ЗАСЕЈАВАЊЕ ХРАНЉИВИХ ПОДЛОГА МЕТОДОМ РАЗРЕЂЕЊА

У одговарајућу хранљиву подлогу бактерије се засејавају под строго стерилним условима,

најчешће помоћу бактериолошке езе или стерилном пипетом. Преношење актерија езом
врши се било са агар плоче са чистом културом или из течне културе бактерија, док се
пипетом наноси жељена количина бактерија из суспензије у којој се зна приближна
концентрација микроорганизама.
Да би се засејане културе размножавале, инкубирају се у термостатима или воденим
купатилима која обезбеђују оптималну температуру за раст и развиће микроорганизама.
Да би се издвојила чиста култура бактерија (популација која води порекло од једне ћелје),
разрађен је велики број метода. Најширу примену има ''метода ишаране плоче'', међутим
веома је важна и метода разређења.
Материјал из кога се издваја чиста култура се разређује. Разређивање се може вршити у
физиолошком раствору, течној, получврстој или чврстој подлози растопљеној и охлађеној
на 45°С. Разређени материјал у чврстој подлози се директно излива у празну стерилну
Петријеву кутију, док се у осталим случајевима наноси на плоче агара. После одређеног
времена развију се усамљене колониеј настале умножавањем једне ћелије.
ПОСТУПАК:
-Припреми се серија стерилних епрувета које се напуне са 9 милилитара раствора за
разређивање (физиолошки, течни бујон итд). Епрувете се обележе бројевима од
један и даље.
- Стерилном пипетом се одмери 1 милилитар материјала и пренесе у прву епрувету.
На овај начин се добија разређење 1:10. Садржај епрувете се добро измеша
пажљивим мућкањем, а употребљена пипета се одложи у кофу са детерџентом.
- Новом стерилном пипетом се одмети 1 мл из епрувете 1 и пренесе у следећу
епрувету. На тај начин се добија разређење 1:100. Понови се поступак мешања и
пипета се одложи у кофу.
- На исти начин се припреме сва разређења користећи увек нову пипету за свако
ново разређење. При томе је свако наредно разређење 10 пута разређеније од
претходног.
ПРАВЉЕЊЕ ДЕЦИМАЛНИХ РАЗРЕЂЕЊА
- Из епрувета са одговарајућим разређењем материјала новом стерилном пипетом
одмери се 0,1мл и пренесе на чврсту неселективну подлогу. Стакленим штапићем
који се претходно потопи у алкохол и стерилише на пламену размаже се кап
течности по површини подлоге
- Петријева кутија се окрене и инкубира у термостату. После одређеног времена се
појављују колоније настале умножавањем једне ћелије.
- Колоније се преносе на нове плоче агара или коси агар и после инкубације у
термостату, чувају у фрижидеру за даљу употребу.