청을 8~10% 되게 첨가하고 혼합
하여 멸균된 적당한 용기에 분주하여 사용한다. 필요시에는 이 배지에 1% 한천을 첨가
하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

90. Sucrose phosphate Glutamate (SPG)

배지성분
Sucrose 75 g
KH2PO4 0.52 g
Na2HPO4 1.22 g
L-Glutamic acid 0.72 g
Bovine serum 50.0 ㎖
Antibiotic inhibitor 10.0 ㎖
(최종 pH7.4~7.6)
Antibiotic inhibitor
Vancomycin 0.1 g
Streptomycin 0.050 g
Nystatin 25,000 U
D. W. 10 ㎖

각 항균제를 멸균된 증류수에 넣어 잘 혼합하여 녹인 후 여과멸균 한다.

제조
Bovine serum과 항균제를 제외한 각 배지 및 시약 성분을 정량하여 증류수 940 ㎖
에 넣어 잘 혼합 후 가온하여 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 45~50℃로 식
힌 후 무균적으로 bovine serum 50 ㎖과 여과 멸균한 항균제 10㎖를 첨가하고 혼합하
여 무균적으로 멸균된 나사마개 시험관에 분주하여 사용한다.

508 감염병실험실진단 제1부 세균질환


91. Syncase broth

배지성분

Casamino acid 10 g
Sucrose 5g
Na2HPO4 5g
K2HPO4 5g
NH4Cl 1.18 g
Na2SO4 0.089 g
MgCl2․6H2O 0.042 g
MnCl2․4H2O 0.004 g
FeCl3․6H2O 0.005 g
D. W. 1ℓ

제조
각 배지 및 시약을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인다. pH를
7.2로 조정하고 나사마개 시험관에 5 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용
한다.

92. Tetrathionate Broth

배지성분
1) Basal medium

Polypeptone 또는 Proteose peptone 5g


Bile salt 1g
Calcium carbonate 10 g
Sodium thiosulfate 30 g

2) Iodine 용액

Iodine 6g
Potassium iodide 5g
D. W. 20 ㎖

배지 및 시약 509
제조
혼합 상품화된 Basal medium 4.6 g을 정량하여 증류수 100 ㎖에 넣어 잘 혼합한
다음 가열하여 완전히 녹인다. 60℃ 로 식혀 2 ㎖의 iodine 용액을 첨가하고 brilliant
green 을 Kauffman’s Combined Enrichment Medium에 표시된 매뉴얼 대로 첨가한
다 (basal medium 100 ㎖ 당 1:1,000용액 1 ㎖). 이들을 멸균된 나사마개 시험관에
10~12 ㎖씩 분주하여 제조한 날에 사용한다 (배지를 저장해서 사용할 경우는 iodine
을 첨가하지 않고 사용직전에 첨가하여 사용한다).
※ Proteus가 과다하게 자라는 것을 막기 위하여 sulfathiazol (100 ㎖ 배지당 0.125 g)
을 첨가 할 수도 있다.

93. Thioglycollate Bile Broth

배지성분

pancreatic digest of casein 15.0 g


Glucose 5.5 g
Yeast extract 5.0 g
NaCl 2.5 g
Agar 0.75 g
L-Cystine 0.5 g
Sodium thioglycollate 0.5 g
Bile solution 50.0 ㎖
D. W. 1ℓ
(최종 pH 7.1±0.2)

Bile 용액
Oxgall 40.0 g
Sodium deoxycholate 2.0 g
D. W. 100 ㎖

※ Bile 용액은 증류수 100 ㎖에 oxgall과 sodium deoxycholate를 정량하여 넣고 잘


혼합한 다음 여과 멸균한다.

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류에 넣어 잘 혼합한 다음 가열하여 완전히 녹인
다. 5.5부 시험관에 10 ㎖씩 분주하여 121℃에서 15분간 고압 멸균한 후 45~50℃로

510 감염병실험실진단 제1부 세균질환


식혀 무균적으로 bile 용액을 각 시험관에 0.5 ㎖씩 첨가하여 사용한다.

94. Thioglycollate Medium (Fluid)


배지성분

L-Cystine 0.5 g
Agar (granulated) 0.75 g
NaCl 2.5 g
Dextrose 5g
Yeast extract 5g
Tryptone 15 g
Sodium thioglycollate or 0.5 g
thioglycollic acid
Resazurin, sodium 용액 (1:1,000), 1㎖
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여 완전히 녹인
다. 5.5부 시험관에 15 ㎖씩 분주하고 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.

95. Thiosulfate Citrate Bile salt Sucrose agar (TCBS agar)

배지제조

Yeast extract 5g
Peptone 10 g
Sodium citrate 10 g
Sodium thiosulfate 10 g
OX gall 5g
Sodium cholate 3g
Sucrose 20 g
Sodium chloride 10 g
Ferrous citrate 1g
Brom thymol blue 0.04 g
Thymol blue 0.04 g
Agar 15 g
D. W. 1ℓ

배지 및 시약 511
제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣로 잘 혼합한 후 가온하여 배지성분을
완전히 녹인다음 50℃정도로 식혀 페트리디쉬에 부어 사용한다. 최적 pH는 8.6이며 고
압 멸균을 하지 말고 제조 후 48시간 이내에 사용하도록 한다.

96. Tinsdale medium

배지성분
1) Tinsdale agar base

Proteose peptone 20.0 g


Yeast extract 5.0 g
Sodium chloride 5.0 g
L-cystine 0.24 g
Agar 15.0 g
D. W. 1ℓ

2) Tinsdale Supplement

Serum equiv. 20.0ml


Potassium tellurite 0.069g
Sodium thiosulphate 0.085g

※ 15 ㎖의 멸균된 증류수에 무균적으로 넣어 녹여 사용하며, base 200 ㎖ 당 한 개의


바이알을 넣는다.

제조
Agar base 9 g을 200 ㎖ 증류수에 넣고 잘 혼합 한 후 가열하여 완전히 녹인다.
50℃로 식힌 다음 Tinsdale Supplement 15 ㎖을 넣어 혼합하고 페트리디쉬에 분주하
여 사용한다. 이 배지는 고압멸균하지 않는다.

512 감염병실험실진단 제1부 세균질환


97. TM배지

배지성분

G.C agar base 36 g + 500 ㎖ (D.W)


Hemoglobin 분말 10 g + 500 ㎖ (D.W)
Isovitale X enrichment 10 ㎖
VCN inhibitor 10 ㎖

제조
① 두개의 1 ℓ 플라스크에 증류수 250 ㎖씩을 넣고 각각에 Hemoglobin 5.0 g을 가
하고 진탕하여 용해 한 후 가열하여 완전히 용해한다. 멸균된 거즈 (3∼4겹)를 놓고
hemoglobin 용액을 여과하여 121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 45~50℃로 식힌다.
② 1ℓ 플라스크에 36 g의 GC agar를 정량하고 500 ㎖ 증류수에 넣어 혼합 한 후 가
열하여 완전히 녹인 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 50℃ 항온수조 내에서
배지를 식힌다.
③ GC 배지가 든 플라스크에 멸균된 hemoglobin용액 첨가하여 혼합하고 (이때 거품
이 생기지 않도록 주의), 10 ㎖ 의 Isovitale X, 10 ㎖의 VCN을 무균적으로 첨가하
여 천천히 혼합한 후 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

98. Todd-Hewitt broth

배지성분

Heart, Infusion 500 g


Neopeptone 20 g
Dextrose 2g
Sodium chloride 2g
Disodium phosphate 0.4 g
Sodium carbonate 2.5 g
Yeast extract 0.5%
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 잘 녹인다. 5.5부
시험관에 5 ㎖ 씩 분주한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.

배지 및 시약 513
99. Todd Hewitt broth+Yeast extract 배지 (THY)

배지성분

Todd Hewitt broth 30 g


Yeast extract 5g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 혼합하고 가온하여 잘 녹인다. 5.5부
시험관에 5 ㎖ 씩 분주한 다음 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 사용한다.

100. Trimethoprim-Sulfamethoxazole-Polymyxin B sulfate


한천배지 (TMSPA)
배지성분

Columbia blood agar base 44 g


Trimethoprim 3.2 ㎎
Sulfamethoxazole 16 ㎎
Polymyxin B sulfate 30,000 unit
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 Columbia agar base를 정량하고 증류수 950 ㎖ 에 넣어 혼합 한 다
음 가온하여 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균 한 다음 50℃로 식혀 탈 섬유
시킨 면양혈액 50 ㎖ (5%) 과 3.2 ㎎ 의 Trimethoprim, 16 ㎎ 의 Sulfamethoxazole,
30,000 unit Polymyxin B sulfate를 첨가하여 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

514 감염병실험실진단 제1부 세균질환


101. Trypticase-Peptone-Glucose-Yeast Extract Broth (TPGY)
배지성분

Trypticase 50 g
Peptone 5g
Yeast extract 20 g
Dextrose 4g
Sodium thioglycollate 1g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가열하여 녹인다. 나사
마개 시험관에 15 ㎖씩 분주하여 121℃에서 10분 동안 고압멸균한 후 식혀 냉장보관
하였다가 필요시 꺼내어 사용한다.

102. Trypticase-Peptone-Glucose-Yeast Extract Broth with


Trypsin (TPGYT)
TPGY 배지에 트립신 (1:250) 1.5 g을 멸균 증류수에 넣어 용해시킨 후 0.45 ㎛ 필터
로 여과멸균하여 사용직전에 첨가한다. 15 ㎖ 배지에 트립신 1 ㎖을 넣는다.

103. Urease Test Medium

배지성분
1) Urea Agar base

Basal ingredients peptone 1g


Sodium chloride 5g
Glucose 1g
Monobasic potassium phosphate 2g
Phenol red 0.012 g
Urea 20.0 g
(최종 pH 6.8)

배지 및 시약 515
제조
900 ㎖의 증류수에 agar 15 g을 잘 혼합하고 가열하여 녹인 다음 121℃에서 15분간
멸균한 후 50~55℃로 식힌다. 한편, 혼합 상품화되어 있는 urea agar base를 표시된
매뉴얼대로 정량하여 증류수 100 ㎖ 넣어 잘 혼합한 후 0.45 ㎛ 막 여과지를 사용하여
여과멸균 한다. 앞서 고압 멸균하여 식힌 agar와 여과 멸균한 urea agar base를 잘
혼합하여 4부 시험관에 3 ㎖ 씩 무균적으로 분주한다. 밑면이 깊은 사면 배지를 만드는
것이 좋으며 필요에 따라 액체배지를 만들어 사용할 수도 있다.

104. UVM modified Listeria enrichment broth

배지성분

Sodium chloride 20.0 g


Sodium phosphate dibasic 9.6 g
Pancreatic digest of casein 5.0 g
Proteose peptone No. 3 5.0 g
Beef extract 5.0 g
Yeast extract 5.0 g
Potassium phosphate dibasic 1.35 g
Esculin 1.0 g
Nalidixic acid 20.0 ㎎
Acriflavine․HCl 12.0 ㎎
(최종 pH7.2±0.2)

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하고 가열하여 완전히 녹인다.
121℃에서 15분간 고압 멸균한 다음 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

105. VBC medium

배지성분

GC medium base 36 g
D. W. 950 ㎖

516 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
혼합 상품화된 GC medium base를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 후 가온하여
배지성분을 완전히 녹인다. 121℃에서 15분간 고압 멸균하여 배지의 온도가 약 95℃일
때 탈 섬유소 시킨 면양혈액 50 ㎖를 첨가한 후 플라스크를 천천히 돌려서 거품이 나지
않도록 주의하면서 내용물을 잘 섞는다. 혈액이 익어서 응괴가 생길 정도로 된 것이 헤
모필루스균 배양에 적합하다. 배지를 약 50℃로 식힌 후 IsoVitale X 를 1%되게 첨가
하고 ㎖ 당 vancomycin 5 ㎍, bacitracin 300 ㎍, clindamycin 1 ㎍되게 각각 첨가하
여 절 섞은 후 무균적으로 페트리디쉬에 분주하여 사용한다.

106. XLD agar

배지성분

Yeast extract 3.0 g


L-lysine 5.0 g
Xylose 3.75 g
Lactose 7.5 g
Saccharose 7.5 g
Sodium desoxycholate 2.5 g
Ferric ammonium citarate 0.8 g
Sodium thiosulfate 6.8 g
NaCl 5.0 g
Agar 15.0 g
Phenol red 0.08 g
D. W. 1ℓ

제조
혼합 상품화된 배지를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합한 다음 가온하여 녹인 후 pH
를 7.4±0.2로 조정한다. 고압 멸균하지 않으며 배지가 50℃정도로 식으면 페트리디쉬에
분주하여 사용한다.

배지 및 시약 517
██ 시약

1. Bile solubility (10% Sodium deoxycholate)

Sodium deoxycholate 1.0 g


D.W. 10.0 ㎖

제조
시약을 정량하여 증류수에 넣어 잘 녹인다음 pH 7.0으로 조정한다. 멸균된 갈색병에
넣어 냉장보관한 후 필요시 꺼내어 사용한다.

2. 1% Formalin 용액

Formalin (중성 포름알데히드, 대략 37%) 100 ㎖


D. W. 900 ㎖

※ 대변검체의 보존을 위해 사용

3. 3% Acid alcohol

70% alcohol 970 ㎖


HCl (conc) 30 ㎖

제조
70% alcohol에 Hcl을 조금 씩 가하여 녹여 갈색병에 보관한다.

4. Carbonate buffer (0.05M pH 9.6)

시약성분

0.2M Na2CO3 16.0 ㎖


0.2M NaHCO3 34.0 ㎖
D. W. 200 ㎖

518 감염병실험실진단 제1부 세균질환


제조
각 시약과 증류수를 정량하여 혼합 한 다음 121℃에서 15분간 고압멸균하여 사용한다.

5. 3% Catalase

H2O2 0.3 ㎖
D.W. 10 ㎖

제조
멸균된 나사마개 시험관에 증류수와 30% H2O2를 넣어 잘 혼합 한 다음 냉장보관하
고, 필요시 꺼내어 사용한다.

6. Gel-Phosphate Buffer

시약성분

Gelatin 2g
Na2HPO4 4g
D. W. 1ℓ

제조
각 시약을 정량하여 증류수에 넣어 혼합한 다음 가열하여 녹인 후 pH를 6.2로 조정
한다. 121℃에서 20분 동안 고압멸균한다.

7. Heat labile catalase 시험용 시약 (68℃, pH 7.0)

■ 0.067M phosphate 완충용액 (pH 7.0)


1) 용액 1

Disodium phosphate (Na2HPO4 anhydrous) 9.47 g


D. W. 1ℓ

2) 용액 2

Monopotassium phosphate (KH2PO4) 9.07 g


D. W. 1ℓ

배지 및 시약 519
제조
pH 7인 완충용액은 용액 1, 61.1 ㎖과 용액 2, 38.9㎖를 잘 혼합하고 pH를 7.0으로
조정한다.

■ Complete catalase 시약 (Tween-peroxide mixture)

30% Hydrogen peroxide


10% Tween 80

제조
10㎖ Tween 80을 정량하여 증류수 90 ㎖에 넣어 잘 혼합한 후 적당한 용기에 넣어
121℃에서 15분간 고압 멸균한다. 냉장 보관하였다가 시험 직전에 Hydrogen peroxide
와 혼합하여 사용한다.

8. Kovac’s 시약 (Indole 시험용)

시약성분

Pure amyl 또는 Isoamyl alcohol 150 ㎖


Para-di-methyl-aminobenzaldehyde 10 g
Concentrated pure hydrochloric acid 50 ㎖

제조
Aldehyde를 알코올에 녹인 다음 천천히 산을 첨가하여 잘 혼합한다. Kovac’s 시약
은 소량씩 만들어 사용하며 냉장고에 보관한다. 건조된 aldehyde는 색이 연해야 한다.

9. Niacin 시험 시약

1) 4% aniline 용액

Aniline 4 ㎖과 95% 에타놀 96 ㎖을 섞는다. 갈색병에 넣어 냉암소에서 냉장 보관한


다 (aniline의 색상이 변한 것은 사용 금한다).

520 감염병실험실진단 제1부 세균질환


2) 10% Cyanogen bromide 용액

Cyanogen bromide 5 g을 증류수 50 ㎖에 넣어 실온에서 용해시킨 뒤, 갈색병에 넣


어 냉장 보관한다. Cyanogen bromide는 독성이 심하므로 제조와 취급에 매우 조심하
여야 하며, 휘발성이 있으므로 보관에 따라 역가가 감소된다.

10. MR-VP 시험 시약

시약성분
1) MR

Methyl-red 0.1 g
Ethyl alcohol (95~96%) 300 ㎖

2) VP

Potassium hydroxide 40 g
Creatine 0.3 g
D.W 100 ㎖

제조
1) MR
알코올에 methyl-red를 넣어 잘 혼합하여 녹인다음 증류수를 가한 후 500 ㎖가 되
게 한다.

2) VP
Potassium hydroxide를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 녹이고 Creatine을
첨가한다.
※ 사용 직전 만드는 것이 좋으며, -20℃에서 2-3 주까지 보존이 가능하다.

배지 및 시약 521
11. Nitrite 시험 시약

1) 용액 1; Sulfanilic acid 시약

Sulfanilic acid 1g
5 N acetic acid 125 ㎖

※ 5 N acetic acid는 glacial acetic acid 28.75 ㎖를 증류수 71.25 ㎖에 첨가하여 제조


한다.

2) 용액 2; N-(1-naphthyl)ethylenediamine 시약

dihydrochloride 0.25 g
5 N acetic acid 200 ㎖

※ 5 N acetic acid는 glacial acetic acid 28.75 ㎖를 증류수 71.25 ㎖에 첨가하여 제조


한다. 제조한 각 시약은 갈색병에 넣어 냉장보관한다.

12. Oxidase 시험 시약

Tetramethyl-P-phenylenediamine-dihydrochloride 1g
또는 Dimethyl-P-phenylendiamine-oxalate
D. W. 100 ㎖

제조
시약을 정량하여 증류수에 넣고 마그네틱 바를 이용하여 완전히 용해시킨 후 갈색병
에 넣어 냉장보관한다. 제조하여 즉시 사용하는 것이 바람직하며, 1주일 이상 된 것은
버린다.

13. 0.5% PBSM

0.1 M PBS 100 ㎖


Non-fat dry skim milk 0.5 g

제조
완전히 용해시킨 후 즉시 사용하는 것이 바람직하다

522 감염병실험실진단 제1부 세균질환


14. 0.05% phenol red

시약성분

Phenolsulfothalein 0.1 g
0.01N sodium hydorxide (NaOH) 22 ㎖
D.W 200 ㎖

제조
유발에 phenolsulfothalein 분말을 0.1 g 정량하여 넣고 여기에 0.01N NaOH 22 ㎖
을 가해 유봉으로 잘 간다. 이것을 200 ㎖ 들이 실린더에 넣고 다시 적당량의 증류수로
유발을 헹구어 실린더에 넣은 다음 200 ㎖이 되도록 증류수로 채운다.

15. 2SP (0.2M Sucrose - 0.02M Phosphate)

시약성분
sucrose 68.46 g
K2HPO4 2.01 g
KH2PO4 1.01 g
D. W. 1ℓ

제조
각각의 시약을 따로 소량의 증류수에 녹인다음 최종 1,000 ㎖ 로 맞춘다. 121℃에
서 15분간 고압멸균하여 항생제를 첨가하여 사용한다.

■ 항생제

- Gentamicin (10 ㎍/㎖)


- Vancomycin (100 ㎍/㎖)
- Nystatin (25 units/㎖)

※ 0.5~2 ㎖씩 소분하여 저장하면 사용하기 편리하다. 단기간 보관시에는 4℃에, 장기


간 보관시에는 -20℃에 보관한다.

배지 및 시약 523
16. 4SP (0.4M Sucrose - 0.02M Phosphate)

시약성분
sucrose 136.92 g
Na2HPO4 2.268 g
D. W. 1ℓ

제조
각 시약성분을 정량하여 소량의 중류수에 넣고 잘 녹인 후 증류수 1,000 ㎖로 맞춘
다. 1N HCl로 pH를 7.0~7.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 고압멸균하여 사용한다.

17. 5% trypsin

Trypsin 1: 250 1g
Phosphate buffer (pH 8.2) 20 ㎖

제조
플라스크에 phosphate buffer 20 ㎖ 를 정량하여 넣고 여기에 trypsin (1: 250) 1 g을
가해 30분동안 실온에서 방치한다 (이따금씩 자주 흔들어 준다). 1500rpm에서 15분간
원심하여 비용해성 물질을 제거한 다음 상청액을 취해서 0.45 ㎛막 여과지로 여과 멸균
하여 0.5 ㎖씩 소분하여 4℃ 냉장고에 보관 하였다가 필요시 꺼내여 사용한다.

18. TBE 완충액 (5× stock)

시약성분

Tris base 54 g
Boric acid 27.5 g
0.5 mM EDTA 20 ㎖
D. W. 1ℓ

제조
각 시약을 정량하여 증류수 800 ㎖에 넣어 녹인다음 pH 8.0로 조정하여 최종 양이
1ℓ가 되도록 한다. 사용할 때에는 10배 희석하여 0.5× TBE를 만들어 사용한다.

524 감염병실험실진단 제1부 세균질환


██ 염색약

1. Counter 염색약

0.1 M PBS 100 ㎖


Evan’s blue 5㎍

제조
Evan’s blue 5 ㎍을 정량하여 PBS에 넣어 잘 녹인 후 갈색병에 넣어 보관한다.

2. Giemsa 염색약

시약성분
1) 보관용 원액

Giemsa stain powder 0.6 g


Methanol (absolute) 50 ㎖
Glycerine 50 ㎖

제조
김자염색 분말을 유발에 갈고 무게를 정량한 다음 글리세린을 첨가하여 염색분말을
완전히 간다. 완전히 갈은 염색분말액을 플라스크에 넣고 55℃에서 2시간 항온 시킨다
(이때 30분마다 한번씩 흔들어 준다). 사용한 유발에 붙은 염색분말은 일정량의 알코올
을 취해 잘 씻어낸 후 동일한 플라스크에 부어 항온 시킨다. 항온이 끝난 후 나머지
알코올을 첨가하고 잘 혼합하여 2주일간 방치한다 (가끔씩 흔들어 준다).

3. Gimenez 염색약

시약성분
1) carbol basic fuchsin 보관용 원액

■ 10% basic fuchsin 100 ㎖


Basic fuchsin 10 g
95% Ethyl alcohol 100 ㎖

배지 및 시약 525
■ 4% Phenol 250 ㎖
Phenol 10 ㎖
D. W. 250 ㎖

제조
10% basic fuchcin 100 ㎖, 4% phenol 250 ㎖을 정량하여 증류수 650 ㎖에 넣어
잘 혼합한 후 37℃에서 48시간 동안 반응시킨다.

2) 보관용 완충 용액

■ 0.2M NaH2PO4
NaH2PO4 2.84 g
D. W. 100 ㎖
■ 0.2M NaH2PO4
Na2HPO4 2.7 g
D. W. 100 ㎖

3) Carbol basic fuchsin 실험용 염색약

4 ㎖ Carbol basic fuchsin 보관용 염색약, 10 ㎖ 0.1M sodium phosphte 완충용액


(pH 7.45), 3.5 ㎖ 0.2M NaH2PO4, 14.5 ㎖ 0.2M Na2HPO4, 49 ㎖ 증류수를 정량하여
잘 혼합한 후 여과하여 사용한다 (실험용 용액은 48시간내 사용해야 한다).

4. Iodine 염색약

Iodine crystal 5.0 g


Potassium iodide 5.0 g
Methanol (absolute) 50.0 ㎖
D. W. 50.0 ㎖

제조
Iodine과 potassium iodide를 정량하여 유발로 갈아 잘 녹인 다음 소량의 증류수를
가해 완전히 녹을 때까지 간다. 충분히 녹인 용액을 적당한 용량의 갈색병에 넣고 메탄
올과 나머지 증류수를 정량하여 잘 혼합한 다음 여과하여 사용한다.

526 감염병실험실진단 제1부 세균질환


5. Lugol’s 요오드 (5% 보관 용액)

Iodine crystal 5.0 g


Potassium iodide 10.0 g
D. W. 100.0 ㎖

제조
Iodine과 potassium iodide를 정량하여 유발로 갈아 잘 녹인 다음 소량의 증류수를
가해 완전히 녹을 때까지 간다. 충분히 녹인 용액을 적당한 용량의 갈색병에 넣고 나머
지 증류수를 정량하여 잘 혼합한 다음 여과하여 사용한다.

6. Lugol’s 요오드 (습식표본 제작을 위한 1% 용액)

Lugol’s 요오드 (5% 보관용액) 5㎖


식염수 용액, 등장액 20 ㎖

제조
5% Lugol’s 보관용액 5 ㎖을 식염수 20 ㎖에 희석하여 사용한다.

※ Lugol’s 요오드 보존용액은 대변의 습식표본 제작에 매우 적합하다. 즉 기생충은


덩어리 속에 숨어 보이지 않을 수 있기 때문에 Lugol’s 보관용액으로 희석시켜야
한다.

7. Malachite green 염색약

시약성분

3% malachite green 수용액 l6 ㎖


glycerin 500 ㎎
6% phenol 500 ㎎

제조
각 시약을 정량하여 혼합한 다음 잘 녹여서 사용한다.

배지 및 시약 527
8. Methylene blue 염색약

1) 보존용액

Methylen blue 14 g
95% 알코올 100 ㎖

2) 실험용액

보존용액 20 ㎖
증류수 180 ㎖

제조
보존용액 20 ㎖을 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 사용한다.

9. Mounting 용액

시약성분

0.1 M PBS 10 ㎖
p-phenylenediamine 100 ㎎
Glycerol 90 ㎖

제조
각 시약을 정량하여 충분하게 용해시킨 다음 적당한 용기에 소분하여 -20℃에서 냉
동 보관한다.

10. Wayson염색약

1) 염색약 1

Basic fuchsin 0.2 g


Methylene blue 0.75 g
Ethanol(95%) 20.0 ㎖

※ Basic fuchsin과 methylene blue를 정량하여 에탄올에 넣어 잘 혼합하여 용해한

528 감염병실험실진단 제1부 세균질환


후 Whatman No.1 여과지로 여과한다.

2) 염색약 2

Phenol (aqueous) 5.0 ㎖


D. W. 195.0 ㎖

제조
각 염색약 1과 2를 혼합하고 갈색병에 담아 실온에 보관하여 사용한다 (5년간 유효).

11. Ziehl-Neelsen 염색약

1) 염색약

Fuchsin액 (용액 1)
Basic fuchsin 3.0 g
95% ethanol 100 ㎖

※ Basic fuchsin을 정량하여 ethanol에 넣어 잘 혼합하여 용해시킨다.

Phenol 액 (용액 2)
Phenol crystals 5.0 g
D. W. 100 ㎖

※ phenol crystal을 정량하여 증류수에 넣고 가온하여 녹인다.

제조
사용 염색약은 용액 1:10 ㎖과 용액 2:90 ㎖을 혼합한 다음 갈색병에 넣어 실온에
보관한다. 6~12 개월간 사용이 가능하며, 사용 시 여과하여 사용한다.

2) 탈색액 (3% hydrochloric acid)

Hydrochloric acid (Conc.) 3㎖


95% Ethanol 97 ㎖

배지 및 시약 529
제조
Hydrochloric acid를 정량하고 ethanol을 조심스럽게 가하여 잘 혼합한다. 실온에서
6~12개월간 사용 가능하다.

3) 대비염색액

Methylene blue chloride 0.3 g


D. W. 100 ㎖

제조
Methylene blue를 정량하여 증류수에 넣어 잘 혼합하여 녹인다음 갈색병에 보관하
면 6~12개월간 사용 가능하다.

530 감염병실험실진단 제1부 세균질환

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