ПРОТОЧНА ЦИТОМЕТРИЈА

Цитометрија значи ке броиме клетки и исто така проточна дека тие ке поминуваат низ еден проток
ке течат во еден медиум.Првин имаме една инка во која го ставаме примерокот кој сакаме да го
анализираме.Имаме епрувета со раствор кој има многу клетки различни и во различен број и ние
сакаме да видиме кои клетки ги имаме и во колкав број и тој примерок го ставаме во комората како
инка и имаме различни клетки еритроцити тромбоцити лимфоцити,и др клетки еозинофили
неутрофили базофили.Поентата е долу на инка имаме отвор кој е голем колку да помине само една
клетка и поради тоа тие ке се наредат и ке поминуваат една по една прво има раствор во кој се
потопено со цел да не се лизираат и кога ке излезат од инчеста структура ке паѓаат една по една и ке
добиеме проток на материја каде клетки ке паѓаат една по една овој проток од една страна имаме
ласер а од друга страна блокада за детектор и детектор кој мери колку светлина удира во него и ја
трансформира во волтажа количеството на светлина.Едноставно кога ке помине некоја клетка пред
ласерот таа ласерот ке удри во нејзе и светлина уствари малце ке се раштрка на страна прво дел ке
се раштрка како конусна структура позади клетката и големината на конусната структура ке зависи
од големина на клетката ако имаме поголема клетка светлина ке направеше поголем конус и врз
база на тоа колкав ке е конусот на дифузна светлина може да одредиме колкава е клетката.Но нема
само такво расејување пример кај еозинофили со гранули кога светлина ке удри голем дел од зраци
ке се раштркаат на сите страни и ке имаме едно расејување потполно на светлината од сите страни и
ова ке биде детектирано од детектор кој се наоѓа под 90 степени од оној првиот кој е во ист правец
со изворот на светлина, и трет случај е ако имаме клетка маркирана со флуоресцентни проби и кога
ке удри светлина ке има на сите страни зраци и оние зраци кои ке удрат во флуоресцентните проби
ке дадат светлина зависи која е флуоресцентната проба бидејки секоја си има различен апсорпциски
спектар емисионен спектар и ке даде емисија во друга боја и ние можеме да ја детектираме оваа
емисија и да знаеме дека таа и таа клетка која била маркирана од дадено тело.Во вториот случај
кога имаме расејување на сите страни колку е поголемо расејувањето на страна ни укажува на
комплексноста на клетката значи што повеќе структури има во нејзе тоа повеќе ке се расејува
светлината под чудни агли.Додека првиот пример со расејување ни кажуваше за големината за
второто значи за комплексноста на клетката.Е сега клетка поминува низ инката удира светлина низ
нејзе и дел ке се расее нанапред и ке го удри детекторот и тој го пренесува сигналот како волтажа,и
информации откога ке помине целата проба кои сме ги добиле за секоја клетка може да ги
претставиме на друг график каде на х оска ке е големината на клетка која е пропорционална со
висина на пик на волтажа а на y оска ке е број на клетки .И дообиваме график кој се базира на
предно расејување на светлина,график за големина на клетки кои ги имаме во примерокот.При
секое отчитување кај детектор имаме и едно друго
отчитување кое е на сензор кој се наоѓта под агол од
90 степени од детекторорт кој ја прима расеаната
светлина која одеше во сите правци а оној напред ја
прима само таа како конус.И овој сензор под 90
степени ке ја детектира комплексноста.За секоја
клетка која поминува едниот сензор бележи
големина а другио комплексноста ја бележи па иде
наредна прилично голема клетка ама со мала
комплексност па иде трета со средна големина и
средна комплексност и потоа график за комплексност
се прави и ке се стават двата на 1 график.Пример имаме клетка со големина 5 и имаме 30 такви
клетки но за секоја нализа на клетка истовремено имаме и анализа на комплексност и може да
дојдеме до заклучок дека сини на пример имаат голема комплексност големи се и се неутрофили
,зелените се со мала комплексност и мала големина и се лимфоцити и црвените се моноцити.
Е сега ако сакаме да испитаме колку имаме од дадена клетка во дадена популација,ке ја бележиме
со дадена флуоресцентна проба со цел да ги детектираме и како што поминуваат низ инка ке се
детектира ахха ова е клетка број 50 и има толкава големина и ке се одбие странично во филтерот и
ке се одреди комплексност.И ке се одреди број на флуоресцентни клетки колкави се и какви се но во
пракса обично ставаме повеќе флуоресцентни проби и затоа се користат повеќе бои пример со
жолта ситењ еритроцити лимфоцити со виолетова само и еозинофили кои врзуваат и жолта и
виолетова и имаме клетки кои не врзуваат ништо.Пред да ги пуштиме на ласер треба да одредиме
која бранвоа должина треба да ја пуштиме од ласер со цел да ексцитираме и двете флуоресцентни
бои бидејки употребуваме и жолта и виолетова и се различни хемиски соединенијакои имаат
различни апсорпциони спектри .Ние треба да избереме одредена бранова должина на ласер која ке
ги ексцитира двете бои и ке избереме некоја измеѓу пример 480нм но има друг проблем самите
флуоресцентни проби кога ке бидат удрени со светлина тие испуштаат одредена емисија на
светлина која е со пониска бранова должина од таа која е апсорбирана но не е една бранова
должина тугу е опсег од 400 до 500нм или 450 до 550 нм е сега
ако го тоа нацртаме на график проблемот е што имаат место на
преклапање и кога ке добиеме емисија нема да знаеме дали е
од едната или од другата клетка со жолта или со виолетова
проба.Затоа се ставаат едни филтри кои се познати како бен
филтри бидејки контролираат примаат само бранова должина во
одреден опсег и тој филтер ке прима од 525 само а другиот од
425 до 475 тоа значи дека се надвор од овие филтри нема да
влезе но пак имаме проблем имаме дел во двата емисиони
спектри и во филтерот исто ако е некоја емисија баш таму пак
нема да знаеме дали е од едната или од другата клетка и ова се
решава преку математички пресметки.Пуштаме да поминат
клетките сме подесиле ласер со која бранова должина светлина
да пушта сме наместиле филтри и сега клетки
поминуваат со жолто со виолетово со двете некои со
ништо и рез ги ставаме на график каде на y оска се со
жолта на х со виолетова боја и може да се направат 4
квадрати каде клетки кои ке се во прв лево долу во таа
популација ке немаат обојување ни жолто ни
виолетово,во десен горе квадрат ке се со жолто и темно
виолетово обојување клетки во лев горе квадрат ке се
само со жолто обојување и оние во десен долу квадрат
само со виолетово обојување и може да се одреди број
на клетки кои не врзуваат ни жолта ни флуоресцентна
проба,130 и жолта и биолетова ,30 само виолетова и 40
само жолта и врз база на овие податови ние може да видиме какви се клетки имаме во една
популација и според нивна големина комплексност да ги детерминираме спрема нивните антигени
бидејки овие флуоресцентни проби се базираат на врзување со антитела кои се врзуваат за дадени
антигени на клетките.

Може да се разделат разни клетки врз база на нивни антигени дури кога се прави график со број на
клетки измерени според нивна големина се прави органичување график почнува од вредност 50 на
почеток ке добиваме високи вредности ке ни каже дека имаме голем број партикули кои се многу
мали и тоа поради тромбоцитите кои се мн мали и во голем број па подле дури кај 50 ке го добиеме
графикот кој ни треба и ние го сечеме тој дел кој не ни го треба од графикот.Самата направа може и
да ни ги стави клетките во посебни епрувети.На секоја капка како поминува и е ставен полнеж и
потоа врз база на полнеж дур поминува капка ласерот удира на детектори и тие праќаат
информација до компјутер за да се анализира и понатаму може да се одреди дали сакаме да ги
оделиме одредени видови клетки и ако сакаме да ги оделиме некои клетки кои се бележени
плочите кои се поставени под инка може да дадат или негативен или позитивен полнеж врз база на
тоа како е поларизирана капката и може да се оделат во 3 различни епрувети.Тие што се со
виолетова радиоактивна проба имаат негативен полнеж и ке бидат турнати кон десна страна
ониекои се зелена радиоактивна провба имаат позитивен полнеж и ке бидат турнати кон лево
.Главна поента е да се одделат различни видови клетки во различни садови со цел да добиеме
популации со црвена и сина флуоресцентна проба едните се со никаква едните се исо црвена и со
зелена флуоресцентна проба.