Professional Documents
Culture Documents
้
4. อาหารเลียงเชื
อส้ าหร ับ Zymomonas mobilis
อาหารแข็ง อาหารเหลว
ยีสต ์เอกแทรก (Yeast 5 กร ัม ยีสต ์เอกแทรก (Yeast 5 กร ัม
extract) extract)
เปปโตน (Peptone) 10 กร ัม เปปโตน (Peptone) 10 กร ัม
กลูโคส (Glucose) 20 กร ัม กลูโคส (Glucose) 20 กร ัม
ผงวุ่น (agar) 15 กร ัม นํ ้า 1000
มิลลิลติ ร
นํ ้า 1000
มิลลิลต
ิ ร
้
5. อาหารเลียงเชื
อส้ าหร ับ YM (Yeast malt)
อาหารแข็ง อาหารเหลว
มอลท ์เอกแทรก (Malt 3 กร ัม มอลท ์เอกแทรก (Malt 3 กร ัม
extract) extract)
ยีสต ์เอกแทรก (Yeast 3 กร ัม ยีสต ์เอกแทรก (Yeast 3 กร ัม
extract) extract)
เปปโตน (Peptone) 5 กร ัม เปปโตน (Peptone) 5 กร ัม
กลูโคส (Glucose) 10 กร ัม กลูโคส (Glucose) 10 กร ัม
ผงวุ่น (agar) 20 กร ัม นํ ้า 1000
มิลลิลติ ร
นํ ้า 1000
มิลลิลต
ิ ร
วิธวี เิ คราะห ์
1.1 การวิเคราะห ์ปริมาณเซลลูโลส เฮมิเซลลูโลส และลิกนิ น โดยวิธ ี TAPPI
203 om-88
่ วมวล 1.5 กร ัม ใส่ลงบีกเกอร ์ขนาด 250 มิลลิลต
ชังชี ิ ร
เติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด ์เข ้มข ้น 17.5 เปอร ์เซ็นต ์ ปริมาตร100
มิลลิลต ่
ิ ร นํ าไปกวนบนเครืองกวนสาร 30 นาที เติมนํ ้ากลัน
่ 100 มิลลิลติ ร
้ งไว
ตังทิ ้ ้ทีอุ
่ ณหภูมหิ อ้ ง 30 นาที
่
กรองสารละลายเพือแยกตะกอนออกโดยทิ ้
งสารละลายใส 10-20
มิลลิลต ิ รแรกของการกรอง เก็บสารละลายเพือนํ ่ าไปวิเครห ์ 100 มิลลิลติ ร
2. การหาความสามารถในการทางานของเอนไซม ์ (FPU
assay)
การหาความสามารถในการทํางานของเอนไซม ์ในการย่อยกระดาษกรอง
โดยใช ้วิธข
ี อง Mandel และ Stembery มีวธิ ก ี ารดังนี ้
สารเคมี
1. สารละลายซิเตรตบัฟเฟอร ์เข ้มข ้น 0.05 โมลาร ์ พีเอช 4.8
2. สารละลายกรดไนโตรซาลิไซลิก
วิธวี เิ คราะห ์
วิธค
ี านวน
กําหนดให ้ 1 ยูนิตของเอนไซม ์ คือ
ปริมาณเอนไซม ์ทีย่่ อยสลายสารตังต
้ ้นให ้เป็ นกลูโคส 1 ไมโครโมล ภายใน 1 นาที
่ ้ทดสอบ นั่นคือ
ภายใต ้สภาวะทีใช
1 ยูนิตของเอนไซม ์ = 1 ไมโครโมลของกลูโคสทีถู ่ กปล่อยออกมาใน 1
นาที
= 0.180 มิลลิกร ัมของกลูโคสทีถู่ กปล่อยออกมาใน 1 นาที
กลูโคส 0.180 มิลลิกร ัม มีคา่ เท่ากับ 1ไมโครโมล
𝑥
ถ ้าเอนไซม ์ย่อยสลายได ้กลูโคส x มิลลิกรมั จะมีคา่ เท่ากับ หรือเท่ากับ
0.180
5.556x ไมโครโมล
ในระยะเวลา 60 นาที กลูโคสถูกปล่อยออกมาเท่ากับ 5.556x ไมโครโมล
5.556𝑥
ระยะเวลา 1 นาที กลูโคสถูกปล่อยออกมาเท่ากับ ไมโครโมล/นาที
60
หรือเท่ากับ 0.926x ไมโครโมล/นาที
่
เมือใช ้เอนไซม ์ 0.5 มิลลิลต
ิ ร จะมีกลูโคสเท่ากับ 0.0926x ไมโครโมล/นาที
0.0926𝑥
ถ ้าใช ้เอนไซม ์ 1.0 มิลลิลต
ิ ร จะมีกลูโคสเท่ากับ หรือเท่ากับ 0.185x
0.5
ไมโครโมล/นาที
่
เมือใช ้ย่อยเซลลูโลส(กระดาษกรอง) 50 มิลลิกร ัม จะมีกลูโคสเท่ากับ 0.185x
ไมโครโมล/นาที
0.185𝑥
ถ ้าใช ้ย่อยเซลลูโลส 1 มิลลิกร ัม จะมีกลูโคสเท่ากับ หรือเท่ากับ 3.7x
50∗10−3
ไมโครโมล/นาที/กรมั
่ ากับ 3.7x ยูนิต/กร ัม (Filter paper units: FPU/กร ัม)
ซีงเท่
วิธวี เิ คราะห ์
ปิ เปตสารละลายตัวอย่างทีจะวิ่ เคราะห ์ 1 มิลลิลติ ร ลงในหลอดทดลอง
โดยมีตวั ทําละลายเป็ นสารละลายแบลงค ์ เติมสารละลายไดไนโตรซาลิไซลิก 1
มิลลิลติ ร ผสมให ้เข ้ากัน นํ าไปต ้มในอ่างควบคุมอุณหภูมท ิ ่ี 100 องศาเซลเซียส
เป็ นเวลา 5 นาที แล ้วทําให ้เย็ นโดยแช่ในนํ ้าแข็ง เพือหยุ
่ ดปฏิกริ ยิ า เติมนํ ้ากลัน
่
10 มิลลิลต ิ รลงในหลอดทดลอง
่
เขย่าใหเ้ ข ้ากันแล ้วนํ าไปวัดค่าการดูดกลืนแสงทีความยาว ่ 550 นาโนเมตร
คลืน
นํ าค่าการดูดกลืนแสงทีวั่ ดได ้มาคํานวณหาปริมาณนํ ้าตาลรีดวิ ซ ์จากกราฟมาตรฐ
าน
การสร ้างกราฟมาตรฐาน
1. อบกลูโคสทีอุ ่ ณหภูมิ 105-110 องศาเซลเซียส เป็ นเวลา 2 ชัวโมง ่
่
เพือใช ้เตรียมสารละลายมาตรฐาน กลูโคสทีมี ่ ความเข ้มข ้น 3
มิลลิกร ัมต่อมิลลิลต
ิ ร
เตรียมหลอดทดลองให ้มีสารละลายมาตรฐานกลูโคสทีมี ่ ความ
เข ้มข ้นต่างๆ โดยใช ้สูตรการคํานวณ N1V1 = N2V2
N1 คือ ความเข ้มข ้นของสารละลายนํ ้าตาลกลูโคสเริมต ่ ้น 3
มิลลิกร ัมต่อมิลลิลต ิ ร
V1 คือ
ปริมาตรของสารละลายนํ ้าตาลกลูโคสเริมต ่ ้นทีต
่ ้องใช ้ตามช่องที่ 2
ในตารางที่ ก-1
N2 คือ ความเข ้มข ้นของสารละลายนํ ้าตาลกลูโคสทีต ่ ้องการตามช่องที่
4 ในตารางที่ ก-1
V2 คือ ปริมาตรของสารละลายนํ ้าตาลกลูโคสสุดท ้าย 5 มิลลิลต ิ ร
2. ทําตามวิธวี เิ คราะห ์นํ ้าตาลรีดวิ ซ ์
3. นํ าค่าการดูดกลืนแสงทีวั่ ดทีได ่ ้มาเขียนกราฟมาตรฐาน
และหาค่าความชนั
กราฟมาตรฐานและข้อมู ลการทดลอง
กราฟมาตรฐานน้ าตาล
ตารางที่ ค่าดูดกลืนแสงของนํ ้าตาลกลูโคสสําหร ับกราฟมาตรฐาน
ความเข ้มข ้นกลูโคส ค่าดูดกลืนแสงที่ 550 นาโนเมตร
(มิลลิกร ัม/มิลลิลต
ิ ร)
0.0 0.000
0.3 0.223
0.6 0.425
0.9 0.711
1.2 0.838
1.5 1.035
1.8 1.221
2.1 1.416
2.4 1.677
2.7 1.771
3.0 1.967