TEMA 2: ENZIMS I CINÈTICA ENZIMÀTICA

Biocatalitzadors
Per a que es puguin donar lloc les reaccions en la cèl·lula es necessiten biocatalitzadors.

Enzims: molècules de naturalesa proteica que catalitzen les reaccions biològiques.

Ribozim: RNA biocatalitzador

Propietats enzims:
Segons la seva naturalesa com a catalitzador:
• Acceleren la reacció que catalitzen
• Són eficaços en quantitats molt petites
• Al final del procés recuperen el seu estat inicial
• No alteren l’equilibri de la reacció (Keq’)
• No alteren la variació d’energia lliure de la reacció (AG)

Segon la seva naturalesa proteica:

• Són termolàbils (són molt sensibles a la temperatura i al pH)
• Són molt més eficaços que els catalitzadors químics
• Són molt específics
• En general, actuen en condicions moderdes (pH,T,P)
• Poden presentar regulació

Holoenzim: enzim format per una part proteica (aproteïna o apoenzim) i un cofactor (component
no proteic, termoestable, de baix pes molecular, necessari per l’acció de l’enzim).

Cofactors i Coenzims
Son necesarias para transportar de forma transitoria grupos funcionales durante la reacción
catalizada por la enzima.
Inorgànics: (cofactors)
• Metaloenzims: unió forta formant part de la proteïna (ions Mn, Fe, Co,..)
• Enzims activats per metalls: unió feble, no estequiomètrica (ions Na, K, Ca, Mg…)
Orgànics: (coenzims)
• Grups prostètics: component no aminoacídica unida fortament a la proteïna (FAD)
• Cosubstrats: no formen part de la proteïna, Actuen com sustrats (NAD)
Molts coenzims deriven de vitamines hidrosolubles.

Classificació
6 categories:
• Oxidoreductases: Transferència d’electrons (ions iodur o àtoms d’hidrogen).
• Transferases: Reaccions de transferència de grups. (ex. quinasas)
• Hidrolases: Reaccions d’hidròlisi. Transfereixen grups funcionals a l’aigua.
• Liases: Trenquen enllaços per formar dobles enllaços, anells o addicionar grups.
• Isomerases: Transferència de grups dins la mateixa molècula donant formes isomèriques.
• Lligases: formen enllaços nous. Reaccions acoblades a la ruptura d’ATP o un cofactor.

Especificitat de reacció:
Les reaccions enzimàtiques són molt específiques. Aquesta especificitat és doble:
• Especificitat de reacció: enzims formats de tal manera que realitzen una determinada reacció i
donen un determinat producte.
• Especificitat de substrat: en la naturalesa proteica hi trobem una cavitat per a que encaixin les
molècules, que han de tenir una forma determinada. Aquí s’encaixa el substrat i s’anomena
centre actiu.
Tenim:
• Especificitat absoluta: només poden unir un compost químic concret (ex: hexocinasa).
• Especificitat relativa o de grup: són enzims
que actuen sobre un grup de molècules semblants.
Centro activo
Lugar de la enzima donde se cataliza la reacción. Unión por fuerzas no covalente similares a las
que estabilizan la estructura de las proteínas. Unión covalente transitoria. (cavitat asimètrica de
l’enzim on té lloc la reacció)

Para que el sustrato se pueda unir con el enzima los dos deben presentar:
• Complementariedad geométrica.
• Complementariedad electrónica: interacción química atractiva.

Estereoespecifidad
Es una consecuencia de la naturaleza asimétrica de las proteínas globulares y de la unión
favorable al estado de transición.
L'energia del accessió proporciona especificitat i catàlisi.

Ejemplos de estereoespecifidad:
• Enzimas con centro activo que solo reconocen un estereoisómero. (ej. tripsina)
• Enzimas que solo dan un producto entre todos los estereoisómeros posibles. Són enzims amb
interès industrial.
Los enzimas en general pueden actuar como un grupo reducido de sustratos (análogos
estructurales). Ejemplo alcohol deshidrogenasa (etanol, propanol…)

Centros de unión de sustrato: preformados + acoplamiento inducido

Dos modelos clasicos:
• Modelo de Fisher (llave-cerradura): está prefromado.
El substrat encaixa amb l’enzim.

•Modelo de Koshland (ajuste inducido): cambio de

conformación, dinámica molecular. Enzim i substart canvien
conformacions perque l’enllaç sigui més fàcil de trencar.

Experimentalmente se ve que el lugar de unión está preformado (especifidad) y que la unión del
sustrato provoca un cambio de conformación en el encima.

Catàlisi
Augmenta la velocitat disminuint la energia de l’estat de transició,
permetent arribar més fàcilment a aquest. La relació de l’enzim amb
l’estat de transició és més fort que amb el propi substrat, el cual
favoreix l’arribada d’aquest.
Velocitat: v=k·[S]
Reacció: A (substrat,S)——> B(producte, P)
La unió dels anàlegs en el E.T és més forta que en el propi substrat
(normalment són inhibidors: s’uneixen pero no es tranformen).

Los substratos que intervienen en la catálisis quedan orientados hacia el centro activo de la
enzima. El sustrato se tiene que poder unir con el enzima en un lugar próximo al centro activo. El
lugar de unión del sustrato determina la especificidad.

Els enzims acceleren la reaccions químiques creen vies alternatives

de menor energia d'activació i ho fan fundamentalment per dos
mecanismes:
1. La formació d'enllaços covalents o la transferència de grups
funcionals entre determinats grups funcionals de l'enzim i del
substrat.
2. La creació d'interaccions no covalents entre l'enzim i el substrat
que van acompanyades d'una alliberació d'energia lliure,
anomenada energia d’unió o de fixació, que rebaixa l'energia
d’activació.
La presència de grups catalítics específics permet crear rutes alternatives de menor energia
d’activació.
Principals mecanismes de catàlisi enzimàtica:
- Proximidad y orientación: les molècules reaccionant també especialitat si presenten l'orientació
relativa adequada. El enzima mantiene los sustratos en la orientación relativa adecuada. La
distribución de cargas de la proteína guía a los sustratos. El enzima fija los sustratos
impidiendo los movimientos de los grupos que han de reaccionar (ej. dihidrofolato reductasa)

- Àcid-base general: es transfereix un protó, es formen intermedis de reacció carregats i

inestables i, normalment, s’acaba amb el trencament d’enllaços. muchos grupos de las
proteínas pueden actuar como aceptores o donadores H+ (ej. ribonucleasa A)

- Covalent: es formarà un enllaç covalent transitori entre el substrat i l’enzim, s’alliberarà un

producte i l’enzim. Requereix aportar energia. se forma un intermedio. Muchos grupos pueden
formar un enlace covalente transitorio con los substratos (ej. mecanismo serina-proteasas)

- Per ions metàl·lics: intervenen ions metàl·lics que realitzaran reaccions d’oxidació-reducció. Ho
poden fer directament amb els substrats o intermediaris.

Cinética enzimática
Estudia las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas, así como la variación de esta
velocidad en variar las condiciones experimentales de la reacción.

Velocidad: es la cantidad de sustrato transformado por

unidad de tiempo. Las enzimas aumentan o disminuyen la
velocidad de la reacción según su naturaleza y según su
cantidad (concentración).

La podem estudiar de dues maneres: com varia la

concentració de substrat per unitat de temps o com varia la
concentració de producte per unitat de temps (observarem
l’aparició de producte per unitat de temps; la velocitat de
reacció serà positiva).

Actividad temática: velocidad de una determinada reacción catalizada por una cantidad
determinada de enzima.

Unidades:
• Katal: enzima que transforma un mol de substrato por segundo: mol/s
• Unidad Internacional (IU): enzima que transforma 1µmol de substrato por minuto: µmol/min
• Actividad específica: actividad/catidad de proteína (Kat/g, UI/mg)
• Actividad molecular: nº de moléculas transformadoras por moléculas de enzima y unidad de
tiempo: s-1

La velocidad de una reacción catalizada por una enzima puede depender de la concentración de
enzimas, pH, T, [S]…

Variación de la velocidad en función de la [S] (cinètica de Michaelis)

Se utiliza para determinar el mecanismo de la reacción, la actividad
enzimática…
Se mantiene todo constante menos la [S]. Cinética estudiada por
Michaelis y Menten.

La mayoría de enzimas sigue una cinética Michaeliana. Se caracteriza

por mostrar una curva hiperbólica en la evolución de la concentración
de sustrato.

Una de las características es que si la [S] es muy elevada, la V se irá

haciendo constante, hasta que llegue a la Vmax. Finalmente será
independiente de la S (reacción de orden 0).
Se diferencias dos etapas en la reacción:
1. Formación del complejo ES
2. Formación del P y recuperación del E

La [E]T será la que ha reaccionado con el sustrato y la que ha formado el complejo. (ET= E+ ES)

La etapa determinante de la velocidad es la segunda, ya que es la más lenta. Se coge con

referencia k2: v=k2[ES]

Cuando se habla que la [S] es muy elevada, la ET será siempre la misma que la del complejo: el
encima está saturado por el sustrato. v=k2[E]T

Para poder aplicar la cinética Michaeliana siempre se ha de suponer que la concentración de

sustrato total es mucho más grande que la [E]T: [S]T>>[E]T

También se ha de suponer que la velocidad de formación del complejo es igual que la velocidad
de eliminación del complejo.
Suponiendo todas las premisas se obtiene:
Velocidad inicial:

Velocidad máxima (M/s):

Constante de Michaelis-Menten (M):

Interpretación de Vmáx y v0 en función de la relación [S] -Km:

Km: afinidad que tiene el sustrato por ezcima. És la concentració de substarta a la qual l’enzim
assoleix la meitat de la velocitat màxima. (NO és una velocitat, És una conecntració!)
El valor de Km varia considerablement d'un enzim a un altre, i per a un mateix enzim difereix
segons els diferents substrats.
Si Km es grande el sustrato tendrá muy poca afinidad por el encima (la v será más lenta). Si Km
es pequeña, tendrá más afinidad por el sustrato.
- Cuando la [S] es mucho más pequeña que Km:
Vo=cnt [S] (poca afinitat)
- Si la [S] es mucho más grande que Km: Vo=Vmáx
(molta afinitat)
- Cuando la [S]=Km: Vo=0,5·Vmáx
Kcat (s-1): nº de recambio. Número de moléculas transformadas por
unidad de tiempo y por molécula de enzima, si el substrato es saturado.

Índice de eficiencia catalítica: cuando en una reacción hay dos etapas y la segunda es mucho
más lenta(K2<<K1), Km coincide con la constante de de disolución del complejo ES.
IEC=Kcat/Km

La constant d’especificitat Kcat/Km (eficiència catalítica) serveix per comparar les deficiències
catalítiques de diferents enzims o del mateix enzim sobre diferents substrats.

• Km: caracteriza enzima y sustrato en determinadas condiciones.

• Kcat: cuantifica y compara un encima en diferentes condiciones.
• IEC: compara eficiencias catalíticas de uno o diferentes enzimas sobre diferentes substratos.

En un problema de cinética enzimática, para determinar los parámetros cinéticos (Km, Vmax…)
se utiliza normalmente el método de la doble inversa (Lineweaver-Burk)
Lineweaver-Burk:
Factors externs que el tenen l'activitat enzimàtica
Concentració d’enzim: els enzims proteics s'aïllen de les seves principals fonts biològiques
mitjançant processos habitual d'alls i a ment i purificació de proteïnes, pel que la puresa del
preparat no és absoluta.
- Unitat d’activitat enzimàtica: quantitat d’enzim capaç de transformar 1µmol de substrat per
minut a 25ºC.
- Activitat específica: es el nombre d’unitats enzimàtiques per mg de proteïna purificada.
Temperatura: l’augment de la temperatura condueix a un augment en la velocitat de la reacció,
que té un límit quan es sobrepassa la temperatura de desnaturalització de l'enzim, el que
comporta una pèrdua de la seva funció.

pH: els canvis en el pH del medi poden alterar l'estat de ionització de la cadena lateral dels
aminoàcids àcids i bàsics. Aquests canvis poden afectar a l'afinitat de l'enzim pel substrat, si es
veuen alterades les carreres dels aminoàcids que participen en la formació d'interaccions no
covalents entre l'enzim i el substrat per formar el complex ES.

Reaccions multisubstrat
Mecanisme secuencial: una reaccions en les que intervenen dos substrats es forma en algun
moment un complex ternari no covalents. Els substrats poden fixar-se a l'atzar o fer-ho específic.

Mecanisme Ping-Pong: no es forma un complex ternari, sinó que el primer sostre s'allibera com a
producte abans de la unió del segon substrat a l'enzim que ja ha sigut modificat en la reacció
anterior. (Ex. Quinases)

Inhibidor
Disminuye la cantidad enzimática, ya sea mediante la velocidad, cantidad de sustrato
transformado…
El inhibidor puede actuar de manera total inhibiendo toda la cantidad de la enzima, formando un
complejo con el enzima que será totalmente inactivo, o puede actuar de manera parcial formando
un complejo con el enzima que sea parcialmente activo.

Pel seu efecte inhibidor pot ser:

• Inhibició total: complex enzim-inhibidor completament inactiu
• Inhibició parcial: complex enzim-inhibidor parcialment actiu

Por su naturaleza, el inhibidor puede ser irreversible o reversible:

• Irreversible: una vez se forma el complejo, los efectos causados no cambiarán al cambiar la [I].
El [I] forma enlaces covalente es con el enzima (ej.penicilina)
• Reversible: al disminuir la [I], los efectos producidos por este sí que pueden cambiar. El I
interacciona con los enzimas, pero cuando se elimina del medio, el enzima vuelve a ser activo.
Hay cuatro inhibiciones diferentes reversibles, I competitiva, I no competitiva pura, I
acompetitiva e I no competitiva mixta.

- Inhibición competitiva: el inhibidor se une al enzima. Normalmente son análogos

estructurales del sustrato.
La Vmax no varía ya que el aumentar [S] este desplaza al inhibidor. La Km aumenta cuando [I].

- Inhibición acompetitiva: el inhibidor se une al complejo.

La Vmax (Vaparente) será menor y la Km (Km aparente) también será menor.
Por mucho que se aumente la [S] no se podrá desplazar al [I].

- Inhibición no competitiva pura: el inhibidor se une con la misma afinidad tanto al E libre
como al complejo ES.
V/(aparente) es menor y la Km (aparente no varia. Al aumentar [S] tampoco se desplaza [I].

- Inhibición no competitiva mixta: el I no se une con la misma afinidad al E libre como al

complejo ES, tendremos una Ki y una Ki’.
Si la NC tiene un carácter competitivo, la afinidad del I por el E será mayor y por lo tanto
Ki<Ki’ (tendrá más afinidad por unirse con el enzima libre como en la competitiva).
Si la NC tiene un carácter acompetitivo, la afinida de I por el complejo ES será mayor y por lo
tanto Ki>Ki’.

Regulación de la actividad enzimática

Se verá como las células pueden modificar el efecto de los enzimas (maneras de regular la AE).

Existen dos tipos de mecanismos: a largo tiempo ( [E] variable) y a corto tiempo ([E] constante):
• A tiempo largo: control del recambio proteico (regulación de la degradación de la enzima y de la
síntesis).
• A corto tiempo: regulación de la actividad.
- Modulación no covalente.
- Modulación covalente (reversible e irreversible).
Control por modificación no covalente
Alosterismo: modificación de la AE por el cambio en la estructura inducido por la unión no
covalente de las moléculas (efectores alostéricos) en un centro diferente del centro activo.
Els enzims al·lostèrics experimenten canvis conformacionals en resposta a la unió del modulador,
modificant la forma del centre actiu afavorint o desafavorint l’entrada del substrat.
• Estat T: inactiu.
• Estat R: actiu. Normalment té més afinitat per unir el substrat.

Si un modulador afavoreix l’estat R, serà un activador i si el modulador afavoreix l’estructura en

estat T, parlarem d’inhibidors.
La velocitat de reacció serà més lenta en presència d’inhibidor i serà més ràpida en presència
d’activador, mou la corba cap a l’esquerra.

Activación alostérica: el enzima es el activo pero tiene un lugar donde se le añade el activador. La
molécula se activa y empieza a unirse el sustrato.

Inhibición aloestérica: el inhibidor al unirse a un lugar diferente del sustrato provoca un cambio de
conformación y hace que el encima no tenga afinidad por el sustrato.

Si la enzima es oligomérica, los cambios de conformación se transmiten entre las subunidades.

a )Efectores alostéricos sobre una enzima monomérico (menos común):
Activador: el efecto cambia la estructura de la enzima haciendo el centro activo más grande y el
lugar donde se coloca el inhibidor más pequeño.
Inhibidor: el efecto hace cambiar la conformación haciendo que el sustrato no se pueda unir.

b) Activador alostérico sobre una enzima dimérico (más común):

Un único activador provoca un cambio en la subunidades haciendo que aumente su afinidad con
el sustrato en los dos centros activos.

Los enzimas alostéricos suelen presentar estructura multimérica consumo unidades catalíticas y
reguladoras y cinética no Michaeliana.
Puede haber efecto alostérico homotrópico (el propio sustrato actúa como efector, unión
cooperativa) o heterótropico (un efector diferente del sustrato puede activar o inhibir uniéndose a
un centro diferente del centro activo).

Modelos de alosterismo homotrópico (cooperativo):

• Modelos de Monod: todas las subunidades de la enzima presentan la misma conformación. El
sustrato desplaza el equilibrio hacia hacia la forma relajada. El activador se une a R y el
inhibidor en la forma tensa T.
• Modelo Koshland: cambio secuencial. El substrato se une con una forma K diferente en cada
subunidad. Puede ser que K2 sea mejor que K1 (cooperatividad positiva) o al revés (negativa).
El inhibidor modifica las K’s dificulatndo la entrada dels substrato y el activador las modifica
facilitando la entrada.

Control de la actividad por modificación covalente

• Reversible: las modificaciones de la enzima pueden ser divertidas por otro. Se puede activar o
inhibir el enzima (ej. fosforilación)
• Irreversible: la célula guarda los enzimas inactivos y cuando es necesario realiza una proteólisis
que lo activa.