FISH (Fluorescence in situ hybridisation, Флуоресцентна in situ хибридизација)

Што е FISH (Флуоресцентна in situ хибридизација)?

 Цитогенетска техника која овозможува детекција на

нуклеинските киселини, односно откривање и
локализирање на присуство или отсуство на специфични
целни секвенци во клетката;

 Се заснова на принципот на комплементарност -

одбележана денатурирана проба се хибридизира со
комплементарната целна секвенца на нуклеинската
киселина.
Принцип на FISH – методата
 Подготовка на примерокот за анализа

 Oбележување на комплементарна проба

 Денатурација на примерокот и пробата

- на висока температура или во алкална средина

 Хибридизација
- формирање двоен хеликс помеѓу двете комплементарни секвенци
- може да биде помеѓу
ДНК - ДНК;
ДНК - РНК;
РНК - РНК.
Видови на проби

 Fluorescein
 Комплементарни секвенци
на целните нуклеински
киселини
 Обележани со
флуоресцентна молекула –
Biotin, Fluorescein, Dioxigenin
 Со големина од 20-40bp до  Biotin
1000bp
Видови на проби
Одбележување на пробата

 Директно одбележување со флуорофор – формира

обоен сигнал на местото на хибридизација, се
визуелизира со флуоресцентен микроскоп.

 Индиректно обележување со биотин – се користи

ензимски или имунолошки систем за детекција, се
визуелизира со светлосен микроскоп.
Директно и индиректно обележување на пробите
 

Протокол на FISH – методата

 Предтретман на примерокот;

 Денатурација на целната ДНК молекула и на

пробата;

 Хибридизација;

 Анализа на примерокот со флуоресцентен

микроскоп.
 Дијагностички апликации на FISH

 Молекуарна цитогенетика на вродени дефекти и ментална ретардација;

 Идентификација на специфични хромозомски абнормалности нумерички

или структурни хромозомски аберации;

 Пренатална дијагностика;

 Амплификација или делеција на одреден ген;

 Структурни хромозомски промени (транслокации);

 Дијагностика на канцер;

 Следење на успешно извршена трансплантација на коскена срцевина.

 https://
www.youtube.com/watch?v=dRmWZ3IUjFo
 https://
www.youtube.com/watch?v=eMkY2jzgWjg