Фактори росту

Ауксотрофи Прототрофи

Концентрація
органічних
речовин

Оліготрофи Копіотрофи
 Азот

Окислений –
Відновлений: нітрати
солі амонію, (відновлення
сечовина, ферментами Атмосферний
амінокислоти, нітрат- та
пептиди нітрит-
редуктазами)

гетероамінотрофи автоамінотрофи
 Біосинтез амінокислот:
Попередник Метаболічний шлях Амінокислоти

Оксалоацетат цикл трикарбонових аспарагінова кислота

кислот аспарагін, лізин,
р-ції карбоксилювання метіонін, треонін,
ізолейцин
α-кетоглутарат цикл трикарбонових глутамінова кислота
кислот глутамін, аргінін, пролін
3-фосфогліцерат гліколіз серин, гліцин, цистеїн
цикл Кальвіна
Піруват гліколіз аланін, валін, лейцин
шлях Ентнера-Дудорова
Фосфоенолпіруват гліколіз Триптофан, тирозин
+ окислювальний фенілаланин
еритрозо-4-фосфат пентозофосфатний шлях
5-Фосфорибозил-1- окислювальний гістидин
пірофосфат + пентозофосфатній шлях
АТФ
Escherichia coli K-12 substr. MG1655

Bos taurus ,
Gallus gallus ,
Homo sapiens ,
Methanocaldococcus jannaschii ,
Methanococcus maripaludis ,
Methanococcus vannielii ,
Mus musculus
Acetohalobium arabaticum DSM 5501 ,
Bilophila wadsworthia 3_1_6 ,
Desulfitobacterium hafniense ,
Desulfitobacterium hafniense DCB-2 ,
Methanococcoides burtonii DSM 6242 ,
Methanohalobium evestigatum Z-7303 ,
Methanohalophilus mahii DSM 5219 ,
Methanosarcina acetivorans ,
Methanosarcina barkeri ,
Methanosarcina barkeri Fusaro ,
Methanosarcina thermophila ,
Thermincola potens JR
Фенілаланін: характеристика
Фенілаланін (скорочено: Фен) – ароматична альфа-
амінокислота (α-аміно-β-пропіонова кислота ), що
має молекулярну масу 165,19 а.о.м. Відноситься до
незамінних амінокислот. Протеїногенна,
зустрічається в складі багатьох білків у всіх
організмах.
Натуральними джерелами фенілаланіну є м'ясо (свинина, баранина і
яловичина), куряче м'ясо і яйця, ікра, риба і морепродукти, горіхи, мигдаль,
арахіс, насіння соняшнику, соя та інші бобові, тверді сири, бринза, сир, молоко
і молочні продукти, в яких він міститься у великих
кількостях.
Засвоєння фенілаланіну підвищують вітамін C, B6, залізо,
мідь і ніацин.
 Роль та використання
• Участь у формуванні • У медицині: при хворобі
білків Паркінсона, лікуванні вітіго, у
• Попередник терапії алкогольної та
катехоламінів, меланіну опіатної залежностей та ін.
• Попередник тироксину • У сільському господарстві:
кормові добавки.
• Забезпечує достатнє • Компонент спортивного
живлення мозку при харчування.
навантеженнях • У харчовій промисловості:
виробництво дипептиду
аспартама – синтетичного
цукрозамінника.
 Способи синтезу
• Хімічний: із бензальдегіду та гіпуронової кислоти
через азлактон. Отримують рацематну суміш, потім
виділяють L-ізомери ферментативним способом.

+
• Ензиматичний: в якості попередника використовують
транс-коричну кислоту, каталізують з допомогою
іммобілізованого ферменту фенілаланінамоніаліази,
який отримують із трансгенного штаму Rhodotorula
rubra Rhodotorula mucilaginosa =
Rhodotorula rubra

Фенілаланінамоніаліаза
з грибів
Rhodosporidium toruloides
Синтез фенілаланіну у мікробній
клітині

За допомогою
рекомбінантни
х штамів
серед родів
Bacillus,
Brevibacterium,
Escherichia.
 Шляхи забезпечення надсинтезу
фенілаланіну
• Збільшення копій генів ферментів, які
задіяні у синтезі амінокислот
• Зменшення чутливості ферментів до
зворотнього інгібування продуктом
• Зменшення експресії генів
ферментів, що задіяні в
біодеградації амінокислот
• Зменшення активності
ферментів конкуруючих шляхів
 Технологічна схема 2
Отримання рекомбінантного штаму шляхом введення
плазміди із геном десенсибілізованої до фенілаланіну DAHP-
синтази (3-Дезокси-D-арабіногептулозонат 7-
фосфат ( DAHP ) синтаза) 1

Вирощування інокуляту на поживному бульйоні 18 год

при 37 °С

Основна ферментація – 48 год при попередній температурі та

інтенсивній аерації, рН 5-9

Відбір культуральної рідини, гідроліз клітин, центрифугування 1 – DAHP-синтаза

2 – DAHP
Виділення цільового продукту методом іоннообмінної
хроматографії, наступне концентрування та кристалізація
 Виробницто триптофану
• Триптофан досить часто є лімітуючим фактором харчування, так як
його зміст в традиційних продуктах (риба, молоко, кормові дріжджі) в
3 рази нижчий, ніж в стандартному білку.
• Триптофан утворюється в ході розгалуженого метаболічного шляху,
тому для його виробництва використовують ауксотрофних мутантів,
у яких блоковані реакції, що ведуть до синтезу фенілаланіну і
тирозину
 Мікробіологічний спосіб
• Поряд з іншими ароматичними амінокислотами у мікроорганізмів
(подібно до більшості організмів) триптофан утворюється з
метаболітів вуглеводного обміну еритрозо-4-фосфату і
фосфоенолпірувату.
• Процес новоутворення ароматичних амінокислот йде через шикімову
і хоризмову кислоти.
• Метаболічним попередником триптофану служить антранілова
кислота, яка виникає з хоризмової кислоти під дією антранілат-
синтетази. Триптофан інгібує антранілатсинтетазу, тому для обходу
метаболічного контролю синтез ферменту індукують ступінчастим
введенням попередника антранілової кислоти (0,1 0,3%).
•
Промислове виробництво триптофану – двостадійний процес:
• І) на першому етапі хімічним способом синтезують антранілову кислоту;
• ІІ) дія ферментів мутантних штамів дріжджів Candida utilis.
- Біомасу дріжджів вирощують при температурі 30 ° С в середовищі, що
містить бурякову мелясу, сечовину і мінеральні компоненти.
- Через добу в ферментер вводять 5% -й спиртовий розчин антранілової
кислоти і 50% -й розчин сечовини, а через 3-4 год після введення
попередника додатково додають джерело вуглецю (25% -й розчин меляси).
- Антранілову кислоту і сечовину подають через кожні 6 ч, а мелясу через
кожні 12 год. Процес двоступеневої ферментації завершується через 144 ч
і забезпечує вміст триптофану в культуральній середовищі до 6 г / л.
• Менш поширені одноступінчасті технології отримання триптофану на
основі ауксотрофних мутантів бактерії Bacillus subtilis. Т
• Тривалість одноступінчастого процесу 48 год, а концентрація
триптофану в культуральній середовищі становить 10 г / л.
 Хіміко-ферментативний спосіб
• Хіміко-ферментативний спосіб отримання триптофану полягає в
прямій конденсації індолу, аміаку і піровиноградної кислоти.
• Реакцію каталізує піридоксальзалежна триптофан- індолліаза.
• Фермент широко поширений в природі. Він виявлений у бактерій Е.
coli, Bacillus albei, Proteus rettgeri і характеризується широкою
субстратної специфічністю.
• Вихід амінокислоти при реалізації хіміко-ферментного способу
отримання триптофану становить 63 г / л.
 Метаболізм триптофану
Триптофан -незамінна для людини та
тварин амінокислота.

Є попередником ряду важливих

біологічно-активних речовин,
зокрема серотоніну, мелатоніну, НАД.
 застосування
• Гіпотеза про те, що при депресивних розладах зменшується вміст в
мозку серотоніну, привела до терапевтичного використання L-
триптофану при депресії. Він застосовується як в якості монотерапії,
так і в поєднанні з традиційними антидепресантами.
• L-триптофан використовується при обсесивно-компульсивному
розладі. Додаткове введення L-триптофану дозою 6-8 г на добу
виправдано при зниженні синтезу або виснаженні запасів серотоніну,
наприклад внаслідок тривалого застосування серотонінергічних
антидепресантів.
• Ппрепарати L-триптофану призначаються при розладах сну, відчуттях
страху і напруги, дисфорії, передменструальним синдромом.